UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

CENTRO DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA 6:

CÁMARA DE NEUBAUER

INTEGRANTES

Dayana Borja

Ingrid Carrera

Jazmín Guadamud

Nicole Plaza

Tatiana Pila

Fernanda Ramos

PARALELO 1

DOCENTE: Dr. Pablo Araujo PhD.

AYUDANTE DE CATEDRA: Francisco Gonzales Valerio

QUITO-ECUADOR

2019 – 2019
 RESUMEN

Determinación de la concentración de microorganismos por el método Cámara de Neubauer.

Para ello se procedió a la activación de la levadura utilizando un monosacárido, se tomó un
volumen con ayuda de un instrumento volumétrico, posteriormente esta solución fue
colocada en un cubreobjetos de la cámara Neubauer, se aplicó presión para evitar formación
de burbujas y por capilaridad el líquido llenó las dos cavidades de la cámara para ser
analizada en el microscopio para el conteo de todos los microorganismos observados,
obteniendo de esta manera una ecuación de concentración de cámara de Neubauer la cual
nos permitió el cálculo de la concentración bacteriana. Se concluyó que el método Cámara
de Neubauer es un permite definir directamente la concentración bacteriana mediante un
conteo continuo del crecimiento microbiano en función del tiempo.

PALABRAS CLAVE: CÁMARA_NEUBAUER/ CONCENTRACIÓN_CELULAR/

CONTEO_CELULAR/ CUADRANTE_DE_NEUBAUER
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FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA 6

CÁMARA DE NEUBAUER

1. OBJETIVOS
 Determinar la concentración de microorganismos por el método cámara de
Neubauer
2. TEORÍA
2.1. Cámara de Neubauer
La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar
el recuento de esporas y células en un medio líquido como: cultivo celular, sangre, etc.
Esta cámara de recuento está adaptado al microscopio de campo claro o al de contraste
de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas cuyo
fondo es marcado con ayuda de un diamante.
A partir del número de cédulas contadas, conociendo el volumen de líquido con las
cédulas a contar, se calcula la concentración de cédulas en la muestra líquida aplicada.
El cálculo de la concentración de células se puede expresar así:
Partículas partículas contadas
= ∗dilución
ul superficie contada [ mm2 ]∗ profundidad de la cámara [ mm ]
2.2. Para que sirve cada cuadrante de la cámara de Neubauer
En la retícula central, la cámara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene
nueve cuadrados secundarios, cada uno de ellos divido a si vez en 16 cuadrados
terciarios. El cuadrado secundario central contiene 25 cuadrantes, cada uno de ellos
dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios.

 Cuadrado 1
área=1mm∗1 mm=1 mm2
volumen=1 mm2∗0,1mm=0,1 mm3=1∗10−4 mL
¿ total de cédulas contadas∗10000
[ C ]=
¿ de cuadrados

 Cuadrado 2
área=0,25 mm∗0,25mm=0,0625 mm2
volumen=0,0625 mm2∗0,1 mm=6,25∗10−6 mL
[ C ] = ¿ total de cédulas contadas∗160000
¿ de cuadrados

 Cuadrado 3
área=0,2 mm∗0,2 mm=0,04 mm2
volumen=0,04 mm2∗0,1 mm=4∗10−6 mL
[ C ] = ¿ total de cédulas contadas∗250000
¿ de cuadrados
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 Cuadrado 4
área=0,05 mm∗0,05mm=0,0025 mm2
volumen=0,0025 mm2∗0,1 mm=0,00025 mm3
6
[ C ] = ¿ total de cédulas contadas∗4∗10
¿ de cuadrados

3. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Material y Equipos

 Microscopio
 Cámara de Neubauer
 Vaso de precipitación
 Jeringuilla de insulina

3.2. Sustancias y reactivos

 Alcohol.
 Levadura
 Azúcar

3.3. Procedimiento

Preparación de la muestra:
1- Lavar la cámara y el cubre con agua destilada y alcohol 96%.
2- Secar bien con papel suave.
3- Poner el cubreobjetos encima de la cámara.
4- Homogeneizar removiendo bien el cultivo en donde residen las levaduras.
5- Tomar 10 micro litros de la levadura activada en la jeringuilla de insulina
6- Poner la punta de la jeringuilla en una de las dos ranuras de la cámara y, por
capilaridad, las levaduras se distribuirán en la cámara.
7- Si se crea una cámara de aire repetir la operación desde el principio.
8- Fijar la cámara de recuento en la platina del microscopio para realizar la
observación microscópica.
9- Esperar unos minutos antes de contar para que las levaduras se depositen en la
cámara.

Preparativos del microscopio:

El enfoque del microscopio se empieza con el objetivo de menor aumento que
posteriormente pasaremos a uno de más. Se centra el objetivo del microscopio a ojo en
el centro teórico de la cruz de la cámara, luego se coloca el objetivo lo más cerca
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posible del cubreobjetos, pero sin tocarlo y posteriormente se irá alejándolo hasta que la
imagen sea lo más clara y nítida posible. Se aconseja trabajar a 400 aumentos.

4. Parte Experimental

4.1 Datos Experimentales.

Tabla 4.1-1
Datos de conteo de microorganismos

Numero de Numero de
Cuadrante microorganismos sección microorganismos sección
1 2
1 31 27
2 26 56
3 24 37
4 33 42
5 28 53
Total 142 215
Fuente: Laboratorio de Biotecnología industrial, UCE
4.2. Cálculos.

X levaduras ¿ cuadros camara 1000 mm3

× × =x millones de levaduras /ml (1)
Y cuadros volumen camara 1 ml

28.4 levaduras 400 cuadros 1000 mm3 células

× 3
× =7100000
16 cuadros 0.1 mm 1 ml ml

5. RESULTADOS.
Tabla 5.1-1
Concentración.

Concentración
Sección
[células/ml]
1 7100000
2 10750000
Fuente: Laboratorio de Biotecnología industrial, UCE

6. DISCUSIÓN
El método cualitativo utilizado en la práctica fue válido ya que se logró analizar los
componentes y el funcionamiento de la cámara de Neubauer reconociendo así los cuadrantes
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y secciones presentes en ella, las mismas que permitieron observar con gran claridad las
células, por otro lado el método cuantitativo que se empleó fue apto para la experimentación
esto ya que se logró cuantificar la cantidad de células presentes en la muestra y mediante los
cálculos matemáticos obtener la concentración de microorganismos en la misma, además
con los datos obtenidos se pudo graficar , se cometieron algunos errores aleatorios puesto
que inicialmente no se tomó el tiempo para cada contaje, por lo que se tuvo que repetir el
mismo, por otro lado el método empleado fue sin tinción lo que no permitió diferenciar una
de otra debido a la gran cantidad de células presentes afectando de igual forma a lo antes
mencionado.
Se recomienda realizar más diluciones para disminuir así la concentración de la muestra y
obtener una mejor diferenciación de las células al momento de ser observadas en el
microscopio, así como también utilizar un contador eléctrico o una cuenta bultos para
realizar el recuento ya que manualmente toma mucho tiempo y confusión provocando datos
inexactos.

