Biochemistry test report

Angie A. Carreño, y María F. Bejarano.

Estudiantes del programa de Biología Aplicada, Facultad de Ciencias Básicas y Aplicadas, Universidad
Militar Nueva Granada. u0501023@unimilitar.edu.co; u0501035@unimilitar.edu.co. Fecha de entrega: 4
de abril de 2018

RESUMEN
De acuerdo con la práctica realizada se debe tener en cuenta la importancia de realizar
pruebas bioquímicas en análisis microbiológicos, correspondiente a estos análisis permite
determinar la actividad metabólica de cepas puras de microorganismos (bacterias aisladas).
Estas pruebas facilitan la identificación y clasificación de bacterias y hongos. Teniendo​ ​en​
​cuenta​ ​que​ ​para​ ​un​ ​crecimiento​ ​bacteriano​ ​óptimo​ ​se​ ​requiere​ ​la​ ​implementación​ ​de medios​
​de​ ​cultivo​ ​(con​ ​nutrientes​ ​específicos)​ ​.​ ​En​ ​la​ ​práctica​ ​se​ ​llevaron​ ​a​ ​cabo​ ​siembras​ ​por
agotamiento​ ​ ​en​ ​diferentes​ ​medios​ ​de​ ​cultivo​, ​para​ ​observar​ ​la​ ​afinidad​ ​de un​ ​tipo​
​desconocido​ ​de​ ​microorganismos,​ y correspondiente a esto poder determinar qué tipo de
bacteria se tenía, realizando una​ ​observación​ del​ ​comportamiento​ ​de​ ​los mismos​ ​ante​ ​la​
​presencia​ ​de​ ​diferentes​ ​sustancias​ ​como​ ​por​ ​ejemplo,​ ​la​ ​posible​ ​producción​ ​de​ ​ácidos grasos​
​por​ ​medio​ ​de​ ​carbohidratos​ ​(glucosa)​ ​o​ ​la​ ​posible​ ​reducción​ ​de​ ​nitratos​ ​por​ ​la​ ​acción​ ​de
algunas​ ​bacterias.​ ​Estos​ ​métodos​ ​permitieron​ ​descartar​ ​la​ ​presencia​ ​por​ ​ejemplo​ ​de​ ​E.​ ​Coli​ ​en​
​las muestras​ ​desconocidas​ ​(crecimiento​ ​en​ ​EMB)​ ​y​ ​habilitar​ ​la​ ​posibilidad​ ​de​ ​que​ ​algunas​
​bacterias utilizadas​ ​podrían​ ​reaccionar​ ​químicamente con ​los diferentes medios de cultivo
​como​ ​por​ ​ejemplo la​ ​producción​ ​de​ ​ácidos​ ​grasos​ ​a​ ​partir​ ​de​ ​carbohidratos​ ​(cambio​ ​de​ ​color​
​rojo​ ​a​ ​amarillo​ ​en​ ​el​ ​tubo​ ​de ensayo).
PALABRAS CLAVES ​Medio​ ​de​ ​cultivo​ ​selectivo,​ ​actividad metabólica,​ ​aislamiento. ​
ABSTRACT
In accordance with the practice carried out, the importance of carrying out biochemical tests in
microbiological analysis must be taken into account, corresponding to these analyzes allows
to determine the metabolic activity of pure strains of microorganisms (isolated bacteria).
These tests facilitate the identification and classification of bacteria and fungi. Bearing in
mind that for optimal bacterial growth the implementation of culture media is required ( with
specific nutrients.) In practice, plantings were carried out due to exhaustion in different media
Of culture, to observe the affinity of an unknown type of microorganisms, and corresponding
to this being able to determine what type of bacterium was had, making an observation of the
behavior of the same in the presence of different substances such as, for example, possible
production of fatty acids by means of carbohydrates (glucose) or the possible reduction of
nitrates by the action of some bacteria. ​These methods allowed to rule out the presence, for
example, of E. Coli in the unknown samples (growth in EMB) and enable the possibility that
some bacteria used could react chemically with different culture media as per Example the
production of fatty acids from carbohydrates (change from red to yellow in The test tube).
KEYWORDS ​Selective culture medium, metabolic activity, isolation.
 1. Introducción en la investigación aislada de
microorganismos para la identificación de
La aplicación del reconocimiento de los mismo y por ende la clasificación
microorganismos es importante para (Vizcarrondo ​et al​,2002).
determinar la influencia que estos tienen
en relación al ser humano.Las pruebas En el proceso de identificación se utilizan
bioquímicas permiten identificar distintas distintos métodos con el objetivo de
características fisicoquímicas que es de identificar el agente microbial establecido
mayor importancia para la clasificación para la diferenciación y clasificación, los
microbial en el aspecto morfológico y cuales se dividen en tres importantes que
metabólico de los microbios.Dependiendo son los métodos fenotípicos
del tipo de cultivo, reactivo de tradicionales,métodos moleculares y
identificación y crecimiento bacterial se métodos basados en proteómica.Sin
obtienen distintos resultados.(Olmos ​et embargo los métodos anteriormente
al​,2010). descritos presentan una sub clasificación,
expuesta de la siguiente manera:
La identificación microbiana parte del
conjunto de técnicas y procesos de ● Metodo de identificacion
investigación que establecen la identidad morfologica.
de un organismo, estas técnicas se utilizan ● Metodo de tincion diferencial.
en distintas áreas como la medicina para ● Método de pruebas bioquímicas
diferenciar microorganismos patógenos, ● Método de tipificación con fagos.
industria farmacéutica para establecer ● Método de ensayos serológicos
normas de control de calidad y por último ● Métodos moleculares

