INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

Profesores:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Elizabeth Jiménez Gutierrez
M en C Hilda Pérez Cervantes
Dr. Luis R. Carreno Durón

Autor: Suarez Gómez Alexis Gabriel

Práctica: Vetificación y evaluación del uso y funcionamiento
de instrumentos de medición columétrica
Grupo: 5QM2
Sección: 4
Equipo: 10

Ciclo escolar 2019

Fecha de entrega
Ciudad de México, 21 de febrero de 2018
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INTRODUCCIÓN
En la actualidad las determinaciones analíticas en química clínica se realizan utilizando
instrumentos y equipos relativamente complejos en el laboratorio clínico, por ello para asegurar
la confiabilidad de los datos es necesario conocer tanto como sea posible las características,
potencialidades, limitaciones y particularidades de los instrumentos analíticos, debido a que
dependen entre otros aspectos tanto del uso adecuado como del buen funcionamiento de los
equipos fotométricos.
Los equipos fotométricos con el tiempo presentan un cambio gradual o deterioro progresivo de
sus componentes, sin embargo, esto es muy difícil de detectar si no se tiene un programa de
control de calidad diario que incluya al menos: realizar la lectura diaria de soluciones de
concentración conocida, calibración periódica de la longitud de onda, linealidad y detección de
luz espuria.
Dichos equipos deben mantenerse en las mejores condiciones, por ello se debe prestar atención
especial en que la fuente de luz de estos instrumentos sea constante. Por lo tanto, una adecuada
calibración instrumental es uno de los factores claves para lograr exactitud en los resultados
analíticos.
La calibración, la sensibilidad y la linealidad, son tres características que permiten verificar el
correcto funcionamiento de los espectrofotómetros y se encuentran descritas en un apartado
específico de los manuales de operación de cada instrumento. Las dos primeras se verifican
mediante la determinación del espectro de absorción de una solución de cloruro de cobalto
(CoCl2) (absorbancia máxima de 0.5 a 510 nm) y la última a través de la medición de la
absorbancia de soluciones de diferentes concentraciones conocidas de dicromato de potasio
(K2Cr2O7) o de permanganato de potasio (KMnO4). (3)
OBJETIVO
Verificar la calibración, sensibilidad y linealidad de los espectrofotómetros, utilizando una solución
de cloruro de cobalto y dicromato de potasio e interpretar los resultados de acuerdo a la ley de
Lamber-Beer.
FUNDAMENTO
Cuando la luz de una apropiada longitud de onda atraviesa una cubeta conteniendo una solución
colorida, parte de la luz es absorbida por la solución, el resto es transmitida a través de la muestra
hasta el detector. La luz que llega al detector se conoce como transmitancia.
Cada solución colorida tiene un espectro de absorción característico que se establece a partir de
la medición de la absorbancia a diferentes longitudes de onda. La longitud de onda a la cual se
analiza una sustancia es generalmente, aquella a la cual se obtiene la máxima absorbancia. Por
lo regular se selecciona aquella que dé la mayor sensibilidad y que más se aproxime a la ley de
Beer.
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RESULTADOS
BITÁCORA DE RESULTADOS FECHA: 20 DE MARZO DEL 2018
Verificación de la calibración, sensibilidad y linealidad de los espectrofotómetros
empleados en el laboratorio clínico
Resultados y observaciones
Espectrofotómetro: Thermo scientific Genesis 20 Marca: Thermo scientific
Codificación de usuario: 11 Unidades: nm
Condiciones físicas del instrumento: buenas condiciones.
Tipo de celda utilizada: volumen semireducido
Solución utilizada: CoCl2 2.2% Vol. Seleccionado: ¾ de la celda
Ajuste de instrumento con: HCl 1% Intervalo de λ: 450-500 nm

Tabla 1. Verificación de la calibración y sensibilidad

λ (nm) A
450 0.216
460 0.290
470 0.342
480 0.388
490 0.431
500 0.477
510 0.509
520 0.496
530 0.438
540 0.342
550 0.249

λ mínima seleccionada: 450 nm λ máxima seleccionada: 550 nm

Verificación de la linealidad
Solución utilizada: K2Cr2O7 Longitud de onda: 500 nm
Ajuste del espectrofotómetro: Agua destilada
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Tabla 2. Verificación de la linealidad

Conc.
Conc. Absorbancia
calculadas % de error
Teóricas mg/dl (500 nm)
mg/dl
26.5 0.148 35.24 32.98
53 0.219 56.50 6.60
106 0.375 106.00 0.00
159 0.598 159.14 0.09
212 0.761 210.60 -0.66
265 0.910 262.06 -1.11
318 1.078 324.71 2.11
371 1.234 365.83 -1.39
424 1.411 414.21 -2.31
477 1.546 464.55 -2.61
530 1.724 510.70 -3.64

Solución con la que se hicieron las diluciones: K2Cr2O7

Factor de calibración utilizado:
Fórmula para calcular las concentraciones de las diluciones:
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
Factor de dilución =
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜

530 𝑚𝑔/𝑑𝐿
Concentración =
𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

Fórmula para calcular las concentraciones calculadas:

106
Factor =
A106
Multiplicar el factor por cada absorbancia obtenida e verificación de la linealidad.
Concentracion calculada = F ∗ Absorbancia
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0.6

0.5
ABSORBANCIA
0.4

0.3

0.2

0.1

0
440 460 480 500 520 540 560
λ(nm)

Figura 1. Espectro de absorción del CoCl2 al 2.2% en HCl al 1%.

