BIOLOGIA CELULAR

MICROSCOPIA: MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Y

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OBSERVACIÓN DE CÉLULAS Y MICROORGANISMOS

ESTRATEGIAS DE ENSEÑANZA-APRENDIZAJE PARA DESARROLLAR LA PRÁCTICA

Fase de apertura. Tiempo: 10 min

1. Toma la asistencia en aula virtual.

2. El docente declara las capacidades a desarrollar:
a. Identifica las partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.
b. D escribe los principios ópticos y no ópticos que rigen el poder amplificador del microscopio y
definir sus límites de amplificación.
c. Reconoce la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas.
d. Realiza preparados en fresco y seco, estructuras de diferentes grados de complejidad biológica que,
por su tamaño, no son observables con el ojo; como las bacterias, protozoarios y hongos.
e. Enfoca un preparado “en fresco”, con el objetivo panorámico (4x) y los objetivos de pequeño
aumento (10X) y mediano aumento (40X).
f. Enfoca un preparado “en seco” coloreado, con el objetivo de gran aumento (100X).
3. Explicación de la práctica por parte del docente.

Fase de Desarrollo. Tiempo: 65 min

Realización de la práctica.

I. Introducción.
La palabra microscopio viene del griego mikro, pequeño y skope, visión. Los microscopios son
instrumentos que nos permiten observar objetos pequeñísimos que no se pueden ver a simple vista,
ni con la ayuda de una lupa.
La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la "Academia dei
Lincei", una sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto de una abeja.
Un microscopio compuesto es un microscopio óptico que tiene más de un lente. Los microscopios
compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan
finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y
organismos no visibles a simple vista.
El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes según los
Italianos hacia 1610 por Galileo y según los holandeses por Zacharías Janssen (1580-1638) quien
inventó un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm. de largo
soportado por tres delfines de bronce; pero se obtenía imágenes borrosas a causa de las lentes de mala
calidad. Leeuwenhoeck (1674). Describió las primeras células aisladas y describió alguna
organización interna de las células.
Estos primeros microscopios aumentaban la imagen 200 veces. Hoy en día el microscopio
compuesto, que puede ser monocular o biocular, permite obtener aumentos de 100 a 1500 X.
Se han desarrollado diferentes sistemas de iluminación para el microscopio, que permiten observar
células o tejidos vivos, o fijados y teñidos. Sistemas en que el trayecto de la luz va desde la lámpara
hasta el ojo del observador pasando por un sistema de lentes que la alinea y la concentra.

1 Práctica 3: Microscopía P.C.

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Figura 1: Formación de la imagen en un microscopio

2.1 CARACTERÍSTICAS DE LA VISIÓN CON EL MICROSCOPIO

1. Grado de Aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al efecto
de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta
el lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta
la imagen de un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente aumentada.
Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este caso será: 10X x 40X = 400X.
Esto permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la imagen de un objeto.
2. Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre sí.
Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual
pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser todavía
distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un microscopio
compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numérica
(propiedad óptica de la lente). Puede ser calculado mediante la siguiente fórmula: P.R. =
Lambda/2 A.N. Donde: Lambda = Longitud de onda de la fuente luminosa
A.N. = Apertura numérica de la lente.
Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura numérica, de tal
modo que las lentes con mayores aumentos generalmente tendrán mayores aperturas
numéricas. El poder de resolución es quizá la característica más importante de un buen
microscopio ya que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si ésta se ve borrosa y
no puede distinguirse en sus detalles.
3. Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en observación y el lente
objetivo. Esta distancia variará según el aumento de la lente objetivo con la cual se trabaje. Es
inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del
lente objetivo menor será la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersión
la distancia de trabajo será mínima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersión entre
el lente objetivo y la preparación debido a que el índice de refracción para este tipo de lente
es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener una imagen de gran tamaño y al mismo
tiempo de gran nitidez.

2.2 PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
1. Sistema óptico
Comprende, los lentes oculares y los lentes objetivos dispuestos de tal manera que producen el
aumento de las imágenes que se observan a través de ellas. Y a los dispositivos del sistema de
iluminación que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la

2 Práctica 3: Microscopía P.C.

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observación a través del microscopio

a. Ocular: Lente situada en la parte superior del tubo cercano al ojo del observador. Amplía la
imagen del objetivo de 6X, 10X y 15X
b. Objetivo: Lente situada en el revólver cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
Son lentes de diferentes aumentos, el de menor aumento es más corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y
el de mayor aumento es más largo (40X y 44X). Puede existir además un objetivo de
inmersión de 100 a 150 aumentos.
2. Sistema de iluminación
a. Condensador: Lente que concentra el haz luminoso hacia la preparación
b. Diafragma: Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa en el condensador. hacia la
preparación
c. Luz incorporada: Corresponde a un foco de luz eléctrica que proporciona la luz que llega
hasta el objeto a estudiar y el sistema óptico del microscopio.

