Luminol

LUMINOL
Luminol Es un derivado del ácido ftálico.

Se trata de un sólido verdoso poco soluble.
Su mayor importancia reside en la reacción de quimioluminiscencia
que da con peróxidos en presencia de complejos de hierro como
catalizadores.
Es capaz de detectar cerca de 1 µL de sangre en 1L de disolución.
Luminol puede ser principio sintetizado a partir del 3 nitroácido ftálico.
Primero, hidracina (N2H4) se calienta con el ácido nitrophthalic 3 en un
solvente high-boiling por ejemplo glicol del triethylene. A reacción de
la condensación ocurre, con la pérdida de agua, la formación del
nitrophthalhydrazide 3. Reducción del grupo nitro a grupo amino con
dithionite del sodio (Na2S2O4) produce luminol.
Quimioluminiscencia
Para exhibir su luminiscencia, el luminol se debe primero activar con
un oxidante. Generalmente, una solución de peróxido de hidrógeno
(H2O2) y a hidróxido la sal en agua se utiliza como el activador. En
presencia de catalizador por ejemplo hierro, el compuesto, el
peróxido de hidrógeno se descompone para formar el oxígeno y el
agua:
2 H2O2 → O2 + 2 H2O
En un ajuste del laboratorio, el catalizador usado está a menudo
ferrocianuro del potasio. En la detección forense de la sangre, el
catalizador es el hierro presente dentro de la hemoglobina. Enzimas en
una variedad de sistemas biológicos puede también catalizar la
descomposición del peróxido de hidrógeno.
Cuando el luminol reacciona con la sal del hidróxido, a dianion se
forma. El oxígeno producido del peróxido de hidrógeno entonces
reacciona con el luminol dianion. El producto de esta reacción,
peróxido orgánico, es muy inestable y se descompone inmediatamente
con la pérdida de nitrógeno para producir el ácido aminophthalic 3 con
los electrones en un estado excitado. Mientras que el estado excitado
relaja al estado de tierra, exceso de la energía se libera como fotón,
visible como luz azul.
La luminiscencia es un fenómeno producido por las moléculas de
materia, que al ser lo suficientemente excitadas, emiten luz visible.
Generalmente, la energía proviene de fuentes externas, como es el
caso de la electricidad en las lámparas de neón, o el calor proveniente
de una combustión. Sin embargo, también es posible producir luz por
medio de reacciones químicas, que tienen como ventaja la baja
producción de calor, aunque la emisión es bastante breve. Esta es la
llamada luz fría.
Existen distintos modos de producir luz fría. En este experimento, se
explicarán las propiedades de la quimioluminiscencia, con el estudio de
las cualidades del luminol. Entre los otros modos de producción de luz
fría, se encuentran la fluorescencia, y la fosforescencia.
La fluorescencia se debe a la absorción de ondas electromagnéticas de
alta frecuencia, y la inmediata emisión de fotones de frecuencia más
baja (léase, luz visible), como por ejemplo, en las lámparas de
ultravioletas. La fosforescencia consiste en la reemisión progresiva de
la energía captada inicialmente por el material, como por ejemplo, en
las pantallas de rayos catódicos. En cambio, la quimioluminiscencia es
propia de reacciones donde uno de los reactivos recibe una alta
excitación, con la posterior emisión de luz visible. En la naturaleza
se encuentran varias proteínas quimioluminiscentes, como las
presentes en las luciérnagas, los peces de la región abisal, y algunas
bacterias. Creadas por el hombre, hay infinidad de compuestos, pero
el más usado en la industria y la investigación es el luminol
(C8H7N3O2. 5-Amino-1, 2, 3, 4-tetrahidro-phtalazin-1,4-dion).
RESUMEN
El luminol posee la capacidad de enseñar por medio de luz visible,

