CENTRO DE INVESTIGACIÓN GENÉTICA Y AMBIENTE

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE TLAXCALA

POSGRADO EN CIENCIAS AMBIENTALES
MAESTRÍA EN GENÉTICA

“AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS”

DRA. ALBA MÓNICA MONTIEL GONZÁLEZ

ASESOR EXTERNO

DRA. RAQUEL GARCÍA BARRIENTOS

ASESOR INTERNO

DR. FAVIAN SALVADOR SANDOVAL SOSA

ESTANCIA II

FAVIAN SALVADOR SANDOVAL SOSA 1

 FECHA DE ENTREGA 20 DE ABRIL 2018
Introducción:

El manejo inadecuado de los materiales y residuos peligrosos ha provocado en el mundo un grave problema de contaminación de los suelos y los cuerpos de agua.

En México, la industria del petróleo en su conjunto ha tenido un impacto negativo en materia ambiental.
Debido a la amplia gama de productos derivados del petróleo, no ha sido posible evaluar cuantitativamente la contaminación involucrada desde la fase de
explotación hasta la obtención de los productos petroquímicos básicos.
El problema de los suelos contaminados con hidrocarburos radica en que hasta hace pocos años no existía conciencia del grado de la dificultad y el costo que
representa la remediación de los suelos y cuerpos de agua contaminados para la sociedad, por lo que es más caro remediar que prevenir (Saval 2005).

La siguiente investigación es debido a la desmedida extraccion ilegal de ductos propiedad de pemex en las comunidades y pasos comunitarios, dicha acción
provoca derrames al suelo de cultivo de maiz (principal producción de la región de calpulalpan y la comunidad de la soledad siendo derramados (cantidad
desconocida) hidrocarburos sin refinar tal es el caso del diesel el cual a pesar de los componentes aun hay crecimiento de cosecha de maiz , papa y alfalfa.

En este estudio solo nos concentraremos en conocer las concentraciones de los elementos que las componen, si hay crecimiento microbiano y cuanto afecta a sus
propiedades y caracteristicas del suelo sin identificar que microorganismos se desarrollan en el debido a que esta es solo la primera parte.

Principales funciones del suelo

El suelo y subsuelo constituyen un recurso natural difić ilmente renovable que desempeña funciones como medio filtrante durante la recarga de los mantos
acuíferos y la protección de los mismos en el lugar donde ocurren los ciclos biogeoquímicos, hidrológicos y las redes tróficas, además de ser el espacio donde se
realizan las actividades agrícolas, ganaderas y ser el soporte de la vegetación (Saval 2005).

Características de los hidrocarburos

Los hidrocarburos son compuestos formados por átomos de carbono e hidrógeno, de gran abundancia en la naturaleza, presentes principalmente en el petróleo
(Chappín 1988, Pemex 1988).

Se consideran como una mezcla compleja de gases, líquidos y sólidos, existiendo cantidades combinadas de nitrógeno, oxígeno y azufre, además de contener
compuestos de hierro, níquel, vanadio y otros metales (PEMEX 1988, Wood 1994).

El petróleo tiene una proporción de 76 a 86% de carbono y 10 a 14% de hidrógeno. Los hidrocarburos se clasifican de la siguiente forma:

 Hidrocarburos biogénicos: éstos son sintetizados por casi todas las plantas, animales terrestres y marinos, incluyendo a la microbiota, bacterias,
plancton marino, diatomeas, algas y plantas superiores (Bedair y Al-Saad 2002).
 Hidrocarburos antrópicos: éstos son introducidos como resultado de la actividad humana. Los procesos de combustión industrial contribuyen con la
contaminación debido principalmente al humo generado por la quema del carbón, combustibles fósiles y petróleo refinado, las descargas de aguas
municipales, las actividades de transporte y los derrames son algunas de las principales fuentes de estos contaminantes (Bidleman et al. 1990).
Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (hap), producidos por las actividades humanas, están formados por dos o más anillos de benceno fusionados, los
cuales difieren en el número y posición del anillo aromático.

