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Apositos Bioactivos

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ARTICULO

Apósitos bioactivos para heridas en forma de 3D sintetizados a partir de celulosa


bacteriana: efecto sobre la adhesión celular de alcohol polivinílico integrado in situ
Introducción
Las úlceras y quemaduras de la piel a menudo resultan en daños extensos a las capas de la
piel [1]. Significativamente, las quemaduras inducen alteraciones anatómicas, fisiológicas,
endocrinológicas e inmunológicas [2]. Solo en los Estados Unidos, más de dos millones de
lesiones por quemaduras por año son sometidas a intervención médica. La mayoría de estas
lesiones son leves; sin embargo, aproximadamente 20,000 pacientes sufren quemaduras
graves que requieren ingreso a unidades especializadas [3]. La mayoría de las heridas por
quemaduras se tratan con gasa estéril, solución salina y profilaxis tópica [4]. Sin embargo,
estos tratamientos no son completamente efectivos para el alivio del dolor, la hidratación y
la protección [5].
Se han desarrollado apósitos modernos para heridas para facilitar las funciones en el área de
la herida. Estos apósitos están diseñados para prevenir la deshidratación de la herida,
promover la curación [6] y reducir las respuestas inflamatorias e inmunitarias [7–12]. Los
apósitos modernos para heridas se clasifican en pasivos, interactivos o bioactivos [6]. El
único papel de los apósitos pasivos es la protección, mientras que los apósitos interactivos
promueven la curación a través de un ambiente húmedo de la herida. Sin embargo, los
apósitos interactivos no solo mantienen un ambiente húmedo sino que también interactúan
con los componentes del lecho de la herida para mejorar aún más la cicatrización [6, 13-
15].
En las aplicaciones de apósitos para heridas, existe una necesidad imperiosa de desarrollar
biomateriales de hidrogel biocompatibles [16]. En este contexto, la biocompatibilidad se
refiere a la capacidad de desempeñarse con una respuesta adecuada del huésped en la
aplicación dada [17-19]. Para este propósito, los hidrogeles son ideales ya que pueden
absorber más del 70% en peso de su peso seco en agua [8].
Varios estudios han destacado el uso de alcohol polivinílico (PVA), celulosa bacteriana
(BC) y sus compuestos en aplicaciones biomédicas, incluidos los andamios para ingeniería
de tejidos, válvulas cardíacas, cartílago articular y córneas artificiales [20–22]. De hecho,
los nanocompuestos PVA / BC se han adaptado para adaptarse a las propiedades de la piel,
donde BC y PVA imitan el colágeno y la elastina por su papel en los tejidos blandos
naturales [23]. Además, los biomateriales PVA / BC se pueden formar en guantes, máscaras
y redes portátiles debido a la conformabilidad de BC durante su fermentación [1]. Los
apósitos para heridas en forma proporcionan un alto grado de adherencia a los tejidos que
rodean una lesión, evitando su desprendimiento en áreas que están sujetas a movimiento
(por ejemplo, torso, manos y cara) [11].
Dos enfoques principales que se utilizan hacia los nanocompuestos PVA / BC incluyen el
procesamiento in situ y ex situ [23, 24]. A diferencia de la síntesis ex situ, los biomateriales
