Laboratorio Bioquímica. Determinación de Got y Gtp en suero. Programa de Farmacia.

2018-1

. Determinación
de Got y Gtp en suero
Luis Acevedo, Ana Charris, Kathy Fuenmayor, Fiorella Lobaton
Programa de Farmacia, Universidad del Atlántico
Entregado abril 25 de 2018.

Resumen
Las proteínas catalizadoras de las reacciones químicas llamadas enzimas son de gran importancia
en el organismo ya que comprenden la velocidad de reacción sin alterar el estado de equilibrio,
trabajan en pequeñas cantidades, establecen un complejo reversible con el sustrato, no se
consumen en la reacción, pudiendo actuar una y otra vez, muestran especificidad por el sustrato y
su producción se encuentra controlada por genes.
En el presente laboratorio se determinaron enzimas en suero las conocidas transaminasas GOT y
GPT de las cuales se pueden determinar a partir de su aumento la presencia de una lesión celular
en el hígado, el corazón, los riñones o en los músculos.
Palabras claves: Got, Gtp, Enzimas, Transaminasas, Catalizadoras.

OBJETIVOS
 Objetivo general.
 Analizar dos transaminasas que son; la alanina transaminasa (ALT) y la aspartato
transaminasa (AST) en el suero.
 Objetivos específicos.
 Conocer Los valores de referencia para la GOT (o AST) y la GPT (o ALT) en hombres y
mujeres.
 Aplicar fórmulas que nos permitan a hallar los valores de la GOT y la GTP.
 Conocer las causas del aumento en las transaminasas.

Introducción
Nuestro cuerpo presenta biomoléculas especializadas en la catálisis de las reacciones
químicas que tienen lugar en la célula llamadas enzimas1.
Son los catalizadores más eficientes que se conocen, pues bastan cantidades muy pequeñas
de ellas para acelerar una reacción en forma impresionante (Tortora. 2007. p 65). Se
distinguen por una especificidad de acción, lo que significa que prácticamente cada
conversión de un reactivo (sustrato) en un producto, es catalizada por una enzima
determinada (Conn. 1996. P. 132).
La actividad de las enzimas se ve afectada por diversos factores tales como:
• Cofactores y coenzimas que son requeridos por algunas enzimas para su activación.
• La temperatura la cual influye en la velocidad de reacción, ya que por cada 10ºC que se
incremente, la velocidad de reacción se duplica. Pero si dicha temperatura es demasiado
alta la enzima se desnaturaliza, pierde su estructura y actividad catalítica.

1
Articulo 14. Enzimas. [citado en 21 de abril de 2018] Disponible en:
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf
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• El pH del cual muchas enzimas son muy sensibles si este cambia. Las desviaciones de
pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su
actividad.

• Concentración del sustrato se complementa con la enzima, se dice que son como una llave
y su cerradura, y surge el concepto centro activo y centro catalítico zona de la enzima a la
que se une el sustrato, esta zona está formada por aminoácidos en la que reside la
especificidad de la enzima.
• Inhibidores son moléculas diferentes al sustrato que interactúan con la enzima, impidiendo
el correcto funcionamiento de esta disminuyendo la velocidad de reacción enzimática.
• Mecanismos reguladores que orientan la actividad enzimática in vivo obteniéndose un
resultado positivo o negativo, dependiendo de las necesidades celulares.2
Según su actividad las enzimas se clasifican en:
•Oxidoreductasas: deshidrogenadas, oxidasas, peroxidasas, oxigenasas, hidroxilasas,
reductasas.

•Transferasas: transaldolosas, transcetolasas, fosforiltransferasas, quinasas, fosfomutasas.

•Hidrolasas: esterasas, glucosidasas, peptidasas, fosfatasas, tiolasas, fosfolipasas, amidasas,
desaminasas, ribonucleasas.
•Liasas: descarboxilasas, aldolasas, hidratasas, deshidratasas, sintasas, liasas.
•Isomerasas: racemasas, epimerasas, isomerasas, mutasas.
•Ligasas: sintetasas y carboxilasas.

Las enzimas son empleadas en los laboratorios clínicos y en las investigaciones biomédicas
como reactivos biológicos para la determinación de analitos. Pero también la medición de
sus niveles de actividad en el suero u otras muestras biológicas constituye una herramienta
eficaz para el diagnóstico y pronóstico de una enfermedad.3
Las transaminasas (ALT o GPT y AST o GOT) son un tipo de enzimas intracelulares que,
se encargan de catalizar las reacciones de transaminación y están localizadas en diversos
tejidos del organismo, siendo la más específica de lesión hepática la GPT, estas se liberan
en la sangre en grandes cantidades cuando hay daño en la membrana del hepatocito (Oh
RC, 2011)4
La evaluación de la elevación de enzimas hepáticas en personas aparentemente sanas es
importante puesto que hoy día se estima que del 1% al 9% de las personas asintomáticas