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Su importancia está relacionada con la movilidad debido a su peso molecular: los hap de alto peso molecular son relativamente inmóviles y, por ende, de baja
volatilidad y solubilidad. Algunos compuestos como naftaleno, acenaftileno, acenafteno, fluoreno, fenentreno, antraceno, fluoranteno y pireno por mencionar
algunos, son considerados como contaminantes prioritarios por la agencia de protección ambiental de los estados unidos us enviromental protection agency,
(usepa), la organización mundial de la salud (oms) y la comunidad europea (ce) debido a sus efectos carcinogénicos (Menzie et al. 1992).
Estos compuestos se encuentran distribuidos en el suelo, mar, sistemas pluviales y sedimentos y su presencia se ha atribuido principalmente a los derrames de
petróleo y descargas de plantas petroquiḿ icas, aun cuando se puede deber al transporte atmosférico por los aportes de la combustión (Padilla 1999).

PEMEX Refinación

Está área lleva a cabo múltiples y variadas acciones para reducir las emisiones de contaminantes, contando con un inventario de emisiones atmosféricas de todas
las refineriá s, el cual se elaboró mediante un programa que incluyó la instalación de 261 puntos de muestreo en las chimeneas de proceso (Viejo 1995).
Los residuos generados por las actividades de esta industria, como son catalizadores gastados y lodos aceitosos, por citar algunos, son depositados en tambores,
patios y fosas rústicas, previo a su tratamiento y disposición final en sitios autorizados. Existe el interés por parte de pemex de rehabilitar los suelos contaminados.
De acuerdo con la información de pemex, dos de los lugares más contaminados por hidrocarburos a nivel nacional son la refinería «lázaro cárdenas» y el pantano
de santa alejandrina, ambos ubicados en el sureste de México (Veracruz y Tabasco).

Marco teórico

Medios de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla de sustancias, en la cual contienen nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes, permitiendo la propagación de
microorganismos como: bacterias, levaduras u hongos, para la obtención de un metabolito primario o secundario, en el cual el cultivo del inóculos se hace mediante
el uso de cajas petri, matraz erlenmeyer o tubos de ensaye con rosca (hernández et. Al.).

Agentes selectivos.

La adición de cristal violeta, sales biliares, azida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada hará que actúen como agentes selectivos
y frene el crecimiento a determinados microorganismos.

Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra especie que pueda confundirse morfológicamente es necesario usar medios de cultivos, ya que
nos permiten diferenciar las características del crecimiento de las bacterias y establecer su identidad según el medio de cultivo que se use.

Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales como el agua, el suelo, aire, el hombre y otros seres vivos, alimentos, entre otros. Haciendo
parte de los diferentes ecosistemas. Por esto se deben usar los medios de cultivo adecuados que se asemejen al ambiente si queremos posibilitar el crecimiento
de la bacteria.
Un medio de cultivo está diseñado para posibilitar el desarrollo y nutrición de las bacterias por esto cuenta con una cantidad de sustancias como: carbono, agua,
azufre, fosforo, nitrógeno, potasio, sodio, magnesio, entre otros. También su crecimiento depende de muchos factores entre ellos: un ph preferiblemente neutro,
humedad, oxigeno, temperatura, presión osmótica, todo esto en condiciones adecuadas.2 los medios de cultivo se clasifican dependiendo de las características
que se necesiten para su óptimo desarrollo los cuales según su consistencia pueden ser:

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Sólidos.

Presentan agar en proporción de 12 a 15 gramos por litro. Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el resultado del
crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se denomina unidad formadora de colonia (ufc) a una célula bacteriana viva y aislada que si se
encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la producción de una colonia en un breve lapso de tiempo

Semisólidos. Presentan agar en su composición con una concentración menor, entre 2.5 a 4 gramos por litro.

Justificación de materiales

(*) Se utilizo este tipo de bolsa para contener las muestras debido a que la iv region militar con cede en la ciudad de calpulalpan,tlaxcala indicó y ordenó que es
un lugar de conflicto armado protegido por la sedena y de seguridad fisica de pemex y que cualquier elemento punsocortante ya sea vidrio, metal o que represente
un arma o proyectil no esta permitido portarlo en aquella zona y como medida de seguridad salvaguardar en todo momento la integridad del muestreo y la vida e
integridad del recolector.