3. Sistema mecánico
Constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el
movimiento para el enfoque
a. Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
 Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio.
 Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene además el
condensador y el diafragma
b. Platina: Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que contienen a las
preparaciones. Contienen a las pinzas
c. Pinzas. Par de láminas, situadas sobre la platina, para mantener al porta- objetos.
d. Cabezal: Proporciona soporte a los lentes oculares y objetivos. Puede ser monocular,
binocular.
e. Revólver: Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para
diversos aumentos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
f. Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de la
platina para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado nítidamente; es
decir, el enfoque preciso para el observador.
g. Tornillo macrométrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque para
lograr una observación precisa

Células Procariotas y Eucariotas.

El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el estudio con el
microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la observación de estructuras y
detalles tan pequeños que no podrían ser observadas a simple vista., fundamentales para el desarrollo
de la investigación en ciencias biológicas.
Hookke (1665). Observo por primera vez las células, en cortes finos de corcho, como
compartimientos simulares a un panal de abejas, de donde proviene su nombre (cella: espacio vació) y
que no se trataba de células vivas, sino de paredes celulares sin nada de sus componentes
citoplasmáticos. La célula es la porción más pequeña de sustancia viva de que están formados los seres
orgánicos. Todos los seres vivos, animales y vegetales, están formados por células.
La forma de la célula es variada. Generalmente es esférica, pero también puede ser estrellada,
ramificada, etc. El tamaño de las células es muy pequeño. Son invisibles a simple vista; es necesario el
microscopio para distinguirlas. Para medir una célula se utiliza la micra.

3 Práctica 3: Microscopía P.C.

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Se conocen dos grandes grupos de células, las células procariotas y las células eucariotas.
Las células procariotas: Son células pequeñas que miden entre 0,2 -10 μm de diámetro
aproximadamente. Posee, una estructura simple existiendo tres componentes celulares comunes que
son la membrana plasmática, ribosomas y un nucleoide. Además se encuentran presentes la pared
celular y la cápsula en la mayoría de ellas. Otras además presentan flagelo.
La característica que permite clasificar a una célula procarionte, es la carencia de una envoltura
nuclear, de esta forma su nucleoide está en contacto con el citoplasma de la célula. También tiene su
ADN desnudo y carece de organelos citoplasmáticos. Su ADN está formado por una sola hebra circular,
fuertemente plegada y empaquetada y no se encuentra asociada a proteínas.
Las células eucariotas: Son células que miden entre 10 - 100 μm con núcleo definido delimitado por
una doble membrana, que contiene en su interior el material genético, el ADN que se encuentra
asociado a proteínas (histonas y no histonas), formando el complejo macromolecular llamado
cromatina, también se encuentra dentro del núcleo el nucléolo que es una masa compacta de gránulos
y fibrillas ribonucleoproteicas. Internamente presenta un sistema de membranas encargadas de los
procesos metabólicos, existiendo algunas diferencias entre las células debido a su función que cumplen
dentro del organismo y por el grado de diferenciación.

II. Material.

Biológico Laboratorio Reactivos y soluciones

Muestras de agua estancada (*) Microscopio óptico Agua destilada
Recorte de periódico (*) Láminas y laminillas Alcohol -acetona
Cebolla * Pipeta Pasteur, Goteros Azul de Metileno,
Levadura *, Láminas y laminillas Violeta de Genciana,
Pan con hongos * Mechero, Gradillas Safranina, Eosina,
Palillos mondadientes * Frasco lavador, Gotero Solución de lugol
Yogurt * Cubeta de tinción Aceite de cedro
Con (*) material a traer por el estudiante el día del TP.

II. Instrucciones.

a. Conociendo el microscopio
 Ubicar en su microscopio cada una de las partes (óptica y mecánica). Determinar la
función de cada una de estas partes. (Figura 1)
 Colocar sobre un porta objetos, la letra “e” de un recorte de papel y enfoque el
microscopio, para ello.
 Primero debe comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo;
si no es así, debe colocarse en dicha posición haciendo girar el revolver hasta alcanzar un
"tope" que lo indique.
 Abrir completamente el diafragma y observando a través del ocular, observe un círculo
uniformemente iluminado. Este constituye el "campo óptico". Una vez obtenida la
iluminación máxima, No se debe cambiar la posición del microscopio.
 Ubicar y sujetar el porta-objetos en la platina, procurando que la preparación se halle en el
centro de la abertura circular.
 Mover el tornillo macrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia la
preparación, hasta llegar a un tope.
 Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macrométrico en el sentido
inverso hasta que aparezca la imagen.

