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    Informe de Laboratorio (1) Soluciones

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    Cathe Bedoya Ochoa
    Este documento describe un experimento de fotocolorimetría y curva de calibración realizado por estudiantes de enfermería. El objetivo fue analizar los principios de la fotocolorimetría, determinar el espectro de absorción de una solución de gelatina, y construir una curva de calibración para soluciones de albúmina utilizando diferentes concentraciones. Los estudiantes midieron la absorción de la solución de gelatina a varias longitudes de onda y seleccionaron la longitud de onda óptima de 540 nm. L

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    Cathe Bedoya Ochoa
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    Este documento describe un experimento de fotocolorimetría y curva de calibración realizado por estudiantes de enfermería. El objetivo fue analizar los principios de la fotocolorimetría, determinar el espectro de absorción de una solución de gelatina, y construir una curva de calibración para soluciones de albúmina utilizando diferentes concentraciones. Los estudiantes midieron la absorción de la solución de gelatina a varias longitudes de onda y seleccionaron la longitud de onda óptima de 540 nm. L

    Descripción original:

    laboratorio de bioquimica udea

    Título original

    Informe de Laboratorio (1)soluciones

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    Este documento describe un experimento de fotocolorimetría y curva de calibración realizado por estudiantes de enfermería. El objetivo fue analizar los principios de la fotocolorimetría, determinar el espectro de absorción de una solución de gelatina, y construir una curva de calibración para soluciones de albúmina utilizando diferentes concentraciones. Los estudiantes midieron la absorción de la solución de gelatina a varias longitudes de onda y seleccionaron la longitud de onda óptima de 540 nm. L

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    Nataly Cañola Rojas cc 1020481999

    Isabella Durán Rueda c.c 1.000.206.854


    Catherine Bedoya Ochoa c.c 43.990.816

    Laboratorio de Bioquímica
    Facultad de enfermería 2019-1

    Fotocolorimetría y curva de calibración

    Objetivos

    1. Analizar los principios básicos de la fotocolorimetría.


    2. Determinar el espectro de absorción de un compuesto coloreado.
    3. Seleccionar la longitud de onda óptima o de máxima adsorción.
    4. Realizar la curva de calibración para una solución de gelatina o albúmina.
    5. Calcular concentraciones de muestras de proteínas

    Sección experimental

    1.Espectro de absorción de un compuesto: Se colocó en una celda la solución problema que


    está compuesta de 2 mL de solución salina, 2 mL de Biuret y 2 mL de solución proteica
    (gelatina) a diferentes longitudes de onda en el fotocolorímetro.

    𝜆 (𝑛𝑚) Absorbancia 𝜆 (𝑛𝑚) Absorbancia

    420 0.001 540 0.206

    440 0.025 560 0.206

    460 0.059 580 0.190

    480 0.122 600 0.159

    500 0.166 620 0.105

    520 0.194

    Gráfica de absorbancia vs longitud de onda.


    2.Curva de calibración para soluciones de albúmina: En 8 tubos de ensayo se
    colocaron diferentes concentraciones de solución patrón, solución salina, reactivo
    biuret en mL. Así mismo se colocaron en el fotocolorímetro y con la longitud de onda
    máxima obtenida del numeral anterior, se midió la absorbancia de cada solución.

    Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8

    Sln patrón 0.1 0.15 0.25 0.35 0.45 0.6

    Sln salina 0.95 0.85 0.75 0.65 0.55 0.4 0.75 0.5

    Biuret 2 2 2 2 2 2 2

    Absorb 0.095 0.088 0.118 0.174 0.226 0.339 0.075 0.109

    Concentración 0.26 0.4 0.66 0.93 1.2 1.6

    Calculo de concentraciones
    Solución patrón de albúmina de huevo (Concentración 8 mg/ml)

    𝐶1. 𝑉1 = 𝐶2. 𝑉2
    𝐶2: 𝐶1. 𝑉1/𝑉2
    T1:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.1 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 0.26𝑚𝑔/𝑚𝑙
    T2:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.15 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 0.4 𝑚𝑔/𝑚𝑙
    T3:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.25 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 0.66 𝑚𝑔/𝑚𝑙
    T4:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.35 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 0.93 𝑚𝑔/𝑚𝑙
    T5:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.45 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 1.2 𝑚𝑔/𝑚𝑙
    T6:8𝑚𝑔/𝑚𝑙 ∗ 0.6 𝑚𝑙/ 3 𝑚𝑙 = 1.6 𝑚𝑔/𝑚𝑙
    Preguntas

    1. ¿ Por qué no se le puede tomar un espectro de absorción a la albúmina sola?


    Porque la albúmina es una sustancia incolora, es por ello que no se toma la albúmina sola,
    es necesario agregar el reactivo de biuret, el cual se organiza con los enlaces peptídicos,
    formando así un compuesto de color violeta.
    El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre, y éste en un medio fuertemente alcalino, se dirige
    con los enlaces peptídicos de la albúmina formando un compuesto de color violeta cuya
    intensidad depende de la concentración de proteínas, lo que facilita y da lecturas más
    1
    precisas de concentración.

    2.¿Por qué razón se eligió una sola longitud de onda para hacer todas la mediciones
    de la curva de absorción?
    Porque se debe trabajar con una longitud de onda óptima por ello se debe elegir la longitud
    de onda máxima de absorbancia que da mayor sensibilidad en las lecturas, y da un menor
    2
    error en las mediciones de la curva de absorción.

    Bibliografía:
    1.https://www.coursehero.com/file/p5ojqac/A-partir-de-esta-grafica-podemos-observar-la-
    longitud-de-onda-en-la-cual-el/
    2.http://virtual.ffyb.uba.ar/mod/book/view.php?id=88081&chapterid=1887

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