Objetivo:
Adiestrarse en técnicas de aislamiento y purificación de microorganismos comunes del ambiente suelo, agua y aire.

Objetivo especifico

Aprender a tomar muestras de microorganismos. Conocer cuál es el medio de cultivo necesario y optimo para los diferentes microorganismos según su deposito o
medio donde se hallarón.

Los microorganismos son ubicuos, por lo que la preparación de un cultivo puro implica no solo el aislamiento de un determinado microorganismo a partir de una
población microbiana natural mixta, sino también el mantenimiento del individuo aislado y de su descendencia, en un ambiente artificial al que se impide el acceso
de otras. Los microorganismos no requieren mucho espacio para su desarrollo de ahí que puede crearse un ambiente artificial dentro de los confines de un tubo de
ensayo, de un matraz o de una placa petri. (ingraham, j. 1992)

Equipos de medición

Cromatografo de gases Agilent modelo 7890a

Equipo de posicionamiento satelital Garmin etrex 12 canales gps, version de software 2.14

Equipos de recolección

Bolsa de venta libre de polipapel de 1 kg

Contenedor termico Rubermaid de 4 l
Cuchara de jardineria Trupper

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Materiales de laboratorio Cantidad Reactivos e insumos %. Peso
Cinta parafilm 1 Agar bacteriologico 0.5 % 6.75 gr
Cajas de cultivo petri 30 Bacto tryptone 0.5 % 2.25 gr
Asa de digralsky 1 Cloruro de sodio 0.3 % 2.25 gr

Bala de agitacion magnetica 1 dH2O 450 ml

Campana de flujo laminar 1 Etanol 96 % Abierto
Canastillas de pesaje 5 Extracto de levadura 1.5 % 1.25 gr
Espatula 1
Incubadora 1
Lamparas de alcohol 2
Matraz Erlenmeyer 500 ml 2
Micropipeta 0 – 100 l 1
Parrilla de calentamiento 1
Potenciometro 1
Probeta graduada 10 ml 1
Probeta graduada 50 ml 1
Puntas para pipeta de 100 l 20
Refrigerador 1
Refrigerador -4º C 1
Vaso de precipitados 50ml 2

Procedimiento de campo

De a cuerdo a la norma oficial mexicana NOM-138-SEMARNAT/SS1-2012 limites permisibles de hidrocarburos en suelos y las especificaciones para su
caracterización se colectaron las mustras in situ de las zonas de derrame en el municipio de Calpulalpan Taxcala en la comunidad de la soledad en el camino del
gasoducto con id: km 734 + 300 eq 20180 duc-tr-gsd-doo 4 trm - 0 – cruce, tramo de Jalapa – Venta de Carpio en las coordenadas señaladas utilizando una
cuchara de jardinero se realiza una excavación la cual la nom-138-semarnat/ss1-2012 señala en su apartado:

7.3 el responsable del muestreo debe integrar un plan de muestreo en el que:

7.3.1
 Se establescan y definan las responsabilidades del personal involucrado en cada procedimiento.
 Se sustente la ubicación y el numero de los puntos de muestreo, la profundidad y el volumen de las muestras.
 Se describa la técnica del muestreo, el equipo de muestreo y las medidas de seguridad.
 Se establescan las medidad de aseguramiento de calidad del muestreo incluyendo la cadena de custodia.

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Muestras de suelo contaminado

Se excavó por debajo de los 5 cm de corteza de suelo y se extrajeron 200 grs de tierra, ya extraida, pesada, etiquetada y depositada en el contenedor a -4º C se
marcaron con cal para señalar los puntos 0, I, II, III, IV sin contaminar las muestras de este elemento ocupado solo para señalizar. La separacion de estos puntos
corresponde a 5 metros entre ellos.

