Curvas Estandar ABS Y TIROSINA

10012012
II. CURVA ESTÁNDAR DE TIROSINA
Tirosína Solución Agua

REACTIVOS Tubo
µg/ml stock (ml) (ml)
1. Solución de tirosina de 100 µg/ml. 0 0 0.0 0.0* 1.0 3.0
2. Reactivos de Lowry: 1 10 0.1 0.3 0.9 2.7
Reactivo A: Sulfato de Cu pentahidratado 2 20 0.2 0.6 0.8 2.4
al 1% en agua. 3 30 0.3 0.9 0.7 2.1
Reactivo B: Tartrato de Na y K al 2%. 4 40 0.4 1.2 0.6 1.8
Reactivo C: Carbonato de Na al 2% en 5 50 0.5 1.5 0.5 1.5
NaOH 0.1M. 6 60 0.6 1.8 0.4 1.2
Reactivo D: 1 vol A + 1 vol de B. 7 70 0.7 2.1 0.3 0.9
Reactivo E: 1 vol de D + 50 vol de C. 8 80 0.8 2.4 0.2 0.6
Reactivo de Folin-Ciocalteu diluido 1:1 9 90 0.9 2.7 0.1 0.3
con agua. 10 100 1.0 3.0 0.0 0.0
PROCEDIMIENTO
A cada tubo preparado se añaden 5 ml de reactivo E y se agita. Se deja reposar durante
10 minutos, se agregan 0.5 ml de reactivo Folin 1:1 en agua y se agita. Se deja reposar
durante 30 minutos y se lee la absorbancia a 590 nm. La curva final resulta del promedio
de mínimo tres curvas. * Volúmenes utilizados para la curva estándar a 280 nm.
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK DE TIROSINA
1g → 1 x 106 g 1 x 10-4 g → 1 ml
1 x 10-4 g ←100 g g a pesar ← volumen a preparar
Ejemplo:
Tirosina D.O. D.O. D.O. Media D.O. Dif

0 0,0246 0,0315 0,0281 0,0000
10 0,1135 0,1135 0,1135 0,0855
20 0,2111 0,2147 0,2129 0,1849
30 0,2970 0,3010 0,2990 0,2710
40 0,3820 0,3980 0,3900 0,3620
50 0,4820 0,4820 0,4820 0,4540
60 0,5850 0,5850 0,5850 0,5570
70 0,6780 0,6680 0,6730 0,6450
80 0,7700 0,7700 0,7700 0,7420
90 0,8860 0,8860 0,8860 0,8580
100 0,9590 0,9590 0,9590 0,9310
CURVA ESTÁNDAR DE TIROSINA
1,1500
y = 0,0094x - 0,0081
0,9500
R2 = 0,9994
0,7500
D.O. 590 n
0,5500
0,3500
0,1500
-0,0500
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
Tirosina g/mL
Proteína D.O.(280 nm) D.O. D.O. Media D.O. Dif

0 0,0019 0,0011 0,0015 0,0000
10 0,0840 0,0786 0,0813 0,0798
20 0,1588 0,1584 0,1586 0,1571
30 0,2422 0,2376 0,2399 0,2384
40 0,3198 0,3158 0,3178 0,3163
50 0,3973 0,3922 0,3948 0,3933
60 0,4778 0,4752 0,4765 0,4750
70 0,5572 0,5578 0,5575 0,5560
80 0,6348 0,6321 0,6335 0,6320
90 0,7130 0,7174 0,7152 0,7137
100 0,7885 0,7934 0,7910 0,7895
Curva Estándar de Tirosina a 280 nm
0,9000
0,8000 y = 0,0079x + 3E-05
0,7000 R2 = 1
D.O.280nm
0,6000
0,5000
0,4000
0,3000
0,2000
0,1000
0,0000
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
Tirosina g/mL
III. CURVA ESTÁNDAR DE ALBÚMINA SÉRICA
BOVINA
Proteína Solución Agua
REACTIVOS Tubo
µg/ml stock (ml) (ml)
1. Solución de ASB de 500 µg/ml. 0 0 0.0 0.0* 1.0 3.0
2. Reactivos de Lowry: 1 50 0.1 0.3 0.9 2.7
Reactivo A: Sulfato de Cu 2 100 0.2 0.6 0.8 2.4
pentahidratado al 1% en agua. 3 150 0.3 0.9 0.7 2.1
Reactivo B: Tartrato de Na y K al 2%. 4 200 0.4 1.2 0.6 1.8
Reactivo C: Carbonato de Na al 2% en 5 250 0.5 1.5 0.5 1.5
NaOH 0.1M. 6 300 0.6 1.8 0.4 1.2
Reactivo D: 1 vol de A + 1 vol B. 7 350 0.7 2.1 0.3 0.9
Reactivo E: 1 vol de D + 50 vol de C. 8 400 0.8 2.4 0.2 0.6
Reactivo de Folin-Ciocalteu diluido 1:1 9 450 0.9 2.7 0.1 0.3
con agua. 10 500 1.0 3.0 0.0 0.0
PROCEDIMIENTO
A cada tubo preparado se añaden 5 ml de reactivo E y se agita. Se deja reposar
durante 10 minutos, se agregan 0.5 ml de reactivo Folin 1:1 en agua y se agita. Se
deja reposar durante 30 minutos y se lee la absorbancia a 590 nm. La curva final
resulta del promedio de mínimo tres curvas. * Volúmenes utilizados para la curva
estándar a 280 nm.
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK DE ASB Y CASEÍNA
1g → 1 x 106 g 5 x 10-4 g → 1 ml
5 x 10-4 g ←500 g g a pesar ← volumen a preparar
Ejemplo:
Proteína D.O. D.O. D.O. Media D.O. Dif