Figura 1.​Métodos de identificación bacteriana.

En la identificación fenotípica microbial se de la prueba sino que también, depende del
tiene en cuenta características tipo de medio o cultivo que se va a utilizar.
microscópicas y macroscópicas de manera
que pueda establecer resultados más 1.1.1 Medios de cultivo según su función.
cercanos al reconocimiento del
microorganismo. Este estudio fenotípico se Un medio de cultivo ofrece características
basa en la comparación de las distintas adicionales para el reconocimiento
características observadas con respecto a microbial, dadas los distintos
microorganismos ya identificados, de requerimientos nutricionales que
manera que la cercanía al número de establecen los microbios para tener un
resultados obtenidos con respecto a la óptimo crecimiento, obtencion de energia,
comparación entre los organismos permite fuente de carbono, fuente de nitrógeno,
una fiabilidad en la conclusión de la algunas sales, oligoelementos y agua, se
identificación del organismo que se está reconocen distintos tipos de cultivos
tratando. (Olmos ​et al​,2010). A (López ​et al,​2003). A continuación se
continuación se relaciona específicamente relaciona los dos grupos de cultivos
las pruebas bioquímicas tratadas en generales utilizados en la identificación
laboratorio. microbiana:
a. Medios no selectivos: ​Estos
1.1 Pruebas bioquímicas medios permiten el crecimiento de
distintos tipos de especies
Las pruebas bioquímicas han sido de gran bacteriana, sin embargo no
importancia en el reconocimiento Permiten el aislamiento de una sola
microbial pues, estas permiten identificar especie en específico a partir de
el funcionamiento metabólico de los muestras con un gran número de
microorganismos permitiendo así una microorganismo, entre ellos
clasificación funcional de los encontramos el medio de algar de
mismos.Estas pruebas han sido sangre y el agar de chocolate
implementadas ampliamente para la (López ​et al,​2003).
identificación de bacterias, y con respecto
al reconocimiento se obtiene distintos
resultados que varían respecto a la prueba
y al microorganismo ejemplo la
fermentación de azúcares, la presencia de
enzimas la degradación de compuestos, el
crecimiento oxígeno o anoxigénico, la
producción de pigmentos a través de la
intervención con distintos reactivos, etc, de
manera que estas pruebas son eficaces para
dicho reconocimiento. De igual manera la Figura 2. ​Agar Biplaca Sangre/Chocolate
identificación bacteriana no solo depende
 b. Medios selectivos: Estos medios Otorgan una información preliminar acerca
permiten el crecimiento de del microorganismo estudiado:
organismos aislados que resultan a. Oxidasa.
importantes para obtener una b. Catalasa.
muestra pura de dichos 1.2.2 Pruebas rápidas con lectura en 6h.
microorganismos, estos medios se Otorgan una información definida acerca
establecen a partir de la adición de del microorganismo estudiado:
