INFORME DE LABORATORIOS

MICROBIOLOGÍA 201504

DAIRON SANCHEZ

TUTOR

MERY LILIANA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

CEAD OCAÑA

24 DE AGOSTO 2020
 INTRODUCCIÓN

La microbiología estudia los microorganismos u organismos generalmente microscópicos,

aunque algunos pueden ser observados a simple vista. Su estudio comprende la identificación y

clasificación de los microorganismos, su origen y evolución, la dinámica del crecimiento, el rol

interactivo de los microorganismos con el sistema inmunológico, las enfermedades que pueden

producir y su importancia en la producción industrial. El presente informe corresponde a las 6

practicas elaboradas correspondientes al componente practico de la asignatura de microbiología,

consta de un análisis individual con respecto a la información adquirida durante el curso.

 COMPONENTE TEMÁTICO

NOMBRE DEL ESTUDIANTE DAIRON SANCHEZ

IDENTIFICACIÓN 1091673957
CENTRO ORIENTE

Práctica 1: Preparación de medios de cultivo.

Práctica 2: Microorganismos del ambiente.

Práctica 3: Técnicas de Tinción

Práctica 4: Siembra de microorganismos

Práctica 5: Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos.

Práctica 6: Control de microorganismos por medio de factores físicos y químicos.

 DESARROLLO COMPONENTE PRACTICO

PRACTICA No. 01. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Temáticas de la práctica Medios de cultivo utilizados en una laboratorio de microbiología

Propósito:

Conocer los principales medios de cultivo, la forma de preparación

y presentación.
Intencionalidades formativas
Objetivo:

Aprender la preparación de los medios de cultivo.

Fundamentación Teórica

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los

microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las
necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen
bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas
sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Informe

Fundamento

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los

microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque

las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco

exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes

que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:

1. un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud),

2. determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los denominados

medios selectivos.

3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test

bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de azúcares, etc.).

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos de

carbono, aminoácidos, vitaminas, etc.) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S, etc.)

2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar), tampones,

indicador de pH, etc.

MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre
el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra,
pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su
desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas
bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma
de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

Medios de cultivo selectivo

son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas del medio o
añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de
especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de
un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo, Agar salado-manitol o Chapman
(permite el crecimiento de ciertos estafilococos).

Medios de cultivo diferencial

son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios géneros y especies de
microorganismos. Por ejemplo, si al medio se le ha añadido un carbohidrato y un indicador y la
bacteria que se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificación del
medio con el consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de Simmons
es un medio cuya única fuente de carbono es el citrato sódico, entonces en él solo crecerán las
bacterias capaces de desarrollarse utilizando como única fuente de carbono ese componente. A
menudo la separación se basa en la diferencia de color de las colonias aisladas, como en el agar
con azul de metileno - eosina que permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metálico)
de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos
en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.

PREGUNTA RESPUESTA
¿Qué es un medio Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de
de cultivo; de qué microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
están compuestos cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en
principalmente; las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
cómo se colonias.
clasifican según
su proporción de Se clasifican de la siguiente manera:
Agar y según su
suministro de Según su origen:
nutrientes?
a) NATURALES: son los que se preparan a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal como extractos de tejidos o
infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.

b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición

química definida. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.

c) SEMISINTÉTICOS: son los sintéticos a los que se les añaden

factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico
complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

Según su consistencia:

1. LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en

solución acuosa.

2. SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido

(caldo) a razón de 15g/litro.

El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono)

que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida
por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo.

3. SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan

para determinar la motilidad de las especies en estudio.
 Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.

Según su composición: A causa de los requerimientos químicos

del mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar
componentes químicos del medio.

a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento

de la mayor parte de los microorganismos poco existentes. Es
el medio más frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas.

Por ejemplo: agar común o caldo común.

b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como

apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un gran
exceso de nutrientes como suplementos nutritivos.

Por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza

para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales.

c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se

consigue alterando las condiciones físicas del medio o
añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos
con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo
crecimiento no interesa.

Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el

crecimiento de ciertos estafilococos).
¿Cuál es el medio Los medios de cultivo acidificados son los que se han usado
de cultivo que se tradicionalmente para el recuento de hongos y levaduras. Su pH es de
emplea para el alrededor de 5 lo que impide el crecimiento de muchas bacterias, aunque
aislamiento de algunos grupos de ellas (como las bacterias acidolácticas) podrían crecer.
hongos y
levaduras?

