Técnicas de Inmunodifusión

Practica 4- Técnicas de inmunodifusión
EL PROCEDIMIENTO DE OUCHTERLONY
La doble difusión en dos dimensiones es un procedimiento simple inventado por el científico sueco
Örjan Ouchterlony. Las soluciones de antígeno y anticuerpo se colocan en pocillos separados
cortados en una placa de agarosa. Los reactivos se difunden desde
los pozos uno hacia el otro y precipitan donde se encuentran en
proporciones equivalentes. Un único antígeno se combinará con su
anticuerpo homólogo para formar una única línea de precipitación.
Cuando dos antígenos están presentes, cada uno se comporta
independientemente el uno del otro. Por lo tanto, el número de
bandas de precipitación indica que hay al menos muchos pares de
anticuerpos y antígenos presentes (Figura 1). Las flechas indican
patrones de difusión de antígenos y anticuerpos.
(INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO EL PROCEDIMIENTO
OUCHTERLONY, 2020)
Inmunodifusión radial
La inmunodifusión radial es una técnica cuantitativa muy sensible que se utiliza a menudo
clínicamente para detectar los niveles de proteínas sanguíneas de los pacientes.
La inmunodifusión radial (RID) es una técnica que puede determinar cuantitativamente la

concentración de un antígeno. A diferencia de muchas técnicas de precipitación en gel y líquido
que detectan cualitativamente el antígeno, el RID es una técnica cuantitativa sensible que se usa a
menudo clínicamente para detectar niveles de proteínas sanguíneas en pacientes. El anticuerpo se
incorpora en agarosa fundida que se vierte en una placa de Petri y se deja solidificar. Se cortan
pequeños pocillos en la agarosa y se llenan con concentraciones conocidas de antígeno que
interacciona con el anticuerpo presente en la agarosa. Se colocan muestras de concentraciones
desconocidas en pocillos similares. Los antígenos en solución difunden entonces hacia fuera desde
el pocillo en un patrón circular que rodea al pozo. El anticuerpo está presente en exceso y la
difusión del antígeno continuará hasta que se forme un anillo
estable de antígenoanticuerpo. Hay complejos antígeno-
anticuerpo en toda la zona que rodea el pocillo dentro de la
línea de precipitación. En la línea de precipitación es donde se
puede encontrar el mayor número de complejos porque el
antígeno y el anticuerpo están presentes en proporciones
aproximadamente iguales. Esto se conoce como la zona de
equivalencia o el punto de equivalencia. Generalmente, es
necesario de 24 a 48 horas para que ocurra la difusión óptima
y aparezca la precipitación. ("Inmunodifusión radial", n.d.)
Inmunoelectroforesis
En el laboratorio clínico, la inmunoelectroforesis se utiliza diagnósticamente. Se utiliza en el

examen de ciertas anomalías del suero, especialmente aquellas que implican inmunoglobulinas,
proteína de orina, líquido cefalorraquídeo, fluidos pleurales y otros fluidos corporales. En la
investigación, este procedimiento puede usarse para monitorizar purificaciones de antígenos y/o
anticuerpos, detectar impurezas, analizar antígenos solubles de tejidos vegetales y animales y
extractos microbianos.
En la inmunoelectroforesis, las proteínas se separan por primera vez mediante electroforesis en

gel de agarosa horizontal sobre la base de sus diferentes relaciones de carga a masa. El gel con las
proteínas separadas (antígenos) se retira entonces del campo eléctrico y los anticuerpos para las
proteínas se introducen en canales estrechos paralelos a los antígenos separados. Se produce la
difusión de ambos anticuerpos antigénicos y, en un
locus particular, se alcanza el punto de
equivalencia que da como resultado la
precipitación. El propósito de este experimento es
demostrar el uso de inmunoelectroforesis para
separar y caracterizar una mezcla de proteínas de
suero, así como para examinar la especificidad de
la interacción antígeno-anticuerpo.
("INMUNOELECTROFORESIS", n.d.)
Inmunoprecipitación
La técnica de inmunoprecipitación tiene la ventaja de permitir el aislamiento del antígeno de

interés para un análisis más amplio. Asimismo, constituye una prueba sensible para la presencia de
un antígeno particular en un tipo de célula o tejido determinado. Un extracto obtenido por rotura
de células o tejidos se mezcla con un anticuerpo contra el antígeno de interés a fin de formar un
complejo antígeno-anticuerpo que se precipitará. Sin embargo, si la concentración de antígeno es
baja (lo que a menudo es el caso en extractos de células y tejidos), el ensamblaje de los complejos
antígeno-anticuerpo en precipitados puede requerir horas e incluso días, y es difícil aislar la
pequeña cantidad de inmunoprecipitado que
se forma. La inmunoprecipitación es un
inmunoensayo de uso frecuente que se vale
de anticuerpos inmovilizados sobre un
soporte sólido para aislar, a partir de una
muestra compleja, una proteína específica.
Las aplicaciones de la inmunoprecipitación

van desde el estudio de presencia o
abundancia relativa de una determinada
proteína, hasta estudios de funcionalidad e
interacción entre proteínas y estudios de
modificaciones postraduccionales o de perles de expresión. ("Inmunoprecipitación: 7 claves para
un ensayo exitoso - Abyntek Biopharma", 2018)
Referencias
INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO EL PROCEDIMIENTO OUCHTERLONY. (2020). Retrieved 30

March 2020, from https://www.bioted.es/protocolos/ANTIGENO-ANTICUERPO.pdf
Inmunodifusión radial. Retrieved 30 March 2020, from

https://www.bioted.es/protocolos/INMUNODIFUSION-RADIAL.pdf
INMUNOELECTROFORESIS. Retrieved 30 March 2020, from

https://www.bioted.es/protocolos/INMUNOELECTROFORESIS.pdf
Inmunoprecipitación: 7 claves para un ensayo exitoso - Abyntek Biopharma. (2018). Retrieved 30
March 2020, from http://www.abyntek.com/inmunoprecipitacion-claves/

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Practica 4- Técnicas de inmunodifusión

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INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO EL PROCEDIMIENTO OUCHTERLONY. (2020). Retrieved 30

Inmunodifusión radial. Retrieved 30 March 2020, from

INMUNOELECTROFORESIS. Retrieved 30 March 2020, from

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