0 0,015 0,018 0,017 0,000
50 0,148 0,136 0,142 0,126
100 0,268 0,262 0,265 0,249
150 0,365 0,376 0,371 0,354
200 0,476 0,476 0,476 0,460
250 0,562 0,561 0,562 0,545
300 0,641 0,675 0,658 0,642
350 0,746 0,747 0,747 0,730
400 0,823 0,825 0,824 0,808
450 0,910 0,931 0,921 0,904
500 0,991 0,974 0,983 0,966
CURVA ESTÁNDAR DE ASB
1,200
y = 0,0019x + 0,0458
1,000 R2 = 0,9938
D.O. 590 n
0,800
0,600
0,400
0,200
0,000
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550
Proteína g/mL
Proteína D.O. 280 nm D.O. (2) D.O. (3) PROMEDIO

0 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
50 0,0272 0,0252 0,0256 0,0260
100 0,0552 0,0560 0,0577 0,0563
150 0,0833 0,0829 0,0829 0,0830
200 0,1114 0,1110 0,1109 0,1111
250 0,1393 0,1384 0,1396 0,1391
300 0,1690 0,1693 0,1717 0,1700
350 0,1990 0,1986 0,1980 0,1985
400 0,2299 0,2284 0,2267 0,2283
450 0,2623 0,2611 0,2610 0,2614
500 0,2908 0,2915 0,2915 0,2913
Curva Estándar de A.S.B a 280 nm
0,3500
y = 0,0006x - 0,0034
0,3000
R2 = 0,9994
0,2500
D.O.280 nm
0,2000
0,1500
0,1000
0,0500
0,0000
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550
Proteína mg/mL
Ejemplo curva estándar de caseína a 590 nm:
Caseína D.O D.O D.O D.O Media

0 0 0 0 0
50 0,0712 0,0702 0,0741 0,0718
100 0,1330 0,1407 0,1419 0,1385
150 0,1952 0,1910 0,2072 0,1978
200 0,2450 0,2443 0,2700 0,2531
250 0,2937 0,2932 0,2998 0,2956
300 0,3487 0,3571 0,3702 0,3587
350 0,3895 0,4638 0,4171 0,4235
400 0,4495 0,4847 0,4678 0,4673
450 0,4729 0,5407 0,5316 0,5151
500 0,5276 0,5537 0,5479 0,5431
CURVA ESTÁNDAR DE CASEÍNA
0,6
y = 0,0011x + 0,0226
0,5 R2 = 0,9941
0,4
D.O. (590 n
0,3
0,2
0,1
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550
Proteína g/ml

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II. CURVA ESTÁNDAR DE TIROSINA

Tirosína Solución Agua

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK DE TIROSINA

Tirosina D.O. D.O. D.O. Media D.O. Dif

Proteína D.O.(280 nm) D.O. D.O. Media D.O. Dif

Curva Estándar de Tirosina a 280 nm

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK DE ASB Y CASEÍNA

Proteína D.O. D.O. D.O. Media D.O. Dif

Proteína D.O. 280 nm D.O. (2) D.O. (3) PROMEDIO

Curva Estándar de A.S.B a 280 nm

Caseína D.O D.O D.O D.O Media

CURVA ESTÁNDAR DE CASEÍNA

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