¿Qué es una Es la reproducción bacteriana o fúngica en agua durante un tiempo.

unidad formado Dependiendo del tipo de bacteria o de cuánta bacteria se espera que haya
de colonia? en la muestra, la muestra de agua se diluirá antes de colocarla en esta
placa.
¿Los Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre
microorganismos substratos nutritivos
pueden vivir de Debe tener las siguientes condiciones
forma indefinida
en un medio de 1.Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los
cultivo? microorganismos (tales como aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes,
vitaminas, minerales).
 2.Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las
bacterias patógenas necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0 –
7.4), en cambio las levaduras y hongos requieren un pH ácido (5.0).

3.Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones asépticas.

4.Estar protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón

cardé, tapones de goma, tapas metálicas o roscas.

PRACTICA No. 02. MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE

Temáticas de la práctica Cultivo de microorganismos presentes en diferentes ambientes

Propósito:

Cultivar microorganismos de diferentes ambientes y realizar una

descripción macroscópica de las colinas que crezcan.

Intencionalidades formativas Objetivos:

Explicar cómo se puede demostrar la presencia de microorganismos

en diferentes sitios.
Describir las características macroscópicas de las colonias
bacterianas.

Fundamentación Teórica

En esta práctica se va a demostrar la presencia de microorganismos en el ambiente que nos rodea. Con
este fin se toman muestras de diferentes sitios y se las siembra en un medio de cultivo que contiene las
sustancias nutritivas que las bacterias necesitan para desarrollarse, se las lleva a incubar a la temperatura
apropiada y se las deja el tiempo necesario para que crezcan y se puedan observar las colonias a simple
vista y así determinar las características macroscópicas de esas colonias.

Para describir lar características macroscópicas se utiliza la siguiente figura:

 Fuente: http://projectomartin.blogspot.com/2012/12/practica-8_9.html

Informe

Se realiza la revisión de cada sitio de toma identificando la cantidad de crecimiento y las

características de las formas, se logra evidenciar en el cabello crecimiento abundante al igual que
en los dedos, pero en sus características notamos diferencias en cuanto a su forma, color, textura,
superficie, elevación y borde, por su parte en los mesones se nota un crecimiento de mucho.
SITIO DE TOMA DE CANTIDAD DE CRECIMIENTO CARACTERÍSTICAS DE LAS
LAS MUESTRAS COLONIAS

Cabello abundante Forma: extendida

Color: incolora

Textura: húmeda y membranosa.

Superficie: rugosa

Elevación: Umbilicada.

Borde: ondulado

Dedos abundante Forma: circular

Color: incolora

Textura: Granular, friable,

húmeda, seca, m.

Superficie: suave, opaca,

resbalosa.

Elevación: Plana.

Borde: regular

Mesón pc mucho Forma: circular y extendida

Color: pigmentada e incolora

Textura: Granular y membranosa.

Superficie: suave y rugosa.

Elevación: Plana, convexa,

Borde: irregular y ondulado

Mesón mucho Forma: circular extendida

Color: pigmentada, incolora

Textura: Granular, friable.

Superficie: suave

Elevación: convexa
 Borde: discreto, regular, entero.

PRACTICA No. 03. SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Temáticas de la práctica Técnicas de siembra básicas en el laboratorio de Microbiología

Propósito:

Conocer las diferentes técnicas de siembra que existen.

Objetivo:
Intencionalidades formativas
Determinar las condiciones necesarias para realizar la siembra de
microorganismos

Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad.

Fundamentación Teórica

Sembrar es colocar una muestra de inóculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los
microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un medio compuesto por
las sustancias que necesitan los microorganismos para crecer. A veces se añaden otras clases de sustancias;
por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podrían contaminar el cultivo. La siembra se
puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con líquidos nutritivos
para los microorganismos.

Si el cultivo bacteriano tiene éxito, crecerán "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias
tienen características de color, forma, tamaño etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a identificarlas.

También se puede someter a las bacterias de las colonias a pruebas bioquímicas o de otro tipo para lograr su
identificación. Algunas bacterias son muy difíciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas,
finalmente, no se han conseguido cultivar.

Informe
Métodos De Siembra De Microorganismos

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio

adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. Una vez
sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

Que se efectúen asépticamente

Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados

Que se realicen solo los manipuleos indispensables

Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un

mechero o bien Flujo laminar.

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del
microorganismo a estudiar.

 Técnica A Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta
parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se
vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto
de la placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.
 Técnica B Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4
estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el procedimiento
hasta agotar la superficie de la placa.

