Este documento describe el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI, el cual permite realizar la identificación bioquímica y el antibiograma de enterobacterias de forma simultánea. El sistema contiene 24 pozos con substratos y antibióticos desecados. Al inocular una muestra bacteriana e incubarla, los resultados de la identificación y el antibiograma se interpretan observando el cambio de color en los pozos.
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Este documento describe el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI, el cual permite realizar la identificación bioquímica y el antibiograma de enterobacterias de forma simultánea. El sistema contiene 24 pozos con substratos y antibióticos desecados. Al inocular una muestra bacteriana e incubarla, los resultados de la identificación y el antibiograma se interpretan observando el cambio de color en los pozos.
Este documento describe el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI, el cual permite realizar la identificación bioquímica y el antibiograma de enterobacterias de forma simultánea. El sistema contiene 24 pozos con substratos y antibióticos desecados. Al inocular una muestra bacteriana e incubarla, los resultados de la identificación y el antibiograma se interpretan observando el cambio de color en los pozos.
Este documento describe el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI, el cual permite realizar la identificación bioquímica y el antibiograma de enterobacterias de forma simultánea. El sistema contiene 24 pozos con substratos y antibióticos desecados. Al inocular una muestra bacteriana e incubarla, los resultados de la identificación y el antibiograma se interpretan observando el cambio de color en los pozos.
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ESPAÑOL
INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI
Sistema colorimétrico para la identificación bioquímica y el antibiograma de las enterobacterias DESCRIPCIÓN INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI es un sistema de 24 pozos que contienen substratos bioquímicos y antibióticos desecados para la identificación bioquímica y el antibiograma de las enterobacterias. El sistema se inocula con la suspensión bacteriana del microorganismo en examen e incubado a 36 °C ± 1°C por 18-24 horas. Los tests para la identificación y para el antibiograma se interpretan evaluando el viraje de color de los distintos pozos del sistema. CONTENIDO DE LOS ESTUCHES El estuche contiene: •20 Sistemas INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI • 20 Oxidase Disc •20 Ampollas de Suspension Medium (7.0 ml/ampolla) • 1 Hoja instrucciones PRODUCTOS NECESARIOS NO CONTENIDOS • Aceite de vaselina para uso microbiológico (Vaseline oil 2 frascos de 50 ml).........……………....cód. 80278 • Physiological Solution (20 ampollas de 7.0 ml/ampolla)….............................................................cód. 20095 • Kovac’s Reagent (2 frascos de 25 ml)..………………………………………………….……..................................cód. 80270 • Material vario para laboratorio de microbiología CONFIGURACIÓN El sistema presenta la configuración indicada en la tabla n°1. Tabla n°1 Pozo IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA 1-LDC Descarboxilación de la lisina 2-ODC Descarboxilación de la ornitina 3-H2S Producción de hidrógeno sulfurado 4-IND Test del indol 5-LAC Fermentación de la lactosa 6-DUL Fermentación del dulcitol 7-PA Desaminción de la fenilalanina 8-UR Hidrólisis de la urea 9-CIT Utilización del citrato 10-OX Test de la oxidasa Pozo ANTIBIOGRAMA (*) 11-AK Amikacina - 32 μg/ml 12-CN Gentamicina - 8 μg/ml 13-TOB Tobramicina - 8 μg/ml 14-TZP Piperacillina+Tazobactam - 128/4 μg/ml 15-FOS Fosfomicina - 200 μg/ml 16-CFP Cefoperazona - 64 μg/ml 17-CTX Cefotaxima - 64 μg/ml 18-CAZ Ceftazidima - 32 μg/ml 19-AMS Ampicillina + Sulbactam – 32/16 μg/ml 20-NA Ácido Nalidixico - 32 μg/ml 21-CIP Ciprofloxacina - 4 μg/ml 22-LEV Levofloxacin - 8 μg/ml 23-SXT Co-Trimoxazolo - 8 μg/ml 24-C Control de crecimiento para el antibiograma
(*): La concentración de cada antibiótico es conforme a las normas actualizadas NCCLS-January 2004, Vol 24 N°1.(1)
2 1 PRINCIPIO DEL MÉTODO INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI permite realizar simultáneamente la identificación bioquímica y el antibiograma de las enterobacterias aisladas de muestras clínicas. • La identificación se basa en pruebas bioquímicas realizadas en terrenos de cultivo que contienen substratos específicos en los pozos de 1-LDC a 10-OX. • El antibiograma se evalúa en base al crecimiento o a la inhibición de los microorganismos en terrenos que contienen el antibiótico y un indicador de crecimiento en los pozos de 11-AK a 23-SXT. El pozo 24-C no contiene antibióticos, sino solamente el terreno de cultivo y el indicador y sirve como control del crecimiento microbiano para el antibiograma.