nanocompuestos desarrollados mediante fermentación in situ favorecen la distribución
homogénea del material, lo que promueve una serie de propiedades sinérgicas [25]. En este
caso, se requiere reticulación para limitar la solubilización de la matriz. Recientemente, se
desarrolló un nanocompuesto PVA / BC in situ mediante reticulación física (Castro et al.).
Este tipo de reticulación evita el uso de compuestos tóxicos, incluidos los reticuladores
químicos [26], algunos de los cuales se sabe que son cancerígenos y neurotóxicos [27]. Los
nanocompuestos PVA / BC in situ desarrollados hasta ahora presentan una morfología
altamente porosa y percolada; sus propiedades químicas, mecánicas y térmicas los hacen
apropiados como biomateriales [20, 26, 28–31]. Sin embargo, cualquier aplicación
biomédica exige evaluaciones in vitro, que están disponibles para los biomateriales BC para
los apósitos para heridas [32-35]; sin embargo, hasta donde sabemos, no existen informes
en este contexto para los nanocompuestos de PVA / BC obtenidos mediante fermentación
in situ.
Por lo tanto, este estudio evalúa el rendimiento morfológico, mecánico, de adsorción de
agua y in vitro (adherencia y migración celular) de nanocompuestos de PVA, BC y PVA /
BC para el vendaje de heridas. Nuestros esfuerzos incluyeron la clasificación de los
materiales desarrollados en apósitos para heridas actualmente aceptados. Los resultados
indican posibilidades para el manejo del exudado y el uso de BC como vendaje bioactivo
para heridas que facilita la regeneración celular de la piel.
2. Materiales y métodos
2.1. Materiales
Glucosa (PubChem CID: 64689), extracto de levadura, peptona, hidrógeno fosfato disódico
(PubChem CID: 24203), ácido cítrico (PubChem CID: 311), hidróxido de potasio
(PubChem CID 14797), caucho de silicio y PVA (peso molecular 89000– 98000 y 99 +%
de hidrólisis, PubChem CID 11199) fueron adquiridos de Sigma-Aldrich. La celulosa
bacteriana fue producida por Komagataeibacter medellinensis [36, 37]. Su análisis
elemental incluyó carbono (44.2 ± 1.6%), hidrógeno (6.3 ± 0.25%) y nitrógeno (0.39 ±
0.04%) [37]. El contenido de nitrógeno se relaciona con los aminoácidos de las bacterias
residuales después de la purificación. El índice de cristalinidad BC es ~ 0.65, con una
relación Iα / Iβ de ~ 0.74, lo que indica el enriquecimiento del polimorfo Iα [38]. El medio
Eagle modificado de Dulbecco, el suero de ternera fetal y los fibroblastos en cultivo
primario se emplearon para el cultivo celular. Todos los reactivos fueron de grado analítico.
Los fibroblastos fueron amablemente donados por el Grupo de Ingeniería de Tejidos y
Terapias Celulares, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.
2.2. Celulosa bacteriana
Para producir el biomaterial BC, 90 ml de medio de cultivo Hestrin & Schramm (HS) [39]
se ajustó a pH = 3,6 con ácido cítrico y luego se esterilizó en autoclave a 15 psi durante 15
min. Después de alcanzar la temperatura ambiente, el medio de cultivo se inoculó con 10
v / v% de Komagataeibacter medellinensis [37] y se distribuyó en una placa de poliestireno
de seis pocillos. La fermentación se llevó a cabo durante 7 días a 28 ° C, después de lo cual