El método por estría es el más fácil y el más utilizado para obtener cultivos axénicos, para ello con
un asa se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la
superficie de un medio sólido, conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se
van depositando en la superficie del medio menos microorganismos los cuales quedan separados
e inmovilizados; después se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas
estrías y se continúa la siembra con la misma técnica en la superficie sin sembrar; repitiendo este
proceso se logra aislar células individuales, a continuación las placas se incuban permitiendo que
las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles.
A continuación, se muestra una imagen de la forma en la que hicimos nuestro estriado para esta
práctica: En el método por extensión en placa, las células microbianas se diluyen en forma seriada
antes de su siembra, las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de
agar y se extienden con ayuda de un asa de Drigalsky de cristal estéril, para esterilizarlas se
sumergen en alcohol y se flamean antes de tener contacto con la muestra diluida. A partir de
colonias separadas suficientemente, es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de
bacterias presentes en la muestra original. El éxito del aislamiento, depende de la superficie sobre
la que se ha distribuido la muestra.

Siembra en medio sólido – Estrías

 PREGUNTA RESPUESTA
los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con
otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman
por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los
microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas,
cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o axénicos). En ocasiones
el estudio molecular conduce a la caracterización de los microorganismos,
aún en poblaciones mixtas. Sin embargo, la identificación bacteriana y la
caracterización completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria
y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar
una bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos
presentes (en una muestra patológica, de agua, de suelo, de alimentos,
¿Qué es un cultivo etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la
mixto? bacteria de interés en cultivo puro.

¿Qué es un cultivo Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente
axénico? de una sola célula. Los cultivos axénicos son muy extraños en la
naturaleza. Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el laboratorio.
A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones
especiales, ya que los microorganismos están por todas partes, en la
naturaleza, en el laboratorio y en los instrumentos y recipientes usados en
los experimentos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes
 deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El
segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir,
una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o líquido,
esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo
microorganismo del resto y se podrá multiplicar en condiciones
favorables. Un clon está constituido por una población de células
descendientes de un solo microorganismo. Una colonia es un clon lo
suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un
medio sólido. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto
tiempo en el mismo tubo o matraz, debe ser transferido a un medio de
cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden
continuar. En esta transferencia se deben considerar dos aspectos
básicos referentes a: no introducir microorganismos
indeseables(contaminantes) y concentración o carga microbiana de la
muestra (inóculo) a sembrar.

¿Qué técnicas  Conteo en placa de Petri. Método más usado para contar
existen para hacer bacterias.
una cuantificación
del crecimiento de
los
microorganismos?
  Conteo por filtración.

 Método del número más probable (NMP)

 Determinación directa por microscopio.
 Método de turbidez.
 Determinación del peso seco en las células.

PRACTICA No. 04. TÉCNICAS DE TINCIÓN

Temáticas de la práctica Tinción simple y tinción diferencial

Propósito:

Realizar diferentes tipos de tinciones para identifcar

microorganismos.

Objetivo:
Intencionalidades formativas
Diferenciar las diferentes técnicas de tinción que habitualmente se
utilizan en un laboratorio de Microbiología.

Observar las bacterias teñidas al microscopio y clasificarlas por su

forma y su reacción a la coloración de Gram.

Fundamentación Teórica

La observación microscópica de las bacterias se facilita cuando han sido coloreadas. Se acostumbra fijar las
bacterias en la lámina portaobjetos para poder teñirlas con facilidad.

La fijación puede hacerse con solventes o con calor. En cualquier caso, se trata e deshidratar la célula y
coagularla con proteínas.

Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o compuestas cuando se utilizan 2 ó
más colorantes. También se puede hacer una coloración negativa en la cual se tiñe el fondo, además de la
bacteria, para poder observar la cápsula.

Informe
Tinción.

Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste
en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se
utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser
observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser
utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de tejido o poblaciones celulares.

Tipos de tinciones:

 Tinción Simple.

Utiliza un solo colorante.

 Tinción Ácido Resistente.

Esta tinción sirve principalmente para clasificar micro bacterias y actinomicetos, que tienen un alto
contenido en lipídico y en ácidos micólicos y que no pueden ser clasificadas por la tinción de Gram.

Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta
tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás
microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

 Tinción de Giensa.

La tinción de Giensa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes

histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Este método tiene utilidad sobre todo para poner de
manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las células huéspedes. El colorante se aplica a un
frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias
núcleos de las células.