COMPOSICIÓN Tabla n°2 Pozo Contenido 1-LDC Terreno para la evidenciación de la lisina descarboxilasa 2-ODC Terreno para la evidenciación de la ornitina descarboxilasa 3-H2S Terreno para la evidenciación de la producción de hidrógeno sulfurado 4-IND Terreno para la evidenciación del indol 5-LAC Terreno para la evidenciación de la fermentación de la lactosa 6-DUL Terreno para la evidenciación de la fermentación del dulcitol 7-PA Terreno para la evidenciación de la fenilalanina desaminasa 8-UR Terreno para la evidenciación de la hidrólisis de la urea 9-CIT Terreno para la evidenciación de la utilización del citrato 10-OX Terreno para la evidenciación de la oxidasa 11-AK Terreno que contiene Amikacina - 32 μg/ml 12-CN Terreno que contiene Gentamicina - 8 μg/ml 13-TOB Terreno que contiene Tobramicina - 8 μg/ml 14-TZP Terreno que contiene Piperacillina+Tazobactam - 128/4 μg/ml 15-FOS Terreno que contiene Fosfomicina - 200 μg/ml 16-CFP Terreno que contiene Cefoperazona - 64 μg/ml 17-CTX Terreno que contiene Cefotaxima - 64 μg/ml 18-CAZ Terreno que contiene Ceftazidima - 32 μg/ml 19-AMS Terreno que contiene Ampicillina + Sulbactam - 32/16 μg/ml 2-NA Terreno que contiene Ácido Nalidixico - 32 μg/ml 21-CIP Terreno que contiene Ciprofloxacina - 4 μg/ml 22-LEV Terreno que contiene Levofloxacin - 8 μg/ml 23-SXT Terreno que contiene Co-Trimoxazolo - 8 μg/ml 24-C Terreno sin antibióticos
Suspension Medium(g/l): Extracto de levadura 5g; Peptona de carne 3g;Glucosa 2g;Agua destilada1000,0 ml pH 6.8±0.2
RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS
Las colonias a someter al test de identificación bioquímica y al antibiograma con INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI se tienen que tomar de un terreno de cultivo, selectivo o no selectivo, utilizado para el aislamiento de las Enterobacterias.
2 2 PROCEDIMIENTO DEL TEST 1. Tomar un sistema del kit. 2. Tras asegurarse, con oportunas investigaciones, que las colonias desarrolladas en terrenos de cultivo pertenecen presuntivamente al grupo de los Enterobacterias, tomar una o más colonias morfológicamente similares, bien aisladas, de un terreno de cultivo sólido y ponerlas en suspensión en 5 ml de solución fisiológica para uso microbiológico a fin de obtener una turbidez equivalente a 0,5 McFarland (Suspensión bacteriana).
3. Transferir: • 0,2 ml de Suspensión bacteriana en los primeros 10 pozos y añadir a los pozos 1-LDC, 2-ODC, 3- H2S y 8-UR 2 gotas de aceite de vaselina para uso microbiológico (IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA). • 0,01 ml de Suspensión bacteriana en la ampolla de Suspension Medium contenido en le kit y distribuir 0,2 ml en los pozos de 11-AK a 24-C. (ANTIBIOGRAMA). 4. Cubrir el sistema con la tapa al efecto e incubar a 36 °C ± 1°C por 18-24 horas.
