Cinética del crecimiento bacteriano

La cinética de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones más

utilizadas por la ingeniería alimentaria y la biotecnología, por lo tanto, es menester
conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, así como, la forma de
cuantificación de los mismos, sus formas de aplicación, las ventajas y desventajas
de los diferentes métodos, y sobre todo el monto económico de cada uno de ellos.
Por tanto, el siguiente documento trata de proporcionar una información general
acerca de los diferentes mecanismos de reproducción bacteriana, así como de
dar una idea acerca de la utilización de los mismos, sus características,
especificaciones, y un análisis de las ventajas y desventajas de cada uno de ellos.

1.- CRECIMIENTO MICROBIANO:

“El crecimiento de células, microorganismos, células vegetales y animales, puede

mirarse bajo dos aspectos o tipos de crecimiento reproductivo.

a) Células individuales o población de células en crecimiento sincronizado

para estudio del ciclo de vida celular. Procesos en laboratorio.

b) División estocástica de la población, o división al azar.

La división celular se efectúa luego de un aumento en el tamaño de la célula,

duplicación del núcleo, división celular, división citoplasmática (salva los
organismos cenóticos). De ésta manera una célula da nacimiento a dos células
hijas de tamaño idéntico y conteniendo los mismos elementos estructurales y
potencialidades.

En el caso de las levaduras, y otros microorganismos, se presenta una variante

que es la gemación o botón. Se forma una pequeña protuberancia que aumenta
progresivamente de tamaño, luego se produce la división en el núcleo y migra
hacia el botón. Finalmente crece hasta un tamaño suficiente y posteriormente se
separa formando otra célula idéntica a la madre. Las células hijas, sin importar el
procedimiento de división celular.
2. MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:

El cálculo del número de células que existen en una suspensión se puede llevar a
cabo mediante el recuento celular (microscopía, número de colonias), masa
celular (peso seco, medida del nitrógeno celular, turbidimetría) o actividad celular
(grado de actividad bioquímica con relación al tamaño de la población). Todos
estos métodos se clasifican en dos apartados: métodos directos y métodos
indirectos.

Métodos directos:

 Recuento del número de células en una cámara Thoma

 Peso seco celular

 Determinación de nitrógeno o de proteínas totales

 Determinación de DNA

Métodos indirectos:

 Recuento de colonias en placa

 Recuento sobre filtro de membrana

 Consumo de oxígeno

 Liberación de dióxido de carbono

 Concentración de un enzima constitutivo

 Decoloración de un colorante

 Incorporación de precursores radiactivos

 Medida de la turbidez

2.1. PESO SECO CELULAR:

El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se encuentran

en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105°C
hasta peso constante. Esta técnica es útil para grandes volúmenes de muestra,
debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un
gran número de bacterias.

El aumento de volumen con la humedad tiene un límite. Este va creciendo hasta

que la célula alcanza un porcentaje de humedad que corresponde al punto de
saturación de la pared celular, aproximadamente del 30 % para todas las
especies en cálculos técnicos. A partir de éste valor el volumen permanece
constante, ya que el agua que penetra en el volumen de las células no produce
hinchamiento de la pared celular. Por lo tanto, el valor del 30 % es un valor para
utilizarlo prácticamente, si bien cada especie tiene su punto de saturación de la
pared celular” (2). No sucede así con el peso, cuyo valor sigue aumentando hasta
alcanzar el contenido máximo de agua para la especie correspondiente. Como
consecuencia de lo anteriormente expuesto, se definen, para una célula los
siguientes pesos específicos:

PESO ESPECÍFICO ANHIDRO:

ρ0 = Peso anhidro ( 2.1.1)

Volumen Anhidro

PESO ESPECÍFICO A H% DE HUMEDAD:

ρk = Peso al H% de humedad ( 2.1.2)

Volumen al H% de humedad

Cuando la humedad es del 12 %,se llama peso específico normal.