muestras inhibidoras,sistemas a. SIM: Sulfuro, Indol y Motilidad.
indicadores y tampones que 1.2.3 Pruebas lentas, con lectura de 18 a
permiten la identificación 48h:
diferencial y, a diferencia de los a. Produccion de acidos a partir de
medios no selectivos estos carbohidratos: Lactosa y Glucosa.
permiten sembrar diferentes tipos b. Reducción de nitratos.
de muestras contaminadas (López c. Prueba de ADN asa.
et al,​2003).A continuación se d. Prueba de la gelatina
muestra los principales tipos
medios selectivos diferenciales.
● Agar Mossel. 2. Materiales y métodos
● Agar Eosina Metil Blue (EMB). Para llevar a cabo la descripción y
● Agar M.R.S (Man Rogosa Sharpe). observación de medios de cultivo
● Agar Vogel-Johnson. selectivos se realizó la siembra por
● Agar Cetrimide. agotamiento de dos colonias de
microorganismos aisladas en cada uno de
1.2 Tipos de pruebas bioquímicas los siguientes medios: EMB,
Vogel-Johnson, MRS, Agar nutritivo,
Las distintas pruebas bioquímicas sobre cetrimide y ADNasa). Al transcurrir 8 días,
colonias aisladas de bacterias a partir de cada muestra fue comparada con un medio
los distintos tipos de medios diferenciales patron para observar si alguna de las dos
permiten la identificación presuntiva entre colonias a estudiar tenía afinidad por
los distintos tipos de microorganismos o alguno de ellos. Con respecto a las pruebas
especies bacterianas, además, sin embargo bioquímicas, de cada microorganismo
algunas de estas pruebas requieren de aislado se tomó un inóculo y se dispuso en
procedimientos adicionales para la diferentes tubos de ensayo (prueba glucosa
identificación definitiva del y lactosa, prueba nitratos y prueba
microorganismos (López ​et al,​2003).Las gelatinasa),se marcó cada tubo y se llevó a
distintas pruebas se pueden clasificar por incubar (37°C).Cada prueba a excepción
el tiempo de reacción en la obtención de de gelatinasa se observó su resultado al
resultados: pasar 8 días, Para la última prueba
mencionada, se observó el resultado al
pasar 48 horas. Se realizaron dos pruebas
1.2.1 Pruebas con lectura inmediata. adicionales, Oxidasa y Catalasa, para la
 primera se usaron tiras de marcación, se
depositó un frotis de la muestra sobre la
tira y se observó si ocurría un viraje de
color azul en cada microorganismo. Para la
segunda prueba, se realizó una fijación de
cada microorganismo en un portaobjetos y
se añadió peroxido de hidrogeno,
observando en cada colonia una reacción
de efervescencia (marcada como prueba
positiva ante la presencia)​.
3. Resultados
3.1 Cuestionario
3.1.1 ​Realice un cuadro en el que para cada una de las pruebas bioquímicas realizadas
en clase indique: - nombre de la prueba, -sustrato requerido, -enzima involucrada en la
reacción, -producto generado, -la prueba requiere o no indicador y cuál es, - como se
observa una reacción positiva, -como es la observación negativa, -ejemplos de bacterias
positivas en cada prueba, y -ejemplos de bacterias negativas a la prueba.

