Nº 189

Año LIV 06/2020

Artículo de Investigación Pág. 1 El laboratorio práctico Pág. 6 Novedades Pág. 8

Dengue Métodos diagnósticos para COVID-19 Vacunación

Artículo de Investigación Pág. 4

Pruebas genéticas. Secuenciación y
aplicaciones clínicas

Artículo de Investigación

Dengue
Bioq. María Victoria Felcaro Artículo on-line
Centro de Investigación y Biotecnología – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina

El dengue es una enfermedad viral trans-

mitida por la picadura de un mosquito
perteneciente al género Aedes, princi-
palmente el Aedes aegypti, vector de la
enfermedad. El mosquito tiene hábitos
domiciliarios, por lo que la transmisión es
Mosquito no Mosquito
predominantemente doméstica. infectado infectado
El virus del dengue pertenece a la familia Persona
Flaviviridae y existen cuatro variantes, los infectada
serotipos 1, 2, 3 y 4. La inmunidad es
serotipo-específica por lo que la infección
con un serotipo determinado confiere in- Persona Persona
munidad permanente contra el mismo, y infectada sana
sólo por unos meses contra el resto de los
Figura 1: Formas de transmisión
serotipos. Por lo tanto, un individuo puede
tener dengue hasta 4 veces en la vida. se restringe a los meses de mayor tem- fermedad de variada intensidad. Luego de
Cualquier serotipo puede producir formas peratura (noviembre a mayo), en estrecha un período de incubación de 5 a 7 días (3
graves de la enfermedad, aunque los se- relación con la ocurrencia de brotes en los a 14 días en algunos casos), podrán apa-
rotipos 2 y 3 han sido asociados a la ma- países limítrofes. recer las manifestaciones clínicas, aunque
yor cantidad de casos graves. una alta proporción de personas infecta-
Formas de transmisión das cursarán de manera asintomática.
Transmisión El dengue se transmite por la picadura de Las infecciones sintomáticas pueden va-
En América ha sido demostrada la trans- un mosquito infectado con el virus que, riar desde formas leves que se manifies-
misión del dengue a través de mosquitos para estarlo, debe haber picado previa- tan con un cuadro febril agudo a otros
Aedes aegypti. El Aedes albopictus, rela- mente a una persona infectada en perío- cuya fiebre se asocia a intenso malestar
cionado a la transmisión de la enferme- do de viremia (Figura 1). general.
dad en otros continentes, solo es un vec- Luego de un período necesario para el de- Algunos casos pueden evolucionar a
tor potencial en las Américas. sarrollo de la infección viral en el mosqui- formas graves en las que hay manifesta-
El Aedes aegypti se distribuye desde el to, éste permanecerá infectante el resto ciones hemorrágicas, pérdida de plasma
norte de Argentina hasta las provincias de su vida. debido al aumento de la permeabilidad
de Buenos Aires, La Pampa y Mendoza. El La enfermedad no se transmite de perso- vascular, con aumento del hematocrito y
Aedes albopictus se encontró en las pro- na a persona, ni a través de objetos, ni presencia de colecciones líquidas en las
vincias de Misiones y Corrientes no aso- por vía oral, respiratoria ni sexual. Están cavidades serosas (derrame pleural, asci-
ciado al dengue. descriptas la transmisión transplacentaria tis y derrame pericárdico), lo que puede
Ambos mosquitos son de hábitos domés- y transfusional, aunque son menos fre- llevar a un cuadro de shock.
ticos y se desarrollan en envases caseros cuentes. Los casos de dengue grave son más fre-
que contienen agua. También se desarro- cuentes en personas que ya padecieron
llan en recipientes extradomiciliarios. Manifestaciones clínicas dengue por un serotipo (infección prima-
El comportamiento del dengue en Argen- La infección por dengue puede ser clínica- ria) y se infectan nuevamente (infección
tina es epidémico, y la ocurrencia de casos mente inaparente o puede causar una en- secundaria) con un serotipo diferente. La

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Artículo de Investigación
Dengue