2
Articulo. Enzimas. [citado en 21 de abril de 2018] Disponible en:
http://docentes.educacion.navarra.es/ralvare2/enzimas.pdf
3
Tema 7: Enzimas. Enzimología clínica Varas SM, Ferramola, ML y Lacoste MG [citado en 21 de abril de 2018]
disponible también en: https://bioquimicaenfermeria.files.wordpress.com/2013/04/tema-7-enzimas-
enzimologc3ada-clc3adnica-2013.pdf
4
Díaz Otero A. Guías clínicas Fisterra 2009. [citado en 21 de abril de 2018]. Disponible en:
www.fisterra.com/guias2/transaminasas.asp
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presentan niveles elevados de enzimas hepáticas en sangre usando los sistemas diagnósticos
estandarizados5.
Al respecto, un estudio realizado en USA demostró que el 8,9% de la población escrutada
presento elevación de los niveles de alanino-aminotransferasa (ALT) en sangre.6

En el hígado se producen múltiples reacciones de transaminación, pero las únicas

transaminasas con valor clínico son dos:
1) aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutámicooxalacética (AST o GOT) cuya
vida media es de 48 horas,
2) alaninoaminotransferasa o transaminasa glutámico-pirúvica (ALT o GPT) con una vida
media de 18 horas.
La ALT es más específica de daño hepático que la AST, debido a que la primera se localiza
casi exclusivamente en el citosol del hepatocito, mientras que la AST, además del citosol y
mitocondria, se encuentra en el corazón, músculo esquelético, riñones, cerebro, páncreas,
pulmón, eritrocitos y leucocitos. La elevación sérica de transaminasas se correlaciona con
el vertido a la sangre del contenido enzimático de los hepatocitos afectados, aunque la
gradación de la elevación enzimática puede no relacionarse con la gravedad lesional.7

FUNDAMENTOS DEL METODO

La GOT cataliza la siguiente reacción:
GOT
l-aspartato + α-cetoglutarato glutamato + oxalacetato
La GPT cataliza la siguiente reacción:
GPT
l-alanina + α-cetoglutarato glutamato + piruvato
El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato), reacciona con
la 2,4-dinitrofenilhidracina produciéndose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que
se mide a 365 nm.8
Los valores de referencia para la GOT (o AST) y la GPT (o ALT) son:
* GOT o AST: 11-39unidades internacionales por litro en el hombre y 10-37 en la mujer;
* GPT o ALT 11-39 unidades internacionales por litro en el hombre y 10-37 en la mujer.

5
Hultcrantz R, Glaumann H, Lindberg G, Nilsson LH. Liver investigation in 149 asymptomatic patients with
moderately elevated activities of serum aminotransferasas. Scand J Gastroenterol. [citado en 21 de abril de 2018]
6
Ioanou GN, Boyko EJ, Lee SP. The prevalence and predictor of elevated serum aminotransferase activity in the
United States in 1999-2002. Am J Gastroenterol. [citado en 21 de abril de 2018]
7
Viviana E. Cétola Bioquímica. Wiener lab. Transaminasas, [citado en 21 de abril de 2018]. Disponible
en:http://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/transaminasas200_sp.pdf
8
Manuel García Martín, Amado Zurita Molina. Transaminasas: Valoración y significación clínica [citado en 21
de abril de 2018] Disponible en: https://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/transaminasas.pdf
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Dichos valores difieren según los laboratorios y las metodologías utilizadas en el análisis.9

1. Materiales
Materiales Reactivos

- Micro pipetas de 200ul - Reactivo de trabajo

- Espectrofotómetro
- Muestra de suero
- Gradilla
- Pipetas Pasteur plásticas
- Tubos de ensayo

2. Procedimiento

GOT

 Añadir 200ul de suero

 Añadir 2ml de reactivo de trabajo
 Mezclar y homogenizar
 Medir absorbancia a 365 nm a 1 y 2 minutos de reacción.
Cálculos:
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑼 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂
Actividad GOT = ∆ 𝒙𝟑𝟑𝟑𝟑 = ∆
𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐 𝑳 𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐

𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝐴1 −𝐴2
Actividad GOT = ∆ =
𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐 𝟐

GPT

 Añadir 200ul de suero

 Añadir 2ml de reactivo de trabajo
 Mezclar y homogenizar
 Medir absorbancia a 365 nm a 1 y 2 minutos de reacción.
Cálculos:
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑽 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂
Actividad GPT = ∆ 𝒙𝟑𝟑𝟑𝟑 = ∆
𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐 𝑳 𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐

𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝐴1 −𝐴2
Actividad GPT = ∆ =
𝑴𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐 𝟐

9
Análisis de transaminasas como índice de enfermedad [citado en 22 de abril de 2018] Disponible en:
https://www.transaminasas.com/anlisis_de_transaminasas_como_ndice_de_enfermedad
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3. Resultados
GOT
Nombre Min1 Min2 𝑼
𝑳
Juliana 0,646 0,645 1,6665

Fiorella 0, 704 0,703 1,6665

Jennifer 0, 670 0,669 1,6665

María 0, 863 0,860 4,9996

Tabla 1. Resultados de los valores de GOT en sangre.

