UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE

HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME N° 07: TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN: USO DEL

AUTOCLAVE Y DEL HORNO BACTERIOLÓGICO

Asignatura: Microbiología (BI-341)

Horario de grupo práctico: miércoles 2 – 5 p.m.
Docente: Mg. APAYCO ESPINOZA, Nilda Aurea

Integrantes:
 ANDIA ALVARADO, Víctor Alejandro.
 CAYLLAHUA ORÉ, Yasmín Nieves.
 LLAMOCCA JAULIS, Manuel.
 SANDOVAL GUTIÉRREZ, Bhezaira Estrella.
 TINEO DIPAZ, Yennifer.
 VEGA CURIÑAUPA, Jhon David.

Ayacucho – Perú
2020
 INTRODUCCIÓN

En microbiología, es imperativa la utilización de material estéril, tales como; medios de

cultivo, material de vidrio (pipetas, placas Petri) e incluso, en ocasiones particulares, la ropa
de trabajo1.

La resistencia de los agentes infecciosos a la esterilización va a depender de la resistencia

que posean a la temperatura y presión, carga (cantidad) del agente presente en el material
inanimado, y la presencia de materia orgánica en el material inanimado. Cuando una carga
microbiana se expone a un método de esterilización, la velocidad a la que se produce su
muerte es proporcional a la aplicación de ese método, durante un tiempo determinado. En
función de esto, experimentalmente se determinan las curvas de muerte de los
microorganismos, que permiten evaluar los métodos de esterilización2.

A diferentes grados y está relacionada con su estructura, con su capacidad de producir

esporas, o con la presencia de ciertos componentes en su pared celular (lípidos, proteínas)
o de su grosor.

Otros factores que influyen en la mayor o menor resistencia frente a los medios de
esterilización son los siguientes: la carga bacteriana total, la presencia de materia orgánica,
la presencia de sales minerales, el PH y la temperatura.

El Autoclave, utilizando estas propiedades, logra realizar la esterilización de aquí se

desprende que en algunos lugares se les llame coloquialmente “esterilizador” o
descontaminación por calor húmedo. Este método es el más usado en los laboratorios,
debido a que produce mayor volumen de material estéril, destruye en un menor tiempo la
materia infecciosa presente y no daña el material a esterilizar. El calor húmedo es más
penetrante que el calor seco1.

Existen 3 formas para aplicar este método: Agua hirviendo, Vapor fluyendo libremente y
vapor bajo presión. Los métodos mediante los cuales se realiza la esterilización pueden ser
clasificados de dos tipos: Físicos y Químicos, en dependencia de que el agente utilizado
para ello sea físico o químico1.
 MARCO TEÓRICO

Esterilización

Es un conjunto de operaciones que se utiliza para eliminar a toda forma de vida en un

ambiente, contenidos en un objeto o sustancia. Debe ser sometido a algún método de
esterilización de acuerdo a su compatibilidad.

1. Esterilización por calor seco

Es importante tener en cuenta en la acción microbiana al calor por motivos de
sustancias orgánicas o suciedades que se puede encontrar en el material: como
pueden ser aceites o gracias que pueden actuar con protectores de
microorganismos.

El calor seco penetra lentamente a los materiales y por lo que necesita largos
periodos de exposición. El aire caliente no es corrosivo pero el proceso es lento.. Se
usa a 170 °C durante 60 minutos o a 150 °C por 150 minutos3.

1.1. Estufa de convección por gravedad

Está compuesta por una cámara revestida de resistencia eléctrica en su
pared interior y posee un canal u orificio de drenaje en la pared superior. La
circulación depende de las corrientes producidas por la subida de la
temperatura y el choque con las diferentes temperaturas. Por ello su proceso
es más lento y menos uniforme3.

1.2. Estufa de convección mecánica

Este equipo produce un rápido movimiento de un volumen mayor de aire
caliente, facilitando la trasmisión de calor directamente a la carga o paquete.
Se utiliza en menos tiempo y ofrece un equilibrio térmico.

Temperatura (°C) Tiempo de exposición

180 30 minutos
170 1 hora
160 2 horas
150 2 hora y 30 minutos
140 3 horas
121 12 horas
 1.3. Ventajas y desventajas

 Ventajas: Permite la esterilización de la vaselina, grasas y polvos

resistentes al calor, que no puedes ser procesados por el calor
húmedo.

 Desventajas: Requiere largos periodos de exposición es un proceso

dificultoso de certificar o validar, acelera el proceso de destrucción del
instrumento.

2. Esterilización por calor húmedo

La esterilización es la destrucción o eliminación de cualquiera forma de vida, vegetal
o animal de tipo macroscópico y microscópico, sean los organismos nocivos o
inocuos. Pueden llevar a cabo por calor o sustancias químicas.