se extrajo el biomaterial BC y se purificó con 5% en peso de solución de KOH a
temperatura ambiente durante 14 h seguido de enjuague continuo con agua desionizada
hasta pH = 7.0. El material resultante se esterilizó en autoclave (121 ° C durante 15
minutos) para su uso posterior.
2.3. Nanocompuestos PVA y PVA / BC
El método para producir el nanocompuesto PVA / BC incluyó PVA (concentración de 5%
en peso) que se solubilizó en medio de cultivo acuoso (90 ° C y 1000 rpm) durante 20
minutos, se esterilizó y luego se inoculó con 10% v / v de Komagataeibacter medellinensis ,
distribuido en placas de Petri, e incubado durante 15 días a 28 ° C. Estas condiciones
fueron optimizadas en nuestros esfuerzos anteriores [26]. El biomaterial obtenido se
reticuló físicamente en un secador de bandeja a granel Labconco FreeZone a presión
atmosférica utilizando seis ciclos de congelación / descongelación entre 20 ° C y -20 ° C
utilizando una velocidad de calentamiento / enfriamiento de 0.1 ° C / min y un tiempo de
mantenimiento de 6 h . La cantidad relativa de PVA / BC en el nanocompuesto fue de
aprox. 80/20% en peso. La purificación de todos los biomateriales se realizó como se
describe para BC. Después de alcanzar un pH = 7.0, y para esterilizar los biomateriales
PVA y PVA / BC para el cultivo celular, se secaron al horno durante la noche a 50 ° C, se
cortaron en discos para encajar en los pocillos de la placa de poliestireno y se esterilizaron
con óxido de etileno. .
2.4. Morfología Compuesta
Se usó microscopía electrónica de barrido (SEM) para examinar la microestructura de los
biomateriales. Las muestras se hincharon en agua destilada hasta el equilibrio y luego se
deshidrataron por liofilización; una vez secos, se revistieron con oro (12 nm de grosor)
usando un dispositivo de recubrimiento por pulverización iónica y se observaron con un
microscopio electrónico Jeol JSM 5910 LV operado a 10 kV a 200, 1000 y 5000x.
2.5. Resistencia mecánica húmeda
El módulo de Young y la resistencia a la tracción de los biomateriales (BC, PVA y PVA /
BC) en condiciones húmedas se evaluaron en aire utilizando una máquina de prueba
universal Instron 5582, equipada con una celda de carga de 50 N con una velocidad de
cruce de 12.5 mm / min. Para la prueba, se utilizaron tiras con forma de mancuerna (taco:
ancho 5 mm × largo 18 mm). Los datos de tracción mecánica se recogieron para 7 muestras
diferentes por tipo de biomaterial. El módulo de Young y la resistencia a la tracción se
determinaron de acuerdo con el método de prueba estándar ASTM D882 para las
propiedades de tracción de láminas de plástico delgado en la pendiente inicial.
2.6. Hinchazón
La relación de hinchamiento del biomaterial es relevante para caracterizar la cantidad de
nutrientes disponibles para las células y los productos de migración celular [8]. Las
mediciones de hinchamiento se llevaron a cabo siguiendo la metodología reportada por
Chang et al. [40] Para alcanzar el equilibrio de hinchamiento, los biomateriales PVA y
PVA / BC se hidrataron en agua destilada durante más de 2 semanas a temperatura
ambiente. La relación equilibrio-hinchazón se determinó experimentalmente como
porcentaje de hinchazón (S%) usando