Prueba Sustrato Enzima Producto Ind Control (+) Control (-) Ejemplos (+) Ejemplos (-)

Tiras de Citocromo Azul de El color de No cambia P.aeruginosa, E. coli, y todas las

papel C-oxidasa indofenol, la tira de color en Neisseria, enterobacterias
Oxidasa diclorhidr CO2 y agua. No cambia a la zona de Moraxella, anaerobias
ato de azul (+). aplicación. aeromonas, obligados
tetrametil aerobios y
p-fenilend anaerobios
iamina facultativo
1%

Catalasa Peróxido Catalasa o Agua y O2 Formación No hay Staphylococos, Streptococcus,

de peroxidasa No de burbujas burbujas Micrococus, clostridium,
hidrógeno Bacillus, microaerofilicas y
10% Listeria,Corinebac anaerobias.
terium Aerobias y
anaerobias
facultativas

Almidón Amilosa Amilasa Glucosa.Malt Halo blanco Siembra B. Subtilis Escherichia Coli
+ osa y Lugol en la color
Amilopep Dextrinas siembra purpura-cafe
tina

Triptófan Triptofanas Indol, ácido Reactivo El medio el medio se E-coli (movil), son indol negativo:
SIM o a pirúvico y de forma un mantiene bacilos gram Klebsiella
amoniaco, Kovacs anillo de amarillo no neg.entericos pneumoniae
ac.indol o Erlich color rojo, cambia de (inmovil) y
acético, metil rosado ó color enterobacter movil
 indol, buganvilia
sobre el
caldo

Cisteína, Tiosulfato H2S+sales Citrato Precipitado No hay E-coli (movil), Son indol
tiosulfato reductasa, férricas=FeS de negro precipitado bacilos gram negativo:
o grupos cisteina amonio neg.entericos Klebsiella
SH de la desulfurilas férrico pneumoniae
cisteína y a que son (inmovil) y
triptófano sales de enterobacter movil
hierro
presente
s en el
agar.

Gelatina Gelatina Gelatinasas Aminoácidos No Licuefacción No hay S.Aureus Listerina,S

licuefacción epidermidis.

R. Nitratos Nitrato de Reductasa Nitrito Alfa Color rojo o No hay E. coli, P. Acinetobacter
potasio. de nitrato naftilam cafe color stutzeri,
NO​3​- ina y corinebacterium,
ácido Clostridium,
sulfaníli Actynomices
co
(reactivo
Griess)

R. Nitritos Nitrito Reductasa N2 Polvo de No color Color rojo P. fluorescens. Azoarcus

de nitritos zinc Paracocous,
NO​2​− Alcaligenes,
Bacillus

Produccion Glucosa, Glucosidas Ácidos Rojo Cambio de No hay Fermentan No fermentan

de acidos a lactosa, a lactasa orgánicos y fenol color y cambio de lactosa: E. coli, P. lactosa
partir de manosa, manasa CO2 vía burbujas color ni aeruginosa, Salmonella,
CHO manitol. sacarasa oxidativa o x burbujas Klebsiella, Proteus y Shigella.
fermentación Enterobacter. No sacarolítico
Fermenta glucosa: Moraxela
Ecoli, oxida
glucosa P.

ADN asa DNA Desoxirribo Nucleotidos HCL 1N Aclaramient No hay Cocos gram E. cloacae
nucleasa o alrededor cambio en el positivos y
de las medio. bacterias
colonias y patógenas, S.
opacidad en aureus
el resto del
medio
 3.1.2. ¿En qué se diferencia un medio de cultivo Diferencial de uno Selectivo? Dé
un ejemplo de cada uno.

​R/ ​La diferencia entre los dos tipos de medios está dada por el tipo de microorganismo que
se desea estudiar, en el caso de medios de cultivo selectivos permite la proliferación de un
solo tipo de microorganismos e inhibe otros tipos de microorganismos que no se desean
estudiar, no solo se utiliza a modo de seleccionar sino también permite el aislamiento del
microorganismo partiendo de grupos mixtos. Por ejemplo Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos). En el caso de medios de
cultivos diferenciales estos permiten distinguir entre varios géneros y especies de
microorganismos, aunque en algunos casos también juegan un papel ‘’selectivo’’ porque
solo crecen determinadas bacterias. Un claro ejemplo sería el agar metil blue - eosina que
permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metálico) de Enterobacter
aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). (​López, 2006​).

