Este documento describe el método de Somogy-Nelson para determinar azúcares reductores en una muestra. El método implica la oxidación de azúcares por cobre, formando óxido cuproso que luego reacciona con un reactivo de molibdato de amonio para formar un complejo de color azul cuya absorbancia se mide. Se prepara una curva patrón para determinar la concentración de azúcares en la muestra mediante espectroscopia. El método es reproducible y puede detectar bajas concentraciones de azúcares re
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Este documento describe el método de Somogy-Nelson para determinar azúcares reductores en una muestra. El método implica la oxidación de azúcares por cobre, formando óxido cuproso que luego reacciona con un reactivo de molibdato de amonio para formar un complejo de color azul cuya absorbancia se mide. Se prepara una curva patrón para determinar la concentración de azúcares en la muestra mediante espectroscopia. El método es reproducible y puede detectar bajas concentraciones de azúcares re
Este documento describe el método de Somogy-Nelson para determinar azúcares reductores en una muestra. El método implica la oxidación de azúcares por cobre, formando óxido cuproso que luego reacciona con un reactivo de molibdato de amonio para formar un complejo de color azul cuya absorbancia se mide. Se prepara una curva patrón para determinar la concentración de azúcares en la muestra mediante espectroscopia. El método es reproducible y puede detectar bajas concentraciones de azúcares re
Este documento describe el método de Somogy-Nelson para determinar azúcares reductores en una muestra. El método implica la oxidación de azúcares por cobre, formando óxido cuproso que luego reacciona con un reactivo de molibdato de amonio para formar un complejo de color azul cuya absorbancia se mide. Se prepara una curva patrón para determinar la concentración de azúcares en la muestra mediante espectroscopia. El método es reproducible y puede detectar bajas concentraciones de azúcares re
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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROMAN
Facultad: FCAG Escuela: ESIA
Título: Determinación de azucares reductores por método de Somogy - Nelson Número de Practica: Nº 5 Nombre: Juan Paul Estrella Useca Profesor(a): Miguel Angel Larrea Cespedes
TACNA – PERU
INTRODUCCIÓN
Teniendo en cuenta que los azúcares reductores (glucosa, maltosa, entre otros)
deben cuantificarse mediante técnicas objetivas, confiables y reproducibles
(Meneges et al., 1991), se han utilizado, a través del tiempo, diferentes métodos: la cromatografía de papel (Maier, 1978), los volumétricos de ferricianuro (NTC 926) o
de Eynon - Lane (Bernal de Ramírez, 1994), el gravimétrico de Allihn (Molinari,
1920), los espectrofotométricos de Somogyi-Nelson (Ros et al., 1992), DNS y DNS
- fenol (Castellanos, 1995); así como los de cromatografía HPLC (Ros et al., 1992).
Sin embargo, independientemente del procedimiento aplicado, es deber del
investigador simplificar y racionalizar el análisis con la sensibilidad, versatilidad y
especificidad del instrumental para repetir con exactitud los experimentos, Por lo
cual en la presente practica se describirá el método de SOMOGYI-NELSON debido
a que es, altamente reproducible, determina azúcares reductores presentes en
concentraciones muy bajas (20 - 180 µg/ ml). Ahora bien, emplear el procedimiento
de SOMOGYI - NELSON implica familiarizarse con su composición y el estudio de
los principios químicos que utiliza el método de SOMOGYI - NELSON para la
determinación de azúcares reductores, los cuales se desarrollara en la practica
presente.
I. OBJETIVO
Determinar el contenido de azucares totales en la muestra.
Conocer la técnica y el principio del método de SOMOGYI-NELSON.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO
El método de Nelson (1944)-Somogyi (1952) propone la formación de un
complejo entre el tartrato de sodio y potasio y el Cu2+ a ph menor a 7,0, el
cual es capaz de oxidar azúcares que contengan extremo reductor. El
método se basa en la reducción cuantitativa del Cu2+ para la generación de
óxido cuproso Cu2O, el cual reacciona cuantitativamente para la formación
de un complejo.
