Apositos Bioactivos
Apositos Bioactivos
Apositos Bioactivos
donde y son el peso del gel hinchado y el material seco (secado a 70 ° C y 0,7 bar de vacío)
medido a temperatura ambiente. Todas las mediciones se registraron por triplicado. La
cinética de la absorción de agua se determinó con muestras que se retiraron del agua a
intervalos de tiempo regulares. El peso de cada muestra fue gravimétricamente registrado.
Antes de las mediciones, las superficies del biomaterial se limpiaron con papel de filtro
para eliminar el agua superficial. El peso de la muestra se registró como el valor promedio
de tres mediciones. Los resultados se expresan como absorción de agua (W u ) y calculado
siguiendo
donde Wt es el peso del gel hinchado en agua destilada a tiempo a temperatura ambiente.
2.7. Célula Adhesión
Los biomateriales estériles BC, PVA y PVA / BC se colocaron en una placa de seis pocillos
para cultivo celular y se hidrataron durante 4 días con medio Eagle modificado de Dulbecco
(DMEM) y suero de ternera fetal (FCS) al 10% v / v. Después del cuarto día, se
intercambió el medio y se sembraron 50,000 fibroblastos por pocillo en la superficie del
biomaterial. El tiempo de incubación fue de 8 días, con cambios medios cada cuatro días.
Los fibroblastos, que estaban presentes en grandes cantidades en la piel, fueron elegidos
para realizar la prueba. Son responsables de la regeneración de las células de la piel y se
utilizan para analizar biomateriales en busca de sustitutos de la piel [11, 33, 41, 42]. Para
controlar la adhesión celular, los biomateriales se tiñeron con hematoxilina-eosina y se
tomaron imágenes con un microscopio Leica y una cámara micrométrica. Además, el
biomaterial basado en BC se tiñó con bromuro de etidio, y las imágenes de fluorescencia se
registraron usando un microscopio Leica a 40x y 100x y un Moticam (Motic) de 10
megapíxeles.
2.8. Viabilidad celular
El número de células viables se cuantificó a lo largo del tiempo de incubación mediante el
ensayo MTT (bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazolio). Este ensayo se
basa en el hecho de que solo las células vivas pueden reducir el bromuro de 3- (4,5-
dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT) a formazan [43]. El protocolo se realizó
según lo descrito por Weniger et al. [44] Brevemente, a los 4 y 8 días de incubación, el
biomaterial BC se cortó en cubos pequeños, para adaptarse a las dimensiones de una placa
de microtitulación de 96 pocillos. A cada pocillo, se añadieron 90 µL de DMEM y 10 µL
de MTT 0.5% p / v. A continuación, la placa se incubó a 30 ° C y 70 rpm durante 3 h. Los
cristales de formazán insolubles formados se disolvieron en 100 µL de isopropanol durante
20 h y se midieron espectrofotométricamente en un lector de ensayo de inmunosorbente
ligado a enzimas (MultiskanGO, Thermo Scientific) a una longitud de onda de 570 nm. El
número de células por biomaterial se estableció totalizando el número de células por pieza
de biomaterial. Antes del ensayo, se desarrolló una curva de calibración utilizando 8
diluciones sucesivas hasta la mitad de la concentración inicial, comenzando desde 50,000
células viables y siguiendo el procedimiento descrito anteriormente. Los resultados se
compararon con el pozo de poliestireno de Corning (control), que es el sustrato de
referencia para el mantenimiento celular. Las pruebas se llevaron a cabo por triplicado en
dos momentos independientes.
2.9. Histología
El procedimiento histológico se realizó para evaluar la adhesión cruzada de fibroblastos
humanos dentro del biomaterial basado en BC. Las muestras obtenidas después de 16 días
de cultivo celular se colocaron en un procesador de tejidos (Thermo Scientific) durante 12
ha temperatura ambiente. Para deshidratar las muestras, se utilizaron los siguientes
solventes: formaldehído neutro, isopropanol entre 50 y 80% v / v, isopropanol puro, xiloles
puros y parafina a 60 ° C (1: 3: 3: 3: 2). Después de 12 h, los biomateriales se incrustaron
en un bloque de parafina a 56 ° C y se cortaron usando un microtomo (Leica) para producir
secciones transversales de 1 µm de espesor. Las secciones se tiñeron con hematoxilina-
eosina y las imágenes se registraron usando un microscopio Olympus (100x).
2.10. Moldeado 3D para apósitos
Los guantes fueron desarrollados a partir de BC. Para esto, se usó un molde permeable al
oxígeno que comprende caucho de silicio. Se cubrió un guante de nitrilo con caucho de
silicio catalizado y se dejó durante 24 h para vulcanizar el silicio; A continuación, el guante
de goma de silicona no estaba moldeado. El molde de silicio se esterilizó, se llenó con 500
ml de medio de cultivo HS y se inoculó al 10% v / v con Komagataeibacter medellinensis,
y el sistema se incubó a temperatura ambiente durante 10 días; luego, el apósito con forma
de guante de BC se desmoldeó y purificó como se explicó en secciones anteriores para BC.