3.1.3. ¿Qué características tiene un medio de cultivo Enriquecido y para qué se

utiliza?

​R/ ​A un medio enriquecido se le agregan más nutrientes de lo normal para que bacterias
que están en menor proporción puedan proliferar de manera más rápida y eficaz. Están
compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un
gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero,
líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales. (​López, 2006​).

3.1.4. Según lo observado en cada caja de los medios de cultivo según su función,
defina los términos:

a.Control Negativo

R/ ​Un control negativo es una muestra que se realiza para verificar que el
microorganismo (bacterias) para este caso, no se encuentre en relación con otros
microorganismos, es decir no haya una contaminación en el medio de cultivo, que
permita el crecimiento de otras bacterias externas a la que se desea estudiar.

b.Control Positivo

R/ ​Un control positivo es una muestra o estudio que se realiza para determinar la
presencia de una bacteria en específico, de acuerdo al tipo de medio de cultivo que se
use inhibe o permite el crecimiento de la bacteria. Se dice que la prueba es positiva
cuando la bacteria tiene una reacción como por ejemplo degradación de compuestos
químicos presentes en el medio de cultivo.

c. Control Absoluto

R/ ​Muestra características fisicoquímicas que determinan el metabolismo e

interacción con el medio de acuerdo de un microorganismo en específico, otorgando así
la identificación exacta del mismo.

3.1.5. En el caso de no contar con una cámara de anaerobiosis durante su trabajo

en el laboratorio, ¿cómo podría garantizar condiciones anoxigénicas para el
crecimiento de un microorganismo?

R/ ​El procedimiento análogo al la cámara de anaerobiosis que cumple con la misma

función de otorgar las condiciones óptimas de oxígeno requeridas para el desarrollo de
distintos tipos de organismos (Aerobios y anaerobio), es la adición de aceite al cultivo
líquido de las prueba que requieren reconocer la acción catabólica de distintos
organismos en presencia de oxígeno y en ausencia del mismo. El procedimiento se lleva
a cabo con la inoculación de la muestra del microorganismo puro en el caldo donde
debe desarrollarse distinguiendo del tipo de prueba requerido, luego, se realiza un
duplicado del sembrado y a uno de los cultivos se le adiciona aceite. El aceite tiene la
función de restringir el paso de oxígeno al medio permitiendo solo el desarrollo de
organismos anaerobios.
 3.2​ ​Identificación microbiana de muestra pura de suelo extraída a partir de la
dilución 10​-6​ de la misma muestra por caracterizacion fenotipica .

3.2.1 ​Descripción macro y microscópica de morfotipos obtenidos de muestra de suelo.

MORFOTIPO 1

Descripción macroscópica

Crecimiento circular, colonia plana, lisa,

convexa, cremosa, brillante y blanca no
difusible.

Descripción microscópica:

Bacilococos gram-positivos.

Tabla 1: ​Descripción macro y microscópica de morfotipo 1, obtenido a partir de dilución

10​-6 ​ de muestra de suelo.

MORFOTIPO 2

Descripción macroscópica:

Crecimiento puntiforme, colonia plana,

lisa, seca,opaca y blanca difusible.

Descripción microscópica:

Bacilos gram-negativos

Tabla 2: ​Descripción macro y microscópica de morfotipo 2, obtenido a partir de dilución

10​-6 ​ de muestra de suelo.
 3.2.2 Identificación bacteriana a partir de la selectividad de distintos medios de
cultivo.