donde y son el peso del gel hinchado y el material seco (secado a 70 ° C y 0,7 bar de vacío)
medido a temperatura ambiente. Todas las mediciones se registraron por triplicado. La
cinética de la absorción de agua se determinó con muestras que se retiraron del agua a
intervalos de tiempo regulares. El peso de cada muestra fue gravimétricamente registrado.
Antes de las mediciones, las superficies del biomaterial se limpiaron con papel de filtro
para eliminar el agua superficial. El peso de la muestra se registró como el valor promedio
de tres mediciones. Los resultados se expresan como absorción de agua (W u ) y calculado
siguiendo

donde Wt es el peso del gel hinchado en agua destilada a tiempo a temperatura ambiente.
2.7. Célula Adhesión
Los biomateriales estériles BC, PVA y PVA / BC se colocaron en una placa de seis pocillos
para cultivo celular y se hidrataron durante 4 días con medio Eagle modificado de Dulbecco
(DMEM) y suero de ternera fetal (FCS) al 10% v / v. Después del cuarto día, se
intercambió el medio y se sembraron 50,000 fibroblastos por pocillo en la superficie del
biomaterial. El tiempo de incubación fue de 8 días, con cambios medios cada cuatro días.
Los fibroblastos, que estaban presentes en grandes cantidades en la piel, fueron elegidos
para realizar la prueba. Son responsables de la regeneración de las células de la piel y se
utilizan para analizar biomateriales en busca de sustitutos de la piel [11, 33, 41, 42]. Para
controlar la adhesión celular, los biomateriales se tiñeron con hematoxilina-eosina y se
tomaron imágenes con un microscopio Leica y una cámara micrométrica. Además, el
biomaterial basado en BC se tiñó con bromuro de etidio, y las imágenes de fluorescencia se
registraron usando un microscopio Leica a 40x y 100x y un Moticam (Motic) de 10
megapíxeles.
2.8. Viabilidad celular
El número de células viables se cuantificó a lo largo del tiempo de incubación mediante el
ensayo MTT (bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazolio). Este ensayo se
basa en el hecho de que solo las células vivas pueden reducir el bromuro de 3- (4,5-
dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT) a formazan [43]. El protocolo se realizó
según lo descrito por Weniger et al. [44] Brevemente, a los 4 y 8 días de incubación, el
biomaterial BC se cortó en cubos pequeños, para adaptarse a las dimensiones de una placa
de microtitulación de 96 pocillos. A cada pocillo, se añadieron 90 µL de DMEM y 10 µL
de MTT 0.5% p / v. A continuación, la placa se incubó a 30 ° C y 70 rpm durante 3 h. Los
cristales de formazán insolubles formados se disolvieron en 100 µL de isopropanol durante
20 h y se midieron espectrofotométricamente en un lector de ensayo de inmunosorbente
ligado a enzimas (MultiskanGO, Thermo Scientific) a una longitud de onda de 570 nm. El
número de células por biomaterial se estableció totalizando el número de células por pieza
de biomaterial. Antes del ensayo, se desarrolló una curva de calibración utilizando 8
diluciones sucesivas hasta la mitad de la concentración inicial, comenzando desde 50,000
células viables y siguiendo el procedimiento descrito anteriormente. Los resultados se
compararon con el pozo de poliestireno de Corning (control), que es el sustrato de
referencia para el mantenimiento celular. Las pruebas se llevaron a cabo por triplicado en
dos momentos independientes.
2.9. Histología
El procedimiento histológico se realizó para evaluar la adhesión cruzada de fibroblastos
humanos dentro del biomaterial basado en BC. Las muestras obtenidas después de 16 días
de cultivo celular se colocaron en un procesador de tejidos (Thermo Scientific) durante 12
ha temperatura ambiente. Para deshidratar las muestras, se utilizaron los siguientes
solventes: formaldehído neutro, isopropanol entre 50 y 80% v / v, isopropanol puro, xiloles
puros y parafina a 60 ° C (1: 3: 3: 3: 2). Después de 12 h, los biomateriales se incrustaron
en un bloque de parafina a 56 ° C y se cortaron usando un microtomo (Leica) para producir
secciones transversales de 1 µm de espesor. Las secciones se tiñeron con hematoxilina-
eosina y las imágenes se registraron usando un microscopio Olympus (100x).
2.10. Moldeado 3D para apósitos
Los guantes fueron desarrollados a partir de BC. Para esto, se usó un molde permeable al
oxígeno que comprende caucho de silicio. Se cubrió un guante de nitrilo con caucho de
silicio catalizado y se dejó durante 24 h para vulcanizar el silicio; A continuación, el guante
de goma de silicona no estaba moldeado. El molde de silicio se esterilizó, se llenó con 500
ml de medio de cultivo HS y se inoculó al 10% v / v con Komagataeibacter medellinensis,
y el sistema se incubó a temperatura ambiente durante 10 días; luego, el apósito con forma
de guante de BC se desmoldeó y purificó como se explicó en secciones anteriores para BC.
3. Resultados y discusión
3.1. Morfología Biomaterial
La morfología de los biomateriales se relaciona con su idoneidad para la adhesión celular y
la biocompatibilidad. BC presenta una estructura fibrilar, mientras que las características de
poro son típicas en PVA y PVA / BC. La microestructura BC muestra una red porosa
abierta (Figura 1 BC a 5000x), que comprende nanoribones interconectados, de 50–70 nm
de ancho, similar a las fibrillas de colágeno en la matriz extracelular (ECM) [17, 45]. En el
caso de los compuestos de PVA / BC, la estructura de fibrillas de BC está cubierta por PVA
(Figura 1), que resulta del hecho de que la celulosa actúa como elemento de nucleación
para el biopolímero de PVA. De esta manera, los cristales de PVA crecen desde los
nanoribones BC hacia los espacios libres [46] (Figura 1, PVA / BC).
Microestructura de los biomateriales secos obtenidos de
PVA, nanocompuesto de PVA / BC y BC según lo
evaluado mediante micrografías electrónicas de barrido
a diferentes aumentos (200 y 5000x).

