LINEA LIQUIDA

ALP 405
C Método cinético optimizado (DGKC y SSCC) a 405 nm,
AA
para la determinación de fosfatasa alcalina

SIGNIFICACION CLINICA Reactivo A con 1 parte de Reactivo B (ej.: 4 ml Reactivo A

La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida + 1 ml Reactivo B).
en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido orto-
fosfórico en medio alcalino. INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
En el adulto proviene en parte del hígado (fracción termoesta- REACTIVOS
ble) y en parte del hueso, sistema reticuloendotelial y vascu- Cuando el espectrofotómetro es llevado a cero con agua
lar (fracción termolábil), dando lugar a distintas isoenzimas. destilada, lecturas de absorbancia del Reactivo único (pre-
La actividad sérica de fosfatasa alcalina ósea, en condi- mezclado) superiores a 0.900 D.O. son indicio de deterioro
ciones normales, alcanza su mayor actividad en los niños del mismo.
en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles
del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los PRECAUCIONES
osteoblastos (relacionados con la calcificación y formación Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
de estructuras óseas). También es fisiológico el aumento Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
que se produce al final del primer trimestre del embarazo, a de trabajo en el laboratorio de química clínica.
expensas de la isoenzima placentaria que en este período Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
alcanza niveles máximos (aproximadamente el doble de los acuerdo a la normativa local vigente.
valores normales).
Entre las patologías que afectan la actividad sérica de fos- ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
fatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas metastásicos ALMACENAMIENTO
en hígado y en hueso (productores de enzima), colestasis Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
biliar, fenómenos osteoblásticos, trastornos de malabsorción hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Una vez
acompañados de lesiones ulcerosas (donde la deficiencia abiertos, no deben permanecer destapados y fuera del refri-
de vitamina D produce osteomalacia con el consecuente gerador por períodos prolongados. Evitar contaminaciones.
aumento de fosfatasa alcalina ósea) e incluso lesiones en Reactivo único (premezclado): estable 1 mes en refrigera-
vías de reparación tales como infarto agudo de miocardio, dor (2-10oC) a partir de la fecha de su preparación.
infarto pulmonar o renal.
MUESTRA
FUN­DA­MEN­TOS DEL ME­TO­DO Suero o plasma heparinizado
La fosfatasa alcalina (ALP o monoéster ortofosfórico fosfohi- a) Recolección: se debe obtener suero de la manera usual.
drolasa, EC. 3.1.3.1.) hidroliza al p-nitrofenilfosfato (p-NFF), b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
que es incoloro, produciendo fosfato y p-nitrofenol a pH ma, debe usarse heparina como anticoagulante.
alcalino. La velocidad de aparición del anión p-nitrofenolato c) Sustancias interferentes conocidas:
(amarillo) a 405 nm, es proporcional a la actividad enzimática - No se observan interferencias por bilirrubina hasta 16 mg/dl,
de la muestra. lípidos hasta 1000 mg/dl de triglicéridos, ni heparina hasta
50 UI/ml.
RE­AC­TI­VOS PRO­VIS­TOS - Hemólisis moderadas (hasta 200 mg/dl) no producen in-
A. Reactivo A: solución de buffer DEA (dietanolamina), terferencias pero hemólisis muy intensas pueden producir
conteniendo sales de magnesio. variaciones en los resultados.
B. Reactivo B: solución conteniendo p-nitrofenil fosfato Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
(p-NFF). drogas en el presente método.
Concentraciones finales d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
DEA........................................................................ 1,0 mol/l emplear suero preferentemente fresco. En caso de no
Mg....................................................................... 0,5 mmol/l efectuarse el ensayo dentro de las 6 horas posteriores a su
p-NFF................................................................... 10 mmol/l obtención, la muestra debe conservarse congelada (-20ºC).

INSTRUCCIONES PARA SU USO MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

Reactivos Provistos: listos para usar. Estos pueden usarse - Espectrofotómetro.
separados o como Reactivo único, mezclando 4 partes de - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas. METODO DE CONTROL DE CALIDAD
- Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada. Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
- Cronómetro. (Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de
fosfatasa alcalina, con cada determinación.
CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 405 nm VALORES DE REFERENCIA
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC. Ver los VALORES En adultos normales (edades entre 20 y 60 años) se obser-
DE REFERENCIA correspondientes a cada temperatura. van los siguientes rangos:
- Tiempo de reacción: 3 minutos y 20 segundos
- Volumen de muestra: 10 ul Temperatura 25oC 30oC 37oC
Los volúmenes de muestra y de Reactivo pueden variarse Valores en
proporcionalmente, sin que se alteren los factores de cálculo. adultos (U/l) 40-190 45-213 65-300