Posterior a la identificación macro y microscópica se realizó la siembra de la muestra de

los morfotipos en distintos tipos de cultivos diferenciales, los resultados se muestran a
continuación y las muestras gráficas de lo obtenido se muestra en anexos :

MORFOTIPO 1

Cultivo Clasificación Agentes inhibidores Indicador de pH Bacteria Forma de

control (+) crecimiento (+)

Volgen Diferencial Telurita de Negativa -

Johnson potasio,glicina y Rojo fenol
cloruro de litio.

Mossel Azul de bromotimol Positivo Formación de

Diferencial NA y el azul de timol colonias con viraje
amarillo.

EMB Diferencial Azul de metileno Eosina Negativa -

Cetrimide Selectivo Cetrimida Rojo fenol Negativa -

ADNasa Diferencial NA Ácido clorhídrico Negativo Formación de

colonias blancas sin
formación de halos

MRS Selectivo y Citrato de amonio NA Negativa -

diferencial
Tabla 3. ​Resultados obtenidos en cultivos diferenciables con respecto al morfotipo 2
obtenido en muestra de suelo (10​-6 ​).
 MORFOTIPO 2

Cultivo Clasificación Agentes inhibidores Indicador de pH Bacteria Forma de

control (+) crecimiento (+)

Volgen Diferencial Telurita de Negativo

Johnson potasio,glicina y Rojo fenol -
cloruro de litio.

Mossel Azul de Negativo -

Diferencial NA bromotimol y el
azul de timol

EMB Diferencial Azul de metileno Eosina Negativo -

Cetrimide Selectivo Cetrimida Rojo fenol Negativo -

ADNasa Diferencial NA Ácido Negativo Formación de

clorhídrico colonias blancas sin
formación de halos

MRS Selectivo y Citrato de amonio NA Negativo -

diferencial
Tabla 4. ​Resultados obtenidos en cultivos diferenciables con respecto al morfotipo 2
obtenido en muestra de suelo (10​-6 ​).

3.2.3 Determinación de características metabólicas de los morfotipos obtenidos en

muestra de suela (10​-6​ ​) por medio de pruebas bioquímicas

Morfotip Glucosa Lactosa Catalasa Oxidasa SIM R. Gelatina

o Nitrato
s
I S M

1 Oil (+) Oil (-) (+) (-) (+) (-) (-) (-) (-)
(-) (-)

2 Oil (-) Oil (-) (+) (+) NA (+) (+) (+) (-)
(+) (+)
Tabla 5.​ Representación de resultados de pruebas bioquímicas en morfotipos 1 y 2
extraídas de muestra de suelo.
 3.2.4 Cuadro comparativo de características fenotípicas de los morfotipos obtenidos
en muestra de suelo.

MORFOTIPO 1 MORFOTIPO 2

BaciloCocos- Gram positivo, resistente a Bacilos - Gram negativos, formación de

la polimixina con formación de colonias colonias planas, blancas difusibles,
blanco- amarillas cerosas, degradadoras de degradadoras de glucosa y lactosa en
glucosa en medio aerobio y descomponen medio anaeróbico. Bacteria móvil de
peróxido de hidrógeno en presencia de acuerdo al desplazamiento que se presenta
agua y oxígeno. No hubo acción de hacia la superficie, productoras de sulfuro
ADNasa puesto que no se observa la de hierro. Presentan una reducción de
formación de halos alrededor de la colonia. nitrato a nitrito. No hubo acción de
ADNasa puesto que no se observa la
formación de halos alrededor de la colonia.
Tabla 6. Comparación de característica fisicoquímicas de morfotipos 1 y 2 extraídos
de muestra de suelo.