3. Resultados y discusión
3.1. Morfología Biomaterial
La morfología de los biomateriales se relaciona con su idoneidad para la adhesión celular y
la biocompatibilidad. BC presenta una estructura fibrilar, mientras que las características de
poro son típicas en PVA y PVA / BC. La microestructura BC muestra una red porosa
abierta (Figura 1 BC a 5000x), que comprende nanoribones interconectados, de 50–70 nm
de ancho, similar a las fibrillas de colágeno en la matriz extracelular (ECM) [17, 45]. En el
caso de los compuestos de PVA / BC, la estructura de fibrillas de BC está cubierta por PVA
(Figura 1), que resulta del hecho de que la celulosa actúa como elemento de nucleación
para el biopolímero de PVA. De esta manera, los cristales de PVA crecen desde los
nanoribones BC hacia los espacios libres [46] (Figura 1, PVA / BC).
Microestructura de los biomateriales secos obtenidos de
PVA, nanocompuesto de PVA / BC y BC según lo
evaluado mediante micrografías electrónicas de barrido
a diferentes aumentos (200 y 5000x).
Figura 4
Vendaje para heridas de BC: (a) vista lateral del corte de histología de BC, las células se
adhieren a la superficie del biomaterial (imagen tomada a 100x). (b) Vendaje para heridas
con forma de guante BC (estado de hidrogel) para el tratamiento de lesiones en las manos,
especialmente aquellas que involucran dedos.
Actualmente, la investigación se centra en la creación de microporosidades en Columbia
Británica para mejorar la migración celular; Algunas estrategias notables incluyen la
creación de esponjas, la inclusión de esferas de parafina y el desarrollo de estructuras tipo
capullo [12, 66, 69, 70]. Para el vendaje de heridas, el hecho de que las células no migren
transversalmente en BC puede ser beneficioso, por ejemplo, en la creación de monocapas
de sustitutos de la piel bioingeniería. Según los resultados anteriores, los apósitos para
heridas BC pueden clasificarse como bioactivos; BC es capaz de controlar la humedad
mientras interactúa con las células de la piel. Una aplicación interesante es el desarrollo de
sustitutos de la piel para la ingeniería de tejidos, donde BC puede ser cubierto por las
células de la piel y luego utilizado para tratamientos de heridas [6]. La adición de PVA
generará un apósito para heridas interactivo para el manejo de exudados, donde no se
requieren interacciones con las células.
3.7. Apósito para heridas en forma de guante
Según los resultados presentados para BC, se diseñó un apósito para heridas en forma de
guante para tratar quemaduras y úlceras cutáneas (Figura 4 (b)). Para estos tratamientos, la
alta capacidad de retención de agua de BC y su biocompatibilidad con las células de la piel
son importantes para mantener la herida húmeda y promover la adhesión de fibroblastos,
respectivamente. Todo lo anterior promueve la epitelización y la cicatrización de heridas
[1].
Los beneficios de los apósitos para heridas se pueden ampliar si están hechos de BC.
Además, la producción de apósitos para heridas relacionadas es posible mediante el uso de
bioingeniería de microorganismos, utilizando una plantilla de membrana de caucho de
silicona (permeable al oxígeno). Solo las bacterias (Komagataeibacter medellinensis) junto
a la pared interna del molde tienen acceso al oxígeno y se dividen y producen celulosa. Por
lo tanto, BC se produce solo adyacente al caucho de silicona y se ajustará a la forma del
molde, un guante en este caso. Tales apósitos para heridas pueden usarse como sustitutos de
la piel para áreas difíciles como manos y dedos.
4. Conclusiones
Se aplicó un método fácil, robusto y novedoso hacia los nanocompuestos con celulosa
bacteriana biocompatible (BC) y alcohol polivinílico (PVA) mediante fermentación in situ
y reticulación física sobre la celulosa biosintetizada de Komagataeibacter medellinensis. Se
descubrió que los hidrogeles basados en BC son beneficiosos para la formación de una capa
celular en el biomaterial. BC presentó un alto grado de hinchazón, que es vital para la
adsorción de nutrientes y proteínas de adhesión. La microestructura de PVA y PVA / BC
apenas permitió la adhesión celular. En contraste, los fibroblastos cultivados en BC se
identificaron en gran número, formando morfología fusiforme y confluente. Esta
observación se explica por la similitud de BC con colágeno. Según las pruebas de
viabilidad, los fibroblastos se multiplicaron rápidamente en BC y la monocapa de
fibroblastos no migró significativamente a través del biomaterial. Esto se debe
principalmente a los efectos de exclusión de tamaño; Esto es ventajoso para las monocapas
de bioingeniería de los sustitutos de la piel. De acuerdo con las propiedades presentadas por
BC y aprovechando la bioingeniería de microorganismos, fue posible desarrollar BC en
forma de guante para el vendaje de heridas. Este material puede tener aplicación en el
tratamiento de quemaduras y úlceras en la piel. En conclusión, los nanocompuestos PVA y
PVA / BC se pueden usar si no se requiere adhesión celular, por ejemplo, como vendaje
interactivo para el manejo del exudado. BC es ideal como vendaje para heridas bioactivo
para el desarrollo de sustitutos de la piel con bioingeniería; así, los biomateriales pueden
usarse como apósitos para heridas dependiendo de la situación clínica. La investigación
adicional se centrará en estudios in vivo para validar los sistemas en condiciones reales,
para determinar su seguridad en el uso y su farmacocinética.
Conflictos de interés
Los autores declaran que no existen conflictos de interés con respecto a la publicación de
este documento ni interés financiero en el tema o los materiales discutidos en este
manuscrito. Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a la Universidad Pontificia Bolivariana, CIDI-UPB, Colombia, y
Colciencias, Colombia, por el apoyo financiero que permitió completar esta investigación.