Análisis clínico II

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ANÁLISIS CLINICOS II

PRACTICA N ° 2
TEMA: Determinación Enzimática de Colesterol en suero sanguíneo

DOCENTE: Q.F. Enrique León Mejía

TURNO: Mañana CICLO: VII

ALUMNAS: Torres Saavedra, Jacqueline Rosaura

Villanueva Velasquez, Liseth Madelein

FECHA DE ENTREGA: 18 de julio de 2018

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DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE COLESTEROL EN SUERO

SANGUÍNEO

I- INTRODUCCION
El colesterol fue descubierto en 1770 por el francés Poulletiere de la Salle, quien
lo aisló de los cálculos biliares, por lo que en un principio se denominó
colestiramina (grasa biliar), y luego pasó a llamarse colesterina (chole=bilis y
stereos=sólido). Finalmente se denominó colesterol cuando se comprobó la
presencia de un OH" en su molécula. En 1843, Vogel detectó la presencia de
colesterol en placas ateromatosa1.Diversos estudios epidemiológicos han
confirmado que el exceso de colesterol de LDL con respecto a un valor crítico
(1,9 g/l) debe ser considerado como factor de riesgo para el desarrollo de
enfermedad cardíaca coronaria, considerando que el efecto protector de las HDL
sólo parece tener relevancia dentro de cierto rango de concentraciones de
colesterol circulante. Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados
de colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como índices predictivos de
riesgo, sino que es necesario conformar un perfil lipídico con los valores de
colesterol total, colesterol de HDL y colesterol de LDL2.

Los análisis clínicos y las observaciones histológicas establecieron que la

aterosclerosis y sus complicaciones cardíacas están ligadas al metabolismo
anormal de los lípidos. Pero no podemos olvidar que el colesterol es un elemento
esencial para la mayoría de las células del organismo, siendo la regulación de su
metabolismo de vital importancia para un buen funcionamiento de las mismas.
En el hepatocito, esta regulación resulta de un equilibrio entre, la llegada de
colesterol vía lipoproteínas plasmáticas, la síntesis de novo de colesterol en la
propia célula y la salida de éste en forma de lipoproteínas y como componente
de la bilis1. Los valores de colesterol sérico por arriba de lo normal, se
correlacionan con un aumento en la frecuencia de arteriosclerosis y
coronariopatía, mientras que los valores bajos constituyen una característica de
hipertiroidismo3.

Dada a su importancia en esta práctica se aprenderá a determinar el colesterol

total en suero sanguíneo, para así poder descartar cualquier tipo patologías que
puede causar el nivel elevado o bajo de colesterol en nuestro organismo.

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II- MARCO TEORICO

Colesterol

El colesterol (3-hidroxi-5,6 colesteno) es una molécula indispensable para la

vida, desempeña funciones estructurales y metabólicas que son vitales para el ser
humano. Se encuentra anclado estratégicamente en las membranas de cada
célula donde modula la fluidez, permeabilidad y en consecuencia su función.
Esta regulación implica que el contenido en colesterol de las membranas
modifica la actividad de las enzimas ancladas en ellas, así como la de algunas
proteínas transportadoras y de receptores de membrana.4

Desempeña una función muy

importante como constituyente de las membranas plasmáticas y de las
lipoproteínas del plasma sanguíneo. Es además, el precursor de todos los otros
esteroides del organismo humano. Se le encuentra en cantidades considerables
como éster de colesterol o colesterol libre, en alimentos de origen animal, como
la yema de huevo, el hígado, cerebro, carnes y mariscos. Se sintetiza en la mayor
parte de las células animales, pero son las células hepáticas las más activas. Se
elimina del cuerpo principalmente a través de la bilis, como colesterol y sales
biliares2.
Colesterol ¿bueno o malo?
 Lipoproteínas de baja densidad o LDL, que también se conocen como
colesterol “malo”. Son las lipoproteínas encargadas de transportar el
colesterol a los tejidos para su utilización, incluyendo las arterias. La
mayor parte del colesterol en sangre es colesterol LDL. Cuanto mayor
sea el nivel de colesterol LDL en sangre, mayor es el riesgo de
enfermedad cardiovascular5.