infección primaria puede asociarse a den- ción de plasma que puede llevar al shock • Sangrado de mucosas.
gue grave, en relación a la virulencia de la hipovolémico (piel fría, pulso débil, taqui- • Somnolencia o irritabilidad.
cepa u otros factores del huésped. cardia, hipotensión). • Hepatomegalia.
Existen otras formas clínicas menos fre- El hematocrito sube siendo un paráme- • Laboratorio: incremento brusco de he-
cuentes: encefalitis, miocarditis, hepato- tro confiable para monitorear la fuga de matocrito con rápida disminución del re-
patía y afección renal. plasma. cuento de plaquetas.
El dengue es una enfermedad sistémica Las plaquetas pueden descender pro- Los criterios de dengue grave son los
y dinámica, en la que en pocas horas un gresivamente desde la etapa febril, pero siguientes:
paciente puede pasar de un cuadro leve a el descenso es más intenso en la etapa • Extravasación grave de plasma con
un cuadro grave. crítica. La plaquetopenia es debida a la presencia de shock hipovolémico y/o di-
Las manifestaciones clínicas del dengue destrucción masiva periférica por un me- ficultad respiratoria debida al exceso de
pueden dividirse en tres etapas: canismo inmunomediado, es decir anti- líquidos en el pulmón.
1) Etapa febril: es de duración variable cuerpos antivirales con reacción cruzada • Hemorragias graves.
(3 a 6 días en niños y 4 a 7 días en adul- contra las plaquetas. Es transitoria por lo • Afectación grave de órganos.
tos) y se asocia a la viremia, durante la cual cuando las plaquetas comienzan a
cual existe alta posibilidad de transmisión elevarse indican que el paciente mejora. Diagnóstico
si la persona es picada por un mosquito El shock generalmente dura algunas ho- Se considera caso confirmado a todo pa-
vector. Además, el paciente puede tener ras. Los pacientes pueden evolucionar a ciente sospechoso que tenga un diagnós-
dolor muscular y articular, cefalea, aste- un cuadro de distrés respiratorio o pre- tico confirmatorio por laboratorio, o por
nia, exantema, prurito, y síntomas diges- sentar complicaciones como hemorragias nexo epidemiológico, según la situación
tivos. masivas, falla multiorgánica y coagula- epidemiológica.
Es frecuente la presencia de leucopenia ción intravascular diseminada. La confirmación del diagnóstico se hace
con linfocitosis relativa, trombocitopenia 3) Etapa de recuperación: se hace evi- por alguna de las siguientes técnicas, de-
e incremento de las transaminasas. dente la mejoría del paciente, pero puede pendiendo de la situación epidemiológica
Algunos pacientes pueden presentar ma- existir un estado de sobrecarga de volu- de la región, y del momento entre el inicio
nifestaciones hemorrágicas leves como men, así como alguna infección bacteria- de los síntomas y la toma de la muestra.
epistaxis, gingivorragias y petequias. na agregada. Las personas infectadas presentan vire-
2) Etapa crítica: es fundamental contro- mia desde un día antes y hasta 5 o 6 días
lar en forma estricta al paciente en las 48 Clasificación de dengue posteriores a la aparición de la fiebre.
horas posteriores al cese de la fiebre, lo Se realiza una clasificación binaria: den- El antígeno NS1 se encuentra presente en
cual sucede entre el 4to y 7mo día de ini- gue (con o sin signos de alarma) y dengue las muestras de individuos, cursando una
ciada la fiebre o cuadro clínico. Esta es grave. infección primaria o secundaria, entre los
la etapa de mayor riesgo de aparición de Se debe sospechar dengue en todo caso días 1 a 9 luego de la aparición de la fiebre.
complicaciones, ya que la extravasación de síndrome febril inespecífico definido En la infección primaria los anticuerpos
de plasma se hace más intensa y es capaz como: IgM se detectan a partir de los 3 a 5 días
de conducir al shock por dengue y es el • Persona de cualquier edad y sexo del comienzo de los síntomas y perma-
momento cuando se producen las gran- que presenta fiebre, de menos de 7 días necen en circulación durante 30-90 días,
des hemorragias (hematemesis, melena, de duración sin afección de las vías aé- pudiendo llegar al año en algunos casos.
otras). Prevenir el shock es prevenir las reas superiores ni otra etiología definida, Los anticuerpos IgG aparecen alrededor
grandes hemorragias. acompañada de dos o más de los siguien- de los 7 días, hacen un pico a las 2-3 se-
A la caída de la fiebre el enfermo puede tes signos: manas y permanecen de por vida.
mejorar o empeorar. El empeoramiento - Cefalea y/o dolor retroocular. En las infecciones secundarias se presen-
es precedido por signos clínicos de alar- - Malestar general, mioartralgias. tan altos niveles de anticuerpos IgG espe-
ma: dolor abdominal intenso y sostenido, - Diarrea, vómitos. cíficos (1 o 2 días luego de los síntomas)
vómitos persistentes, derrame seroso, - Anorexia y náuseas. antes o junto a la respuesta de IgM (4 a 5
sangrado de mucosas, cambio de estado - Erupciones cutáneas. días luego de los síntomas).
mental, hepatomegalia, incremento brus- - Petequias.
co de hematocrito con disminución del - Leucopenia, plaquetopenia. En un área SIN circulación autóctona
recuento de plaquetas. Los casos sospechosos deben ser eva- de dengue
Identificar los signos de alarma permite: luados para identificar la presencia o no 1) Si la muestra (suero o tejidos) es
• iniciar precozmente la reposición de de signos de alarma: obtenida antes del 5to día de evolu-
líquidos por vía intravenosa, • Dolor abdominal intenso y sostenido. ción de los síntomas
• prevenir el shock. • Vómitos persistentes. Se dispone de diferentes metodologías
Esta etapa se caracteriza por la extravasa- • Derrame seroso. diagnósticas:

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 Artículo de Investigación
Dengue

1.1) Si se realiza detección de Antíge- diagnóstico de dengue. Si el cuadro clíni- con dengue y nexo epidemiológico (en
no NS1: co fuera muy característico de dengue, se una zona donde se ha confirmado la cir-
- Si el resultado es positivo se considera recomienda la toma de una 2da muestra culación del virus mediante pruebas de
Dengue Probable y se debe realizar detec- para detección de IgM e IgG. laboratorio, los siguientes casos se confir-
ción de genoma (RT-PCR convencional o - Si es resultado es positivo para IgM, se man por criterios clínico-epidemiológicos)
en tiempo real) / aislamiento viral (repli- considera Dengue Probable y se requiere constituirá un caso de dengue a los fines
cación viral en cultivos celulares, ratones una segunda muestra para confirmar me- de su tratamiento.
o inoculación de mosquitos) o detectar diante prueba de neutralización en culti- El diagnóstico de laboratorio no está des-
anticuerpos en una muestra de más días vos celulares (estudio de par de sueros de tinado al manejo de los casos, sino que se
de evolución. períodos agudo y convaleciente): realiza para la vigilancia.
- Si el resultado es negativo, no se descar- - Si el resultado es negativo se descarta el Por lo tanto, sólo se debe tomar mues-
ta el diagnóstico y se debe solicitar nueva caso de dengue. tras para el diagnóstico etiológico a una
muestra de suero con más de 5 días de - Si el resultado es constante se considera pequeña proporción de los casos sospe-
evolución para su confirmación. un caso de dengue anterior. chosos a fin de monitorear la duración del
1.2) Si se realiza detección del geno- - Si el resultado es positivo se confirma el brote en el tiempo y vigilar la potencial
ma viral y/o aislamiento del virus de caso de dengue. introducción de nuevos serotipos en el
muestras de suero y/o tejidos: La detección de anticuerpos IgM no tiene área. También debe realizarse diagnóstico
- Si el resultado es positivo, se confirma el valor confirmatorio dada la existencia de etiológico a aquellos casos con presenta-
caso de dengue. cruces serológicos con otros Flavivirus y la ción clínica atípica, graves y/o mortales
- Si el resultado es negativo, no se descar- persistencia de los anticuerpos IgM inclu- que pudieran atribuirse al virus dengue.
ta el diagnóstico. Se debe solicitar nueva sive por más de un año en un porcentaje 1) Si la muestra es obtenida antes del
muestra de suero del paciente con más de de los pacientes. 5to día de evolución de los síntomas
5 días de evolución para realizar la bús- Los Flavivirus comparten sitios antigéni- • Detección de antígeno NS1/detección
queda de anticuerpos específicos. Depen- cos y presentan un alto grado de reacti- del genoma viral y/o Aislamiento del vi-
diendo de los datos clínicos y epidemio- vidad cruzada que debe ser considerada rus en muestras de suero y/o tejidos, para
lógicos considerar diagnóstico diferencial al interpretar resultados serológicos. En monitoreo de serotipo y genotipo.
con otros Flavivirus. infecciones secundarias o secuenciales se 2) Si la muestra es obtenida después
2) Si la muestra es obtenida a partir exacerban estos cruces serológicos. del 5to día de evolución de los síntomas
del 5to día de iniciados los síntomas • Detección de anticuerpos IgM del vi-
2.1) Si se realiza detección de anti- En un área CON circulación autóctona rus del Dengue.
cuerpos IgM específicos para virus de de dengue • Neutralización en par serológico en
dengue: En esta situación epidemiológica, toda un porcentaje de casos.
- Si el resultado es negativo, se descarta el persona con cuadro clínico compatible 3) En pacientes post mortem

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Artículo de Investigación
Dengue

