SEMINARIO 4: LA CALIBRACIÓN EN EL

LABORATORIO ANALÍTICO

Dra. Laura Gámiz Gracia

Laboratorio de Química Analítica

Grado en Químicas
Curso 2014/2015
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INDICE
1. Calibración: Objetivos y tipos
2. Materiales de referencia y blancos analíticos
3. Metodologías de calibración en Química
Analítica
4. Validación y verificación de la calibración
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INDICE
1. Calibración: Objetivos y tipos
2. Materiales de referencia y blancos analíticos
3. Metodologías de calibración en Química
Analítica
4. Validación y verificación de la calibración
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1. Calibración: objetivos y tipos

• Calibración (metrológica):
“Operación que bajo condiciones especificadas establece, en una primera etapa,
una relación entre los valores y sus incertidumbres de medida asociadas
obtenidas a partir de los patrones de medida, y las correspondientes indicaciones
con sus incertidumbres asociadas y, en una segunda etapa, utiliza esta
información para establecer una relación que permita obtener un resultado de
medida a partir de una indicación” (VIM 2008).

Calibración (de un método analítico):

Establecimiento de una relación clara e
inequívoca entre la respuesta instrumental y la
cantidad / concentración de analito

El proceso de calibración consta de dos etapas:

• Etapa de calibración: Se investigan las características del método con objeto de
encontrar el modelo de comportamiento (y=f(x)).
• Etapa de predicción: Se obtienen las variables independientes de una o más
muestras problema a partir de valores medidos de la variable dependiente.
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1. Calibración: objetivos y tipos

CLASIFICACIONES DE LA CALIBRACIÓN:
(I) En función del SISTEMA DE MEDIDA sobre el
que se aplica

(II) En función de la naturaleza de la

MAGNITUD medida

(III) En función del NÚMERO DE PATRONES

empleados
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1. Calibración: objetivos y tipos

CLASIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN (I):

EN FUNCIÓN DEL SISTEMA DE MEDIDA SOBRE EL QUE SE APLICA

Calibración de materiales
Seminario 3

• El objetivo es asignar un valor de referencia al material

• El material se mide directamente
• Ej.: Certificación de MRC, Normalización, factorización de disoluciones

Calibración de equipos (Calibración instrumental)

• El objetivo es conocer la desviación con la que mide un equipo

• El patrón se mide directamente sin modificación

Calibración de procesos (Calibración metodológica)

• El objetivo es determinar el error global del proceso de medida

• El patrón, previamente a la medida, se somete al proceso analítico
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1. Calibración: objetivos y tipos

Calibración de procesos (Calibración metodológica):

 Los patrones sufren un proceso de modificación, previa a la medida, de
modo que la señal no se obtiene directamente sobre el patrón original sino
sobre el material resultante de aplicarle el proceso analítico (completo o de
forma parcial) de forma similar a como se aplica a las muestras.
 La relación obtenida considera tanto las características metrológicas del
equipo como los posibles errores del procesos analítico globalmente
considerado.

EVALUACIÓN DE ERRORES EN MÉTODOS ANALÍTICOS

Evaluar y/o controlar la magnitud de los errores globales cometidos durante la
realización de un determinado proceso analítico.

CUANTIFICACIÓN
Cuantificar analitos en muestras en las que existe "efecto matriz" o "pérdidas de
analitos".
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1. Calibración: objetivos y tipos

CLASIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN (II):

EN FUNCIÓN DE LA NATURALEZA DE LA MAGNITUD MEDIDA

CALIBRACIÓN DIRECTA:

• El valor del patrón o referencia está expresado en la misma magnitud

que la señal medida del equipo.
• Se emplea fundamentalmente en calibración de equipos o materiales.

CALIBRACIÓN INDIRECTA:
• El valor del patrón se expresa en una unidad distinta a la de la señal del
equipo.
• Se emplea fundamentalmente en calibración de equipos y métodos.
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1. Calibración: objetivos y tipos

CALIBRACIÓN DIRECTA
• Se basa en medir el patrón y comparar el valor obtenido en el equipo con el
valor declarado del patrón.

• Se expresa como:
a) Corrección (si el sesgo es constante): Valor que sumado al resultado no
corregido de una medida, sirve para compensar un error sistemático:
Corrección = valor del patrón – valor del equipo

b) Factor de corrección (si el sesgo es proporcional al valor medido): Factor

numérico por el que debe multiplicarse el resultado no corregido de una
medida para compensar un error sistemático:
Factor de corrección = valor del patrón / valor del equipo
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1. Calibración: objetivos y tipos

CALIBRACIÓN INDIRECTA
• Consiste en convertir las unidades de señal en unidades de la magnitud a
determinar mediante un factor de calibración o aplicando la función de
calibrado.