7. CONCLUSIONES
 Se determinó que la cámara de Neubauer es un método directo que nos permite determinar la
concentración del crecimiento microbiano a través del tiempo y que esta concentración obtenida
depende directamente del nivel de activación de la levadura para apreciar el incremento celular,
además de factores como la concentración de la solución, la turbidez de la levadura influye
directamente en la visibilidad de las células producidas, por tanto influye directamente en el
factor de conteo de las mismas. –Fernanda Ramos
 Se determinó la concentración de microorganismos por el método de la cámara de Neubauer la
misma que resultó un valor de entre 7 y 10 millones de células por cada mililitro como se
muestra en los resultados; es un valor aceptable para el reconteo rápido de microorganismo pero
esto no significó que sea exacto ya que en el procedimiento no se distingue células vivas de
muertas debido a que se utiliza otras técnicas para esta diferenciación, sin embargo al ser uno de
los métodos más rápidos es bastante utilizado e incluso el objetivo fue adquirir más habilidad
para el reconteo de microorganismos en muestras líquidas como se experimentó. Ingrid Carrera
 La cámara de Neubauer tiene muchas limitaciones, ya que no se puede distinguir entre células
vivas y muertas en la observación, lo que afectaría notablemente a los cálculos de crecimiento
microbiano. De acuerdo con la Tabla 4.1-1 se pudo determinar una cantidad considerable de
microorganismos en la cámara de Neubauer, esto como resultado de una dilución de orden 10 -3
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utilizada para realizar la cuantificación de células presentes, se observó un mayor cantidad de

microrganismos en la sección dos ya que esta sección se contabilizó después de una lapso de
tiempo aproximado de 7 minutos con lo cual se concluye que las células de levaduras se
reprodujeron en este lapso de tiempo; en la curva de crecimiento microbiano (Ver anexo 2) se
observa el crecimiento de las células con lo que se concluye que los microorganismos tienen una
reproducción exponencial hasta que llegan a la fase de muerte. Jazmin Guadamud
 En base a las observaciones realizadas en el microscopio sobre la cámara de Neubauer y a los
datos registrados en la tabla 4.1-1, se concluye que la distribución de células en cada cuadrante
no siguió un determinado patrón, contrario a esto se observó que ciertos cuadrantes contenían
más células entre líneas de frontera que otros, además se pudo verificar que el método de conteo
en la cámara de Neubauer fue efectivo para determinar la concentración de los microorganismos
en la muestra líquida calculándose valores aproximados de 7,1x10 5 y 1,07x107 células/ml como
se observa en la tabla 5.1-1. Dayana Borja.
 Se concluye mediante las observaciones realizadas en la cámara de Neubauer que es un método
rápido y simple para el conteo de celular, pero no permite el reconocimiento de células viable y
no viable a menos que se someta a las células a algún tipo de tinción, además se pudo determinar
el crecimiento celular de la levadura en un determinado tiempo como se observa en la tabla 4.1-1
que el total de células en la sección 2 es mayor que en la sección 1 debido que tuvo un mayor
tiempo para la duplicación y mediante la utilización de expresiones matemáticas y características
de diseño de la cámara se pudo determinar la concentración de células en mililitro llegando a la
conclusión que había una mayor concentración de células en la sección número 2 que en la
sección 1 y que la concentración inicial debido al mayor tiempo de duplicación como se dijo
anteriormente. Tatiana Pila Fonseca
 La concentración determinada en la sección 2 (ver Tabla 4.1-1), como se observa es muy alta, lo
cual demuestra como las células se encontraban en la velocidad máxima de crecimiento, se
comprobó el crecimiento de la levadura saccharomyces cerevisiae, mediante el conteo de células
visualizadas por microscopio y determinación de la concentración de células en solución, con la
ayuda de la cámara de Neubauer, concluyéndose que en el conteo realizado se obtuvieron
valores altos, los cuales en otros métodos se determinaban incontables, lo cual muestra la
efectividad de realizar un conteo celular mediante la carama de Neubauer, pero en sí este método
presenta errores aleatorios ya que no permite identificar las células viables de las no viables, por
lo cual se recomienda efectuar una tinción diferencial para optimizar el método. Nicole Plaza
Macias
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8. CUESTIONARIO.

