2 ° INFORME DE MICROOLOGIA 2016

“AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU”

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGIA GENERAL

DOCENTE:

Ing ROJAS MORENO, Mercy

Integrantes:

 CASTRO PRADO, Brenda

 MALPARTIDA ROMERO, Erika
 MONTERO CHAVEZ , Daniela
 NEIRA CNTENO, Christian

HUANCAYO – 2016 – 1

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INTRODUCCIÓN

Una de las forma para la identificar microorganismos es observar su crecimiento en

sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. Este material alimenticio
en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo. Se han preparado más de
10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuado; así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante. Son muchos y muy rigurosos los aspectos
a tener en cuenta al momento de preparar un cultivo.

En este informe presentamos nuestros resultados obtenidos en laboratorio sobre nuestra

experiencia en preparación de medios de cultivo.

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL:

• Preparar de manera correcta el agar

2.1 OBJETIVO ESPECÍFICO:

• Preparación correcta del agar.

• Determinar el correcto del pH antes y después al revisar el agar.

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II. MATERIALES Y REACTIVOS

 LUGAR DE EJECUCIÓN: Se realizó en el laboratorio de biología – química de la Universidad

Continental de Ciencias e Ingeniería.
 INSTRUMENTAL DE LABORATORIO:

REACTIVOS

AGAR:
Es un polisacárido compuesto por galactosa, un azúcar
simple

EXTRACTO DE CARNE
Es un caldo de carne muy concentrado,
normalmente de vacuno.

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CLORURO DE SODIO
Más comúnmente conocido como sal de mesa, o en su
forma mineral halita, es un compuesto químico con la fórmula NaCl

AGAR PEPTONA CASEINA

MATERIALES:

BALANZA
Para calcular el peso que tendrán los reactivos

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ALGODÓN.-
Para hacer las torunas en los tubos de ensayo

ESTUFA
Para calentar el agar

CUCHARA ESPATULA
La utilizamos para extraer muestras y pesarlas

MEDIDOR DE pH

Para calcular su pH antes y después quel agar hierva

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VASO PRECIPITADO
Para mezclar y calentar el agar

Erlenmeyer
Utilizamos para almacenar el agar

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CÁLCULOS Y RESULTADOS

Procedimiento para 250 mL

AGAR

1L 18g

250 mL x

Donde: X= 4.5g

CLORURO DE SODIO

1L g

250 mL x

Donde: X= 0.75g.

PEPTANO

1L 5g

250 mL x

Donde: X= 1.25g Es la cantidad a pesar.

EXTRACTO DE CARNE

1L 5g

250 mL x

Donde: X= 1.25g Es la cantidad a pesar.

AGUA DESTILADA

250 mL

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CUESTIONARIO

1. ¿Para qué se utiliza los medios de cultivo?

Se utiliza para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos, y parásitos, el

cual sirve como un medio optimo que favorece el proceso deseado. También se emplea como un
método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades.
2. El medio de cultivo que hemos preparado, ¿es un medio definido o indefinido? ¿Qué elementos
nutritivos contiene este medio?

Es definido por que el agar Mc Conke ya tiene todo los elementos para un caldo nutricio. Y, los
elementos nutritivos que contiene este medio de cultivo es el agar agar, agar Mc Conke y el agar
nutricio.
3. ¿Por qué es necesario ajustar el pH del medio?

El caso de nuestra prelación de agar mesonotos no utilizamos el PH del medio por que el Agar
maconke ya está preparado.
4. Respecto a la preparación del Agar Nutritivo:
a. ¿Para qué se añade el Agar-agar?

Para que la preparación sea más espesa.

b. ¿Qué cualidades tiene esta sustancia?

Las cualidades que tiene esa sustancia es cambiarlo a un estado sólido, es decir, consume
toda el agua que está en una determinada sustancia.
c. ¿Por qué crees que en Agar Nutritivo pueden crecer todo tipo de bacterias?

Porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas, además que las
bacterias crecen en la superficie de esta porque contienen diversos nutrientes en
concentraciones.
5. Respecto al Agar Nutritivo:
a. ¿Cuáles son sus ingredientes?