• Para ello es necesario:

a) Obtener respuesta de una serie
de patrones
b) Adaptar un modelo matemático.
Generalmente se usan métodos
estadísticos de regresión para
encontrar la mejor función y
obtener la “Curva de calibrado”
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1. Calibración: objetivos y tipos

CALIBRACIÓN INDIRECTA
• CARACTERÍSTICAS:
▫ La respuesta puede variar en el tiempo y por tanto, los períodos entre
calibraciones suelen ser menores que en las directas.
▫ Un mismo equipo puede necesitar distintas calibraciones si se miden
respuestas para diferentes analitos.
▫ Esta calibración está relacionada con la validación, ya que a partir de
ella se obtienen valores que definen parámetros de validación: rango
de trabajo, sensibilidad, LOD, LOQ…
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1. Calibración: objetivos y tipos

CLASIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN (III):

EN FUNCIÓN DEL NÚMERO DE PATRONES EMPLEADOS

Calibración en UN punto (One-standard calibration)

• Emplea el Factor de Calibración

Calibración en DOS puntos (Two-standard calibration)

• Interpolación lineal

Calibración en VARIOS puntos

• Función de calibración
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1. Calibración: objetivos y tipos

FR (factor de respuesta) = Y patrón / X patrón

FC (factor de calibración) = X patrón / Y patrón

X muestra = FC · Y muestra
Y

Ej.: control de
calidad de
Y patrón
productos

X patrón X
¡ intervalo de aplicación pequeño !
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1. Calibración: objetivos y tipos

 Se calcula un factor de calibración (FC) para el analito considerado a

partir de los valores del patrón. Es conveniente realizar réplicas de cada
patrón.
 Dicho factor de calibración se puede aplicar para cuantificar el
mismo analito (o uno similar) en muestras de similares características al
patrón utilizado.
 Sólo debe aplicarse a muestras cuyas señales analíticas (es decir,
cuyos contenidos) sean iguales o cercanas al valor del patrón (dentro de
la variabilidad experimental).
 Si se realizan extrapolaciones, se asume que el factor de calibración
es constante (se acepta una hipotética recta de calibrado que pasa por
el origen de coordenadas).
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1. Calibración: objetivos y tipos

Factores de FC1 = Xpat1/Ypat1 FC2 = Xpat2 /Ypat2

calibración X muestra = FC (interpolado) · Y muestra

Ypat2

Ypat1 Ej.: Calibración de

pH-metros o
conductímetros

Xpat1 Xpat2 X

intervalo de aplicación
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1. Calibración: objetivos y tipos

Construcción de la recta:

Y2  Y1 Ymuestra  Y1 Y2  Y1
 Ymuestra  ·(X muestra  X 1 )  Y1
X 2  X1 Xmuestra  X1 X 2  X1

Y  a  b·X
Ypat2

Ypat1 Y  Y1 Y2  Y1
b (o SENS )  2 a  Y1   X1
X 2  X1 X 2  X1

Xpat1 Xpat2 X
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1. Calibración: objetivos y tipos

 Para cada patrón, se calcula el factor de calibración correspondiente

al analito. Es conveniente realizar réplicas de cada patrón.
 Los factores de calibración pueden ser iguales o diferentes.
 Sólo se deberían aplicar extrapolaciones en el primer caso (FC = cte).
 El intervalo de aplicación no debe ser muy amplio. La relación entre
ambos patrones no debería ser mayor de 1:4.
 La interpolación aplicada es equivalente a trazar una recta sobre los
dos puntos.
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1. Calibración: objetivos y tipos

CALIBRACIÓN "ENTRE PARÉNTESIS"

("BRACKETING" CALIBRATION)

 Un tipo particular de calibración con 2 puntos se produce cuando,

para cada muestra, se preparan dos patrones con un contenido de
analito ligeramente superior e inferior al contenido de analito en la
muestra.
 Se utiliza cuando se quiere asegurar la exactitud en la cuantificación
del analito y existen dudas sobre la linealidad (sobre el hecho de que el
FC sea constante).
 Se aplica habitualmente en los análisis para control antidopaje.
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1. Calibración: objetivos y tipos

FUNCIÓN DE MEDIDA:
Y = (m,a,x)·X

FUNCIÓN CALIBRACIÓN:
Y = Y0 + Yanalito = Y0 + S(x)·X

 Y0 = BLANCO
 Y = SEÑAL ANALÍTICA
 S(x) = SENSIBILIDAD ANALÍTICA
 X = CONCENTRACIÓN DE ANALITO

FUNCIÓN DE CUANTIFICACIÓN:
X = (Y – Y0) / S(x)
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1. Calibración: objetivos y tipos

FUNCIONES DE CALIBRACIÓN

LINEAL (I) : Y = B·X

Blanco del método = 0
Sensibilidad = B  [CONSTANTE]
Factor de calibración = 1 / B  [CONSTANTE]