2
y = 0.0034x + 0.029
1.8
R = 0.9996
Absorbancia a 500 nm

1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600
Concentración de K2Cr2O7 (mg/dL)

Figura 2. Curva tipo realizada con diluciones de K2Cr2O7 (530mg/dL).

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2
y = 0.0036x
1.8
R=1
Absorbancia a 500 nm
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
Concentración de K2Cr2O7 (mg/dL)

Figura 3. Curva tipo obtenida al multiplicar las absorbancias por el Factor de Calibración
(279.68).

600.00
y = 0.9588x + 8.1242
500.00 R = 0.9996
Concentración Factor

400.00

300.00

200.00

100.00

0.00
0 100 200 300 400 500 600
Concentración Teórica

Figura 4. Verificación de la linealidad.

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36
34
32
30
28
26
24
22
20
% Error

18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
-2 0 100 200 300 400 500 600
-4
-6
Concentración

Figura 5. Porciento de error en cada uno de los puntos.

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Tabla 3. Resultados de calibración, sensibilidad y linealidad del grupo 5QV2.

L
C S
S i
E a e
e n
q li n
c # interno y λ (De e
u b s Intervalo útil de
c Marca de Abs A (λ máx) %E R (inicial) R (Factor) m a
i r i trabajo
i espectro máx) li
p a b
ó d
o d l
n a
o e
d

2 3

5
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DISCUSIÓN
El espectro de absorción obtenido es el esperado ya que el CoCl2 presenta la mayor
absorbancia a 510 nm debido a que en esta longitud de onda se presenta una interacción
más estrecha entre la materia y la energía (absortividad), por lo tanto se puede decir que el
espectrofotómetro Dlab número 1 se encuentra calibrado. La absorbancia registrada en
esta longitud de onda (510 nm) es de 0.616 y se encuentra fuera del rango 0.475-0.525, el
cual se obtuvo con el valor esperado de absorbancia (0.5) y agregándole un 2.5% de error
por arriba y por debajo de este valor, como la absorbancia obtenida sobrepasa este rango
podemos decir que el espectrofotómetro no es sensible, esto se puede deber a una falla en
la lámpara, ya sea porque ha superado su tiempo de vida media o bien que se encuentre
sucia (llena de polvo) o bien que la celda ocupada se encuentre muy rayada. Es importante
mencionar que para poder validar los datos que se obtienen de un equipo, es necesario
que se haga la determinación al menos 5 veces, ya que si se realiza solo una vez, los datos
no son realmente representativos y por lo tanto existe mayor grado de incertidumbre. La
verificación de la calibración y sensibilidad del equipo se realiza con CoCl2 debido a que a
510 nm se realizan la mayoría de las pruebas clínicas de rutina.
En la verificación de la linealidad del equipo se obtuvo un gran intervalo de trabajo que va
desde 0.623 a 1.35 de absorbancia. Los demás putos por arriba o por debajo de este
intervalo se descartan debido a que el porciento de error es muy grande y no se generarían
datos confiables. En el primer puto el % de error es excesivamente grande, esto se debe a
que en este punto la concentración del analito es muy pequeña y se podría confundir con
el ruido del equipo. En los demás puntos donde se presenta un % de error mayor al 2.5%
por arriba o por abajo del valor real, el analista es responsable de ese error que se pudo
haber cometido al momento de realizar las diluciones. Es por eso que las determinaciones
se deben realizar por lo menos 5 veces para tener datos más representativos y confiables
que reduzcan el grado de incertidumbre.
CONCLUSIONES

 Es necesario realizar 5 veces la determinación para validar los datos.

 No se puede verificar si el equipo se encuentra calibrado o si es sensible, debido a
que no se ajustó a cero de absorbancia con el blanco en cada una de las longitudes
de onda.
 El equipo presenta linealidad en un intervalo de 0.623 a 1.35 de absorbancia a una
longitud de onda de 500 nm.
 Se debe ajustar a cero de absorbancia con el blanco, cuantas veces sea necesario.
REFERENCIAS
1. Alva Estrada S.I., Benito Mercadé C., Programa de evaluación de la calidad entre
laboratorios. I. Diagnóstico del funcionamiento de espectrofotómetros. 1991: 17-
19.
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2. Alva Estrada S.I., Benito Mercadé C., Programa de evaluación de la calidad entre
laboratorios. III. Estudio del efecto de la calibración sobre la calidad analítica. 1991:
19-24.
3. Arderiu Fuentes X., Lacambra Castiñeiras M. J., Compaño Queralto M. J.,
Bioquímica clínica y patología molecular, Vol. I., Ed. Reverte, ed. 2a, Barcelona,
1998.