0,5 % de peptona; 0,3 % de extracto de carne/extracto de levadura; 1,5 % de agar; 0,5 %

de cloruro de sodio; agua destilada; pH casi neutro (6,8) a 25 °C.

b. Indique las propiedades nutricionales que proporcionan para el desarrollo de los

microorganismos:
 Las peptonas: Mezcla de aminoácidos libres y cadenas cortas de polímeros de
aminoácidos (péptidos), ciertas vitaminas y a veces carbohidratos.
 Extracto de carne: Algunos de sus componentes se pueden utilizar como factores
orgánicos de crecimiento o como fuente de carbono y energía. El extracto de
carne está preparado a partir de carne de vacuno fresca. Se encuentra en diversas
formulaciones como base nutritiva. Polvo de color beige, soluble en agua.
 Cloruro de sodio: Sus funciones en un medio de cultivo pueden ser poco
específicas, (como el NaCl para ajustar la osmolaridad del medio) o pueden ser

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requeridas específicamente en el metabolismo (como las sales de K+, Mg2+,

Ca2+, Fe3+, etc.).
 Agar: Existen versiones más o menos purificadas (las más puras están más
enriquecidas en el polisacárido agarosa; son las que se emplean para los medios
definidos, con objeto de evitar la introducción de sustancias "contaminantes"
inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento
nutricional de la bacteria).

6. Respecto al Agar Mc Conkey:

a. ¿Cuáles son sus ingredientes?

Sales biliares (medio inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas,

excepto Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus), colorante cristal
violeta (inhóspito para cierto tipo de bacterias Gram-positivo), colorante rojo neutro (el
cual marca microorganismos que fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.
b. Indique las propiedades nutricionales que proporcionan para el desarrollo de los
microorganismos.
 La peptona: Mezcla de aminoácidos libres y cadenas cortas de polímeros de
aminoácidos (péptidos), ciertas vitaminas y a veces carbohidratos.
 La lactosa: Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como Escherichia
coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual baja el pH bajo 6,8 lo que
tiene como consecuencia la aparición de colonias de color rosadas o rojas.
Algunas bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera lenta, estas siguen
siendo Lac+ por ejemplo: Serratia y Citrobacter. En cambio, las bacterias Lac-, al
no poder usar la lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a las que
desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH4+, que
alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro
vira a amarillo.
 sales biliares, cristal violeta: son agentes tensioactivos que desorganizan muchas
membranas externas, Inhiben el crecimiento de ciertas bacterias Gram-positivas.
La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte
de la flora Gram positiva.
 Agar-agar: Inhibidores: cristal violeta y sales biliares. Lactosa como agente
diferencial. Rojo neutro como indicador. El agar-agar es el agente solidificante
más utilizado. Su composición química es indefinida y solidifica con mayor
dificultad a medida que desciende el pH.

c. ¿Por qué el pH final debe ser 7.1 +- 2?

Para evitar la corrosión de metales. Además es óptima para los cultivos.

7. Respecto al Agar Saboraud:
a. ¿Cuáles son sus ingredientes?
Contiene 40 g/L glucosa, 10 g/L pluripeptona, 15 g/L agar, 0,05 g/L [cloranfenicol]
b. Indique las propiedades nutricionales que proporcionan la peptona, glucosa, agar-agar
para el desarrollo de los microorganismos.
Agar: son las que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la
introducción de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las interpretaciones
sobre el comportamiento nutricional de la bacteria
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 2 ° INFORME DE MICROOLOGIA 2016

Peptona: Excelente nutriente, usado en medios de cultivo, para producir antibióticos,

toxinas, enzimas y otros productos. Laboratorios farmacéuticos y veterinarios usan este
medio de cultivo.
c. ¿Por qué se usa alta concentración de glucosa en este medio?
Es la fuente de energía en muchos medios. Metabolizada preferentemente vía glucólisis
hacia piruvato que puede ser convertido en lactato o acetoacetato que entra el ciclo de
Krebs, y genera CO2, para la acumulación de ácido láctico en el medio propio de células
embrionarias y transformadas parece indicar un funcionamiento diferente del ciclo de
Krebs en estas células respecto al modelo in vivo. En estos casos la mayor parte del CO2
parece proceder de un uso de la glutamina/glutamato.
¿Por qué el pH final debe ser 5.6?
8. Cite algunas propiedades de Agar-Agar y la gelatina.
9. Indique un método para ajustar el pH en un medio de cultivo.
10. ¿En qué se diferencian los medios selectivos con los medios diferenciales?

Medios selectivos Medios diferenciales

 Son medios utilizados para  Se utiliza para poner en evidencia las
favorecer el crecimiento de ciertas características bioquímicas que
bacterias contenidas en una ayuden a diferenciar géneros o
población poli microbiana. El especies.
fundamento de estos medios  Permiten distinguir diferencias
consiste en facilitar metabólicas de las bacterias.
nutricionalmente el crecimiento de
una población microbiana
específica.
 Favorecen el crecimiento de ciertas
bacterias e inhibe el crecimiento de
las Gram Positivas.

