Medios de Cultivo

MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que

permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los
seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno,
dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de
factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros. Clasificación de los medios de cultivo Según su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Según su consistencia:
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El

agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como
esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este
conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de
ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran
posibles en medio líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad
de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.
Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del mundo microbiano, a veces
es necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los

microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.
b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se
le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo:
sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas
del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de inhibir el
crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite
el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para
seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo, Agar salado-
manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:
’ Cambio de pH: por ejemplo agregando ácido acético para favorecer el crecimiento de
Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil para la mayoría de las especies que crecen entre
6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6 y S. faecalis a pH 9,6.
’ Cambio de temperatura: la mayoría de las bacterias crece óptimamente entre 20º C y

40º C. Los cultivos típicos de S. Faecalis requieren 60º C de temperatura y los de Listeria
son capaces de desarrollarse y crecer a 4º C.
’ Alteraciones osmóticas: se acrecientan las propiedades osmóticas un medio con el

agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la selección de bacterias
halófilas como Staphylococcus spp. (7,5%). ’ Ajuste en la tensión de oxígeno: es
importante en la selección de aerobios y anaerobios.
’ Ajuste en la tensión de anhídrido carbónico: muchos patógenos importantes pueden

ser cultivados a menos que se eleve la tensión más allá de la atmosférica.
Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:
’ Antisépticos: sustancias antibacterianas inespecíficas que pueden actuar como

inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S (Salmonella - Shigella) que
contiene verde brillante (inhibe las bacterias grampositivas) y sales biliares (que inhiben
un gran número de gramnegativas menos enterobacterias). Otro ejemplo es el medio
de Mc Conkey que contiene cristal violeta (inhibe las grampositivas pero no las
enterobacterias)
’ Antibióticos: sustancias antibacterianas específicas que impiden el crecimiento de

aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan en ese medio. Un ejemplo
es el medio de Thayer - Martin con VCN (vancomicina, colistina y nistatina) que se utiliza
para el aislamiento de gonococos. La penicilina en una concentración de 5,50 unidades/
ml inhibe la mayoría de las grampositivas. Otro ejemplo es el medio de Sabourand -
cloranfenicol para el aislamiento de Cándida albicans.
d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios géneros y
especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha añadido un carbohidrato y un
indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una
acidificación del medio con el consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El
citrato de Simmons es un medio cuya única fuente de carbono es el citrato sódico, entonces en
él solo crecerán las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como única fuente de carbono
ese componente. A menudo la separación se basa en la diferencia de color de las colonias
aisladas, como en el agar con azul de metileno - eosina que permite diferenciar E. coli (colonias
oscuras y de brillo metálico) de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin
brillo). Estos dos microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.
Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto, solo crecerán determinadas bacterias (pueden ser
dos o más tipos) que al actuar sobre alguno de los componentes específicos del medio,
demuestran algunas de sus propiedades o características y nos permite diferenciar entre ambos
tipos.
e) DE ENRIQUECIMIENTO: son medios líquidos que contienen un agente que inhibe las especies
no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso. El medio de
Muller - Kauffman, permite el crecimiento de Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos
coliformes. Esto es de gran importancia ya que, en ciertas muestras, por ejemplo, fecales, el
agente infeccioso (Salmonella) es frágil y puede ser superado en número por agente bacterianos
indígenas como E. coli; por lo tanto, antes de realizar las pruebas de laboratorio es necesario
aumentar su número con respecto a ésta en un caldo de enriquecimiento. Ejemplo de este tipo
son los caldos de tetrationato y selenito. El agua de peptona alcalina se utiliza para Vibrio
cholerae. El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir
el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de
microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable
crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes
f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación

significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción hasta su posterior
estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a
otro. Se recomienda un límite de dos horas desde la recolección de las muestras y su estudio en
el laboratorio, pero este límite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se trata de
muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios de
transporte adecuados. Los medios de transporte más frecuentemente utilizados son los de
Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una unidad descartable de cultivo de transporte llamada
Culterette que consiste en un tapón estéril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior que
se rompe cuando se ejerce presión liberando el medio de transporte de Stuart alrededor del
extremo del tapón impregnado en la muestra. Hasta hace algunos años los componentes
orgánicos mencionados debían ser obtenidos por el microbiólogo y el medio de cultivo se
preparaba en el laboratorio. Actualmente se dispone comercialmente de la mayor parte de los
medios e incluso de sus componentes adicionales. Un gran número de medios de cultivo usados
en el laboratorio de microbiología son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios
grupos de los mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues tiene un inhibidor: el
verde brillante) y es a la vez un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador) que permite
diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacárido. El medio de Thayer y Martin
para Neisseria es un medio enriquecido (contiene plasma) y es selectivo (tiene 3 antibióticos
inhibidores de la flora bacteriana y fúngica: colistina, vancomicina y nistatina).
Cuestionario:
Responda el siguiente cuestionario
1. Según la concentración de este medio, clasifíquelo de acuerdo a su origen: 5gr. de glucosa, 1

gr. de cloruro de amonio, 1 gr. de fosfato diácido de potasio, 0,3 gr. de sulfato de magnesio, 5
gr. de extracto de levadura y 1 litro de agua destilada.
2. Calcule cuántos gramos de agar-agar se necesitan para preparar 125 ml de medio de cultivo
sólido. ¿Qué porcentaje P/V se utilizó?
3. ¿Por qué el medio Mc Conkey puede ser considerado un medio selectivo y diferencial? ¿Para
el aislamiento de qué tipo de bacterias se lo emplea ? Anote la composición y diga qué función
cumple el rojo neutro.
4. ¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y por qué?
5. ¿Cuál es la fuente de carbono del medio Citrato de Simmons y del agar nutritivo? ¿Por qué se
considera al primero un medio diferencial y con respecto a qué?
6. Antes del agar-agar se utilizó otro componente para solidificar los medios de cultivo ¿de qué
componente se trata y qué inconvenientes presentaba su uso?
7. ¿Cuál es el medio de cultivo elegido para el aislamiento de Staphylococcus aureus? Diga la

composición y clasifíquelo de acuerdo a su origen, composición y consistencia. 8. ¿Cuál es el
medio de cultivo que se emplea para el aislamiento de hongos y levaduras?

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MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que

a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El

a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los

’ Cambio de temperatura: la mayoría de las bacterias crece óptimamente entre 20º C y

’ Alteraciones osmóticas: se acrecientan las propiedades osmóticas un medio con el

’ Ajuste en la tensión de anhídrido carbónico: muchos patógenos importantes pueden

Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:

’ Antisépticos: sustancias antibacterianas inespecíficas que pueden actuar como

’ Antibióticos: sustancias antibacterianas específicas que impiden el crecimiento de

f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación

Responda el siguiente cuestionario

1. Según la concentración de este medio, clasifíquelo de acuerdo a su origen: 5gr. de glucosa, 1

4. ¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y por qué?

7. ¿Cuál es el medio de cultivo elegido para el aislamiento de Staphylococcus aureus? Diga la

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