PESO SECO VOLUMÉTRICO SATURADO:

 Rs= Peso anhidro ( 2.1.3)

Volumen a H%

Cuando la humedad H es superior al punto de saturación de la pared celular.

PESO SECO VOLUMÉTRICO HÚMEDO:

Rk= Peso anhidro ( 2.1.4)

Volumen a H%

Siendo, en este caso, la H inferior al punto de saturación de la pared celular.

El volumen ocupado por los huecos se determina por desplazamiento de fluidos,

por lo que estos no deben reaccionar con la pared celular para obtener un valor
exacto del mismo. Se suelen emplear el agua o el helio, siendo este naturalmente
más exacto al ser el helio un gas inerte.

El agua, como veremos, es sorbida molecularmente por la pared celular,

produciendo una compresión de la misma que enmascara el valor obtenido, cuyo
efecto estudiaremos con la hinchazón. Con respecto al peso específico real de la
célula, o más exactamente pesoespecífico de la pared celular, después de
numerosos estudios, se ha encontrado que, con pequeñas variaciones, se puede
considerar para todas las células prácticamente igual a 1,56.

2.2. ABSORCIÓN:

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión,

parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es
transmitida. La nefelometría mide la luz dispersada por una solución de partículas.
La turbidimetría mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz
transmitida a través de la solución. Con relación a la longitud de onda y al tamaño
de la partícula pueden existir tres tipos de dispersión.

Los métodos de dispersión de la luz son las técnicas más utilizadas para
monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy útiles y poderosos
pero pueden llevar a resultados erróneos. Principalmente, dan información sobre
el peso seco (contenido macromolecular).

Turbidimetría: La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido

a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida.

Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de

diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi
la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere
decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al
peso seco, independientemente del tamaño celular del microorganismo.

Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC
(Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas
son diferentes. Por esta razón, para estimar el número de microorganismos
totales o el número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana
debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo
de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el número
de microorganismos totales o con UFC.

Fig. 2.2-1 Absorbancia en función del Peso Seco

 Absorbancia = K x Peso Seco (2.2.1)

K: constante que varía con la longitud de onda utilizada y representa la inversa

del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el
valor de la absorbancia(1/W 0).

Peso seco: Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso

seco (µg/ml-mg/ml).

La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para

suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una
absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la
ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas
puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel
de absorción.

Fig. 2.2-2 Absorbancia en función del Peso Seco

 Fig. 2.2-3 Absorbancia en función del Número de Microorganismos Totales

En estos gráficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos

microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia,
mientras que para el mismo número de microorganismos totales la absorbancia
de cada suspensión es distinta.

2.3. PESO HÚMEDO:

Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la

separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para
grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda
atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La
cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de
células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular
que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular.

Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda

retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se
utilizan soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden
ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes
bacterianas.
2.4 VOLUMEN DE CÉLULAS EMPACADAS Y NÚMERO DE CÉLULAS:

El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes

perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del
crecimiento mediante diversas metodologías. Para algunos, el crecimiento es la
capacidad para multiplicarse que tienen las células individuales, esto es iniciar y
completar una división celular.

De esta forma, se considera a los microorganismos como partículas discretas y el

crecimiento es entendido como un aumento en el número total de partículas
bacterianas. Existen dos formas para determinar el número total de
microorganismos en una muestra:

 Recuento microscópico de partículas

 Recuento electrónico de partículas

Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces de

formar colonias debido a que sólo se tiene en cuenta el número de
microorganismos viables, esto es capaces de crecer indefinidamente. Las
determinaciones que se utilizan son:

 Recuento de colonias

 Método del número más probable

Para los fisiólogos bacterianos, bioquímicos y biólogos moleculares una medida

del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la síntesis
macromolecular y un incremento en la capacidad para la síntesis de los
componentes celulares es una medida del crecimiento. Para este grupo la división
celular es un proceso esencial pero menor que rara vez limita el crecimiento, ya
que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimático para
utilizar los recursos del medio y formar biomasa.

