Preparacion de Cultivos

UNIVERSIDAD NACIONAL
“JORGE BASADRE GROHOMANN“

Facultad De Ciencias Agropecuarias
Escuela De Ingeniería
En Industrias Alimentarias
PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO
ALUMNO:
Richard Klever Santos Alarcón
DÍA Y HORA:
Lunes de 8:00 a 10:00am
CURSO:
Microbiología de los Alimentos 1
PROFESORA:
Ing. Amelia Castro G.
I. INTRODUCCION
Durante las prácticas se van a manejar medios de

cultivo de composición muy variada y de tres tipos
diferentes en cuanto a consistencia: medios sólidos,
semisólidos y líquidos.
Este último aspecto es importante a la hora de la
preparación de los mismos.
Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden

preparar a partir de sus componentes individuales, se
pueden adquirir comercialmente como medios
deshidratados a los que solamente hay que añadir la
cantidad de agua necesaria.
El fabricante indica la composición, la caducidad, y

la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar
e incluso como debe esterilizarse.
II. OBJETIVOS
1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de
nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos in vitro.
2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez

que imprescindibles, en el laboratorio de
microbiología.
3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de

microorganismos. Adquirir la idea de la importancia
del trabajo en condiciones de esterilidad y las
técnicas más comunes para realizarlo.
III. FUNDAMENTO TEORICO
Uno de los sistemas más importantes para la

identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio
en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial, éste debe reunir una
serie de condiciones tales como: temperatura, grado de
humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un
grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Clasificación de medios de cultivo:
• Según su estado físico:
Líquidos
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los

nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener
suspensiones con un elevado número de microorganismos.
Ej. Caldo nutritivo.
Sólidos
Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los

cuales se les añaden agentes solidificantes como agar,
gelatina o sílica gel. Se utilizan con frecuencia en
el aislamiento y mantenimiento de los microorganismos
en el laboratorio. Ej. Agar nutritivo.
El gelificante más usado es el agar-agar, extraído de
las algas rojas (ej.: Gelidium), del cual existen
versiones más o menos purificadas. Las más puras que
se enriquecen con el polisacárido agarosa para evitar
la introducción de sustancias “contaminantes”
inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el
comportamiento nutricional del microorganismo; son las
que se emplean para los medios definidos (Ver más
abajo).
El agar presenta la gran ventaja de que una vez
gelificado, no funde hasta cerca de los 100 °C, lo que
permite su uso para la inmensa mayor ía de los
microorganismos, que son mesófilos.
• Según la naturaleza de sus constituyentes:
Medios naturales, complejos o indefinidos

Están constituidos por sustancias complejas de origen
animal o vegetal y usualmente se complementan con el
añadido de minerales y otras sustancias. No se conocen
todos los componentes del medio de cultivo, ni las
cantidades exactas en que están presentes. Este tipo
de medio es el ideal para cuando simplemente se
pretende obtener un buen crecimiento microbiológico,
ya que su confección es fácil y rápida (Basta pesar
una cierta cantidad del extracto desecado,
suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua
y esterilizar en autoclave). Ej. Extracto de carne,
extracto de levaduras.
Medios sintéticos
Se preparan a partir de ingredientes químicamente
puros y por lo tanto se puede conocer exactamente su
composición cuali y cuantitativa. Por su costo sólo se
emplean en procedimientos especiales.
Medios “mezcla” de los anteriores

Denominado medio semisintético, llevan algunas
sustancias químicas cuya naturaleza
y cantidad se conoce, junto con sustancias de
naturaleza y composición indefinida.
• Según sus propósitos de uso:
Medios de enriquecimiento
Se llama enriquecimiento a cualquier cultivo en medio
líquido que resulte en un incremento en el número de
un tipo dado de microorganismo en relación con el
número de otros tipos de microorganismos que puedan
estar en el inóculo.
Un medio de enriquecimiento puede contener sustancias
que favorezcan el crecimiento del microorganismo que
nos interesa o que inhiban el crecimiento de los otros
tipos de microorganismos presentes. La selectividad de
un cultivo de enriquecimiento no está determinada
únicamente por la composición química del medio usado,
sino que en un medio dado puede ser variada
significativamente modificando otros factores tales
como: temperatura, pH, fuerza iónica, iluminación,
aireación, etc.
Ej. Caldo tetrationato utilizado para el
enriquecimiento de las especies del género
Salmonella proveniente de muestras de heces, orina,
agua o alimentos.
Medios selectivos
Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se
diferencian por ser medios sólidos y están diseñados
para el aislamiento de microorganismos específicos.
Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para el
aislamiento de patógenos entéricos.
Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es decir,
permiten el crecimiento de muchos tipos de
microorganismos, pero sí contienen indicadores de
productos derivados de la actividad metabólica de los
microorganismos sobre algunos de los componentes del
medio. Se utilizan para la identificación de los
microorganismos.
Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar
fermentación de carbohidratos.
Medios selectivos diferenciales