Muestra 0 Muestra I Muestra II

19.529472196522565, -98.60652778463889 19.529472156885785, -98.60638889310574 19.52947220716218, -98.60625000182598

Muestra III Muestra IV

19.529472217312264, -98.60597222002656 19.5294721771859, -98.6058333295069

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Vista aerea de zona de muestras Tubo asegurado SEDENA y Protección Fisica de PEMEX
19.54213044207396, -98.61199507869581

Ducto de Diesel y Gas sin refinar Vista General

19.54213044207396, -98.61199507869581

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7.4 Especificaciones técnicas para llevar a cabo el muestreo
7.4.1 Para la toma de muestras se debe apegar al plan de muestreo elaborado, las desviaciones al mismo se deben justificar y documentar.
7.4.2 Las muestras a tomar en un suelo contaminado siempre serán simples (material colectado en un solo punto de muestreo).
7.4.3 En el muestreo estadístico no se puede tomar muestras en los mismos puntos que los utilizados en el muestreo dirigido.
7.4.4 Evitar el uso de fluidos de perforación y la utilización de equipos y recipientes para las muestras que ocasione la pérdida de hidrocarburos volátiles y la
contaminación cruzada.
7.4.5 Durante la perforación para la obtención de muestras de suelo no se debe ocasionar la contaminación de acuíferos.
7.4.6 Como un procedimiento de aseguramiento de calidad, se tomará y analizará una muestra duplicada por cada diez muestras tomadas.

7.5.2 Los recipientes deben ser nuevos o libres de contaminantes.

1. El tiempo máximo de conservación se refiere al lapso que no deberá ser excedido desde que se toma la muestra hasta que se realiza la extracción del analito
de interés.

7.5.4 Cada muestra deberá ser sellada y etiquetada inmediatamente después de ser tomada y debe ser entregada para su análisis a un laboratorio de pruebas
acreditado.
7.5.4.3 Todas las etiquetas deben contar con la siguiente información como mínimo: nombre de la persona que tomó la muestra, fecha y hora de muestreo, nombre
de la empresa, lugar del muestreo, y número o clave única misma que la del sello.
7.6 El informe de la caracterización debe contener como mínimo lo establecido en todos los numerales de este capítulo, así como los resultados de los análisis
realizados, los métodos utilizados, la interpretación de los resultados, y se debe anexar la cadena de custodia correspondiente.

Anexo a. Metodos analiticos para la determinacion de hidrocarburos en suelos

1.2 preparación de la muestra

Para el análisis es necesario extraer previamente los hidrocarburos que están presentes en la muestra de suelo homogeneizada y cribada. Debe utilizarse un
sistema de purga y trampa, el cual está acoplado al cromatógrafo de gases con la finalidad de introducir los hidrocarburos directamente a la columna de separación,
inmediatamente después de haber sido purgados del suelo y concentrados en una trampa especial, con lo cual se reduce la manipulación de la muestra y los
tiempos entre la extracción y el propio análisis.
La técnica de purga y trampa consiste en hacer pasar una corriente de gas inerte a temperatura ambiente, a través de la muestra suspendida en agua reactivo y
calentada a 40°c. Los hidrocarburos ligeros se desorben del suelo, pasan a la fase gaseosa y son entonces captados por un material adsorbente en la trampa del

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equipo. Posteriormente, este material se calienta y se le hace pasar a contracorriente, un gas inerte que desorbe los hidrocarburos, arrastrándolos hacia la columna
del cromatógrafo.

1.3 calibración

De acuerdo al numeral 7.4.6 de la norma, cuando exista producto libre, éste deberá entregarse junto con
La muestra para calibrar el equipo y cuantificar la cantidad de producto derramado.
Para la calibración del equipo se deberá utilizar una mezcla estandarizada de compuestos puros que simulan una gasolina. Se deberán cumplir los requisitos de
calidad para métodos analíticos establecidos por la normatividad correspondiente.

La curva de calibración debe iniciar al menos en 10 mg/kg y hasta el rango lineal del equipo utilizado.

1.4 cuantificación

La cuantificación deberá realizarse por la suma de áreas de todos los picos que conforman el perfil dentro del intervalo de c5 (pentano) a c10 (naftaleno), a partir
́ ea base y no con el método de valle-valle.
de la lin

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1.5 reporte de resultados

Se deberá reportar la concentración de hidrocarburos de fracción ligera en mg/kg base seca, por lo cual será necesario determinar también la humedad de la
muestra conforme al método del anexo a.6 de esta norma.