La morfología, incluida la textura y el tamaño de los


poros, afecta la adsorción y adhesión de proteínas y, en consecuencia, el anclaje celular
[47]. Los nanocompuestos secos de PVA / BC presentaron poros grandes y cerrados, ca. 2
µm de tamaño, mientras que el PVA exhibió poros abiertos (1 µm de tamaño, ver Figura 1).
Estos resultados están relacionados con la separación de fases durante la congelación-
descongelación [30]. La porosidad abierta es deseable porque permite la migración de
nutrientes dentro del biomaterial y su suplementación a las células. Por lo tanto, en
comparación con los nanocompuestos PVA / BC, se espera que el componente único BC y
PVA exhiban una mayor adhesión celular.
3.2. Propiedades mecánicas húmedas
Las propiedades mecánicas húmedas de los biomateriales BC, PVA y PVA / BC se
presentan como perfiles de tensión-tensión (Figura 2 (a)). Se identificaron hidrogeles con
comportamientos viscoelásticos, similares a los del tejido humano, la piel, el cartílago, etc.
[23]. Esto fue más distintivo para BC (Figura 2 (b)), que mostró una respuesta no lineal
(región de convergencia) como se ha descrito en otra parte [48, 49]. Esta región resulta del
estiramiento gradual de las fibras de celulosa tras la carga, que es análoga a la función de
las fibrillas de colágeno [48].
(a) Curvas de tensión-deformación biomateriales bajo tensión uniaxial en estado
húmedo para los nanocompuestos BC, PVA y PVA / BC, como se indica. (b)
Cinética de la absorción de agua para PVA y PVA / BC nanocompuesto (perfiles de
rehidratación de biomateriales). El contenido de agua se midió gravimétricamente.
Esta respuesta no fue evidente para PVA o PVA / BC, debido a la morfología altamente
enredada que se generó durante la reticulación física [25]. La incorporación de BC
indujo cambios en las propiedades mecánicas de PVA: la pendiente de la zona lineal,
relacionada con la rigidez, aumentó debido a la presencia del refuerzo BC. El módulo
elástico de la piel es ca. 1–3 MPa [50]. En comparación con este valor, los resultados en
la Tabla 1 indican que los biomateriales probados tienen una rigidez similar, lo que se
espera que facilite la comodidad de los pacientes, evitando la concentración de estrés
entre el apósito y el área herida.