2.5.- RECUENTO MICROSCÓPICO:

Es una técnica común, rápida y barata que utiliza un equipamiento fácilmente

disponible en un laboratorio de microbiología. Para estos recuentos se utilizan
generalmente cámaras de recuentos, aunque también pueden realizarse a partir
de muestras filtradas en membranas y transparentizadas o teñidas con colorantes
fluorescentes (Naranja de acridina).

La mayor dificultad del recuento en cámara es obtener reproductibilidad en el

llenado de la cámara con líquido. Otra dificultad es la adsorción de las células en
las superficies del vidrio, incluyendo pipetas.

Esta adsorción es crítica en el proceso de dilución de la muestra y se minimiza al

realizar las diluciones en medios de alta fuerza iónica (solución fisiológica o
medios mínimos sin fuente de carbono).

Las cámaras más utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La

primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersión,
aunque la mayoría de los recuentos se realizan con objetivos secos.

Una de las mayores ventajas del recuento microscópico es brindar información

adicional sobre el tamaño y la morfología de los objetos contados.

Fig. 2.5.1-1 Cámara de recuento de Petroff-Hausser

Tabla 2.5.1-1 Recuento de Microorganismos

Area Volumen Factor

Tipo de cuadro
[cm2] [ml] [1/Volumen]
Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104

Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106

Cuadrado pequeño 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107

 ( 2.5.1)

1/Dilución: Inversa de la dilución utilizada para llenar la cámara de recuento.

Número de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de la cámara que se

utilizaron para contar un el número de bacterias.

Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cámara. Depende del

tipo de cuadrado en donde se realizó el recuento. Por ejemplo, cada cuadrado
pequeño tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 µm x 50 µm x 20 µm = 5 x 104 µm3
= 5 x 10-8 ml)

2.6.- RECUENTO ELECTRONICO:

Los contadores electrónicos permiten realizar recuentos de bacterias, levaduras

no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y microorganismos
filamentosos o miceliares. Estos instrumentos constan básicamente de dos
compartimientos comunicados a través de un pequeño conducto.

En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia eléctrica del

sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeño y su resistencia es muy
alta, la resistencia eléctrica de cada compartimiento es independiente.

El principio de funcionamiento de estos instrumentos es el que se explica a

continuación. Un volumen fijo de una suspensión bacteriana es forzada a pasar
desde un compartimiento al otro a través del pequeño conducto, en un muy breve
intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la
resistencia de éste se incrementa debido a que la conductividad de la célula es
menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en
pulsos o voltaje y contados. Este tipo de recuento presenta algunos
inconvenientes.
Ciertas bacterias muy pequeñas producen cambios en la resistencia que son
comparables al "ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla al pasar el
fluido por el orificio. No pueden medirse células que formen filamentos o
agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el
pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser tomado
como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por
microorganismos muy grandes.

2.7.- MASA DE UN COMPONENTE CELULAR:

“Debido a que la célula no es tan "lista" (no sabe contar hacia atrás en el tiempo)
ni tiene el don de la predicción (los humanos tampoco, para la mayor parte de las
cosas importantes). La bacteria tampoco sabe "contar hacia adelante", ya que el
tiempo de inicio de una ronda de replicación no guarda una relación sencilla con
la división celular previa.” (3)

Entonces, ¿cómo se acoplan división celular y replicación cromosómica? Una

clave hacia la respuesta a esta pregunta es que la razón (proporción) entre
orígenes de replicación y masa celular en el inicio (inmediatamente antes de la
replicación) es igual para todas las tasas de crecimiento. He aquí un modelo
hipotético sobre el mecanismo de coordinación entre ambos eventos del ciclo
celular:

El sistema de coordinación detecta la concentración de orígenes de replicación;

conforme la bacteria crece, esta concentración va descendiendo, hasta que se
alcanza un valor umbral crítico que desencadena una nueva onda de replicación.
Ello hace que se doble el número de orígenes. Una ulterior ronda no se pone en
marcha hasta que el crecimiento haga de nuevo descender la concentración de
orígenes.