 Tinción de Esporas.

Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.

La envuelta de la endospora es más compleja e impermeable que la envuelta de las células

vegetativas en las que se forma. Sólo se puede teñir el contenido de la espora alterando su
envuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endospora se decoloren una vez
teñidas.

El verde de malaquita es un colorante débilmente básico (tiene una carga positiva débil) y, por
tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetra en las células vegetativa. Cuando se calienta la
preparación también penetra las endospora.
  Tinción de Cápsula.

La cápsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide. El tamaño de estas cápsulas
está influenciado por el medio en el que crece la bacteria. En algunos casos el grosor de la cápsula
es sólo una fracción del diámetro de la célula, en otros casos la cápsula es mucho mayor que la
célula. Las cápsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros
organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y además sirven de reservorio
de alimento almacenado.

 Tinción de Flagelos o leifson.

Es una tinción para lograr observar flagelos de bacterias. Es usada en laboratorios, pero no de
rutina. Los pasos que sigue son el de usar pararosanilina sirve como tinción principal, y ácido
tánico es agregado a la solución como mordiente.

Los componentes de la tinción son: Fucsina básica en Alcohol etílico al 95%, en 1.27%; ácido
tánico en agua destilada, en 3%; Cloruro de sodio en agua destilada, 1.5%. Se usa mordiente el
cual aumenta el tamaño del microorganismo.

Técnicas de tinción:

 Tinción de Wright.

La tinción de Wright es una técnica que se emplea generalmente para la diferenciación de

elementos celulares de la sangre y es clasifica cada como una tinción policromática, dado que
puede teñir compuestos ácidos básicos presentes en una célula.

 Tinción de azul algodón de lactofenol.

El examen microscópico es de gran importancia en micología para la observación de las diferentes

especies de hongos de interés clínico. Se deben utilizar tinciones que logren preservar la integridad
de las estructuras fúngicas.

 Tinciones diferenciales.

Se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La técnica de tinción diferencial consta
de dos etapas: una tinción simple seguida de una tinción de contraste. En la tinción de contraste se
utiliza otro colorante que tiñe (y por tanto, revela) las células no teñidas por el primer colorante.
Estas tinciones son muy utilizadas en microbiología.

 Tinciones específicas.
Se utilizan para incrementar el contraste en las células microbianas y revelan estructuras
particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y las cápsulas.

 Tinción adecuada.

En su forma más simple, el verdadero proceso de tinción puede implicar la inmersión de la muestra
en la solución colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de
colorante y la observación. Muchos tintes, sin embargo, requieren del uso de un mordiente.
Cuando la solución de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tinción mordentada
permanece.

 Tinción negativa.

Un método sencillo de tinción para bacterias, que además es un claro caso de cromofobia y que
por lo tanto funciona aun cuando los métodos de tinción positiva fallan, es la tinción negativa. Esto
puede ser conseguido simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando
directamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra
humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados
fácilmente por medio de microscopía en campo claro como inclusiones claras muy bien
contrastadas contra el medio oscuro que las rodea

 Tinción indirecta.

Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Un mordiente habitual
es el ácido tánico.

 Tinción directa.

Hablamos de tinción directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro
tratamiento previo.

 Tinción Gram.

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

bacteriológico. Su utilidad en la práctica de referencias a la morfología celular bacteriana (cocos,
bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM

 Tinción Rodamina-Auramina.

Los ácidos micólicos de las paredes celulares del mico bacterias poseen afinidad para los
fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color
amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como
contraste, evita la fluorescencia inespecífica. Todos los microorganismos ácido-alcohol resistentes,
incluyendo los esporozoarios parásitos, se tiñen con estos colorantes.
Un aspecto importante de la coloración rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden ser
reteñidos con la coloración de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tinción con el
fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersión. De esta forma, los resultados positivos
pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que además permiten la diferenciación
morfológica.

 Tinción Naranja de Acridina.

El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su forma nativa o

desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la fluorescencia
puede variar, dependiendo del pH y de la concentración. El naranja de acridina ha sido empleado
como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo está vivo y roja si está
muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el ácido nucleico, el germen viable se
inactivará poco tiempo después de la tinción.

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio
para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado
a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han
ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos –en los que se incluyen
bacterias, parásitos y hongos–. La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial
de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa para el
diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas
tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para
el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción
de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos.
Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para
el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa.