Tabla 1. Propiedades mecánicas de los biomateriales en estado húmedo: módulo


de Young y resistencia a la tensión bajo tensión uniaxial (la prueba se realizó en el
aire). También se incluye la hinchazón del biomaterial, la hinchazón (%), el
contenido de agua (% en peso), el tiempo para alcanzar el equilibrio (h) y el
espesor húmedo (mm). La hinchazón biomaterial, la hinchazón como porcentaje,
se calculó de acuerdo con (1). El tiempo para alcanzar el equilibrio de
hinchamiento se determinó cuando se registraron cambios de masa de menos del
1% en peso. El espesor húmedo se informa en milímetros.
Los valores de resistencia a la tracción y el módulo de Young de los biomateriales se
resumen en la Tabla 1. La inclusión de BC en PVA aumentó el módulo de Young, lo
que indica un endurecimiento de la matriz. Este comportamiento fue el resultado de una
buena transferencia de tensión tras la incorporación de la red tridimensional de
nanoribones BC en PVA [25, 26, 51]. La máxima resistencia a la tracción del
biomaterial está influenciada por la presencia de agua, que interfiere en la interacción
de las cadenas de polímeros [52]. La resistencia a la tracción de PVA se redujo
mediante la incorporación de BC. Esto se explica por el hecho de que, en estado
húmedo, BC actúa como un concentrador de tensiones, debido a la interferencia del
agua ubicada entre la matriz y el refuerzo, en las interfaces en el compuesto [52].
El módulo de un joven de ca. Se midieron 3 MPa para los hidrogeles BC, de acuerdo
con otros informes [53, 54]. Los nanoribones están vinculados al agua a granel [8];
Además, según Konidari et al., el agua induce cambios en las propiedades mecánicas de
los polímeros semicristalinos debido a la plastificación de las regiones amorfas y la
posible destrucción parcial de las cristalinas [55]. A pesar de la pérdida de rendimiento
mecánico (resistencia a la tracción) en presencia de agua, la morfología del hidrogel es
deseable para la regeneración celular, ya que imita la morfología del colágeno [11] y,
según Bäckdahl et al. y Fu et al., este tipo de efecto es beneficioso para la formación de
capas celulares en el biomaterial [53, 54].
3.3. Hinchazón
La Figura 2 (b) ilustra el comportamiento de hinchamiento del nanocompuesto PVA y
PVA / BC, incluyendo su porcentaje de hinchamiento, contenido de agua, tiempo para
alcanzar el equilibrio de hinchamiento y espesor húmedo. PVA y PVA / BC presentaron
ca. 300% de hinchazón, lo que indica que el refuerzo de PVA con BC no afectó su
capacidad de absorber agua. BC tiene una gran capacidad para retener agua (99 ±
0.04% en peso), equivalente a una hinchazón relativa de ca. 7000%. La capacidad de
retención de agua en los biomateriales es importante porque determina la cantidad de
nutrientes disponibles para las células [8]. En consecuencia, estos resultados indican la
posibilidad de una extensa adhesión celular.
Con respecto a la cinética de la absorción de agua, el equilibrio de hinchamiento para
los biomateriales PVA y PVA / BC no se ve afectado por la inclusión de BC
(aproximadamente 67% en peso de contenido de agua) (Tabla 1). PVA / BC alcanzó el
equilibrio en 1 h, mientras que PVA tomó 5.5 h. Sin embargo, en comparación con el
PVA, la tasa de absorción de agua es mayor para los nanocompuestos PVA / BC. Este
comportamiento está relacionado con el grosor del biomaterial (Tabla 1), que afecta la
difusión del agua, como se describe en la segunda ley de Fick [56]. El grosor del
nanocompuesto es difícil de controlar en la metodología in situ porque depende del
número de bacterias viables en la interfaz aire-líquido. Notamos que la inflamación de
BC ocurre durante la fermentación, y la rehidratación es limitada después de que el
material se haya secado, debido al fenómeno de "hornificación" [57].
3.4. Adhesión celular in vitro
Los resultados para la adhesión celular en los biomateriales se muestran en la Figura 3.
Se observó adhesión para PVA, PVA / BC y BC. Para el nanocompuesto PVA / BC, los
poros cerrados afectaron la adhesión de fibroblastos en el biomaterial. Esto es probable
porque la absorción y la adhesión de proteínas se ven obstaculizadas por la
disponibilidad reducida de nutrientes [47]. Además, las células ancladas apenas en PVA
y PVA / BC, como se observa en la Figura 3. En ambos casos, el número de células fue
bajo en comparación con BC; de 50000 células sembradas solo se detectaron unas
pocas. El ensayo MTT no reveló ningún cambio significativo.