Se trataría, pues, de una especie de reloj biológico y "oscilador" que usaría como
medida del tiempo el parámetro de masa celular, volumen, u otro equivalente, de
tal modo que la concentración crítica de un factor iniciador o la dilución de un
represor servirían para disparar la replicación a una concentración determinada.
Es fácil comprobar en los cultivos bacterianos que cuanto más rico es un medio, y
por lo tanto menor es el tiempo de generación (g), mayor es el tamaño medio de
las células:

1. bacterias creciendo en un medio relativamente pobre (supongamos que en

este medio g = 60min, C+D=g);

2. si transplantamos una célula recién dividida procedente del cultivo anterior

a un medio más rico (por ejemplo, que permite un tiempo de generación g
= 35min) podemos observar que:

 la primera división ocurre C+D (60 minutos) después; es decir, con un

tiempo idéntico al que tenía en el medio anterior;

 pero como en este medio g = 35min, la iniciación de una nueva ronda

de replicación ocurre antes de dicha replicación celular (es decir, C y D
se superponen);

 se observa que se alcanza un nuevo equilibrio, con un tamaño celular

mayor que en el medio pobre, y una masa de inicio (tras la división
celular) mayor, alterándose igualmente el tiempo de inicio.

2.8.- MEDICIONES FÍSICAS:

Podemos medir el crecimiento microbiano siguiendo diferentes parámetros físicos,

algunos de los cuales se presentan a continuación. No debemos olvidar que en
condiciones de crecimiento equilibrado todos los parámetros del cultivo
evolucionan de forma proporcional y, por consiguiente, midiendo uno de ellos (el
de medida más fácil) podemos medir el resto.

En este apartado revisaremos los principales métodos de recuento de

microorganismos. Los métodos para el seguimiento de la evolución de un cultivo
microbiano pueden clasificarse en directos e indirectos. Los métodos directos se
basan en la medida de la evolución del número de células vivas (técnicas de
plaqueo) o del número de partículas (técnicas microscópicas y de contadores de
partículas). Los métodos indirectos se basan en la medida de algún parámetro del
cultivo que nos permite deducir información sobre la evolución del número de
microorganismos. La elección de un método de seguimiento del cultivo en
concreto depende de las características del cultivo y del proceso.

Entre los métodos principales de recuento de microorganismos podemos

destacar:

1. Las técnicas de recuento microscópico de células sin fijar usando

microscopía de contraste de fase. Para ello se cuenta el número de
partículas en un volumen determinado usando una célula de Petroff-Hauser
o de Neubauer (portaobjetos modificado en el que una rejilla nos permite
conocer el volumen que estamos observando). El procedimiento es rápido
y sencillo; pero no permite distinguir células vivas inmóviles de células
muertas.

2. Contaje de partículas utilizando sistemas automáticos del tipo Coulter-

Counter. La operación de estos sistemas es sencilla (método de empleo) y
permite rápidamente determinar el número de partículas presentes en una
suspensión y la distribución de sus tamaños. El problema es que no
distingue entre células vivas y muertas ni entre células y agregados de
material insoluble presente en la suspensión del cultivo.

3. Técnicas de recuento en placa, basadas en colocar en un medio de cultivo

adecuado un volumen determinado de muestra. Cada una de las células
aisladas dará lugar, después de la incubación correspondiente, a una
colonia de forma que el número de estas nos permitirá estimar el número
de células presentes en la muestra plaqueada (sembrada).