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 Lipoproteínas de alta densidad, o HDL, también conocidas como

colesterol “bueno”, porque son las encargadas de recoger el colesterol de
los tejidos y transportarlo al hígado para su eliminación a través de la
bilis. Un nivel bajo de colesterol HDL, aumenta el riesgo de enfermedad
cardiovascular5.
Riesgos del colesterol elevado
Origina la enfermedad ateroesclerótica cardiovascular que es la principal causa
de mortalidad. La enfermedad ateroesclerótica incluye la enfermedad coronaria
(angina e infarto de miocardio), cerebrovascular (infarto cerebral o ictus) y la
enfermedad arterial periférica (claudicación o dolor en las piernas).
El colesterol elevado es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular,
junto con el tabaco, la hipertensión arterial y la diabetes mellitus. También puede
ser causa de enfermedad cardiovascular el aumento de los triglicéridos y un
colesterol-HDL bajo5.

Las causas
Algunos factores relacionados con el estilo de vida pueden aumentar la
probabilidad de tener colesterol alto. Es una alimentación poco saludable que
contiene muchas grasas saturadas, la falta de ejercicio físico, ser obeso, fumar y
beber grandes cantidades de alcohol.
Una serie de enfermedades tratables también puede provocar colesterol alto en la
sangre. Estas enfermedades son: hipertensión (tensión arterial alta), diabetes,
enfermedades del riñón e hígado, inflamación aguda del páncreas (pancreatitis
aguda) e hipoactividad de la glándula tiroides.
Un conjunto de factores de riesgo fijos también puede provocar colesterol alto
en la sangre. La probabilidad de tener colesterol alto es mayor si existen

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antecedentes familiares de cardiopatías coronarias, accidentes cerebrovasculares

u otras enfermedades relacionadas con el colesterol. La edad, una menopausia
temprana en la mujer y el origen étnico también son factores de riesgo.6

Diagnostico
Normalmente, se hace un análisis sanguíneo para medir el nivel de colesterol.
Antes del análisis, le pedirán que no coma durante las 12 horas previas para que
toda la comida se haya digerido completamente y no influya en el resultado del
análisis.
El colesterol en la sangre se mide usando unas unidades denominadas milimoles
por litro (mmol/litro). En el RU, el consejo gubernamental actual es tener un
nivel de colesterol en la sangre menor de 5 mmol/litro, y un nivel de colesterol
LDL por debajo de los 3 mmol/litro.
Es especialmente importante que compruebe el nivel de colesterol si tiene
algunas de las enfermedades tratables. Al hacerse una evaluación se tendrán en
cuenta los riesgos de enfermedad cardiovascular, así como el nivel de colesterol,
los factores del estilo de vida y las enfermedades tratables que tenga, así como la
edad, sexo y origen étnico5.
Tratamiento
Una alimentación sana baja en grasas saturadas puede reducir el nivel de LDL
(“colesterol malo”). Deben incluirse alimentos de todos los grupos:
carbohidratos (cereales, arroz, patatas, pasta), proteínas (carne magra, pollo y
pescado azul) y grasas no saturadas (pasta de untar con monosaturados o
polisaturados, y aceite vegetal y de girasol). También deberá comer al menos
cinco raciones de fruta y verdura al día.
Las estatinas pueden reducir el nivel de colesterol. Son útiles en la prevención y
tratamiento de la ateroesclerosis.

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III- PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y Equipos a usar:

 Centrifuga

 Espectrofotómetro

 Cubetas

 Micropipetas

 Tips o puntas

 Tubos de prueba 13 x 100

 Gradillas

 Pisetas

 Ligaduras

 Alcohol

 Agujas

 Guantes descartables

Reactivos:

 Colesterol Ester hidrolasa

 Colesterol oxidasa

 Peroxidasa

 Sol Estándar [200mg/Dl]

PROCEDIMIENTO
Obtención de la M.P. suero sanguíneo
Para este análisis, la persona a quien se la va extraer la sangre tiene que estar con
12 horas de ayuno aproximadamente.
Extracción de sangre venosa
Extraer la sangre en un tubo de ensayo, aproximadamente la mitad del tubo.