A veces se combinan en un mismo medio las
características de ser selectivo y diferencial.
Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene
sales biliares y cristal violeta, que inhiben el
crecimiento de las bacterias gram positivas. Pero como
también contiene lactosa y un indicador de pH permite
distinguir entre las bacterias fermentadoras de
lactosa y las que no lo son.
Ejemplos de medios de cultivo

Agua peptonada
Medio usado como diluyente y para enriquecimiento
bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de
interés sanitario.
APC Agar plate count

Medio de cultivo recomendado para el recuento de
bacterias aeróbicas en aguas, aguas residuales,
productos lácteos y otros alimentos. También es
recomendado como medio general para determinar
poblaciones microbianas.
Baird Parker Medio Base
Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y
diferencial para el aislamiento y recuento de
estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros
materiales de importancia sanitaria.
VRBL Violeta Rojo Bilis Lactosa

Medio selectivo para la investigación presuntiva y
recuento de coliformes en alimentos y productos
lácteos. Es importante aclarar que este medio en
particular no debe esterilizarse en autoclave.
EMB (eosina-azul de metileno)

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado
para el aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae.
YGC (extracto de levadura, glucosa, cloramfenicol)

Medio selectivo recomendado para el recuento genérico
de mohos y levaduras.
Caldo Mac Conkey

Medio de cultivo selectivo, utilizado para la
investigación presuntiva de microorganismos coliformes
en aguas, alimentos y otros materiales de importancia
sanitaria.
Caldo lactosado
Se recomienda como prueba presuntiva para investigar
la presencia de bacterias del grupo coliforme en agua,
productos lácteos, etc. Actualmente también está
indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la
búsqueda de Salmonella spp. A partir de alimentos
IV. PROCEDIMIENTO
Preparación de medios de cultivo sólidos
- Pesar la cantidad necesaria para preparar 250 cm3

de medio de cultivo
- Agregar 250 cm3 de agua destilada
- Homogeneizar con varilla de vidrio
- Sumergir el erlenmeyer en baño María, agitando
suavemente hasta la disolución total del medio
- Distribuir el medio en porciones de 10 a 12 ml en
tubos de ensayo, o bien dejarlo en el Erlenmeyer
- Tapar con tapones de plástico esterilizables, o en
su defecto con torundas de algodón
- Esterilizar en autoclave o a vapor fluente según
corresponda. (TP N° 2)
Preparación de medios de cultivo líquidos
- Pesar la cantidad necesaria para preparar 250 cm3

de medio de cultivo
- Agregar 250 cm3 de agua destilada
- Homogeneizar y disolver con varilla de vidrio
- Una vez disuelto el medio, distribuirlo en
porciones de 10 a 12 ml en tubos de ensayo
- Tapar con tapones de plástico esterilizables, o en
su defecto con torundas de algodón
- Esterilizar en autoclave o a vapor fluente según
corresponda. (TP N° 2)
V. BIBLIOGRAFÍA
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimic
a/5_anio/biotecnologia/practicoI.pdf

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Durante las prácticas se van a manejar medios de

Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden

El fabricante indica la composición, la caducidad, y

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez

3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de

III. FUNDAMENTO TEORICO

Uno de los sistemas más importantes para la

Clasificación de medios de cultivo:

• Según su estado físico:

Usualmente se denominan caldos ya que contienen los

Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los

Medios naturales, complejos o indefinidos

Medios “mezcla” de los anteriores

• Según sus propósitos de uso:

Medios selectivos diferenciales

Ejemplos de medios de cultivo

APC Agar plate count

VRBL Violeta Rojo Bilis Lactosa

EMB (eosina-azul de metileno)

YGC (extracto de levadura, glucosa, cloramfenicol)

Caldo Mac Conkey

Preparación de medios de cultivo sólidos

- Pesar la cantidad necesaria para preparar 250 cm3

Preparación de medios de cultivo líquidos

- Pesar la cantidad necesaria para preparar 250 cm3

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