8.1. De donde sale el término 10000, en la ecuación de concentración para la cámara

Neubauner, Explicar con ecuaciones.
 En caso de haber empleado los cuadrantes de 0.04 mm, se calcula en número de células
en 0.1 mm3 con la siguiente ecuación:

Número total de células contadas

Número de células en 0.1 mm3= (2)
Número de cuadros de 1 mm2 en el conteo

 Esto dará el número total de células por 0.1 mm 3 (volumen obtenido de multiplicar el
área de 1mm2 x 0.1mm profundidad de la cámara).
 El número de células por mL se obtendrá de multiplicar el valor obtenido anteriormente
por 10,000, como lo muestra la siguiente ecuación:

Número de células por mL = Número de células en 0.1 mm3 x 10, 000 (3)

 En caso de haber empleado los cuadrantes de 1 mm, se calcula el número de células en

0.1 mm3 con a la siguiente ecuación:

Número total de células contadas

Número de células en 0.1 mm3= ( 4)
Número de cuadros de 1 mm2 en el conteo

 Este valor corresponderá al número total de células en 0.1 mm3. Para obtener el número
por mL, se multiplica por 10,000. (UNAM, 1986)

8.2. Aplicaciones para todos los cuadros de la cámara de Neubauer.

Entre sus aplicaciones tenemos las siguientes:

 Recuento de glóbulos.
 El conteo de espermatozoides.
 Cultivo celular.
 Elaboración de la cerveza.
 Procesamiento celular para el procesamiento posterior.
 Medición de tamaño de celda. (Naga, 2012)
8.3. Ventajas y desventajas del método de recuento por cámara de Neubauer.
 Ventajas
 Conteo rápido de microorganismos.
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 Desventajas
 No se distinguen las celulas muertas de las vivas.
 Células pequeñas son difíciles de distinguir.
 Se requiere tiempo y habilidad.
 Se requiere un microscopio de contaste de fases si las celulas no están teñidas.
 No es buen método para suspensiones muy diluidas (>106 células/mL).
(Rojas,2016)

9. BIBLIOGRAFIA
 Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). 1986. Biología Celular. Manual
de Prácticas. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional
Autónoma de México. pp. 20-28.
 Naga M. (2012). La cuantificación de las células bacterianas o esporas de hongos
mediante el uso de cámara de Neubauer. Investigador Prometeo – SENESCYT.
Universidad Estatal Amazónica Puyo - Ecuador

 Rojas, L. (2016). Microbióloga General. Agencia de Protección Ambiental de los

Estados Unidos (USEPA).
 Laboratory Galssware. (2002). Folleto explicativo de la técnica de recuento en cámara
de Neubauer.pdf
 A.A. (2000). Fórmula cámara de Neubauer. Recuperado de:
https://www.celeromics.com. [Acceso el 24 de Mayo de 2019]

10. ANEXOS
10.1. Diagrama del equipo. (VER ANEXO 1)
10.2. Curva de crecimiento microbiano (VER ANEXO 2)
 ANEXO 1

9.2. Diagrama de equipo

Figura 9.1-2

Fuente: Centro de Biología, UCE

1. Microscopio
2. Gradilla
3. Jeringuilla de insulina
4. Cámara de Neubauer
5. Contador
6. Tubo de ensayo

Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/17/05
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/25/05
Gonzales
Lámina:
Escala: Diagrama de equipo
1
ANEXO 2

9.2. Curva de crecimiento microbiano

Figura 9.1-2 Curva de crecimiento microbiano

Curva de crecimiento microbiano

16.5 16.19
16 15.78
15.5
Ln (celulas)

15

14.5
14.25
14

13.5

13
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Tiempo (min)

Fuente: Centro de Biología, UCE

Tabla 9.1-1: Crecimiento celular en función del tiempo

Concentración Concentración LN
Sección tiempo
[células/ml] [células/ml]
  0 1550000 14.25376549
1 20 7100000 15.77560534
2 40 10750000 16.19041631
Fuente: Centro de Biología, UCE

Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/17/05
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/25/05
Gonzales

Escala: Crecimiento celular en función del tiempo Lámina: 2