• Detección de antígeno NS1/Aisla- controlar la evolución del paciente. ción de las picaduras) de los pacientes
miento viral y/o detección de genoma En los casos de dengue grave se debe enfermos mientras se encuentren febriles.
viral por PCR en muestras de suero obte- expandir enérgicamente al paciente pre- • Informar al paciente, la familia y la
nida por punción cardíaca, o tejidos. via realización del hematocrito. Se debe comunidad sobre la enfermedad, el mos-
• Serología IgM/IgG en par de sueros. evaluar su evolución controlando los quito, el modo de transmisión y las medi-
• Inmunohistoquímica en muestras de signos vitales, tiempo de llenado capilar, das de prevención.
tejidos. hematocrito y diuresis. Si el paciente no
mejora y el hematocrito baja puede indi- Conclusión
Tratamiento car sangrado y la necesidad urgente de El dengue es una enfermedad viral trans-
No hay un tratamiento antiviral específi- transfundirlo. mitida por mosquitos infectados. Dado
co. Se realiza tratamiento de síntomas y que existen cuatro tipos del virus del
un seguimiento estricto de los pacientes. Vacunas: hay una vacuna, pero no está dengue, una persona podría tener hasta
En los casos que se manejan de forma disponible para uso asistencial. La OMS cuatro veces la enfermedad. La infección
ambulatoria se debe indicar: recomienda su administración a personas puede ser clínicamente inaparente o pue-
• Reposo. que hayan tenido una infección anterior de causar una enfermedad de variada in-
• Adecuada ingesta de líquidos. por el virus del dengue confirmada ya tensidad, pudiendo evolucionar a formas
• Control diario y evaluación de signos que en personas seronegativas la vacuna graves con manifestaciones hemorrágicas
de alarma hasta 48hs posteriores al cese aumenta el riesgo de desarrollar dengue y pérdida de plasma por aumento de la
de la fiebre. grave cuando el individuo experimenta permeabilidad vascular.
• Protección de picadura de mosquitos una infección natural por dengue. Por el momento la mejor prevención es
para evitar la transmisión. evitar ser picados por mosquitos y contro-
• Paracetamol si el paciente tiene dolor Prevención lar la proliferación de los mismos.
o fiebre. Están contraindicados los antin- • Realizar control del mosquito y sus La reducción de la mortalidad por den-
flamatorios no esteroides. criaderos. gue involucra el reconocimiento precoz,
A los pacientes con signos de alarma se • Detección rápida y temprana de los tratamiento adecuado y derivación a un
les debe realizar un hematocrito antes de casos mediante la vigilancia de síndromes centro de mayor complejidad cuando sea
comenzar la reposición de líquidos por febriles inespecíficos. necesario.
vía endovenosa. Repetir hematocrito para • Aislamiento entomológico (protec-

Artículo de Investigación
Pruebas genéticas. Secuenciación y
aplicaciones clínicas Artículo on-line
Dra. Luisina Cappellino
luisina.cappellino@wiener-lab.com
Centro de Investigación y Biotecnología – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina

Una copia del genoma humano contie- secuencia. Desde entonces, comenzó a la hebra sintetizada, a partir de los cuales
ne más de 3.000 millones de pares de vislumbrarse la potencialidad de este lo- ya no es posible que continúe la elonga-
bases (pb). Sin embargo, desde el siglo gro para el desarrollo de una medicina a ción. Así, se generan diferentes fragmen-
XIX, descubrimientos y desarrollos han la medida de cada paciente. La secuencia- tos de menor tamaño que el molde, todos
permitido conocerlo en profundidad. En ción del genoma humano y el desarrollo iniciados a partir del cebador.
1865, Gregor Mendel introdujo las leyes de las tecnologías de secuenciación de En el método original se realizaban cuatro
fundamentales de la herencia. En 1953, segunda generación (Next Generation Se- reacciones de síntesis, cada una con un
James Watson y Francis Crick describieron quencing) y de las de tercera generación, nucleótido distinto (A, T, G, C), y los frag-
la estructura de doble hebra complemen- han permitido incrementar la capacidad mentos obtenidos se analizaban en geles
taria helicoidal y antiparalela del ADN. de procesamiento y reducir el costo, con de agarosa, combinando los resultados de
Trece años después, fue descubierto el lo que aumentó la demanda de pruebas los cuatro experimentos. Posteriormente
código genético. El método de secuencia- genéticas de diverso tipo. se modificó, siendo hoy el estándar de
ción manual de Frederick Sanger impulsó calidad de secuenciación: se comenza-
el desarrollo de tecnologías como FISH, Sistemas utilizados para la secuenciación ron a emplear nucleótidos terminadores
hibridación en microarreglos y PCR (desa- de ácidos nucleicos. (Figura 1) marcados con moléculas fluorescentes
rrollada en 1993). Primera generación: esta técnica se de cuatro colores distintos, para poder
La automatización de la secuenciación basa en fragmentar el ADN, amplificarlo realizar un único experimento. Además, la
de Sanger (primera generación) permi- mediante clonado en bacterias y la ADN secuencia se lee por electroforesis capilar.
tió lanzar el Proyecto Genoma Humano polimerasa al sintetizar la hebra comple- Esta técnica permite actualmente obtener
para revelar su secuencia completa. Se mentaria al ADN molde a secuenciar, in- lecturas de 600-900 pb con una tasa de
alcanzó el objetivo en el año 2000, con corpore nucleótidos modificados (dideo- error de 0,01-0,1%, pero sus costos son
la obtención del primer borrador de dicha xinucleótidos) en diferentes posiciones de elevados.