PREGUN RESPUESTA
TA
Las bacterias son un grupo de microorganismos de una sola célula que no tienen
núcleo. Son de pocos micrómetros de largo y tienen muchas formas, como esferas y
¿Según
espirales. Crecen en la tierra, en lugares con desperdicio radioactivo, en agua, y
su
también en cuerpos vivos de plantas y animales.
morfologí
a, como
También se les clasifican dependiendo de su forma, pero algunas tienen unas formas
se
extrañas, así que es difícil lograr una calificación por medio de esto. Sin embargo, la
clasifican
mayoría tienen forma de bastón, esfera o espiral.
las
bacterias
Para los científicos hay muchas otras formas para clasificarlas, como donde se
?
reproducen, a qué medios responden, si requieren oxígeno o no para sobrevivir, entre
otras cosas.
¿Qué  Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular interna y una pared de
diferenci peptidocluno. En cambio, las negativas poseen una pared celular más
as completa.
encuentr
  Las positivas no cuentan con una membrana externa. Las negativas tienen
membrana externa que forma un saco rígido alrededor de la bacteria.

 Las Gram positivas no tienen espacio peri plasmático, mientras que las Gram
negativas sí tienen, entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y
la interna de la membrana externa.
a entre
bacterias  Las Gram positivas tienen una red de mureína que está bien desarrollada y
Gram puede llegar a tener hasta 40 capas. En cambio, las Gram negativas cuentan
positivas solamente con una capa.
y Gram
negativas
?  La penicilina mata a la Gram positivas; en cambio, a las negativas no.

 Las bacterias Gram positivas no contienen LPS; en cambio, las Gram negativas
sí.

 Las Gram positivas retienen la tinción azul, mientras que las Gram negativas
quedan decoloradas.
¿En qué El proceso de fijación ha de ser rápido y la velocidad de difusión de la sustancia fijadora
consiste en los tejidos es un factor determinante. Los fijadores generalmente endurecen los
el tejidos, lo cual depende del tipo de fijador y del tiempo que el tejido haya estado
proceso expuesto a él.
de
fijación?
¿Qué
esporas teñidas de verde y células vegetativas teñidas de rosa. observar la forma, tamaño relativo y
coloració
posición de la espora en la célula vegetativa.
n se debe
utilizar
la nigrosina es un colorante aniónico de color negro que es repelido por las cápsulas, lo que
para
imposibilita su penetración dentro de los microorganismos. permite la visualización de cápsulas
observar
bacterianas y fúngicas.
las
endospor
as y
cápsula?

PRACTICA No 5. FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE LOS

MICROORGANISMOS

Temáticas de la práctica

Influencia del oxígeno y la temperatura en el crecimiento

microbiano
 Propósito

Conocer los aspectos físicos que afectan el crecimiento

microbiano

Intencionalidades formativas

Objetivo

Evaluar el efecto de los factores intrínsecos y extrínsecos sobre

el crecimiento bacteriano.

Fundamentación Teórica

Los aspectos físicos que influyen de manera determinante en el crecimiento microbiano son: la
temperatura, el pH y la presión osmótica.

Los químicos son: el agua, las fuentes de carbono y de nitrógeno, los minerales, el oxígeno y los
factores orgánicos del propio microorganismo.

Informe
Influencia de temperatura

Se logra identificar que a mayor temperatura mayor crecimiento.

en el tubo de ensayo número 3 se observa el mayor crecimiento de microorganismos

Tubo 1: En 4ºC Nevera

Tubo 2: A 20ºC

Tubo 3: En incubadora a 37ºC

influencia del PH

se observa en el tubo de ensayo número 2 para la prueba de pH que es donde se efectuó mayor
crecimiento microbiano.

El tubo de ensayo número 2 es a pH 7

Crecimiento abundante más turbidez

PANTALLAZO PRESENTACIÓN CUESTIONARIO

 PRACTICA No. 6. CONTROL DE MICROORGANISMO POR MEDIO DE FACTORES FISICOS Y
QUIMICOS

Temáticas de la práctica Esterilización y Desinfección

Intencionalidades formativas
Propósito:

Se va a demostrar en la siguiente serie de experimentos que los

métodos que se utilizan para eliminar los microorganismos no
son igualmente efectivos de igual forma se va a comparar la
efectividad de varios desinfectantes que se utilizan
comúnmente.
 Objetivo:

Explicar la diferencia entre los resultados obtenidos al utilizar

diferentes métodos de esterilización de bacterias.
Explicar cómo se hace un ensayo comparativo de la eficiencia de
varios desinfectantes.