El sistema es fácil de utilizar en el caso de células aisladas (no sirve en el

caso de hongos filamentosos, por ejemplo). Puede realizarse sembrando
en superficie (extendiendo un volumen dado de muestra sobre el medio de
cultivo sólido) o en profundidad (mezclando un volumen dado de muestra
con el medio de cultivo antes que solidifique). Esta última opción permite
realizar el recuento de microorganismos microaerófilos que no crecen bien
en la superficie de las placas de cultivo. Para que el sistema de recuento
en placa tenga validez estadística, es necesario contar entre 30 y 300
colonias con objeto de disminuir el error de la medida.
 4. Técnicas turbidométricas basadas en la medida de la turbidez de los
medios de cultivo en los que crecen microorganismos unicelulares. La
turbidez es proporcional a la masa de las partículas en suspensión
(células) y su medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un equipo
similar al que se emplea en la medida de la absorbancia de luz por
disoluciones coloreadas (colorímetro, por ejemplo). Las medidas se hacen
a una longitud de onda adecuada (normalmente en el entorno de 550 nm) y
los valores se suelen denominar valores de densidad óptica. La limitación
de este sistema, por otra parte muy sencillo, es que no distingue células
vivas de muertas y que normalmente no es capaz de detectar densidades
celulares menores a 10.000 células por mililitro.

5. Medida de peso seco. El sistema consiste en la filtración del cultivo a

través de una membrana que retenga las células y su posterior desecación
hasta peso constante. El sistema, obviamente, no diferencia células vivas
de muertas y su sensibilidad es limitada.

6. Medida del ATP. Es una medida relativamente sencilla basada en la

emisión de luz por la luciferasa de luciérnaga (Photimuspyralis) en
presencia de O2 y de ATP. De esta forma se puede medir la concentración
de ATP en un volumen dado de cultivo. Esta medida es interesante porque
la concentración de ATP decae rápidamente en las células muertas, de
forma que esa medida indirecta detecta únicamente las células vivas.

Los sistemas de medida del crecimiento celular se han adaptado técnicamente

para poder ser utilizados como sistemas on-line. En una operación on-line no es
necesario extraer la muestra del cultivo para realizar la medida. Esto es muy
importante en el caso de fermentaciones en gran volumen porque permite realizar
medidas en tiempo real y disminuye los riesgos de contaminación.

3.- CRECIMIENTO EN CULTIVO INTERMITENTE:

En este apartado vamos a revisar el estudio de la cinética del crecimiento de

microorganismos que crecen en un cultivo realizado en un volumen finito. a esto
se le denomina cultivo batch y podríamos traducirlo por cultivo discontinuo por
contraposición con el cultivo continuo que desarrollaremos más adelante. El
desarrollo de un cultivo discontinuo se ajusta al representado en la siguiente
figura:

Fig. 3.1-1 Desarrollo de un Cultivo Intermitente

Se pueden distinguir cuatro fases en el cultivo:

 La fase logarítmica, en la que el microorganismo se adapta a las nuevas

condiciones y pone en marcha su maquinaria metabólica para poder
crecer activamente. La duración de esta fase es variable y en general
es mayor cuanto más grande sea el cambio en las condiciones en las
que se encuentra el microorganismo.

 La fase exponencial.

 La fase estacionaria, en la que no hay aumento neto de

microorganismos, lo que no significa que no se dividan algunos, sino
que la aparición de nuevos individuos se compensa por la muerte de
otros.

 La fase de muerte, en la que el número de microorganismos vivos

disminuye de forma exponencial con una constante k que depende de
diferentes circunstancias.
En la fase de muerte decimos que el número de microorganismos vivos disminuye
exponencialmente. Pero ¿qué es un microorganismo vivo en términos
microbiológicos?. Consideramos vivo al microorganismo que puede multiplicarse
(dividirse), y muerto al que ha perdido irreversiblemente la capacidad de dividirse.
Es importante entender este concepto porque los microorganismos
microbiológicamente muertos no tienen por qué estar metabólicamente inactivos.

4.- EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO:

Si [Et] representa la concentración total del microorganismo en una reacción y

[ES] es la concentración del complejo microorganismo-sustrato, entonces [Et] -
[ES] representa la concentración de microorganismo libre para reaccionar con el
sustrato.