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Luego de la extracción, lo llevamos a centrifugar por 10 minutos a 2500 RPM

con una cantidad de agua igual al de la muestra en otro tubo de ensayo y lo
pusimos frente a la muestra para poder equilibrar.

Finalmente se obtuvo la M.P de suero sanguíneo

Determinación de colesterol total

Técnica
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Pipetear en tubos rotulados:

Tubos Blanco St M

R. Enzimática(Ml ) 1 mL 1mL 1mL

H2O(μL) 10 μL -

Sol. Stand (μL) 10 μL

Suero sanguíneo(μL) - - 10 μL

Mezclar 10 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 505 nm.

Vamos a coger tres tubos de ensayo rotulados (blanco, solución estándar y

muestra) vamos a poner 1mL del R. Enzimático a cada uno de los tubos, luego
al tubo de blanco agregar 10 μL de agua, al tubo Sol.Standar agregar 10 μL de
solución estándar.

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Standar y blanco

Finalmente al tubo de la muestra agregar 10 microlitros de suero sanguíneo.

Mezclamos e incubamos a 5 minutos a temperatura ambiente .Leemos la

absorbancia(A) en el espectrofotómetro a - 540 nm

IV- RESULTADOS:

Resultado de Abs.

Stándar 0,527

M.de Jacqueline 0,186

M. de Liseth 0,293

CALCULOS

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Col. (mg/dL) =F x Abs x M.

Rango de referencia

140- 200 mg/ dL.

Jacqueline:

= 379,51

379.51 X 0.186 = 70,49 Muy bajo según las rangos referenciales

Liseth:

= 379,51

379.51 X O.293 = 111,19 Bajo según

los rangos referenciales

V- INTERPRETACIÓN:
Según los rangos de referencias, los resultados obtenidos: 70,49 y 111,19 se
encuentran debajo de los rangos normales. El colesterol bajo se debe a
muchas causas posibles como son:
 Hipertiroidismo.
 Patologías hepáticas.
 Enfermedades de malabsorción.
 Enfermedad Celíaca.
 Enfermedades genéticas.
 Deficiencia de manganeso.
 Enfermedades hematológicas.
 Alimentación insuficiente
VI- CONCLUSIONES

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 El análisis de colesterol salió bajo según los rangos referenciales. Se

llamaría hipocolesterolemia.

 El colesterol es un compuesto químico, un alcohol, que forma parte

del grupo de lípidos conocidos como esteroides.

 Los lípidos en general (del griego lipos, grasa) son sustancias de

origen orgánico que junto con los hidratos de carbono y las proteínas
se encuentran en todos los organismos vivos y desempeñan un papel
fundamental en el mantenimiento de la vida.

 Dentro del grupo de lípidos conocidos como esteroides se clasifican

diferentes tipos de sustancias.

VII- CUESTIONARIO

1. Como explica las reacciones que ocurren en la determinación de

colesterol total por el método enzimático.

El colesterol se determina por acción de las enzimas Colesterol éster

hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los ésteres
de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido
de hidrogeno, el cual en presencia de la enzima proxidasa reacciona con el
sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a
505 nm.

Colesterol éster CEH Colesterol ácidos grasos

Colesterol O2 CHOD Colest-4-en-ona H2O2

2H2O2 4-AAP p-HBA PAP Comp. Coloreado 4H2O

2. Que precauciones se deben tener con respecto a los reactivos que

intervienen en esta práctica enzimática.
Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación
de los reactivos. No utilizar los reactivos cuando la absorbancia del reactivo
de trabajo o de la mezcla medida contra agua o cuando los reactivos
estuvieran turbios o con señales de contaminación7.