11. ¿Cuáles son los requerimientos mínimos nutricionales y ambientales que debe tener un medio
de cultivo?
12. ¿Cuál es el mecanismo por el cual el vapor saturado a presión mata a los microorganimos?

Se realiza mediante la esterilización en auto clave. El vapor mata las bacterias por
desnaturalización de sus proteínas.
13. ¿Cómo se verificaría que un medio de cultivo procesado en la autoclave quedo realmente
esterelizado?

Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de
esterilización de material. Aunque cabe notar que debido a que el proceso involucra vapor de
agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave, como el
papel y muchos plásticos (a excepción del polipropileno).
Debido a que el material a esterilizar es muy probablemente de uso grabable, se requiere de
métodos de testificación de la calidad de dicha esterilización, esto quiere decir que la presión y
temperatura aplicadas serán distintas para cada uno de los productos auto clavados.
Las autoclaves suelen estar provistas de medidores de presión y temperatura, que permiten
verificar el funcionamiento del aparato. Aunque en el mercado existen métodos testigo anexos,

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por ejemplo, testigos químicos que cambian de color cuando cierta temperatura es alcanzada, o
bien testigos mecánicos que se deforman ante las altas temperaturas. Por este medio es posible
esterilizar todo tipo de materiales a excepción de materiales volátiles, por lo que se debe tener
gran precaución.
14. ¿Cuáles son los métodos más corrientes utilizados para esterilizar?

Se utiliza el calor, de dos maneras diferentes según el tipo de muestra:

 Calor húmedo (autoclave).
 Calor seco (estufas).

Cuando el tipo de muestra a esterilizar no resiste temperaturas superiores a 100ºC, se recurre a

los métodos denominados fríos:
 Radiaciones (rayos gamma, ultravioleta).
 Química (gases de óxido de etileno), entre otros.

15. Ciertos microorganismos poseen la estructura biológica más termoresistentes, para la

supervivencia. ¿Cuál es y en que microorganismos se encuentra?

Endóspora, es una de sus principales características. Mientras que las bacterias o las formas
vegetativas de las bacterias esporuladoras sometidas a 80º C durante diez minutos
(pasteurización) mueren, las endóspora sobreviven e incluso soportan un calentamiento superior.
Para eliminarlas son necesarias técnicas de esterilización.
Esta característica permite un fácil método de aislamiento de las bacterias esporuladas calentando
el material donde se supone que existe esporas a 100ºC durante 10 minutos mueren todas las
bacterias y, seguidamente, las endóspora sobrevivientes se hacen germinar y crecer en el medio
de cultivo adecuado.
16. Usualmente como se esterilizan las pipetas serológicas de vidrio y las placas Petri de vidrio.

Pipetas: En caso de las pipetas, se le coloca en la boquilla un trocito de algodón que actuará, como
filtro evitando la contaminación del operario con los microorganismos de la muestra y que éste a
su vez contamine la muestra. Una vez preparadas, se introducen en estuches o cajas metálicas, o
bien se envuelven individualmente en papel satinado para ser posteriormente esterilizadas. Todo
el material de vidrio se esteriliza con calor seco, generalmente en un horno Pasteur.
Placas Petri: Las placas Petri se introducen en una bolsa de plásticos sellados y se esterilizan con
óxido de etileno o radiaciones.
17. ¿Qué agar utilizarías para el crecimiento de bacterias degradadoras de petróleo y por qué?

El agar – agar, Mc conkey, son medios que se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos
de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Que permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en las muestras la cual permiten observar las bacterias degradadoras de
petróleo que son Gran negativas.

18. Diga a qué se llama medio sintético y a qué medio no sintético. Dar cinco ejemplos de cada uno.
19. Indique las diferencias entre un medio de cultivo enriquecido, selectivo y para priebas
bioquímicas.

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20. ¿Qué precauciones se deben considerar en la preparación y esterilización de los medios de

cultivo?
21. Haz un esquema de una autoclave, indicando como funciona.