Durante una reacción el microorganismo se unirá al sustrato, hasta que todas las
moléculas se saturen. Usualmente la concentración de sustrato [S] es mayor que
[ES], por lo que no resulta un factor limitante. La razón de formación de [ES] está
definida por

[ES] Rate = k1 ([Et] – [ES]) [S] ( 4.1.1)

Mientras que la disociación está definida por

[ES] disociación rate = k –1 [ES] – k2 [ES] (4.1.2)

Mientras haya microorganismo disponible, la razón de k 1 irá aumentando hasta

que se saturen. Si las constantes de reacción y disociación son iguales, la
formación del complejo [ES] se mantiene estable al igual que la velocidad de
reacción. O sea que la generación del producto se mantiene constante mientras la
concentración del sustrato no sea limitante. Esto se definiría como
 [ES] = [Et] [S] (4.1.3)
[S] + (k2 + k -1) / k1

La velocidad inicial de la reacción está determinada por

v = k2 [ES] (4.1.4)

Si definimos KM como (k2 + k -1) / k1 y Vmax como k2 [Et], obtenemos que

v = Vmax [S] / KM + [S] ( 4.1.5)

Esta es la ecuación de Michaelis-Menten.

En un estudio de cinética microbiana se mide la actividad en términos de producto

formado por minuto, a distintas concentraciones de sustrato. Si la actividad es
graficada en términos de la concentración inicial del sustrato versus el producto
generado en un lapso de tiempo (velocidad de reacción), la curva generada es
una hipérbole rectangular.

La ecuación que describe todos los puntos en esa línea viene dada por v. Esta
ecuación expresa la velocidad para la reacción de un solo sustrato y se conoce
como la ecuación de Michaelis-Menten:

V max v = Vmax [S] / (Km + [S]) (4.1.6)

v = actividad microbiana

V max/2 [S] = concentración de sustrato

KM Vmax = actividad a [S] infinito

KM = el valor de [S] que da actividad

[S] igual a ½ Vmax

Fig. 4.1-1

Estos últimos dos parámetros son importantes, porque nos dan información
directa sobre cuán bien el microorganismo se une al sustrato (KM) y sobre cuán
bien el microorganismo convierte el sustrato en producto una vez se une (V max).
De hecho, KM es la constante de disociación dinámica del microorganismo con el
sustrato, y Vmax es la concentración molar del microorganismo por la constante
catalítica (Kcat).nas celulares
s transportadores están

5.- EFECTO DE LA TEMPERATURA:

Todos los microorganismos tienen una temperatura óptima de crecimiento. Esto

significa que a determinada temperatura la velocidad de duplicación (o la
velocidad de crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor. Hay que
tener en cuenta que no todos los microorganismos crecen en el mismo rango de
temperaturas:

Tabla 5.1.- Temperatura Óptima de Crecimiento

Clasificació
Rango Optima
n

25 - 80 50 - 60
Termófilos
°C °C

10 - 45 20 - 40
Mesófilos
°C °C

-5 - 30
Psicrófilo 10-20 °C
°C
 Fig. 5.- Efecto de la Temperatura en el Crecimiento Microbiano

La temperatura afecta la estabilidad de las proteínas celulares porque induce

cambios conformacionales que alteran la actividad biológica de estos
compuestos, especialmente la de enzimas.

6.- EFECTO DEL pH:

La mayoría de los microorganismos crecen en pH cercanos a la neutralidad, entre

5 y 9, cosa que no excluye que existan microorganismos que puedan soportar pH
extremos y se desarrollen. Según el rango de pH del medio en el cual se
desarrollan pueden dividirse en:

Tabla 6.1.- Clasificación de los Microorganismos según el pH

Clasificación pH externo pH interno

Acidófilos 1.0 - 5.0 3.5

Neutrófilos 5.5 - 8.5 7.5

Alcalófilos 9.0 - 10.0 9.5

Los microorganismos regulan su pH interno mediante un sistema de transporte de
protones que se encuentra en la membrana citoplasmática, que incluye una
bomba de protones ATP dependiente.

El rango de pH óptimo para el desarrollo de los microorganismos es estrecho

debido a que frente a un pH externo muy desfavorable se requiere un gran
consumo de energía para mantener el pH interno.