cuando es oxidado. Por esto es una herramienta muy utilizada en la
investigación forense, ya que gracias a sus propiedades; puede
revelar, en solución con un oxidante, hasta los rastros más ínfimos de
sangre, por medio de un brillo azulado. Esta peculiar característica
facilita el reconocimiento de aquellas sustancias oxidantes o sus
catalizadores en situaciones que requieren rapidez y efectividad,
tal como la escena de un crimen donde se demanda el señalamiento
de cualquier trazo de sangre. La reacción del luminol precisa de un
medio alcalino, el cual sirve para disolver y cargar negativamente la
molécula. El oxidante, que suele ser Peroxido de Hidrogeno, libera y
reemplaza dos de los Nitrógenos, llevando así a la molécula a el
mencionado estado de excitación.
Finalmente se obtiene el luminol oxidado y cargado, el fotón, y
Nitrógeno gaseoso.
Las reacciones de luminol requieren de un catalizador. Usualmente es
una sal o metal de transición, los cuales son muy accesibles.
Específicamente en el caso de la sangre, el Hierro (Fe) de la
Hemoglobina es un poderoso catalizador. Las propiedades de la sangre
permiten una excelente optimización de la oxidación del luminol, esta
reacción cuenta con la suficiente sensibilidad como para detectar
manchas diminutas de sangre, gracias a que puede reaccionar a 1ppm
(parte por millón).
EXPERIMENTACION
En el laboratorio se comenzó por demostrar la reacción básica del
luminol con varios catalizadores, bases, y oxidantes.
Mas adelante se expuso en una solución de agua, una base, y Peróxido
de Hidrogeno, solución que fue analizada en sangre y otros
compuestos típicos de un hogar que podrían causar confusiones en la
detección de sangre. La siguiente tabla ilustra las reacciones y los
resultados relativos de cada una.
Se obtuvo una considerable afinidad entre los reactivos, todos
reaccionaron de manera inmediata produciendo un brillo azul muy
fuerte. Las duraciones variaron mucho, comenzando por la oxidación
con blanqueador, la cual solo duraba unos 3 segundos, en los cuales
burbujeaba rápidamente el Nitrógeno. Además se obtuvo un brillo muy
intenso y puntual.
Las reacciones con Sulfato de Cobre (II) y Hexacianoferrato de
Potasio(III) resultaron de gran similitud, se caracterizaron por el
mismo color azulado y por una duración de alrededor de 5 minutos. En
ambas reacciones fue utilizado el mismo oxidante y medio alcalino, ya
que estos actúan de igual manera como catalizadores.
El Nitrato de Cobalto (II) mantuvo el brillo por más de 20 minutos,
decayendo lentamente su intensidad. Su color era un poco más
verdoso que el de las demás reacciones. La baja concentración del
catalizador demuestra la proporcionalidad de la reacción con esta
variable.
Al enfocarse en la reacción con sangre se encontró el brillo mas
intenso entre todas las reacciones. Efectivamente cualquier cantidad
de sangre, seca o fresca, inclusive hasta una tela y un cuchillo lavados
con jabón producían el característico brillo azul, con las minúsculas
cantidades de sangre o luminol, el brillo persistía entre 5 y 30
segundos. Al comparar la reacción entre la sangre seca y fresca, el
color e intensidad eran iguales, pero la sangre fresca se opacaba
un poco más rápido por la espuma blanca producida en la reacción del
H2O2 con la sangre, probablemente había un exceso del oxidante. De
todas maneras no fue necesario recurrir a proporciones perfectas para
crear una solución que detecte la sangre. A partir de luminol, agua,
H2O2, y una base cualquiera con pH mayor a 9 (NaHCO3, Na2CO3,y
NH3) obtuvimos iguales resultados con la reacción de la sangre. Tan
solo se debe precaver en que esta solución solo dura unas horas o
días, según la temperatura en que se conserve. Finalmente fue
comprobado que la sangre puede diferenciarse de otras sustancias que
causan la oxidación del luminol en escenarios comunes de la ciencia
forense. Tal como lo es el Criminalistica.com.mx y Criminalistic.org
[v3.0] - La página de Criminalística de México http://criminalistic.org
Potenciado por Joomla! Generado: 21 October, 2010, 11:18
Blanqueador, el cual produce un destello más breve y concentrado que
el de la sangre. Los compuestos de origen vegetal, como la mayoría de
frutas, no produjeron reacción alguna con el luminol.
CONCLUSIONES
Es muy sencillo establecer condiciones básicas para demostrar la

quimioluminiscencia del luminol. Solo se necesita un oxidante, una
base, y un catalizador. En este último resalta la sangre al requerir
mínimas cantidades y producir un brillo suficientemente consistente e
intenso. Por lo tanto la investigación forense puede encontrar de gran
utilidad y confianza el uso del luminol como indicador de rastros de
sangre.
Las confusiones con otra clase de compuestos que puedan dar falsos
positivos de sangre en la escena de un crimen pueden ser
desmentidos con la observación cuidadosa del color e intensidad del
brillo, además de la espuma formada en muestras frescas de sangre.
La radiación observada en cada una de las reacciones nos confirmó
inmediatamente el desarrollo de las reacciones y la presencia de
sustancias, por lo que la investigación en la quimioluminiscencia puede
ofrecer un excelente indicador inmediato de reacciones.
SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA

(SUERO POLIESPECÍFICO DE CONEJO)
TEST DE ANTIGLOBULINA
Las aplicaciones del test de antiglobulina humana reportadas por