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 Artículo de Investigación
Pruebas genéticas. Secuenciación y aplicaciones clínicas

Secuenciación de segunda generación

(NGS): estos equipos son comercializados
desde 2005 y cada plataforma se basa en
diferentes principios químicos, pero con
algunas características comunes:
• El ADN se fragmenta al azar y se unen
adaptadores en ambos extremos de cada
fragmento.
• La amplificación de la biblioteca de
fragmentos genómicos se produce me-
diante el anclaje de los mismos, a través
de los adaptadores, a una superficie só-
lida (microesferas o placa de secuencia-
ción), realizando PCR de manera paralela.
• La secuenciación y detección de las
bases ocurren al mismo tiempo en todas
las moléculas de ADN (masivo y paralelo).
• Permiten leer ambos extremos de un
mismo fragmento.

Secuenciación de tercera generación:

esta tecnología es la más reciente y evita
la PCR antes de la secuenciación, lo que
reduce el tiempo de análisis y los errores
derivados de esta técnica. La detección
de nucleótidos se realiza en tiempo real.
Hasta ahora, existen dos empresas que
comercializan equipos con principios di-
ferentes:
• La medición de fluorescencia para
identificar bases de una única molécula
en tiempo real, añadiendo los cuatro nu-
cleótidos simultáneamente. Se leen hasta
30000 pb.
• La utilización de un nanoporo biológi-
co, similar a un canal iónico de membrana
plasmática, a través del cual puede pasar Figura 1: Ejemplos de tecnologías de secuenciación del ADN de primera, segunda y
tercera generación. Adaptado de Shendure y col., 2017.
una única molécula de ADN. Su tránsito
modifica el voltaje del canal, cada nucleó- Este tipo de pruebas es, en general, rea- en muchos genes de un grupo, según las
tido tiene una estructura diferente y pue- lizado como parte de una consulta gené- sospechas médicas, por ejemplo, los pa-
de ser reconocido por el efecto que induce tica y sus resultados pueden confirmar o neles de epilepsia.
sobre la corriente iónica. En general, las descartar una condición genética sospe- Tests genéticos de gran escala, que
lecturas son de más de 10000 pb. chada o ayudar a determinar las posibili- pueden ser de dos tipos:
dades de desarrollar o transmitir un tras- • Secuenciación de exoma: la mayoría
Pruebas genéticas torno genético. de las mutaciones conocidas que causan
Las pruebas genéticas son un tipo de enfermedades ocurren en los exones (re-
pruebas médicas que identifican cambios Tipos de pruebas genéticas gión codificante de proteínas). Así, se bus-
en los cromosomas, genes o proteínas. En general, el tipo de prueba genética can cambios en todos los genes (exoma
Muchas de ellas se basan en la secuen- más conveniente para un individuo se de- completo) o sólo en aquellos relacionados
ciación de regiones del genoma o del fine según su historia médica y familiar. con condiciones médicas (exoma clínico).
genoma completo de un individuo, en De acuerdo con la cantidad de genes es- • Secuenciación de genoma completo:
busca de variaciones con respecto a una tudiados, estas pruebas se pueden clasi- es el tipo de test genético más grande ya
secuencia consenso (es decir, aquella que ficar en: que estudia todo el ADN de una persona,
está más representada en la población). Tests de gen único: en este caso, se no sólo sus genes. Esto se debe a que va-
Pueden ocurrir variaciones de nucleótido buscan cambios en un único gen cuando riaciones del ADN por fuera de los exones
único, inserción o deleción de un peque- existe sospecha médica de una condición pueden afectar la actividad genética y la
ño número de bases (indels), o rearreglos específica (monogénica) en base a los sín- producción proteica. Esta técnica, además
estructurales o cambios en el número de tomas o a la historia familiar, por ejemplo, de mutaciones puntuales, detecta indels,
copias (pérdidas, duplicaciones o translo- la distrofia muscular de Duchenne. variaciones en el número de copias y
caciones de grandes segmentos). Tests de paneles: éstos buscan cambios translocaciones.