22. Glosario: Definir los términos.

a. Factor de crecimiento:

Los factores de crecimiento son compuestos orgánicos que, sin ser una fuente de energía
o de carbono. Son necesarios para el crecimiento bacteriano, pero no todas las bacterias
son capaces de sintetizarlos.
Los factores de crecimiento encajan básicamente en tres grupos: 1. Aminoácidos
esenciales precursores de proteínas; 2. Bases puricas y pirimidicas; 3. Vitaminas que
actúan como coenzimas o precursores de coenzimas; las principales vitaminas requeridas
por los microorganismos son: tiamina, biotina y piridoxina, y 4. Otros factores, estos se
encuentran generalmente en la sangre.
Título: Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición
Autor: Hugo Humberto Montoya Villafañe
Editor: Universidad de Antioquia
b. Elemento traza:

Los oligoelementos constituyen un grupo de micronutrientes presentes en el organismo

en cantidades inferiores a 0.01 por 100 del peso corporal total. Asimismo se les denomina
elementos traza, aunque esta terminología se utiliza generalmente cuando se les

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 2 ° INFORME DE MICROOLOGIA 2016

relaciona con su análisis ya que se trata de la detección de concentraciones en partes por

millón (ppm) y ultranza cuando su cuantificación se encuentra en partes por billón (ppb).
Título: Tratado de Nutrición
Autores: Manuel Hernández Rodríguez, Ana Sastre Gallego
Traducido por: Manuel Hernández Rodríguez, Ana Sastre Gallego
Edición: Ilustrada
Editor: Ediciones Díaz de Santos, 1999
ISBN: 8479783877, 9788479783877
Nº de páginas: 1496 páginas
c. Macronutrientes:

Los Macronutrientes son compuestos requeridos por las bacterias en cantidades

significativas. En este grupo se ubican todos los compuestos que hacen parte de los
carbohidratos, lípidos y proteínas, como por ejemplo el oxígeno, el hidrogeno, el carbono,
el nitrógeno, el azufre y el fosforo. También se incluyen n este grupo el agua y ciertos
cationes.
Título: Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición
Autor: Hugo Humberto Montoya Villafañe
Editor: Universidad de Antioquia
d. Micronutrientes:

Son pequeñísimas concentraciones de algunos elementos necesarios para el desarrollo

bacteriano que, aunque son requeridos en pequeñas cantidades, son tan indispensables
para la nutrición como los Macronutrientes.
Título: Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición
Autor: Hugo Humberto Montoya Villafañe
Editor: Universidad de Antioquia
ISBN: 9587140907, 9789587140903
e. Peptona :

Peptona es una sustancia que resulta de la transformación de las proteínas por la acción
del jugo gástrico.
http://es.thefreedictionary.com/peptona
f. Triptona :

Es una peptona que se produce durante la digestión de las albuminas a través de la acción
de la tripsina.
http://www.diccionariomedico.net/diccionario-terminos/Diccionario-terminos-
2/T/page,9/
g. Extracto de levadura :

Este producto es rico en vitaminas especialmente del complejo B, aminoácidos y otros

factores de crecimiento. Es utilizado en una amplia variedad de medios de cultivo como
una excelente fuente de nutrientes.
http://www.mcd.com.mx/pdfs/extracto_levadura.pdf
h. Indicador de PH

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Los indicadores de ácido base son sustancias, cuyo color en disolución depende del PH de
la misma. Por lo regular un indicador tiene un color determinado por debajo del PH
definido
Título: Prácticas de química general
Autor: Antonio Fuster Ortigosa
Editor: EDITUM, 1986
ISBN: 8476840128, 9788476840122
Nº de páginas: 113 páginas
i. Autoclave.

Es un aparato para la esterilización de materiales por vapor bajo presión. El autoclave

permite que el vapor fluya alrededor de cada artículo colocado en la cámara.
http://medical-dictionary.thefreedictionary.com/autoclave
j. Campana de flujo laminar:

Recinto especial de manipulación que permite garantizar el trabajo en un ambiente estéril

mediante la utilización de filtros, siendo los más habituales los denominados filtros HEPA
(filtros de alta eficacia para partículas de aire).
Título: Técnicas de Exploración En Medicina Nuclear
Autor: César Díaz García
Editor: Elsevier España, 2004
ISBN: 8445814206, 9788445814208
Nº de páginas: 405 páginas

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PAGINAS WEB

http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf
• http://es.thefreedictionary.com/peptona
• http://medical-dictionary.thefreedictionary.com/autoclave
• http://www.danival.org/fungi/fungi_medios.html?pr=7200hongos_-
400_laboratorio_medios.html
• http://es.wikipedia.org/wiki/Esterilizaci%C3%B3n_%28microbiolog%C3%ADa%29
http://www.seimc.org/control/revisiones/bacteriologia/pmultocida.pdf

Bibliografía

• BROCK BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS Edición DECIMA PÁG 100-115

• Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición

• Manual de microbiología (guía de la práctica

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