LINEAL (II) : Y = A + B·X

Blanco del método = A
Sensibilidad = B  [CONSTANTE]
Factor de calibración = 1 / (A/X+B)  [DEPENDE DE X]

CURVILÍNEA : Y = A + B·X + C·X2

Blanco del método = A
Sensibilidad = (B + 2·C·X)  [DEPENDE DE X]
Factor de calibración = 1 / (A/X+B+C·X)  [DEPENDE DE X]
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INDICE
1. Calibración: Objetivos y tipos
2. Materiales de referencia y blancos
analíticos
3. Metodologías de calibración en Química
Analítica
4. Validación y verificación de la calibración
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2. Materiales de Referencia y blancos analíticos

UNE-EN ISO Guía 99 IN (2012):

Material de Referencia (RM)

“Material suficientemente homogéneo y estable con respecto a propiedades
específicas, establecido como apto para su uso previsto en una medida o en
un examen de propiedades cualitativas”.

Material de Referencia Certificado (CRM)

“Material de referencia acompañado por la documentación emitida por un
organismo autorizado, que proporciona uno o varios valores de propiedades
especificadas, con incertidumbres y trazabilidad asociadas, empleando
procedimientos válidos”.
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2. Materiales de Referencia y blancos analíticos

Pueden ser: sólidos, líquidos, gases o disoluciones

Materiales de referencia de sustancia pura, RM-s

Sustancias puras (elementos o compuestos) o sus disoluciones (en un
disolvente inerte) que tienen perfectamente caracterizado el valor de
referencia para la propiedad concreta de interés.

Materiales de referencia tipo matriz, RM-m

Materiales similares a las muestras reales constituidos por una matriz similar a
la que será objeto de análisis y que contienen el analito en su forma natural.
El valor de referencia de la propiedad de interés debe estar perfectamente
caracterizado.
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2. Materiales de Referencia y blancos analíticos

Materiales
de
calibración

Materiales
de
Referencia
Materiales
Materiales
para
de control
validación
(verificación)
de métodos
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2. Materiales de Referencia y blancos analíticos

El término BLANCO ANALÍTICO se utiliza con dos sentidos complementarios:

1. Sistema material preparado siguiendo el procedimiento analítico y que
incluye todos los componentes propios del método con excepción del
(los) analito(s).
Generalmente está constituido por una disolución que puede prepararse
a partir de:
- Disolvente + reactivos: BLANCO DE SISTEMA
- Matriz: BLANCO DE MUESTRA (de Youden)

2. Señal del Blanco: Valor de la señal instrumental que es producida por

causas distintas a la presencia de analito, por ejemplo:
- Disolvente + reactivos: BLANCO DEL MÉTODO
- Matriz: BLANCO DE MUESTRA
- Instrumento: SEÑAL DE FONDO ("BACKGROUND")
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2. Materiales de Referencia y blancos analíticos

Y
BLANCOS DE CALIBRACIÓN
(ordenada el origen)

- Señal de fondo
- Blanco del método
- Blanco de la matriz X
- Términos interactivos ( ! )

La denominada "CORRECCIÓN DEL BLANCO" (utilizar como valor de señal

analítica la obtenida al restar sistemáticamente el blanco a las señales medidas)
sólo estaría justificada (desde un punto de vista metrológico) en el caso de las
SEÑALES DE FONDO
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INDICE
1. Calibración: Objetivos y tipos
2. Materiales de referencia y blancos analíticos
3. Metodologías de calibración en Química
Analítica
4. Validación y verificación de la calibración
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

Tipos de calibración:

Según la naturaleza del patrón

Según la composición del patrón

Según el tipo de señal analítica

utilizada
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

a) SEGÚN LA NATURALEZA DEL PATRÓN:

Patrón igual al analito

• Se utiliza un RM (tipo sustancia pura o tipo matriz) químicamente

idéntico al analito.

Patrón distinto al analito

• Se utiliza un RM (tipo sustancia pura o tipo matriz) diferente al
analito pero de naturaleza química similar (SUBROGADO).
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

b) SEGÚN LA COMPOSICIÓN DEL PATRÓN:

Patrón EXTERNO
• Se utiliza un RM-s (tipo sustancia pura).
• Preparado en blanco de sistema (disolvente + reactivos).
Similar a la MUESTRA
• Se puede utilizar:
• un RM-m (tipo matriz) preparado en blanco de sistema (disolvente +
reactivos).
• un RM-s (tipo sustancia pura) preparado en blanco de muestra
(matriz + disolvente + reactivos).