5. Después de la incubación, añadir:
• 2 gotas de Kovac’s Reagent al pozo 4-IND (TEST DEL INDOL). • 1 disco de OXIDASE DISC al pozo 10-OX (TEST DE LA OXIDASA). INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Interpretar los resultados de los primeros 10 pozos utilizando la tabla n°3 y formar el código numérico de 4 cifras siguiendo las instrucciones indicadas en el párrafo FORMACIÓN DEL CÓDIGO NUMÉRICO. Luego remontar a la identificación bacteriana sirviéndose del tabulado de los códigos numéricos (tabla n°5). ANTIBIOGRAMA Observar el viraje de color de los pozos de 11-AK a 23-SXT e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n°3 . El pozo de control (24-C) tiene que resultar positivo (amarillo). En caso de que resultara negativo (azul o gris), es necesario verificar la vitalidad de la inoculación, su correcta preparación y proceder a la repetición del test utilizando un nuevo sistema. Tabla n°3 Color pozo Pozo IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Reacción Reacción positiva negativa 1-LDC Descarboxilación de la lisina Violeta Amarillo-Marrón 2-ODC Descarboxilación de la ornitina Violeta Amarillo-Marrón 3 -H2S Producción de hidrógeno sulfurado Negro Amarillo 4-IND Test del indol Anillo rosa-rojo Amarillo 5-LAC Fermentación de la lactosa Amarillo Azul-Verde 6-DUL Fermentación del dulcitol Amarillo Azul-Verde 7-PA Desaminación de la fenilalanina Negro-Marrón Amarillo Amarillo- 8-UR Hidrólisis de la urea Rojo-Fucsia Anaranjado 9-CIT Utilización del citrato Azul-Verde oscuro Verde Azul-Púrpura 10-OX Test de la oxidasa Incoloro (reacción immediata)
ANTIBIOGRAMA COLOR POZO CRECIMIENTO BACTERIANO INTERPRETACIÓN Azul Inhibida S = Sensible Gris Intermedia I = Sensibilidad intermedia Amarillo Buena R = Resistente
2 3 FORMACIÓN DEL CÓDIGO NUMÉRICO 1) Los 10 tests bioquímicos están divididos en 3 grupos que contienen 3 tests y un grupo que contiene 1 test, y cada uno es indicado por un valor de resultado positivo de 1,2,4. • Valor 1: primer test positivo de cada grupo • (LDC, IND, PA,OX) • Valor 2: segundo test positivo de cada grupo • (ODC,LAC,UR) • Valor 4: tercer test positivo de cada grupo • (H2S, DUL,CIT) • Valor cero: reacciones negativas de cada grupo 2) Añadiendo en cada grupo los números de las reacciones positivas, se obtiene un código de 4 cifras que, sirviéndose del tabulado de los códigos numéricos, permite identificar el microorganismo en examen, como en el ejemplo.
Grupo I Grupo II Grupo III Grupo IV
LDC ODC H2S IND LAC DUL PA UR CIT OX Codigo de resultado 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 positivo Resultados + + - + + - - - - - Suma de los códigos 3 3 0 0 CÓDIGO NUMÉRICO: 3300 IDENTIFICACIÓN: E.coli
ESQUEMA DE LAS REACCIONES BIOQUÍMICAS
Tabla n°4 Microorganismos Grupo I Grupo II Grupo III Grupo IV LDC ODC H2S IND LAC DUL PA UR CIT OX E.coli V V - + + V - - - - E.coli inactive V V - + - V - - - - Shigella spp. - V - V - - - - - - Edwardsiella spp. + + + + - - - - - - Citrobacter spp. - V + V V V - V V - Salmonella spp. + + V - - +* - - V - Arizona spp. + + + V V - - - + - K. pneumoniae + - - - + V - V V - Klebsiella oxytoca + - - + + V - + V - Enterobacter cloacae V + - - V - - V + - E. aerogenes + + - - + - - - + - Enterobacter hafnia + + - - V - - - + - Serratia spp. + + - - - - - V + - Proteus mirabilis - + + - - - + + V - Proteus vulgaris - - V + - - + + V - Morganella morganii - + - + - - + + - - Providencia stuartii - - - + - - + - + - Providencia rettgeri - - - + - - + + + - Pseudomonas spp. + + - - - - - - + + + : Reacción Positiva - : Reacción Negativa V: Reacción Variable
*Dulcitol: Algunas cepas de Salmonella fermentan lentamente el dulcitol, por lo tanto inicialmente se pueden identificar como Arizona spp. Es necesario, pues, realizar una prueba de confirmación usando un antisuero polivalente para Salmonella.