Coombs, Mourant y Race en 1945-6 establecieron estos ensayos como
métodos de laboratorio invaluables para detectar anticuerpos que
sensibilizan, pero no aglutinan directamente.
Los casos originales tenían especificidad Rh. La experiencia posterior
ha mostrado el valor inmenso de los test de antiglobulina en la
detección de anticuerpos con casi cualquier especificidad conocida que
sea clínicamente significativa.
PRINCIPIO
La adición de suero antiglobulina humana a glóbulos rojos muy bien
lavados que han sido recubiertos con anticuerpos (inmunoglobulina)
y/o fragmentos del tercer componente del sistema del complemento
(C3b, C3bi, C3dg o C3d) generalmente producirá una aglutinación
claramente visible de los glóbulos rojos.
EL REACTIVO
El suero antiglobulina humana poliespecífico, es una mezcla de
diluciones seleccionadas de suero adsorbido obtenido de conejos
inmunizados con IgG humano purificado y Anti-C3d monoclonal
murino.
El reactivo ha sido estandarizado para dar una detección óptima de
fragmentos IgG y C3 humanos que se han unido a células en todas las
aplicaciones diagnósticas de rutina donde se requiere hacer el test de
antiglobulina: directo o indirecto.
ESPECIFICIDAD
El suero antiglobulina humana poliespecífico es fabricado para
satisfacer los requerimientos de potencia y especificidad de la FDA.
Cada lote de suero antiglobulina humana poliespecífico es probado con
anticuerpos de un amplio rango de especificidades, incluyendo Rh,
Kell, Duffy, Kidd, Lewis, etc. y con glóbulos rojos recubiertos con C3b
y C3d.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO PUEDEN OCURRIR
REACCIONES FALSO POSITIVAS O FALSO NEGATIVAS POR:
1 Contaminación bacteriana o química de las muestras de sangre u

otro material usado en el test.
2. Lavado insuficiente de los glóbulos o por introducción de suero
humano que neutraliza el suero antiglobulina humana.
3. Tiempo o temperatura de incubación inadecuados.
4. Tiempo o velocidad de centrifugación inadecuados.
5. El uso de soluciones de lavado mal preparadas o almacenadas en
forma incorrecta.
6. Omisión de algún reactivo en el test.
7. Agitación excesiva para soltar el botón celular antes de leer.
8. El uso de tubos plásticos.
LAVADORAS AUTOMÁTICAS DE CÉLULAS
El funcionamiento de cada instrumento debe ser revisado
frecuentemente.
Un buen lavado y una calibración permanente es esencial. Cualquier
residuo de solución salina que quede en el botón celular después del
último lavado diluirá el suero antiglobulina humana.
Son extraordinariamente sensibles, por lo que permiten demostrar
trazas de sangre a diluciones de 1:200.000. Carecen en cambio de
especificidad
Podemos nombrar la Peroxidasa y LUMINOL
Fundamento: se basan en la presencia en la sangre deperoxidasas,

enzimas capaces de descomponer el peróxido desprendiendo oxígeno.
El oxígeno se para oxidar una base, la base oxidada cambia de color.
Reacción de la peroxidasa:
H 2 O2 + Sangre (peroxidasa) H2 O + O
Base + O2 Base coloreada

PRINCIPALES BASES UTILIZADAS:
Reactivo de Adler: bencidina azul
Reactivo de Van Deen: tintura de guayaco azul
Reactivo de Kastle-Meyer: fenolftaleína rojo
Reactivo de Kohn-O Kelly: ortoluidina verde azul
VALOR DE LA PRUEBA
La prueba tiene valor cuando es negativa, sirviendo entonces para
ratificar la negatividad de las pruebas de certeza; su gran sensibilidad
permite excluir que la negatividad de las pruebas de certeza se deba a
la escasez de material sanguíneo en la muestra de la mancha
sospechosa. Es importante destacar que un resultado positivo, en
cambio, no autoriza a establecer la naturaleza sanguínea de la
mancha, ya que vegetales, semen o heces dan resultados positivos al
poseer catalasas y PEROXIDASAS.
LUMINOL: En una solución acuosa la oxidación de luminol es
catalizada por la presencia de un ión metálico, como hierro o cobre.
Por esta razón la solución de luminol puede ser usada para detectar
sangre, ya que puede ser catalizada por el hierro de la hemoglobina.

Luminol

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Luminol

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Luminol

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

LUMINOL

Luminol Es un derivado del ácido ftálico.

El luminol posee la capacidad de enseñar por medio de luz visible,

Es muy sencillo establecer condiciones básicas para demostrar la

SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA

Las aplicaciones del test de antiglobulina humana reportadas por

1 Contaminación bacteriana o química de las muestras de sangre u

Fundamento: se basan en la presencia en la sangre deperoxidasas,

Base + O2 Base coloreada

También podría gustarte