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En los analizadores automáticos, los reactivos están sujetos a

contaminaciones con otros reactivos o con el aire del ambiente, dependiendo
de las características del equipo y de las condiciones de trabajo. Estas
contaminaciones pueden provocar reducción de la estabilidad de los
reactivos o modificaciones en su desempeño, requiriendo una nueva
calibración del sistema7.
Como ocurre en toda medición enzimática, la rigurosa observación del
tiempo y de la temperatura de incubación es de gran importancia para la
calidad de resultados obtenidos.
Los reactivos contienen azida sódica que es toxica. No ingerir y, en caso de
contacto de con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y
procurar ir al médico7.
3. Porque es importante la determinación de colesterol en una persona de
edad avanzada

Más del 80% de los individuos que mueren por enfermedad arterial coronaria
son mayores de 65 años. Fumar, hipertensión, dislipidemia y diabetes son los
principales factores de riesgo para todas las edades, pero el riesgo absoluto
aumenta exponencialmente a medida que avanza la edad. La OMS estima
que la dislipidemia está asociada con más de la mitad de los casos de muerte
por enfermedad coronaria, representando más de 4 millones de muerte por
año.

La decisión clínica para el control de los factores de riesgo de enfermedad

cardiovascular en ancianos tiene en consideración no solo la edad, sino
también la esperanza de vida y la capacidad funcional. La decisión de
rastrear y tratar la dislipidemia en el anciano debe ser individualizada para
cada paciente, basándose en la edad cronológica y fisiológica, teniendo en
cuenta la funcionalidad. Por otra parte un anciano saludable debería recibir
fármacos hipolipemiantes ya que el beneficio del tratamiento supera
ampliamente sus riesgos, no solamente por disminuir el colesterol sino
también debido a sus efectos adicionales llamados pleiotrópicos, que se han
demostrado con estatinas. La valoración y el riesgo del beneficio del
tratamiento hipolipemiante en ancianos deberían basarse en la determinación
del riesgo de enfermedad cardiovascular8.

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4. Cuál es el origen del colesterol, como se sintetiza el colesterol

El colesterol endógeno se produce principalmente en el hígado. Su

fabricación se inicia en unos organelos celulares llamados mitocondrias y es
el producto de varias reacciones químicas controladas por enzimas. En la
cadena de reacciones necesarias para producir colesterol interviene una
enzima, la B-hidroximetilglutaril CoA reductasa o hmg -CoA reductasa que,
con todo su nombre, es el paso limitante, la llave, de dichas reacciones. La
mencionamos porque la industria farmacéutica ha producido medicamentos
que inactivan esta enzima, con lo cual se puede interrumpir la fabricación de
colesterol dentro de las células. En las personas que se alimentan de manera
occidental, aproximadamente dos terceras partes del colesterol total que
poseen son producidas por el propio organismo.

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VIII- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Molina M, Vásquez C, Ruiz V[internet]. Metabolismo del colesterol su
regulación a nivel hepático e intestinal: Consejo Superior de Investigaciones
Científicas: España [Citado el 11 de julio de 2018]. Disponible en:
http://grasasyaceites.revistas.csic.es/index.php/grasasyaceites/article/viewFile/12
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Médicos: 2012. [Citado el 11 de julio de 2018]. Disponible en:
http://trabajosmedicos.blogspot.com/2012/08/determinacion-de-colesterol-total-
y-ldl.html
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Universidad de San Carlos de Guatemala; 2017.[Citado el 11 de julio de 2018].
Disponible en:
http://www.medicinaresources.com/medicinaresources_staticfiles/bioquimica/la
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implicaciones médicas: Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas. México;
2011.[Citado el 12 de julio de 2018].Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/pdf/rmcf/v43n2/v43n2a2.pdf
5. Sistema de Gestión de Seguridad y Salud en el Trabajo Bienestar Universitario.
[internet]. Colesterol y triglicéridos: Universidad de Santander:2017.[Citado el
12 de julio de 2018]Disponible en:
http://www.udes.edu.co/images/otros/EVS/CORAZON_SALUDABLE/COLES
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6. Choices [internet]. El Colesterol: Queen’s Printer and Controller of HMSO
2008. [Citado 12 de Julio de 2018]. Disponible en:
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8. Golán S[internet]. Dislipemias en ancianos: Revista Argentina de Gerontología y
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