4. Análisis de Resultados varios géneros y especies de

microorganismos. (López et.,al 2006). De
Para poder determinar el tipo de bacteria acuerdo a los resultados obtenidos y la
que se obtuvo, se partió por el análisis de bibliografía consultada el medio de cultivo
las pruebas bioquímicas realizadas, Mossel en el que crecen bacterias como
correspondiente a esto se es de gran bacillus cereus, dichas bacterias presentan
importancia las reacciones que tienen resistencia a la polimixina presente en el
dichas bacterias con los medios de cultivo medio de cultivo. Sin embargo al realizar
utilizados en la práctica. Se utilizaron dos el análisis de las tablas de resultados
tipos de medios en la práctica realizada obtenidas en la diferenciación de ambos
posteriormente, los medios de cultivo morfotipos, se infiere que en el caso del
selectivos y los medios de cultivo morfotipo Nº1 pertenece al género
diferenciales; los medio selectivos son Staphylococcus pues, según Cervantes
sólidos en los que la selectividad (2014) este género posee características
se consigue alterando las condiciones microbiológicas importantes, destacando
físicas del medio o añadiendo o principalmente por ser cocos gram
suprimiendo componentes positivos que en comparación a lo
químicos específicos con el fin de inhibir obtenido en el morfotipo 1. (Tabla 1) se
el crecimiento de especies químicas cuyo reconocen bacilo cocos grampositivos, de
crecimiento no interesa, estos medios dan igual manera este autor indica que son
paso a crecimiento de ciertos bacterias no móviles que concuerda con lo
microorganismos. Y los medios de cultivo obtenido en las pruebas SIM de morfotipo
diferenciales nos permiten distinguir entre 1. (Tabla 5), a aparte relaciona el
metabolismos de este género bacteriano comprobando así en la demostración
como anaerobias facultativas de manera gráfica (Anexo 1).
que en relación a lo obtenido en el Sin embargo en comparación a la literatura
laboratorio en la prueba de obtencion de observada existen pruebas en las cuales no
acidos a partir de carbohidratos en este se obtuvieron resultados similares a la
caso glucosa un viraje de color al amarillo predicción del organismo estudiado
lo cual indica positivo para la respiración ejemplo claro es el resultado en la prueba
aeróbica en relación a la degradación de de agar ADNasa que se muestra negativo
glucosa. Por otro lado también se compara (Tabla 5.) y en la literatura este resultado
los resultados obtenidos en la prueba de es positivo para S. aureus que muestra una
catalasa (+) que en relación al género identificación rápida en la adición del HCL
Staphylococcus es aprobada pues estos con relación a la presencia de enzimas
microorganismos que poseen catalasa la ADNasas en la bacteria estudiada.
cual es una enzima que puede degradar el
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno Por otro lado en la identificación del
libre observando asi la formación de morfotipo Nº2 obtenemos que en relación
burbujas. Por lo general el crecimiento de a la literatura inferimos que este morfotipo
bacterias en medios de cultivos de pertenece a la familia de la
ADNasa van a generarse, sin embargo esto enterobacteriales (Enterobacteriaceae)
no implica precisamente presencia de la pues son bacterias gram negativas que en
enzima, para determinar dicha acción se relación a lo obtenido (Bacilos gram
utilizó ácido clorhídrico el cual permitió negativos) hay una especificidad próxima
observar la ausencia de halos en los medio en la morfología. En cuanto a las
de cultivo y por lo tanto descartar la características fenotípicas esta familia se
presencia de desoxirribonucleasa siendo relaciona con el morfotipo pues la
así prueba negativa para ambos casos. descripción obtenida del mismo infiere que
Con respecto al medio selectivo que existe formación de colonias planas,
permite la identificación presuntiva de el blancas difusibles, degradadoras de
microorganismo se especula que el glucosa y lactosa en medio anaeróbico,
organismos estudiado (Morfotipo 1.) puede bacteria móvil de acuerdo al