4 Práctica 3: Microscopía P.C.

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 Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar el tornillo
micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo macrométrico. Cuando los
tornillos macro y micrométrico se encuentren incorporados en un solo dispositivo, el ajuste fino se
hace solo después de haber realizado el avance rápido de acercamiento a la preparación.
 Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre en el centro
del campo, hacer girar el revolver cambiando el lente objetivo hasta llegar al "tope" y accionar
solamente el tornillo micrométrico hasta obtener la nueva imagen.
 Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, colocar una gota de aceite de
inmersión sobre la preparación en seco, antes de girar el revólver. Esto permite que la imagen se vea
con nitidez para realizar la observación ya que este tipo de lentes requiere que el índice de
refracción sea similar al del vidrio.
 Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en la primera
posición de trabajo.
 Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio. Si usó el objetivo de inmersión, debe
limpiarse inmediatamente después de su uso con ayuda del papel de lente.

a) Preparado en fresco
 Observación de organismos unicelulares eucariotas (protozoos de vida libre)
En un portaobjetos coloque una gota de agua estancada, cúbrala con un cubreobjetos y Observa
al microscopio, enfoque la muestra con el objetivo de 10X y 40X. (Fig 1.)

 Observación de organismos unicelulares eucariotas (levaduras)

En un tubo de ensayo coloque unos granos de levadura fresca o seca activa, agregue agua tibia y
agite hasta tener una solución muy diluida; deposite una gota sobre el portaobjetos, ponga el
cubreobjetos y observe al microscopio con los objetivos de 10X, 40X y 100X.

 Observación de organismos multicelulares (mohos)

Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua. Tomar el material a observar en una mínima
cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con
cuidado sobre la gota de agua en el portaobjeto. Con agujas muy finas se distribuye el material
en la gota de manera que no quede amontonado.
Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas
entre los dos vidrios.

 Observación de células de epidermis de cebolla

Realizar un corte en el bulbo de la cebolla y desprenda cuidadosamente la membrana
transparente y delgada (catáfila) que recubre al mismo. Llevar la muestra extraída a un
portaobjetos que contenga una gota de agua. Cubrir con el cubreobjetos y observar al
microscopio en 10X y 40X. Realizadas las observaciones respectivas dejar caer una gota de azul
de metilo al borde del cubreobjetos, de tal manera que el colorante penetre en la muestra por
capilaridad. Eliminar el exceso de colorante y observar.

Observación de preparaciones en fresco

 Bajar la platina hasta el tope y colocar la preparación sobre la platina
 Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posición de observación
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico.
Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos
 Mirar a través de los oculares y lentamente, ir separando el objetivo de la preparación con el

5 Práctica 3: Microscopía P.C.

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macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener
un enfoque fino.
 Pasar al objetivo 10x La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover
un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior. Pasar al objetivo de
40x el cual enfoca a muy poca distancia de la preparación.

Fig. 1 Organismos representativos de agua estancada

6 Práctica 3: Microscopía P.C.

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b) Preparado en seco
 Observación de organismos procariontes en sarro dentario
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes.
Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus
productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de
las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar
bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas,
cocobacilos, diplococos y bacilos.
Con un mondadientes tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de
agua sobre el portaobjetos. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer
el frotis. Dejar secar y fijar con calor. Realiza una tinción compuesta o diferencial (Tinción Gram)
por 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.

 Observación de organismos procariontes en yogur

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala
industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos
cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y
el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar
dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos,
cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30μm de longitud)
facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.
Para ello debe realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de
agua. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa y teñir con la tinción Gram. Finalmente
observar al máximo aumento del microscopio.

Fig. 2 Formas de bacterias

 Observación de organismos eucariontes (células epiteliales de la mucosa labial)

Cuidadosamente con la ayuda de una laminilla, realiza un raspado de la mucosa labial de su
compañero y extiéndalo en la parte central de una lámina portaobjeto. Seguidamente realiza una
tinción simple (con azul de metileno).

