Practica 7 Analitica

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CAMPUS IV, TAPACHULA.
LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIOLOGO
LABORATORIO DE QUÍMICA ANALITICA III
CUARTO SEMESTRE GRUPO A
PRÁCTICA N° 7 ELECTROFORESIS
EQUIPO No: 3
INTEGRANTES DEL EQUIPO:
LÓPEZ GIRÓN BIANCA
URBINA FLORES CIELO SABINE
CRISTIAN AMERICA MORALES LOPEZ
CARLOS JESUS MENDOZA CRUZ
CATEDRATICO: MTRO ALEXANDER LÓPEZ ROBLERO
TAPACHULA CHIAPAS A 04 DE ABRIL DEL 2019

OBJETIVO:
Realizar el corrimiento de una muestra de ADN en electroforesis en gel de agarosa.
INTRODUCCION
El término electroforesis se usa para describir la migración de una partícula cargada

bajo la influencia de un campo eléctrico. Muchas moléculas importantes
biológicamente (aminoácidos, péptidos, proteínas, nucleótidos, ácidos nucleicos…)
poseen grupos ionizables y existen en solución como especies cargadas, bien como
cationes, o bien como aniones. Estas especies cargadas se van a separar en
función de su carga cuando se aplica un voltaje a través de los electrodos.
(Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular , 2010)
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad

de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las
separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que
se use. (Becerril, 2008)
La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN (u

otras macromoléculas, como ARN y proteínas) por su tamaño y carga. La
electroforesis consiste en aplicar una corriente a través de un gel que contiene las
moléculas de interés. Con base en su tamaño y carga, las moléculas se desplazarán
por el gel en diferentes direcciones o a distintas velocidades, con lo que se separan
unas de otras.
Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa. Debido
a esto, la electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN únicamente por su
tamaño. La electroforesis nos permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN
están presentes en una muestra y cuán grandes son unos con respecto a otros.
También podemos determinar el tamaño absoluto de un fragmento de ADN
examinándolo junto a una "escala" estándar de fragmentos de tamaño conocido.
(Khan Academy, 2016)
MATERIALES:
Fuente de Poder
Cámara electroforética
Micropipeta de 1-10 microlitros
Puntillas de 1-10 microlitros
Matraz de 250 ml
Espátula
Balanza analítica
Horno de microondas
REACTIVOS:
TAE 1X
Agarosa
Jugo azul
Muestras de ADN
MÉTODOS:
-Preparar el gel de agarosa al 1% con el buffer TAE 1X (100 ml).
-Calentar la disolución por 1 min en horno de microondas hasta que quede

completamente homogéneo
-Vaciar la solución en la cámara electroforética (la cámara electroforética debe ser

armada, de acuerdo con el modelo de esta).
-Esperar que solidifique el gel
-Retirar el peine de los pozos
-Mezclar 5 microlitros de la muestra con 2 microlitros de jugo azul más 1 microlitro

de RedGel.
-Colocar cada muestra en el pozo correspondiente
-Iniciar la corrida a 80 voltios por 40 min
-una vez finalizado, visualizar en luz UV los productos de DNA de las muestras.
OBSERVACIONES
FIGURA 1.- Se conectó la cámara FIGURA 2.- Se preparó el gel de

electroforética. agarosa y se introdujo en la cámara
electroforética.
FIGURA 3.- Se introdujo dentro de

cada posillo la cantidad de muestra
necesaria.
FIGURA 4.- Se inició la corrida a 80
voltios por un tiempo de 40
minutos.
FIGURA 5.- Se observó el gel de agarosa después de

los 40 minutos transcurridos, sin embargo no se pudo
apreciar la corrida de la muestra esto debido a que al
momento de colocar la muestra perforamos el gel y
la muestra queda debajo de la superficie del gel.
RESULTADOS
Tabla. Corrimiento de una muestra de ADN en electroforesis
Tiempo Muestra Productos de ADN
40minutos Agarosa No hubo corrida de ADN

DISCUSION
La electroforesis en gel de agarosa ha demostrado ser una manera eficiente y eficaz

de separar los ácidos nucleicos. Alta resistencia del gel de agarosa, permite la
manipulación de los geles porcentuales bajos para la separación de grandes
fragmentos de ADN. Tamizado molecular se determina por el tamaño de poros
generados por los haces de agarosa en la matriz de gel. En general, cuanto mayor
sea la concentración de agarosa, menor es el tamaño de los poros. Tradicionales
geles de agarosa son más eficaces en la separación de los fragmentos de ADN
entre 100 pb y 25 kb. Para separar fragmentos de ADN de más de 25 kb, uno tendrá
que utilizar campo pulso electroforesis en gel de que implica la aplicación de
corriente alterna a partir de dos direcciones diferentes. De este modo grandes
fragmentos de ADN de tamaño están separados por la velocidad a la que ellos
mismos reorientar con los cambios en la dirección de la corriente. En el ADN
moderno secuenciación electroforesis capilar se utiliza, por lo que los tubos
capilares se llenan con una matriz de gel. El uso de tubos capilares permite la
aplicación de altas tensiones, lo que permite la separación de fragmentos de ADN
(y la determinación de la secuencia de ADN) de forma rápida.
Los tamaños exactos de los fragmentos de ADN separados pueden determinarse