Adhesión celular in vitro en biomateriales, tiempo de incubación de tinción con


hematoxilina-eosina de 8 días. (a) PVA, (b) PVA / BC, y (c) BC. Imágenes tomadas a
40x. Las flechas blancas indican la presencia de células. Densidades celulares: PVA y
PVA / BC no detectables; BC 56934 ± 4657. Imágenes fluorescentes de fibroblastos en
BC, (d) cuarto día y (e) octavo día. Tinte: bromuro de etidio, el núcleo celular es más
brillante que el citoplasma. Token de imágenes a 40x. Los fibroblastos aumentan su
número en BC. Al cuarto día, las células se extienden sobre la superficie de la
superficie BC. Al octavo día, las células muestran una monocapa confluente en la
superficie del biomaterial. La barra de escala es de 100 µm.
Según fluorescencia
imagenología (ver Figuras 3 (d) y 3 (e)) y la evaluación MTT de fibroblastos humanos
en BC (Tabla 2), las células se adhirieron al biomaterial BC en grandes cantidades.
Células ancladas a BC desde el cuarto día. Al octavo día, era evidente una monocapa de
fibroblastos confluentes en la que las células mostraban una morfología fusiforme. Este
tipo de morfología indica células sanas y un anclaje apropiado en BC [58, 59]. Esto se
explica por la microestructura BC, similar a la del colágeno, y su configuración química
con tres grupos hidroxilo por monómero que interactúan con los sitios polares en la
célula a través de enlaces de hidrógeno [60]. Asimismo, la alta hinchazón de BC y su
porosidad abierta facilitó la sorción del medio de cultivo celular; Estos factores
promovieron el anclaje celular.
tabla 2
Densidad celular en BC con el tiempo.
Se usaron placas para el cultivo celular
de poliestireno como control.

A pesar de la presencia de abundantes grupos hidroxilo en PVA, se evitó la adsorción de


proteínas y la adhesión celular [61]. En BC, los fibroblastos se adhirieron, un fenómeno que
no ocurrió en PVA / BC (ver Figura 3). Por lo tanto, PVA / BC puede utilizarse mejor
como apósitos interactivos donde no se requiere adhesión celular, o incluso no es deseada
[14]. Sin embargo, de acuerdo con los resultados de la hinchazón, estos biomateriales
controlan la humedad, es decir, controlan el exudado, sin interactuar directamente con el
lecho de la herida (células). Otras posibles aplicaciones biomédicas del nanocompuesto
PVA / BC incluyen el desarrollo de implantes de duramadre, sistemas de administración de
fármacos e inmovilización de proteínas [62-64]. En estas aplicaciones no se requiere
adhesión celular.
3.5. Viabilidad celular
La viabilidad celular es una prueba crítica para los apósitos para heridas, ya que interactúan
con las células y promueven el movimiento celular al sitio de la lesión [65]. La Tabla 2
muestra los resultados de la prueba de viabilidad MTT.
El número de células viables en BC en el día 8 fue similar al del control. Sin embargo, las
células en BC aumentan en su número más rápido que en el control; del día 4 al 8, las
células en BC aumentaron cuatro veces en número. Este efecto puede atribuirse a la
microestructura BC y su química de superficie [60], como se explicó anteriormente. El
hecho de que los fibroblastos sean viables en la BC significa que este biomaterial no
interfiere en el ciclo celular, lo que hace que la BC sea adecuada para la regeneración de las
células de la piel como un vendaje bioactivo [6]. Este resultado está de acuerdo con las
imágenes fluorescentes (véanse las Figuras 3 (d) y 3 (e)): se observó una buena adhesión en
BC desde el día 4; en el día 8, se observó una monocapa de fibroblastos como una
morfología fusiforme y confluente [32].
3.6. Histología
La Figura 4 (a) muestra la vista lateral de una monocapa de fibroblastos en BC. Indica que
no migraron a través del biomaterial, ya que el tamaño de poro del BC es c.a. 1 µm de
tamaño y las células tienen un tamaño promedio de 40 µm [66]. Sin embargo, se ha
indicado en la literatura que las células pueden empujar los nanoribones BC y migrar
transversalmente [67, 68]. Este fenómeno parecía no ocurrir en este caso debido a la red BC
altamente enredada, que excluía las células por tamaño.