De modo que a 5 cm de profundidad sobre la cortesa expuesta y tomando de la profundidad 200 grs. Y depositandola al interior de una (*)bolsa de polipapel de 1
kg y repitiendo la técnica para los puntos siguientes etiquetando desde 0 y hasta lV para identificar cada una y depositandola en contenedor refrigerador a -4 ºc y
trasladandolo a el Centro de Investigación Genética y Ambiente de la Universidad Autonoma de Tlaxcala C.I.G.Y A. Ubicado en mariano matamoros periféria, 90120
villa mariano matamoros, tlax.

Procedimiento de análisis

Metodología

Se pesan 0.5 gramos de cada punto (triplicado) de suelo contaminado y se agregan 1.5 ml (etanol polar, hexano no polar y cetona parcial mente polar) la primera
fase (scan) será para determinar que solvente mostró mejor lectura en el cromatógrafo.

Se depositarán en tubos Ependorf de 5 ml con 1.5 ml de cada solvente.

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Se homogenizaron en vortex y dejaron decantar
Se retiró el sobrenadante (2 ml)
Se depositó en viales
Se conservó a -4º c hasta calibrar cromatógrafo y realizar análisis de cromatografía de gases (stand by)

Análisis de muestras en cromatógrafo

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1E 2E 3E 4E 5E
ETANOL

ETANOL

1 EX 2 EX 3 EX 4 EX 5 EX
HEXANO

1C 2C 3C 4C 5C
CETONA

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Hipótesis
la preparación adecuada de los medios de cultivo, permitirá un buen crecimiento del microorganismo a usar.

SE PREPARÓ EL MEDIO

0.5% TRIPTONA 2.25 gr. IMAGEN DE AGARES USADOS

0.3% EXTRACTO DE LEVADURA 1.25 gr. DH20 450 ml MEDIO PREPARADO
1.5% AGAR 6.75 gr. pH 6.8 CAJAS DE CULTIVO PETRI
0.5% NACL 2.25 gr. CAMOANA DE FLIJO LAMINAR
LAMPARA DE ALCOHOL

NOMENCLATURA
ETIQUETA DE CAMPO ETIQUETA DE BOLSA ETIQUETA DE CAJA DE PETRI
MUESTREO I 0 0
MUESTREO II I I
MUESTREO III II II
MUESTREO IV III III
MUESTREO V IV IV

Se coloca en el area de campana de flujo laminas las cajas y encendiendo las lampara de alcohol dentro del radio de los 30 cm (área estéril) y abriendo el Matraz
de Erlenmeyer (medio) aplicando 30 ml (medición hecha en una probeta graduada de 50 ml) por cada caja petri y cerrandolas hasta gelificar o que el medio se
solidifique, con la micropipeta se miden 100 l del inoculo y se vacia en la caja petri con el medio y con el asa bacteriológica o de digralsky pasada por el mechero
para flamearla se extiende el inoculo sobre la superficie del inoculo, se sella con la pelicula de parafilm y se estiqueta.

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MUESTREO PUNTO 0 MUESTREO PUNTO I MUESTREO PUNTO II MUESTREO PUNTO III MUESTREO PUNTO IV

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Se realizó una resiembra con el mismo medio y el inoculo a una dilución a 1:10
Obteniendo los siguientes hallazgos:

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En las diluciones ll y lV (recuadro rojo) se mostró crecimiento de colonias lo cual muestra que la vertiente de los campos de muestra por ser arcillosos y con tepetate
manteniendo distintas concentraciones de los elementos aparentemente, siendo el mismo nivel de suelo, pero con depositos microbianos menos expuestos.