trazando el registro del peso molecular de las distintas bandas de un estándar de
ADN contra la distancia recorrida por cada banda. El estándar de ADN contiene una
mezcla de fragmentos de ADN de tamaños predeterminados que pueden ser
comparados contra las muestras de ADN desconocidos. Es importante señalar que
las diferentes formas de ADN se mueven a través del gel a diferentes velocidades.
ADN plásmido superenrollado, debido a su conformación compacta, se mueve a
través de la más rápida en gel, seguido por un fragmento de ADN lineal del mismo
tamaño, con la forma circular abierta viajar el más lento.
En esta práctica se realizó la corrida de una muestra de ADN en el uso de la cámara

electroforética a si mismo al leer la separación de los fragmentos de ADN, es de
gran importancia que se tenga precisión y/o exactitud en las mediciones de estas
ya que lo contrario no tendremos un resultado correcto. No se determinaron las
corridas correspondientes de la muestra de ADN, donde se observó que el gel de
agarosa después de los 40 minutos transcurridos, al momento de colocar la muestra
perforamos el gel y la muestra quedó debajo de la superficie del gel, se puede
atribuir a errores del tipo sistemático, operativos y/o instrumentales, por lo que es
muy importante el buen manejo de las técnicas de medición.
Kirkpatrick, F. H. Descripción general de las propiedades del gel de agarosa.

Electroforesis de grandes moléculas de ADN: teoría y aplicaciones. 9-22 (1991)
CONCLUSION
La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes

muestras biológicas, para la identificación de ácidos nucleicos de agentes
infecciosos o para la obtención de un fragmento determinado de ADN, que una vez,
localizado en el gel, puede ser extraído para análisis posteriores.
En esta práctica la muestra de ADN no se pudo correr correctamente ya que por

error de aplicar la muestra al pocillo en el gel, se rompió y cuando se leyó el gel a
luz UV, la muestra de ADN, no era tan pronunciada a como se tenía esperado que
fuera.
Desde la adopción de geles de agarosa en la década de 1970 para la separación

de ADN, tiene demostrado ser una de las técnicas más útiles y versátiles en la
investigación ciencias biológicas.
BIBLIOGRAFÍA
Becerril, I. M. (19 de Septiembre de 2008). Depa.unam. Recuperado el 10 de Abril de 2019, de

Depa.unam:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf
Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular . (12 de Octubre de 2010). Recuperado el 10 de

Abril de 2019, de Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular :
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/17%20ELECTROFORESIS%20ACS%20NUCLEICOS%20GELES%20AGAROSA.pdf
Khan Academy. (7 de Junio de 2016). Recuperado el 10 de Abril de 2019, de Khan Academy:

https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-
pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis

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LÓPEZ GIRÓN BIANCA

URBINA FLORES CIELO SABINE

CRISTIAN AMERICA MORALES LOPEZ

CARLOS JESUS MENDOZA CRUZ

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TAPACHULA CHIAPAS A 04 DE ABRIL DEL 2019

Realizar el corrimiento de una muestra de ADN en electroforesis en gel de agarosa.

El término electroforesis se usa para describir la migración de una partícula cargada

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad

La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN (u

Micropipeta de 1-10 microlitros

Puntillas de 1-10 microlitros

-Preparar el gel de agarosa al 1% con el buffer TAE 1X (100 ml).

-Calentar la disolución por 1 min en horno de microondas hasta que quede

-Vaciar la solución en la cámara electroforética (la cámara electroforética debe ser

-Esperar que solidifique el gel

-Retirar el peine de los pozos

-Mezclar 5 microlitros de la muestra con 2 microlitros de jugo azul más 1 microlitro

-Colocar cada muestra en el pozo correspondiente

-Iniciar la corrida a 80 voltios por 40 min

FIGURA 1.- Se conectó la cámara FIGURA 2.- Se preparó el gel de

FIGURA 3.- Se introdujo dentro de

FIGURA 5.- Se observó el gel de agarosa después de

Tabla. Corrimiento de una muestra de ADN en electroforesis

Tiempo Muestra Productos de ADN

40minutos Agarosa No hubo corrida de ADN

La electroforesis en gel de agarosa ha demostrado ser una manera eficiente y eficaz

Los tamaños exactos de los fragmentos de ADN separados pueden determinarse

En esta práctica se realizó la corrida de una muestra de ADN en el uso de la cámara

Kirkpatrick, F. H. Descripción general de las propiedades del gel de agarosa.

La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes

En esta práctica la muestra de ADN no se pudo correr correctamente ya que por

Desde la adopción de geles de agarosa en la década de 1970 para la separación

Becerril, I. M. (19 de Septiembre de 2008). Depa.unam. Recuperado el 10 de Abril de 2019, de

Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular . (12 de Octubre de 2010). Recuperado el 10 de

Khan Academy. (7 de Junio de 2016). Recuperado el 10 de Abril de 2019, de Khan Academy:

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