Patrón INTERNO
• Se utiliza un RM-s (tipo sustancia pura) añadido sobre muestra real.
• Preparado en blanco de sistema (disolvente + reactivos)
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

c) SEGÚN EL TIPO DE SEÑAL ANALÍTICA (Y) UTILIZADA:

Señal ABSOLUTA
• Se utiliza como señal el valor directamente suministrado por el
instrumento al medir el patrón de calibración

Señal RELATIVA
• Se utiliza como señal el cociente entre los valores
correspondientes al patrón de calibración y al patrón interno
(de compensación)

Señal NORMALIZADA
• Se utiliza como señal el valor normalizado del patrón de
calibración con respecto a un patrón de referencia (patrón
interno o patrón de calibración)
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

Calibración Material de referencia Propósito

Calibrar cuando se sospecha

Patrón externo (EC) RM-s
que no existe efecto matriz

RM-m
Patrón en matriz (MC) Compensar el efecto matriz
RM-s + matriz libre de analito

Adición de patrón (AC) RM-s Corregir el efecto matriz

RM-s Corregir la respuesta

Patrón interno (IC)
RM-m + otro RM-s instrumental

Determinar el porcentaje de
RM-s
Respuesta normalizada (NC) composición en series
RM-m
homólogas
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

y
AC

yMuestra = yAnalito MC
+ yMatriz
EC
yAnalito

xAnalito

xAnalito + xMatriz
xAnalito

Relación entre los diferentes tipos de calibrados. EC: Calibrado con patrón externo,
MC: calibrado con patrón en matriz, AC: calibrado por adición de patrón.
La componente proporcional de error sistemático no ha sido considerada.
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3. Metodologías de calibración en Química Analítica

CALIBRACIÓN INTERNA
Esta denominación puede referirse a varios métodos de calibración:
 CALIBRACIÓN CON SEÑAL RELATIVA (“PATRÓN INTERNO”)
 CALIBRACIÓN CON UN SUBROGADO
 no se dispone de patrón químico
 para determinaciones multianalito

Características del Patrón Interno

- Se debe comportar de forma similar al analito

- Puede ser cuantificado de modo independiente
- No puede estar presente en la muestra
- Se puede utilizar como patrón de calibración o patrón de compensación
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INDICE
1. Calibración: Objetivos y tipos
2. Materiales de referencia y blancos analíticos
3. Metodologías de calibración en Química
Analítica
4. Validación y verificación de la calibración
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4. Validación y verificación de la calibración

VALIDACIÓN: “verificación de que los requisitos especificados

son adecuados para un uso previsto” (VIM 2008).

• La validación de una calibración se puede realizar de dos

modos:
1. Comparación de los resultados experimentales obtenidos al
analizar diferentes muestras de diferentes concentraciones
(dentro del rango dinámico) con los obtenidos con otro
método suficientemente contrastado.

2. Estudios de recuperación, empleando un CRM adecuado y

similar a la muestra a analizar.
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4. Validación y verificación de la calibración

Si no disponemos de CRM se pueden realizar los

estudios de recuperación con muestras fortificadas:

ESTUDIOS DE
RECUPERACIÓN

Muestra + Blanco + Patrones (A) Muestra + Blanco

(Muestra Fortificada: CF) (CM)

(CF  CM)
%R  100·
A
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4. Validación y verificación de la calibración

VERIFICACIÓN: “aportación de evidencia objetiva de que un

elemento satisface los requisitos especificados” (VIM 2008).
• Los resultados de una calibración no son estables indefinidamente y
pueden variar en función de las características del proceso y del
equipo.
• Es necesario programar re-calibraciones periódicas en función de la
estabilidad y de los resultados de las operaciones de VERIFICACIÓN
de los parámetros de calibración.
• Es necesario un adecuado control estadístico de los parámetros del
calibrado.
• Se pueden emplear patrones a las concentraciones bajas y altas del
calibrado, comprobando si la respuesta obtenida se encuentra
dentro de los límites predichos.
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BIBLIOGRAFÍA:
• “Principios de Química Analítica”. M. Valcárcel. Ed. Springer.
• “Quimiometría”. G. Ramis y M.C. García. Ed. Síntesis.
• “Garantía de la Calidad en los Laboratorios Analíticos”. R. Compañó y A. Ríos.
Ed. Síntesis.
• “Calibration in chemical measurement processes (I): A metrological approach”.
L. Cuadros Rodríguez, L. Gámiz Gracia, E. Almansa López y J. Laso Sánchez.
Trends in Analytical Chemistry 20 (2001) 185–206.
• “Calibration in chemical measurement processes (II): A methodological
approach”. L. Cuadros Rodríguez, L. Gámiz Gracia, E. Almansa López y J.M.
Bosque Sendra. Trends in Analytical Chemistry 20 (2001) 620–636.
• IUPAC Recommendation. “Guidelines for calibration in Analytical Chemistry.
Part 1: Fundamentals and single component calibration”. Pure and Appl. Chem.
70 (1998) 993-1014.
• Informe UNE-82132 IN. “Calibración en Química Analítica y uso de los
materiales de referencia certificados”. 2005.