Resultados

RESULTADO DE CROMATOGRAFIA DE LAS MUESTRAS (CONCENTRACIONES) CON CETONA

PRUEBA 1C 2C 3C 4C 5C
CROMATOGRAFO 13.120 13.125 13.522 13.072 13.120
HEXADECANO, 2,6,10,14 HEXADECANO,2,6,10,14 CICLOHEXADECANO OCTADECANO, HEXADECANO,2,6,10,14
PRUEBA 1 DE MUESTRAS TETRAMETIL 1, TETRAMETIL 1 OCTATRIACANTE 1 OCTADECANO TETRAMETIL 1
DE CAMPO DE SUELOS TRITETRACANTANO TRITETRACANTANO PENTAFLUOROPROPIANATO NONADECANO TRITETRACANTANO
CONTAMINADOS PUNTOS DODECANO,2,6,11 TETRACANTANO HEXADECANO
O, I, II, III, IV TRIMETIL 1 HEXATRIACANTE 1
PENTAFLUOROPROPIANATO

RESULTADO DE CROMATOGRAFIA DE LAS MUESTRAS (CONCENTRACIONES) CON ETANOL

PRUEBA 1 ET 2 ET 3 ET 4 ET 5 ET
CROMATOGRAFO 13.744 13.130 13.077 12.352 13.125
NONADECANO HEXADECANO,6,10,14 OCTADECANO HEPTADECANO HEXADECANO 2,6,10,14
PRUEBA 1 DE MUESTRAS HEXADECANO TETRAMETIL 1 OCTADECANO PENTADECANO TETRAMETIL 1
DE CAMPO DE SUELOS TRIDECANO TRIDECANO 7 HEXADECANO HEPTADECANO HEXADECANO
CONTAMINADOS PUNTOS HEXY 1 TRITETRACANTANO
O, I, II, III, IV ACIDO METOXIACETICO 2
TETRADECI 1 ESTER

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RESULTADO DE CROMATOGRAFIA DE LAS MUESTRAS (CONCENTRACIONES) CON HEXANO
PRUEBA 1 EX 2 EX 3 EX 4 EX 5 EX
CROMATOGRAFO 13.120 13.141 13.173 12.362 13.125
HEXADECANO 2,6,10,14 HEXADECANO, 2,6,10,14 HEXADECANO HEPTADECANO HEXADECANO 2,6,10,14
PRUEBA 1 DE MUESTRAS TETRAMETIL 1 TETRAMETIL 1 TETRADECANO TETRADECANO TETRAMETIL 1
DE CAMPO DE SUELOS TRITETRACANTANO TRITETRACANTANO DODECANO 2,6,11 TETRADECANO TRITETRACANTANO
CONTAMINADOS PUNTOS HEPTADECANO 2,6,10,15 TETRACANTANO TRIMETIL 1 HEXADECANO
O, I, II, III, IV TETRAMETIL 1

El coeficiente de distribución agua-suelo/sedimento (kd) de contaminantes no polares es fuertemente dependiente del contenido de materia orgánica del suelo o
sedimento (fom) o alternativamente del contenido de carbón orgánico del suelo/ sedimento (foc) (chiou et al. 1998). Se expresa la siguiente relación:

koc=kd/foc

Parámetros en el transporte de contaminantes en suelo

Relación de compuestos orgánicos y su destino en el ambiente

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 Laboratorio de Nutrición Vegetal, S.C.
“La Perfección en Calidad Analítica”

D IA G N OS T IC O D E L A FE R TI LID A D D E L S UEL O
I nf or m a ci ó n G eneral
Antecedentes de suelo

No. de Registro: SU- 19066 Rancho: La Soledad Cultivo Anterior:

Centro de Recepcion: Sector del Predio: San Antonio Calpulalpan Manejo de Residuos:
Fecha Recepción: 25/04/2013 Prof. Muestra: 0-30 cm Cultivo a Plantar: Maiz
Fecha Entrega: 01/05/2013 Ubicación GPS Lat: Long: Meta de Rendimiento: 5 Ton/Ha
Id Cliente: 9,351 Municipio : Calpulalpan Tipo de Agricultura: Temporal

FAVIAN SALVADOR SANDOVAL SOSA

Cliente: Emiliano Sant am ari a Hernand ez Estado: Tlaxcala Fuente de Agua:

Propieda des Físicas del Suelo Reacción del Suelo y Necesidades de Yeso

Clase Textural: Franco Color Muns ell pH (1:2 agua) : 7.30 Neutro
Punto de Satur aci ón : 35.0 % Mediano Seco: ND pH Buffer : ND
Capaci dad de Campo : 18.5 % Mediano Hum: ND Carbonatos Totales (%): 1.43 % Libre
Punt o Marc h. Perm. : 11.0 % Mediano Dap: 1.01 g/cm3 Salinidad (CE Extracto) : 0.31 ds/m Muy Bajo
Cond. Hidráulica : 4.68 cm/hr Mod. Alto Requerimientos de Yeso : No Req. Ton/Ha

Fertilab Fertilab Fertila b Fertilab Fertilab Fertilab Fertilab Fertilab Fertilab Fertilab Fertilab Fertila b FertilabFertilab Fertilab

Fertilidad del Suelo Cationes Intercambia ble s

Muy Mod. Mod. Muy Gráfico Basado en % de Saturación
Det Result Unid Bajo Bajo Bajo Mediano Alto Alto Alto
MO 1.04 %
Muy
N-Inorg. 6.71 ppm Alto
P-Bray 64.9 ppm
K 227 ppm
Alto
Ca 2472 ppm
Mg 412 ppm
Na * 24.8 ppm Medio
Fe 33.0 ppm
Zn 1.02 ppm
Bajo
Mn 18.6 ppm

programa de fertilizacion de los suelos en beneficio de los productores de maiz, papa y alfalfa.
Cu 0.63 ppm Muy
B 0.34 ppm Bajo
S 21.6 ppm

Reporte de suelo por fertilab cortesia de que funciona para el desarrollo a.c. (Q.F.D.) 25/04/2013 * Es deseable que estos elementos tengan un bajo contenido
% Sat 75.2 20.5 3.52 0.67 ND ND

Fertilab Fertilab Fertilab Fertila b Fertilab Fertilab Fertila b Fertilab Fertila b

meq/
Relaciones entre cationes (basadas en me/100g) 100g 12.4 3.38 0.58 0.11 ND ND 16.5
Relación Ca/K Mg/K Ca+Mg/K Ca/Mg

Resultad os 21.0 5.83 27.2 3.67 Catión Ca Mg K Na* Al* H* CIC

Interpretación Muy Alto Muy Alto Mediano Mediano

Interpretación Resumida del Diagnostico de la Fertilidad del Suelo

Suelo con pH neutro, textura media, libre de salinidad, bajo en materia organica, con moderadamente alta
conductividad hidraulica, con moderadamente bajo nivel de nitrogeno disponible(27 Kg/ha), muy alto en fosforo,
mediano en potasio y moderadamente alto en magnesio.
En cuanto a la disponibilidad de micronutrientes: sin limitaciones aparentes de fierro, el zinc se presenta en una
concentracion moderadamente baja, sin limitaciones aparentes de manganeso, el cobre se presenta en una
concentracion moderadamente baja y el boro se encuentra en una concentracion muy baja.
18
En relacion a previos estudios celebrados por la empresa contratada por la para estatal de sagarpa para determinar los nutrientes y elementos en esa zona para el
Discusión de resultados
Como menciona el apartado 1.4 referente a la “cuantificación” deberá realizarse por la suma de áreas de todos los picos que conforman el perfil dentro del intervalo
de c5 (pentano) a c10 (naftaleno), sin embargo recordemos que solo se muestrearon 5 puntos y no 10 asi como dice el apartado 7.4.6 de la NOM-138-semarnat/ss1-
2012 que no deberan hacerse por duplicado si no son mas de 10 puntos de muestreo

Conclusión
El estudio solo es la primera parte de estos 5 puntos del area afectada, los resultados son altos en concentracion de varios elementos contaminantes de el
hidrocarburo sin embargo podemos decir que la bioremediación es posible y que en comparación a los antecedentes de los suelos (fertilab) las concentraciones
aun no rebazan las 120.000 ppm de los cultivos, desde la solubilidad hasta la polaridad y el contenido y retencion de agua hasta la profundidad a la que viaja el
agua subterranea ademas de la temperatura, evapotranspiración de los sitios, el inocular planta con microorganismos que degraden estos agentes contaminantes
son la mejor opción a corto plazo.