Mecanismo de Reacción:
Aunque el mecanismo no se ha elucidado completamente, sí se conoce que
todos los aldehídos y cetonas α- hidroxiladas, como lo son las aldosas y
cetosas, pueden ser objeto de oxidación por el Cu2+ bajo las condiciones de
ph y calentamiento adecuadas. El precipitado de Cu2O (amarillo-naranja)
puede aparecer, dependiendo de la cantidad de azúcar en la muestra, en
ese caso es necesario centrifugar antes de hacer la medida
espectrofotométrica
Principios químicos del componente de Somogyi
El sulfato de sodio es un cuerpo sólido e incoloro, cuya máxima solubilidad
se presenta a los 33 ºC, y sus disoluciones saturadas en caliente ofrecen en
frío el fenó- meno de la sobresaturación: en este estado, cuando por
agitación u otra causa cristalizan, lo hacen con siete moléculas de agua
(Puig, 1934).
Principios químicos del reactivo de Nelson
El molibdato de amonio en presencia de ácido sulfúrico y de arsenato de
sodio da origen al ácido molibdoarsénico, complejo de color amarillo.
III. MATERIALES EQUIPOS Y MATERIALES :
Material Tubos de ensayo Muestra de miel Pipetas
REACTIVO CUPRICO DE SOMOGYI (SN1)
4.0G DE CuSO 4 ó 6.25g de SO4 .5H2O(Sulfato de cobre ) 24.0 g Na2CO3 (carbonato de sodio anhidro ) o 28.07g con una
molecula de agua 16,0g de NaHCO3 (Bicarbonato de sodio ) 12.0g de tartrato deble de sodio y potasio 18g de Na2 SO4 (Sulfato de sodio)
Disolver en un Bécquer de 100ml con 600 ml de agua destilada, acrecentar
los reactivos indicados en el orden indicado anteriormente .Transferir para
un balón volumétrico de 1000ml y completar a volumen con agua destilada,
dejar de un día para otro al abrigo de la luz guardar en frascos ámbar
Reactivo de arsenomolibdico de Nelson (SN2 )
Solución A
50.0 g de (NH4) 6Mo7O24 (Molibdato de amonio) o 53.093g de
molibdato de amonio 4H2O en 900ml de agua destilada
Adicionar 42 ml de H2SO4 concentrado p.a
Solución B
6.0 g de Na2AsO4 en 50 ml de agua destilada o 10.06 g de Na 2AsO4 .
7H2O (Arsenito disodico
Mezclar A y B y mantener a 37ºC en baño maría o estufa por 24
horas .volumen final a 1000 ml
IV. PROCEDIMIENTO: 1.0ml de solución problema más 2.0 ml de reactivo SN 1 10 minutos en baño de agua en ebullición Enfriar en baño de hielo Adicionar 2ml de reactivo SN2 Esperar 5 minutos Completar a volumen para 25 ml de agua destilada Leer la absorbancia a 540 nm
Preparación de la muesrta
V. RESULTADOS Y CÁLCULOS : Elaboración de la curva patrón: Realizamos regresión lineal para hallar la ecuación de la recta y así
hallar la concentración de la muestra.
Obtenemos los valores de:
A: 0.08197 B: 2.04517 r: 0.998
Ecuación de la recta:
VI. DISCUSIONES: La glucosa u otro azúcar reductor reducen el reactivo cúprico alcalino,
dando el óxido cuproso. Este , en presencia del reactivo arsenomolibdico de
nelson, forma un complejo de óxido de molibdeno de color azul estable
cuya intensidad puede ser medida en el fotocolorimetro , una vez que sigue
las leyes de lambert y beer. Esto explica la presencia del color azul en los
tubos de la curva padrón
VII. CONCLUSIONES: Determinación de la concentración para la absorbancia obtenida mediante la
espectroscopia, la cual se desarrolla mediante la ecuación obtenido en base
a la curva padrón .En este procedimiento se espera observar la dependencia
lineal entre la concentración de la señal con el incremento en la
concentración.
Determinación de azucares reductores por el método espectrofotometrico
de somogyi- nelson trata de usardos reactivos que al usar cualquier
muestra que contenga glucosa u otro azúcar reductor reduce el primero
reactivo cuprico alcalino, dando el oxido cuproso. en presencia de calor
para luego ser enfriado en presencia del reactivo arsenomolibdico de
Nelson, forma un complejo de oxido de molibdeno de color azul
,característico en este método , cuya intensidad puede ser medida en el
fotocolorimetro.
VIII. BIBLIOGRAFÍA: Manual de Laboratorio para el Análisis de los Alimentos L. HART, J.