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Artículo de Investigación
Pruebas genéticas. Secuenciación y aplicaciones clínicas

Estos test de gran escala son solicitados ponibles análisis más amplios que buscan mación, generalmente a personas sanas,
para personas con historias médicas com- mutaciones en docenas de genes. sobre rasgos médicos y no-médicos: as-
plejas. Por otro lado, la secuenciación de Pruebas de preimplantación: es una cendencia, respuesta a medicamentos o
genes individuales o de paneles de genes técnica que puede reducir el riesgo de alimentos, o riesgo de desarrollar ciertas
reduce el tiempo y costo de secuenciación tener un niño con un desorden genético condiciones. Habitualmente, la persona
y análisis, en escenarios clínicos conocidos. o cromosómico, analizando los embriones toma una muestra en su hogar, la envía
Asimismo, existen pruebas que analizan creados mediante técnicas de reproduc- a analizar y obtiene su perfil genético. Así,
otros cambios, como modificaciones en los ción asistida como la fertilización in vitro. podría modificar su modo de vida o cuida-
cromosomas o en la expresión de genes. Pruebas prenatales: se realizan durante do médico, pero se debe tener en cuenta
Por otro lado, es posible diferenciarlas en el embarazo para ayudar a determinar si que las pruebas no son concluyentes, no
función de la información que estas prue- el feto tiene ciertos desórdenes, detectan- debiendo ser la única referencia para la
bas pueden brindar: do cambios en sus genes o cromosomas. toma de decisiones médicas.
Pruebas diagnósticas: que permiten Pruebas a recién nacidos: se emplean El avance de las tecnologías genéticas
identificar de manera precisa una enfer- para evaluar si bebés de uno o dos días hace necesario abordar las cuestiones le-
medad, ayudar a definir un tratamiento, pueden tener ciertas enfermedades que gales y éticas relativas a su implementa-
evitar intervenciones inapropiadas y anti- causen problemas en su desarrollo, las ción. Asimismo, el asesoramiento genético
cipar síntomas. cuales podrían ser tratadas temprana- es central en el proceso de testeo e involu-
Pruebas predictivas y pre-sintomá- mente. cra la interpretación de la historia familiar
ticas: tienen como finalidad encontrar Pruebas farmacogenómicas: brindan y médica, así como la discusión con los
variaciones genéticas que incrementarían información sobre cómo ciertas medici- pacientes sobre las ventajas, desventajas
la probabilidad de desarrollar enfermeda- nas son procesadas por cada organismo y los aspectos sociales y emocionales.
des, lo que permitiría realizar modificacio- en función del perfil genético, permitien- El impacto de las pruebas genéticas, de
nes en el cuidado de la salud. Estos tests do así elegir aquellas que funcionen me- las nuevas tecnologías de secuenciación
serían particularmente útiles para perso- jor en ese contexto. y de la bioinformática parece aún difícil
nas que tienen familiares con un desor- Perfil genético de tumores: el cáncer de predecir de manera certera. Sin embar-
den genético, pero sin tener característi- posee una combinación única de cambios go, su aplicación supondrá un cambio de
cas de dicho desorden ellos mismos (por genéticos en cada persona, y conocerla paradigma en las áreas de diagnóstico y
ejemplo, algunos tipos de cáncer). puede ayudar a determinar un tratamien- medicina, orientado hacia una medicina
Pruebas de portación: se ofrecen a per- to. Esto sería más beneficioso en casos de precisión adaptada a las característi-
sonas con historia familiar de una enfer- de cánceres que puedan ser tratados con cas moleculares de cada paciente.
medad hereditaria o a grupos étnicos con terapias dirigidas, para pacientes con cán-
riesgos de enfermedad hereditaria espe- cer avanzado que no responden a trata- Bibliografía
cífica. Se investiga si portan una copia de mientos estándar o para los cuales éstos * Krier,JB y col. Genomic sequencing in
una mutación que, cuando está presente no existan. Sin embargo, en ocasiones, no clinical practice: applications, challenges,
en dos copias, causa una enfermedad es posible identificar la alteración genéti- and opportunities (2016).
(condición recesiva). Si ambos padres son ca, o ésta no puede ser tratada o existen * Martí,M. Genoma y salud: cómo la ca-
examinados, pueden tener información características biológicas que influyen so- pacidad de leer nuestro ADN está revolu-
sobre el riesgo de tener un hijo portador bre la respuesta a una terapia. Además, cionando la medicina (2017).
o que desarrolle la enfermedad, gene- la heterogeneidad celular en un tumor * NIH. US National Library of Medicine.
rándose así la posibilidad de optar por el puede incidir en los resultados obtenidos. Genetic Testing (https://ghr.nlm.nih.gov/).
diagnóstico preimplatacional. Aunque el Las pruebas clínicas mencionadas difieren Genetics home reference (2020).
análisis suele ser dirigido a ciertas condi- de las pruebas genéticas directas al con-
ciones, recientemente se han vuelto dis- sumidor, las cuales pueden brindar infor-

El laboratorio práctico L ABOR

ATORIO
PRÁCTI
CO
Métodos diagnósticos para COVID-19
Dra. Claudia Elena / Bioq. Ivan Ruiz
claudia.elena@wiener-lab.com / ivan.ruiz@wiener-lab.com
Product Team – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina

Artículo on-line

La disponibilidad de ensayos de diagnós- blica para prevenir y controlar la dise- do como la causa del brote de neumonía
ticos precisos y de testeos masivos son minación del agente infeccioso. Esto ha en Wuhan, China, en diciembre de 2019, y
factores críticos para mitigar el brote de quedado expuesto con la aparición de un que rápidamente se propagó al resto del
infecciones respiratorias. La detección nuevo coronavirus conocido como SARS- mundo.
temprana permite políticas de salud pú- CoV-2, que fuera primeramente identifica- La obtención de la primera secuencia del

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 Laboratorio Práctico
Métodos diagnósticos para COVID-19

Grafico 1: Posiciones relativas de targets de amplificación para coronavirus 2019-nCoV. PCR Screening: ensayo en gen E. PCR Con-
firmatoria. Ensayo en gen RdRp. Confirmatoria adicional: ensayo en gen N. Este gráfico se muestra a modo de ejemplo; los targets
de amplificación varían en función del diseño del ensayo.

genoma del SARS-CoV-2 fue determinan-

te para el desarrollo de ensayos mole-
culares de diagnóstico que actualmente
permiten detectar los casos de infección
por SARS-CoV-2.

Diagnóstico de laboratorio para pacientes

comprendidos en la definición de caso
sospechoso
La decisión de realizar el test para CO-
VID-19 debe estar basado en factores
clínicos y epidemiológicos ligados a la
probabilidad de infección, según defi-
nición de caso sospechoso. Los tests de
reacción en cadena de la polimerasa en
tiempo real (RT-qPCR) sobre contactos
asintomáticos o con sintomatología leve
se consideran en casos de individuos que
hayan tenido contacto cercano con casos
Tabla 1: Resumen de metodología diagnóstica y significado clínico probable.
confirmados de COVID-19. La definición
de caso sospechoso es regularmente re-
visada y actualizada a medida que se va Técnicas de diagnóstico molecular para de 2 (o más) genes específicos para SARS-
obteniendo mayor información sobre la COVID-19 CoV-2. Según las últimas recomendacio-
infección por SARS CoV-2. La confirmación de casos está basada en nes de la OMS, en áreas donde el virus se
El diagnóstico de la infección por SARS- la detección de secuencias génicas RT- encuentra ampliamente difundido, se está
CoV-2, se basa en la detección de genoma qPCR del virus, para lo cual es necesario aplicando un algoritmo simplificado, y se
viral a través de técnicas de biología mo- un paso previo de transcripción reversa considera suficiente realizar el screening
lecular como es la RT-qPCR. Dentro de las de su genoma de RNA, y luego la amplifi- por RT-qPCR de un único target.
muestras de elección para procesar a tra- cación de targets específicos por técnicas Dada la variabilidad en las cargas vira-
vés de esta metodología se encuentran: de RT-qPCR. La extracción del RNA debe les, un resultado negativo no excluye la
• muestras de tracto respiratorio superior: ser realizada en cabinas de bioseguridad positividad de infección. Estos resultados
hisopado nasofaríngeo y orofaríngeo en BSL-2 o equivalentes. negativos pueden deberse a:
pacientes ambulatorios; En general, los distintos métodos mole- • una inapropiada toma de muestra, o
• y/o muestras de tracto respiratorio in- culares se basan en la amplificación de baja carga viral en el área de donde se
ferior en pacientes con enfermedad res- regiones conservadas del virus: el gen tomó la muestra,
piratoria severa: esputo, aspirado (endo) RdRP (RNA-dependent RNA polymerase • tiempo de recolección de la muestra
traqueal o lavado bronqueoalveolar. gene) en el marco abierto de lectura de la inadecuado: demasiado tarde o demasia-
En adición a estos, otras muestras pue- región ORF1ab; el gen E (gen que codifica do temprano en la infección,
den ser consideradas para diagnóstico de para la proteína de la envoltura viral), y el • manejo y/o envio inadecuado de la
COVID-19 dado que el virus también ha gen N (gen que codifica para la proteína muestra,
sido detectado en sangre y en heces, del de la nucleocápside). La mayor parte de • motivos técnicos del test, como inhi-
mismo modo que previamente se ha he- los ensayos comercialmente disponibles bición de la PCR.
cho con los coronavirus responsables del están diseñados para la amplificación De obtenerse un resultado negativo a
SARS y MERS. Sin embargo, la duración de dos genes targets, algunos de ellos partir de muestras de un paciente con
y la frecuencia de la excreción del virus utilizan un par de cebadores para la de- alta sospecha clínica de infección por
en heces, y eventualmente en orina, aún tección genérica de los Betacoronavirus, SARS-CoV-2, particularmente cuando
no se conoce con exactitud. En caso de y un segundo par de primers específicos solo se ha tomado una muestra de trac-
pacientes fallecidos, se considera la au- para SARS-CoV-2 (grafico 1), mientras to respiratorio superior, de ser posible se
topsia a partir de tejido de pulmón. que otros están basados en la detección aconseja tomar adicionalmente otro tipo