GPT
Nombre Min1 Min2 𝑼
𝑳
Juliana 0,504 0,504 0

Fiorella 0, 573 0,573 0

Jennifer 0, 635 0,636 1,6665

María 0, 659 0,659 0

Tabla 2. Resultados de los valores GPT en sangre.

4. Análisis De Resultados
 Al comparar los resultados obtenidos de las transaminasas GOT (AST) con los valores
normales, se determinó que las estudiantes presentan niveles bajos de dicha enzima en
sangre lo que se produce cuando hay algún embarazo o deficiencia de vitaminas, aunque
no se descarta el hecho de que pudo haber algún error en el pipeteo o en algún otro paso,
sin embargo, esto no es motivo de preocupación ya que los niveles bajos de la GOT (AST)
por lo general no son indicios de ninguna enfermedad; solo si alguna de las estudiantes que
son objeto de análisis son diabéticas o llevan una alimentación poco equilibrada, se les
recomienda que consulten a su médico ya que puede ser un indicativo de cetoacidosis
diabética, beriberi o de una enfermedad renal.
 De los datos obtenidos de la transaminasa GPT de las estudiantes en contraste a los valores
normales se precisó que estas presentan bajos niveles de esta enzima en sangre, además
como se mencionó en los resultados anteriores tampoco se descarta el rango de error que
se pudo haber dado al momento del pipeteo u otro paso. Los niveles bajos en muchos casos
no son sospecha de ninguna enfermedad y se producen cuando hay un embarazo,
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deficiencia de vitaminas e infección urinaria. Solo si alguna de las estudiantes presenta

problemas de tiroides o alguna infección urinaria puede ser un indicativo de hipotiroidismo
o hipofosfatasia.

5. Conclusiones

 Después de realizar el análisis de las dos transaminasas llamadas alanina transaminasa

(ALT) y la aspartato transaminasa (AST) en el suero de cada una de las estudiantes
participes de este trabajo y al relacionarlos con los valores normales expuestos en nuestro
marco teórico se llegó a la conclusión que las estudiantes tienen niveles bajos de
transaminasa (ALT) y transaminasa (AST) causados posiblemente por deficiencia de
vitaminas.
 Concluimos que el análisis de la transaminasa (ALT) y transaminasa (AST) son de gran
importancia para evitar enfermedades hepáticas, estas se deben tener en cuenta para ofrecer
el bienestar al paciente.
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6. Bibliografía
 Artículo 14. Enzimas. [citado en 21 de abril de 2018] Disponible en:
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf
 Articulo. Enzimas. [citado en 21 de abril de 2018] Disponible en:
http://docentes.educacion.navarra.es/ralvare2/enzimas.pdf
 Tema 7: Enzimas. Enzimología clínica Varas SM, Ferramola, ML y Lacoste MG
[citado en 21 de abril de 2018] disponible también en:
https://bioquimicaenfermeria.files.wordpress.com/2013/04/tema-7-enzimas-
enzimologc3ada-clc3adnica-2013.pdf
 Díaz Otero A. Guías clínicas Fisterra 2009. [citado en 21 de abril de 2018].
Disponible en: www.fisterra.com/guias2/transaminasas.asp
 Hultcrantz R, Glaumann H, Lindberg G, Nilsson LH. Liver investigation in 149
asymptomatic patients with moderately elevated activities of serum
aminotransferasas. Scand J Gastroenterol. [citado en 21 de abril de 2018]
 Ioanou GN, Boyko EJ, Lee SP. The prevalence and predictor of elevated serum
aminotransferase activity in the United States in 1999-2002. Am J Gastroenterol.
[citado en 21 de abril de 2018]
 Viviana E. Cétola Bioquímica. Wiener lab. Transaminasas, [citado en 21 de abril
de 2018]. Disponible en:http://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/transaminasas200
_sp.pdf
 Manuel García Martín, Amado Zurita Molina. Transaminasas: Valoración y
significación clínica [citado en 21 de abril de 2018] Disponible en:
https://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/transaminasas.pdf
 Análisis de transaminasas como índice de enfermedad [citado en 22 de abril de
2018] Disponible en:
https://www.transaminasas.com/anlisis_de_transaminasas_como_ndice_de_enf
ermedad.