Alternativa
Dependiendo del tipo de suelo este puede recuperarse de forma natural, siempre y cuando ya existan los microorganismos nativos que degraden los hidrocarburos.
Lo que buscan los científicos es que las poblaciones de microorganismos se equilibren, localizando a las que ya viven en el suelo y se alimentan del hidrocarburo
para, entonces, aumentar el número de bacterias para que la bioremediación del suelo se acelere.

El proceso mixto de las bacterias que impulsan el desarrollo de las plantas y las que ayudan a que se hagan solubles los hidrocarburos se llama fitoremediación, o
rizoremediación. Este proceso debería ser la parte final de una recuperación integral del suelo, porque la bioremediación tiene algunas limitantes.
Los microorganismos no soportan suelos muy contaminados, que tengan arriba de “120 mil partes por millón” (unidad de medida utilizada para medir
concentraciones).
Nosotros tenemos bacterias que llegan a soportar hasta 80 o 100 mil partes por millón, que son bastante resistentes. Pero ya en un proceso in situ, en la realidad,
estas concentraciones (de hidrocarburos) son muy altas”, trabajar específicamente con bacterias promotoras de crecimiento vegetal, junto con las encargadas de
producir biosulfactantes, compuestos producidos por bacterias que tienen la capacidad de solubilizar hidrocarburos, a su vez compuestos “hidrofóbicos”, es decir,
que no se disuelven en agua e
inocular de forma mixta bacterias que promuevan el crecimiento de la planta, y bacterias que produzcan detergentes naturales”

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BIBLIOGRAFíA

 Biología de los microorganismos – michael t. Madigan, john martinko, jack parker – editorial pearson intro. A la microbiología – gerard j. Tortora – editorial
medica panamericana

 García gustavo, gómez guillermo, velásquez luis, pineda fabio, saldarriaga yamillé; manual de laboratorio de microbiología general; medellín 2-garcía martos
p, fernández del barrio m. T, paredes salido f; microbiología clínica practica; 2 ed.

 Universidad cadiz; 1994. Disponible en: http://books.google.com.co/books?id=4n8qvkckruuc&pg=pa59&lpg=pa59&dq=a

gar+nutritivo&source=bl&ots=mzpornhtoh&sig=rjfj5papqno8zc14ata0ryhjht k&hl=es-
419&sa=x&ei=fip1upjfe3gsasquiggaw&ved=0cd8q6aewbtgk#v=onepage&q=agar%20nutritivo&f=t rue 3-elmer w, koneman,stephen allen; koneman.

 Laboratorios britania; nutritivo agar. Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/234_inserto_es.pdf 7- garcía martos p, fernández del barrio m. T,
paredes salido f; microbiología clínica practica; 2 ed.

 Universidad cadiz; 1994.disponible en: http://books.google.com.co/books?id=4n8qvkckruuc&pg=pa59&lpg=pa59&dq=a

gar+nutritivo&source=bl&ots=mzpornhtoh&sig=rjfj5papqno8zc14ata0ryhjht k&hl=es
 419&sa=x&ei=fip1upjfe3gsasquiggaw&ved=0cd8q6aewbtgk#v=onepage&q=agar%20nutritivo&f=f alse 8-whin, allen, janda, koneman, procop,
schereckenberg, woods. Koneman; diagnostico microbiológico.

 Norma oficial mexicana nom-138-semarnat/ssa1-2012, límites máximos permisibles de hidrocarburos en suelos y lineamientos para el muestreo en la
caracterización y especificaciones para la remediación.
 La restauración de suelos contaminados con hidrocarburos en méxico oscar ortínez brito, irina ize lema y arturo gavilán garcía
 Centro de investigación en ciencias microbiológicas de la buap, armando tapia hernández, https://ladobe.com.mx/2017/06/buap-bacterias-plantas-
recuperar-suelos-contaminados-hidrocarburos

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