NotiWiener Nº 189 - Junio 2020 - 7

Laboratorio Práctico
Métodos diagnósticos para COVID-19

de muestras, incluyendo muestras del SARS-CoV-2 o que se han recuperado de den ser un buen complemento de las
tracto respiratorio inferior para realizar la infección. Por el lado de la OMS, hasta pruebas moleculares, ayudando a deter-
pruebas adicionales. Es importante se- el momento, recomienda el uso de los tests minar estadios de la infección y detectar
ñalar que toda prueba de RT-qPCR debe rápidos solo con fines epidemiológicos. posibles falsos negativos en técnicas de
incluir tanto controles externos (positivos Hay que tener en cuenta que, en los pri- RT-qPCR. Por el momento, está en discu-
y negativos), como controles internos de meros días de la infección, los anticuer- sión si el desarrollo de anticuerpos puede
amplificación. pos pueden no estar presentes en niveles neutralizar una nueva infección; aún así,
detectables. Esto limita la efectividad de existen varios protocolos de estudios para
Metodologías serológicas las pruebas serológicas como diagnóstico, la evaluación de la utilización del plasma
Se han desarrollado una amplia gama siendo las técnicas de RT-qPCR la meto- de pacientes convalecientes como posible
de inmunoensayos serológicos (IEs) que dología de elección por su mayor sensibi- tratamiento.
complementan los ensayos moleculares lidad diagnóstica. Diversos estudios coin-
para el diagnóstico de COVID-19. Los IEs ciden en que los anticuerpos IgM frente a Referencias
más importantes están representados por SARS-CoV-2 comienzan a aparecer apro- * Informe SARs-CoV-2. Sociedad Argenti-
pruebas de quimioluminiscencia (CLIA), ximadamente entre los días 5-7 desde el na de Virología, División de la Asociación
técnicas de ELISAs y tests rápidos por in- inicio de los síntomas, y recién a partir del Argentina de Microbiología 26 de marzo
munocromatografia de flujo lateral, que día 14 aparecerían los anticuerpos de tipo de 2020.
detectan anticuerpos IgM e IgG produci- IgG (Tabla 1). Actualmente, al utilizar téc- * FDA. https://www.fda.gov/medical-devi-
dos por el sistema inmune en respuesta a nicas serológicas como metodología de ces/emergency-situations-medical-devices/
la infección por SARS-CoV-2. screening, en caso de resultado positivo emergency-use-authorizations#covid19ivd
Según las últimas publicaciones, la FDA ya sea para IgM y/o IgG anti-SARS-CoV-2, * WHO.https://www.who.int/docs/default-
recomienda utilizar las pruebas serológi- el diagnostico confirmatorio de infección source/coronaviruse/sb-2020-1-poc-
cas para identificar aquellos individuos se realiza por técnicas de RT-qPCR. immunodiagnostics-2020-04-08-e.
que han estado expuestos al virus del En este sentido, los test serológicos pue- pdf?sfvrsn=4c26ac39_2

Novedades

Vacunación
La inmunización mediante la vacunación, previene enfermedades, discapacidades y defunciones; con lo cual, no
hay intervención sanitaria preventiva más costo-efectiva que la inmunización, que evita entre 2 y 3 millones de
muertes anuales por difteria, tétanos, tos ferina y sarampión. Sin embargo, si se mejorara la cobertura vacunal
mundial se podrían evitar otros 1,5 millones.
En el marco de la pandemia de COVID-19, es primordial que las personas de 65 años o más, el personal de salud y
Artículo on-line
el resto de quienes pertenecen a los grupos de riesgo, se apliquen la vacuna contra la gripe como medida especial
de cuidado. Estas vacunas protegen de otras patologías respiratorias que también debilitan a las personas y que muchas veces requie-
ren cuidados especiales y hospitalización.
¿Quiénes se deben aplicar esta vacuna?
• Personal de Salud.
• Personas de 65 años y mayores.
• Mujeres embarazadas: en cualquier trimestre de la gestación.
• Puérperas: una dosis, hasta los 10 días posteriores al parto en caso de no haber recibido en el embarazo.
• Niños/as de 6 a 24 meses: deben recibir dos dosis separadas por al menos 4 semanas, excepto los niños/as que ya hubieran recibido
dos dosis en años anteriores.
• Personas de 2 a 64 años inclusive con factores de riesgo: una dosis anual. Son considerados factores de riesgo: obesidad, diabetes,
enfermedades respiratorias, enfermedades cardíacas, inmunodeficiencias congénitas o adquiridas, pacientes oncohematológicos, tras-
plantados o personas con insuficiencia renal crónica en diálisis, entre otros.
Fuente: Ministerio de Salud de la Nación

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