Debido al proceso osteoclástico, la isoenzima ósea se en-

PRO­CE­DI­MIEN­TO I cuentra aumentada en la niñez y adolescencia (hasta los 18
años, aproximadamente) proporcionando valores de fosfata-
TECNICA CON REACTIVO UNICO
sa alcalina más elevados que en los adultos. En condiciones
En una cubeta mantenida a la temperatura de reacción
normales se consideran los siguientes valores límites:
seleccionada colocar:
Temperatura 25oC 30oC 37oC
Reactivo único 1,0 ml
Preincubar unos minutos. Luego agregar: Valores en niños y
adolescentes (U/l) hasta 400 hasta 450 hasta 645
Muestra 10 ul
La IFCC recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el
valores de referencia eligiendo grupos de personas en base a
cronómetro. Esperar 20 segundos y leer la absorbancia
criterios establecidos, acorde con el contexto de su población.
inicial. Registrar la absorbancia luego de 1, 2 y 3 minutos
de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
de Absorbancia/min (∆A/min), restando cada lectura de la
ALP (U/l) x 0,017 = ALP (ukat/l)
anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio
para los cálculos.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Los anticoagulantes comunes (tales como EDTA disódico,
CALCULO DE LOS RESULTADOS
oxalato, citrato o fluoruro) producen inhibición de la actividad
Fosfatasa alcalina (U/l) a 405 nm = ∆A/min x 5.460
de fosfatasa alcalina.
El reactivo puede colorearse en presencia de trazas de
soluciones de limpieza a base de hipoclorito. Asegurarse
PROCEDIMIENTO II
de enjuagar abundantemente con agua desmineralizada
TECNICA CON REACTIVOS SEPARADOS todo el material que pueda estar en contacto con hipoclorito,
En una cubeta mantenida a la temperatura de reacción incluyendo las agujas y conexiones de los analizadores,
seleccionada colocar: cuando se emplea la técnica automática.
Reactivo A 1,0 ml
PERFORMANCE
Muestra 10 ul Los ensayos fueron realizados en analizador Express Plus(*)
Preincubar unos minutos. Luego agregar: a) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento
EP15-A del CLSI (ex-NCCLS), se obtuvo lo siguiente:
Reactivo B 0,25 ml
Precisión intraensayo
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el Nivel D.S. C.V.
cronómetro. Esperar 20 segundos y leer la absorbancia 119 U/l ± 2,6 U/l 2,2 %
inicial. Registrar la absorbancia luego de 1, 2 y 3 minutos 347 U/l ± 2,6 U/l 0,7 %
de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio
Precisión total
de Absorbancia/min (∆A/min), restando cada lectura de la
Nivel D.S. C.V.
anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio
119 U/l ± 2,9 U/l 2,4 %
para los cálculos.
347 U/l ± 3,2 U/l 0,9 %
b) Linealidad: la reacción es lineal hasta 1.500 U/l. Para
CALCULO DE LOS RESULTADOS valores superiores debe repetirse la determinación, previa
Fosfatasa alcalina (U/l) a 405 nm = ∆A/min x 6.812 dilución del suero 1/5 ó 1/10 con solución fisiológica. Corregir

(*)
Marca registrada de Ciba Corning Diagnostics
los cálculos multiplicando por el factor de dilución empleado. - NCCLS document "Evaluation of Precision Performance of
c) Límite de detección: el mínimo cambio de actividad de- Clinical Chemistry Devices", EP5-A (1999).
tectable de ALP que puede distinguirse de cero es de 18 U/l. - NCCLS document "Evaluation of Linearity of Quantitative
Analytical Methods", EP5-A (1986).
PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Para las instrucciones de programación consulte el manual AACC Press, 4th ed., 2001.
del usuario del analizador en uso.

PRE­SEN­TA­CION
Equipo para 100 ml conteniendo:
- 4 x 20 ml Reactivo A
- 1 x 20 ml Reactivo B
(Cód. 1361402)
Equipo para 100 ml conteniendo:
- 4 x 20 ml Reactivo A
- 1 x 20 ml Reactivo B
(Cód. 1009241)
Equipo para 125 ml conteniendo:
- 5 x 20 ml Reactivo A
- 2 x 12,5 ml Reactivo B
(Cód. 1009301)
Equipo para 200 ml conteniendo:
- 4 x 40 ml Reactivo A
- 1 x 40 ml Reactivo B
(Cód. 1361403)
Equipo para 200 ml conteniendo:
- 8 x 20 ml Reactivo A
- 2 x 20 ml Reactivo B
(Cód. 1009602)
Equipo para 200 ml conteniendo:
- 8 x 20 ml Reactivo A
- 2 x 20 ml Reactivo B
(Cód. 1009909)
Equipo para 100 ml conteniendo:
- 4 x 20 ml Reactivo A
- 2 x 10 ml Reactivo B
(Cód. 1009809)

BI­BLIO­GRA­FIA
- Bessey, O.A. ; Lowry, O.H. y Brock, M. . - J. Biol. Chem.
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- Bowers, G.N. Jr. and Mc Comb, R.B. - Clin. Chem. 12:70 (1966).
- Mc Comb, R.B.; Bowers, G.N. Jr - Clin. Chem. 18/2:97 (1972).
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tee - Clin. Chim. Acta 96/1-2: 157 (1979).
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- Demaría, I.; Setta, F.; Lorenzo, L. - Rev. Asoc. Bioq. Arg. 54/3 (1990).
- Schlebusch, H.; Rick, W.; Lang, H. and Knedel, M. - Dtsch.
Med. Wschr. 99:765 (1974).
- Rick, W. - Klinische Chemie und Mikroskopie, p.294, 6th
ed., Springer Verlag, Berlin (1990).
Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar

Wiener lab.
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 4386/01
PM-1102-151 2000 Rosario - Argentina