CONTROL CALIDAD Cada lote de INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI se somete al control calidad utilizando los siguientes microorganismos ATCC de referencia. Enterobacter cloacae……………………….. ATCC 13047 Proteus mirabilis…………………… ATCC 25933 Escherichia coli................................…........ ATCC 25922 Pseudomonas aeruginosa………... ATCC 27853 Klebsiella pneumoniae……………………… ATCC 13883 Salmonella typhimurium………….. ATCC 14028 2 5 FACTORES QUE PUEDEN INVALIDAR LOS RESULTADOS No correcta estandarización de la inoculación; aplicación del método a microorganismos no pertenecientes al grupo de las Enterobacterias; cultivos mixtos o contaminadas; uso de sistemas o de reactivos caducados; no correcta aplicación de la técnica de uso. LÍMITES Y ADVERTENCIAS La identificación de Salmonella spp. y de Shigella spp se tiene que confirmar utilizando antisueros adecuados. Para la identificación definitiva de los microorganismos en algunos casos puede ser necesario recurrir a tests suplementarios de confirmación. PERFORMANCE Los resultados de la identificación bacteriana obtenidos con el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI concuerdan con los de los métodos de identificación tradicionales (Piccolomini et al.(4)). Los resultados del antibiograma obtenidos con el sistema INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI concuerdan con los obtenidos con el método de difusión radial según Bauer et al.(5) recomendado por Food and Drug Administration (FDA) y por National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) U.S.A (1,8). PRECAUCIONES El producto, INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI, no se clasifica como peligroso según la legislación vigente ni contiene sustancias nocivas en concentraciones ≥1%, por lo tanto no requiere la disponibilidad de la Ficha de Seguridad. INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI es un dispositivo desechable a utilizar sólo para uso diagnóstico in vitro, está destinado a un ámbito profesional y tiene que ser usado en laboratorio por operadores adecuadamente formados, con métodos aprobados de asepsia y seguridad con respecto a los agentes patógenos. CONSERVACIÓN Conservar a 2-8°C en su estuche original. No conservar cerca de fuentes de calor y evitar excesivas variaciones de temperatura. En estas condiciones el producto es válido hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar después de esta fecha. Eliminar si hay signos de deterioro. ELIMINACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADO Después de la utilización INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI y el material que ha entrado en contacto con la muestra tienen que ser descontaminados y eliminados de acuerdo con las técnicas en uso en laboratorio para la descontaminación y la eliminación de material potencialmente infecto. PRESENTACIÓN Producto Código Estuche INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI 71714 20 tests
TABLA DE LOS SÍMBOLOS
SÍMBOLO SIGNIFICADO SÍMBOLO SIGNIFICADO
Producto sanitario para diagnóstico in vitro No reutilizar Fabricante Contenido suficiente para <n> ensayos Referência de catálogo Frágil, manipular con precaución Fecha de caducidad Atencion, ver instrucciones de uso Limite de temperatura Código de lote
2 6 PORTUGUÊS
INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI
Sistema calorimetrico para a identificação bioquímica e o antibiograma das enterobactérias DESCRIÇÃO INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI é um sistema com 24 cavidades que contêm substratos bioquímicos e antibióticos exsicados para a identificação bioquímica e o antibiograma das enterobactérias. O sistema é inoculado com a suspensão bactérica do microrganismo em exame e incubado a 36 °C ± 1°C por 18-24 horas. Os testes para a identificação e para o antibiograma são interpretados avaliando a viragem da cor das várias cavidades do sistema. CONTEÚDO DAS CONFECÇÕES A confecção contém: ∙ 20 Sistemas INTEGRAL SYSTEM ENTEROBATTERI ∙ 20 Oxidase Disc ∙ 20 Ampolas de Suspension Medium (7.0 ml/ampola) ∙ 1 Folha de instruções PRODUTOS NECESSÁRIOS NÃO CONTIDOS • Óleo de vaselina para uso microbiológico (Vaseline oil 2 frascos de 50 ml).................………....….cód. 80278 • Physiological Solution (20 ampolas de 7.0 ml/ampola)..............................…...................................cód. 20095 • Kovac’s Reagent (2 frascos de 25 ml)……………………………………………….…………........…......................cód. 80270 • Material vário para laboratório de microbiologia CONFIGURAÇÃO O sistema apresenta a configuração indicada na tabela n°1. Tabela n°1 Placa multi- IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA cavidades 1-LDC Decarboxilação da lisina 2-ODC Decarboxilação da ornitina 3-H2S Produção de hidrogeno sulfatado 4-IND Teste indologenéo 5-LAC Fermentação da lactose 6-DUL Fermentação do dulcitol 7-PA Desaminação da fenilalanina 8-UR Hidrólise da ureia 9-CIT Utilização do citrato 10-OX Teste da oxidase Placa multi- ANTIBIOGRAMA (*) cavidades 11-AK Amikacina - 32 μg/ml 12-CN Gentamicina - 8 μg/ml 13-TOB Tobramicina - 8 μg/ml 14-TZP Piperacilina+Tazobactam - 128/4 μg/ml 15-FOS Fosfomicina - 200 μg/ml 16-CFP Cefoperazona - 64 μg/ml 17-CTX Cefotaxima - 64 μg/ml 18-CAZ Ceftazidima - 32 μg/ml 19-AMS Ampiciline + Sulbactam – 32/16 μg/ml 20-NA Acido Nalidíxico - 32 μg/ml 21-CIP Ciprofloxacino - 4 μg/ml 22-LEV Levofloxacin - 8 μg/ml 23-SXT Cotrimoxazol - 8 μg/ml 24-C Controle do crescimento por antibiograma
(*): A concentração de cada antibiótico é conforme as normas actualizadas NCCLS-January 2004, Vol 24 N°1.(1)