Fundamentación Teórica

Se define esterilidad a la condición de ausencia de cualquier microorganismo. Significa destrucción

de toda forma de vida microbiana incluyendo esporas. Los métodos de esterilización más usados en
el laboratorio son calor seco, calor húmedo, flameado, utilización de soluciones químicas.

La desinfección se refiere a la reducción de los organismos patógenos (organismos que ocasionan

enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composición química se clasifican en: Fenoles,
Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario, Formaldehídos, Peróxidos.
Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de nivel intermedio o de alto nivel.

Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden destruir la mayor parte de las
formas vegetativas bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus con
envoltura lípidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacterium spp, ni las esporas bacterianas.

Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas vegetativas,
incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayoría de los virus (virus con y sin envoltura) y hongos
filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas bacterianas.

En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehídos, peróxidos, hipocloritos) consiguen destruir
todos los microorganismos, excepto algunas esporas bacterianas.

Informe

1. Autoclave (15 minutos)

2. Agua hirviendo (30 minutos)
3. Agua a 60oC (Una hora)
4. No tiene tratamiento
  1 ml del cultivo de E. coli en cada uno de los tubos de ensayo

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Se observa mayor turbidez en el tubo de ensayo número 4 el cual no tiene tratamiento.

TABLA 1

TRATAMIENTO CRECIMIENTO
Control No se le hizo ningún tratamiento,
pero se le dio el mismo
procedimiento de incubación lo cual
es que tuvo mayor crecimiento. ( ++
+)
 Autoclave El tubo uno no hubo crecimiento (-)
por que el procedimiento de
esterilización mato todos los
microorganismos
Agua hirviendo durante 30´ Hubo crecimiento, pero muy mínimo
ya que se mantuvo en agua
hirviendo pero no mueren todos los
microorganismos haciendo el
tratamiento menos eficiente. ( + )
Agua a 60 grados por una hora Hubo más crecimiento que la
anterior ya que la temperatura
estuvo muy baja. ( ++ )

TABLA 2

Desinfectante TIEMPO EN SEGUNDOS

15 30 45 60
Alcohol Mayor Medio Mínimo No hay
crecimiento crecimiento crecimiento crecimiento

PREGUNTA RESPUESTA
¿Cuáles agentes Hipoclorito de Sodio y Cloro
químicos son más
efectivos en el
control de
microorganismos?
¿Con que criterios Se debe tener en cuenta su nivel de acción si es bajo, medio o alto
se selecciona un después de seleccionar su fase de acción se pude utilizar para las
agente químico diferentes aplicaciones que se requieran
para desinfectar:
superficies,
ambientes, objetos
contaminados, la
piel?
 CONCLUSIONES

Para finalizar podemos decir que las tinciones son utilizadas en el laboratorio de microbiología

permiten el diagnóstico oportuno y sugerente de los agentes infecciosos, por lo que juegan un

papel importante en la decisión del tratamiento inicial de las enfermedades infecciosas. Se debe

practicar la tinción adecuada de acuerdo con el agente infeccioso en sospecha y el tipo de muestra

clínica. Las tinciones son herramientas elementales, vigentes y de uso universal que coadyuvan al

diagnóstico microbiológico.
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

MEDIOS DE CULTIVO. (2006). Obtenido de http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

Unidades Formadoras de Colonias (UFC). (s.f.). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de

https://www.merus.es/ufc-unidades-formadores-colonias/

Cultivos Mixtos Clásicos. (s.f.). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de

http://www.fundacionsales.org/boutique-de-plantas/jardineria/consejos-y-
trucos/14292/cultivos_mixtos_clasicos-p1.html#:~:text=Resumen%3A%20El%20cultivo%20mixto
%20consiste,las%20diferentes%20especies%20se%20complementen.

CULTIVO AXENICO (PURO). (11 de marzo de 2014). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de

http://bioquimicamicro.blogspot.com/2014/03/cultivo-axenicopuro-introduccion.html

Cómo se clasifican las bacterias. (s.f.). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de

https://www.vix.com/es/imj/salud/2010/10/15/como-se-clasifican-las-bacterias

Las Bacterias Gram Positivas. (26 de 01 de 2017). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de

https://okdiario.com/curiosidades/bacterias-gram-positivas-697551#:~:text=Las%20bacterias
%20Gram%20positivas%20poseen,r%C3%ADgido%20alrededor%20de%20la%20bacteria.

FIJACION. (s.f.). Recuperado el 26 de 07 de 2020, de https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/2-

fijacion.php