Figura 4
Vendaje para heridas de BC: (a) vista lateral del corte de histología de BC, las células se
adhieren a la superficie del biomaterial (imagen tomada a 100x). (b) Vendaje para heridas
con forma de guante BC (estado de hidrogel) para el tratamiento de lesiones en las manos,
especialmente aquellas que involucran dedos.
Actualmente, la investigación se centra en la creación de microporosidades en Columbia
Británica para mejorar la migración celular; Algunas estrategias notables incluyen la
creación de esponjas, la inclusión de esferas de parafina y el desarrollo de estructuras tipo
capullo [12, 66, 69, 70]. Para el vendaje de heridas, el hecho de que las células no migren
transversalmente en BC puede ser beneficioso, por ejemplo, en la creación de monocapas
de sustitutos de la piel bioingeniería. Según los resultados anteriores, los apósitos para
heridas BC pueden clasificarse como bioactivos; BC es capaz de controlar la humedad
mientras interactúa con las células de la piel. Una aplicación interesante es el desarrollo de
sustitutos de la piel para la ingeniería de tejidos, donde BC puede ser cubierto por las
células de la piel y luego utilizado para tratamientos de heridas [6]. La adición de PVA
generará un apósito para heridas interactivo para el manejo de exudados, donde no se
requieren interacciones con las células.
3.7. Apósito para heridas en forma de guante
Según los resultados presentados para BC, se diseñó un apósito para heridas en forma de
guante para tratar quemaduras y úlceras cutáneas (Figura 4 (b)). Para estos tratamientos, la
alta capacidad de retención de agua de BC y su biocompatibilidad con las células de la piel
son importantes para mantener la herida húmeda y promover la adhesión de fibroblastos,
respectivamente. Todo lo anterior promueve la epitelización y la cicatrización de heridas
[1].
Los beneficios de los apósitos para heridas se pueden ampliar si están hechos de BC.
Además, la producción de apósitos para heridas relacionadas es posible mediante el uso de
bioingeniería de microorganismos, utilizando una plantilla de membrana de caucho de
silicona (permeable al oxígeno). Solo las bacterias (Komagataeibacter medellinensis) junto
a la pared interna del molde tienen acceso al oxígeno y se dividen y producen celulosa. Por
lo tanto, BC se produce solo adyacente al caucho de silicona y se ajustará a la forma del
molde, un guante en este caso. Tales apósitos para heridas pueden usarse como sustitutos de
la piel para áreas difíciles como manos y dedos.
4. Conclusiones
Se aplicó un método fácil, robusto y novedoso hacia los nanocompuestos con celulosa
bacteriana biocompatible (BC) y alcohol polivinílico (PVA) mediante fermentación in situ
y reticulación física sobre la celulosa biosintetizada de Komagataeibacter medellinensis. Se
descubrió que los hidrogeles basados en BC son beneficiosos para la formación de una capa
celular en el biomaterial. BC presentó un alto grado de hinchazón, que es vital para la
adsorción de nutrientes y proteínas de adhesión. La microestructura de PVA y PVA / BC
apenas permitió la adhesión celular. En contraste, los fibroblastos cultivados en BC se
identificaron en gran número, formando morfología fusiforme y confluente. Esta
observación se explica por la similitud de BC con colágeno. Según las pruebas de
viabilidad, los fibroblastos se multiplicaron rápidamente en BC y la monocapa de
fibroblastos no migró significativamente a través del biomaterial. Esto se debe
principalmente a los efectos de exclusión de tamaño; Esto es ventajoso para las monocapas
de bioingeniería de los sustitutos de la piel. De acuerdo con las propiedades presentadas por
BC y aprovechando la bioingeniería de microorganismos, fue posible desarrollar BC en
forma de guante para el vendaje de heridas. Este material puede tener aplicación en el
tratamiento de quemaduras y úlceras en la piel. En conclusión, los nanocompuestos PVA y
PVA / BC se pueden usar si no se requiere adhesión celular, por ejemplo, como vendaje
interactivo para el manejo del exudado. BC es ideal como vendaje para heridas bioactivo
para el desarrollo de sustitutos de la piel con bioingeniería; así, los biomateriales pueden
usarse como apósitos para heridas dependiendo de la situación clínica. La investigación
adicional se centrará en estudios in vivo para validar los sistemas en condiciones reales,
para determinar su seguridad en el uso y su farmacocinética.
Conflictos de interés
Los autores declaran que no existen conflictos de interés con respecto a la publicación de
este documento ni interés financiero en el tema o los materiales discutidos en este
manuscrito. Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a la Universidad Pontificia Bolivariana, CIDI-UPB, Colombia, y
Colciencias, Colombia, por el apoyo financiero que permitió completar esta investigación.

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