Figura 3 Obtención de muestras de mucosa labial

7 Práctica 3: Microscopía P.C.

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Tinción Simple Tinción compuesta (Tinción Gram)

(Azul de metileno)  Teñir con cristal violeta por 1min.
 Teñir con azul de metileno  Lavar con abundante agua el exceso de
por 10 min. colorante.
 Lavar con abundante agua  Cubrir con Lugol por 1min.
para eliminar el colorante  Lavar con agua el exceso de Lugol.
 Secar a temperatura de un  Decolorar con alcohol-acetona o simple-mente
mechero la preparación. con alcohol hasta que la preparación deje de
 Examinar al microscopio perder color (30 seg)
fijándose sobre todo en las  Lavar con abundante agua para eliminar el resto
estructuras subcelulares de disolvente.
 Teñir con safranina por 1min.
 Lavar con agua para eliminar el colorante de
contraste.
 Secar la preparación.
 Examinar al microscopio fijándose sobre todo en
el color de cada preparación.

Observación de preparaciones con objetivo de inmersión

 Bajar al tope la platina.
 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se
va a visualizar y donde habrá que colocarse la gota de aceite
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
Dejar caer una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz, sin Permitir que el gotero
toque la preparación
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de 100X
 Mirar directamente al objetivo y lentamente subir la platina hasta que la lente toque la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y
la preparación es mínima, aún menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy
grande.
 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite.
 Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación
Una vez finalizada la observación de la preparación. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación.

8 Práctica 3: Microscopía P.C.

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V. Resultados.
Identifica las partes del microscopio.
Identifica las partes del microscopio señaladas en el dibujo:

9 Práctica 3: Microscopía P.C.

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5.2 Observaciones en el microscopio

Esquematice las células de las muestras observadas con los objetivos de 4X y 10X anotando el
nombre de la observación; así como el aumento total empleado.

Observación: _______________________________

Muestra: ___________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

Observación: ______________________________

Muestra: __________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

Observación: ______________________________

Muestra: __________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

10 Práctica 3: Microscopía P.C.

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Observación: _______________________________

Muestra: ___________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

Observación: ______________________________

Muestra: __________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

Observación: ______________________________

Muestra: __________________________________

Coloración: _______________________________

Aumento total: _______ x _______ = _______

(Ocular) (Objetivo)

11 Práctica 3: Microscopía P.C.

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Fase de cierre. Tiempo: 25 min

 Se concluye la práctica con una retroalimentación docente-alumno y el docente refuerza cualquier duda
de los estudiantes.
 El docente evalúa la práctica desarrollada mediante una prueba escrita.
 El docente señala que la siguiente clase se desarrollará la retroalimentación, menciona recomienda a los
estudiantes descargar de aula virtual, y cumplir con la actividad de retroalimentación que será
presentada la siguiente semana.
 El docente da a conocer la tarea a desarrollar, que será presentada en la siguiente sesión práctica.

Evidencia. Instrumento de evaluación.

- Informe de la práctica, resumen o mapa - Asistencia
- Sustentación del tema desarrollado - Rúbricas para evaluar el informe.

Fuentes de Consulta

Páginas WEB de apoyo.

- Archivos en pdf y vdieos sobre microscopía
 Capítulo 2 El microscopio óptico
http://www.bibliotecagbs.com/archivos/027_032_CAP2_GBS.pdf
 Microscopio: https://www.youtube.com/watch?v=70gEkF0kj1c
 Microscopio https://www.youtube.com/watch?v=0Tunrrm3OlM
 Capítulo 1 Terminología, microscopia y técnica histológica.
http://www.herrerobooks.com/pdf/pan/9786077743910.pdf
 Partes de un Microscopio 1 https://www.youtube.com/watch?v=ntPjuUMdXbg
 Partes de un Microscopio 2 https://www.youtube.com/watch?v=VQtMHj3vaLg
 Manejo del microscopio https://www.youtube.com/watch?v=b1tV3k68cAU
 Microscopio óptico: componentes, enfoque y cuidado
https://www.youtube.com/watch?v=LXbWgRwXFPk
 Tinción Gram. http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php
 Preparado en fresco. https://www.youtuzbe.com/watch?v=qSsMe_OXv-0
 Observación de microorganismos de agua estancada
https://www.youtube.com/watch?v=qa3JKuR9fgQ
https://www.youtube.com/watch?v=xYhZ9g8GFJ8
 Obtención de células epiteliales de mucosa labial
https://www.youtube.com/watch?v=i2x3MKSJez4
 Obtención de células epiteliales de cebolla. https://www.youtube.com/watch?v=PrX3h-AflZI
 Observación de levaduras. https://www.youtube.com/watch?v=ziP6-cntcRQ
 Observación de bacterias del yogurt https://www.youtube.com/watch?v=RLClwfyeYeA

12 Práctica 3: Microscopía P.C.