tratarse de S. aureus. Lo anterior se desplazamiento que se presenta hacia la
sustenta en lo dicho por Seija (2006) que superficie, productoras de sulfuro de
caracteriza a esta especie como bacterias hierro, presentan una reducción de nitrato a
Gram negativas lisas, elevadas, brillantes nitrito y en relación a la literatura las
y de bordes enteros, presentan consistencia enterobacterias son bacterias gram
cremosa y pigmentación que va del negativas, la mayoría bacilos o cocobacilos
amarillo a dorado que en relación a lo son oxidasa negativo,son capaces de
obtenido existe una proximidad elevada en reducir nitrato a nitrito, son anaerobios
los resultados. Observando el resultado en facultativos y fermentadores de
la prueba de mossel se establece que esta carbohidratos en condiciones anaeróbicas
especie es fermentadora de manitol (Puerta et al,2010).
De acuerdo a las características
anteriormente mencionadas es válido 5. Referencias
estimar que se está hablando de Klebsiella ● González S., Mahecha R., Luján
pneumoniae ya que esta bacteria presenta R(2008) Pruebas Bioquímicas para
dichas características morfológicas y por enterobacterias.
otro lado estudios en donde se realizan ● Olmos A.,Fuente C., Sáez J.,Ramos
pruebas bioquímicas de la misma arrojan S.(2010) Métodos de identificación
resultados similares a los obtenidos en la bacteriana en el laboratorio de
práctica. Estas bacterias presentan una microbiología. Procedimientos en
resistencia a múltiples antibióticos. La Microbiología Clínica.España.
evidencia actual implica un plásmido como ● Vizcarrondo M., Gutiérrez S.,
fuente de los genes que le permiten a la (2002) Identificación microbiana.
bacteria ser resistente. Debido a la Cap 12 Identificación microbiana
producción de enzimas beta lactamasas, mediante métodos basados en
hacen que sean resistentes a agentes beta- sistema de utilización de sustratos,
lactámicos. (Gonzales, 2008). inmunoensayos y detección
molecular.
Conclusiones ● López J.,Castillo F & Salavert M
(2003)Técnicas de identificación.
A partir del aislamiento, identificación y Cap 3 Microbiología aplicada al
análisis de la muestra extraída de suelo en paciente crítico.
la Universidad Militar Nueva Granada se ● López T., Torres L. (2006) Medios
logró reconocer los diferentes tipos de de cultivo. Facultad de
medios de cultivo en relación a la agroindustrias, Universidad
selectividad de los morfotipos Nacional del Nordeste.
identificados. Además a partir de la Microbiología general.
realización de la pruebas bioquimica se ● Cervantes E., Garcia R.,Salazar
puede inferir que reconocer el principio P.(2014) Características generales
metabólico que distinguieron dos del Staphylococcus
morfotipos encontrados en muestra de aureus.Patología clínica y medicina
suelo especulando así la identificación de de laboratorio.México.
S. aureus y Klebsiella pneumoniae. ● Seija V (2006) Género
Entonces el análisis de interpretación de Staphylococcus.Etiopatogenia
las pruebas bioquímicas en morfotipos microbiológica.pp 257-263.
microbianos es importante pues conforma ● Puerta A.,Rodríguez F (2010)
la mayoría de sistemas de identificación Enterobacterias. Medicine.pp
que actualmente se usa. 3427-3428
ANEXOS

Se expone la representación gráfica de las pruebas realizadas a morfotipo 1. y morfotipo 2.

extraídas de muestra de suelo diluido 10​-6

Morfotipo 1

Prueba de EMB (-)

Prueba de MRS (-)

Prueba de AC (-)
 Prueba de VJ (-)

Prueba de ADNasa (-)

Prueba mossel (+)

Prueba para lactosa (-)

Prueba para glucosa

medio anaeróbico: (-)
medio aeróbico: (+)
 Prueba gelatinasa (-)

Prueba para nitratos (-)

Morfotipo 2

Prueba de agar Mossel (-).

 Prueba de agar ADNasa.(+)

Prueba de EMB (-)

Prueba de Agar Cetrimide (-)

Prueba en agar MRS (-)

 Prueba de Vogel Johnson.

Pruebas de producción de ácidos a partir de

CHO.
1.(-) Glucosa en medio aeróbico
2. (-) Lactosa en medio aeróbico
3. (+)Glucosa en medio anaeróbico
4.(+)Lactosa en medio anaeróbico

Prueba gelatina (-)

1. Prueba de SIM (+) Motilidad
positiva y Indol positiva.
2. Prueba nitratos (+)