Algunas endosporas bacterianas son capaces de sobrevivir varias horas a 100 °C.
Por tanto para la esterilización con calor húmedo se requiere una autoclave o
hervidor a presión, con vapor a presión, para alcanzar temperaturas más elevadas.
La mayoría de los medios de cultivo son esterilizados en autoclave a 121 °C ya 1 atm
de presión, durante 20 minutos o más, dependiendo del volumen de material que se
calienta. Algunas esporas pueden resistir 7 minutos a 121 °C. En algunas ocasiones
se emplea el vapor a presión atmosférica en un esterilizador Arnold para medios
bacteriológicos especiales que son fácilmente 10 dañados por el calor. A causa de
que muchas esporas bacterianas sobreviven a este tratamiento, no es adecuado
para asegurar la esterilidad4.

Para lograr una esterilidad confiable el método estándar es el vapor saturado, en

autoclave, a una temperatura de 121 °C durante 15 minutos. Esta temperatura se
logra por vapor de agua a una atmósfera de presión sobre la presión atmosférica.
Los recipientes a colocar en la autoclave no deben estar totalmente llenos y deben
tener tapas flojas o estar tapados con algodón con una sobre tapa para permitir la
ebullición libre y la liberación del aire disuelto. Para grandes volúmenes de líquidos
se debe permitir un mayor tiempo de purgado. Este método se utiliza para esterilizar
medios de cultivos y soluciones. En el caso de líquidos, éstos no deben formar
emulsiones con el agua como ejemplo: aceite o vaselina. También se utiliza para
esterilizar ropa de cama o material textil en general, siempre que la autoclave esté
provista de un sistema de secado por vacío5.

OBJETIVOS

1. Conocer los fundamentos de las técnicas de esterilización de diversos materiales y

medios de cultivo de uso común en microbiología
2. Desarrollar habilidades y destrezas en el uso y manejo del autoclave.
 MATERIALES DE ESTERILIZACION:

vidrios: material fabricado a partir de silice ,es rigido pero fragil

y facil de romper ,resiste a altas temperaturas , de mayor grosor y
dureza .con el se fabrican botellas tubos de ensayo

plasticos: polimeros que pueden ser naturales o

sinteticos .son capaces de modelarse y deformarse.

latex: material derivado del caucho que se emplea en la

fabricacion de guantes , se daña facilmente en contacto
con detergentes y no es rentable su reesterilizacion .

acero inoxidable: es resistente ala oxidacion,incluso

en contactos con humedad , acidos y alcalis corrosivos .

Algodon : material textil , natural ,se usa en la

fabfricacion de ropa ,y como envoltorio de material a
esterilizar, resiste a altas temperaturas pero se daña y se
rompe facilmente

Textiles especiales :forman envoltorios aislantes de la

humedad y permeables a algunos de los metodos de
esterilizacion.
 PROCEDIMIENTO

Válvula reguladora de calor

Manómetro
Espita

Tapa

Canastilla

Bulones
Contenedor de
aluminio

Botón de encendido Rejilla

 Colocar los materiales a
esterilizar en la canastilla, siendo
Retirar la tapa del autoclave y la
acondicionados con
canastilla. Verificar el nivel de agua,
anterioridad, luego colocarlo en
si es necesario agregar agua.6
el autoclave y cerrar con la tapa
de la canastilla.6

Colocar la tapa del autoclave y Encender el equipo, cerrar la

ajustar los bulones de forma espita y calentar hasta que el
diametral.6 manómetro marque lbs/pulg2.

Cuando el manómetro marque Cerrar la espita y esperar hasta

las 5 lbs/pulg2 de presión, abrir que el manómetro marque 15
la espita y dejar escapar el aire y lbs/pulg2, mover el control de
vapor atrapados por completo, intensidad de calor y mantener
hasta que el manómetro marque la presión interna a 15 lbs/pulg2
a cero.6 por 15 min.6

Una vez que el manómetro

marque el 5 lbs/pulg2 o menos,
Transcurrido los 15min apagar el
abrir la espita y dejar escapar el
equipo y esperar que enfríe.6
vapor de agua hasta que marque
cero.6

Abrir la tapa del autoclave

Retirar la canastilla que contiene
aflojando los bulones, retirar con
los materiales esterilizados.6
cuidado la tapa de la canastilla.6
CUESTIONARIO
1. Indique las partes del autoclave:
2. ¿Cómo se pueden esterilizar sustancias que se desnaturalizan a temperatura
de esterilización de la autoclave?
 Las sustancias que se desnaturalizan a temperatura de esterilización del
autoclave pueden esterilizarse mediante la filtración. Este es un
procedimiento físico de esterilización de fluidos, en el que los
microorganismos no son destruidos, sino simplemente retenidos por un
material filtrante.

 La filtración sólo puede ser utilizada con fluidos, sean líquidos o gaseosos.
Se suele utilizar con soluciones cuyos componentes sean termolábiles, por
ejemplo, soluciones concentradas de azúcares, de urea, vitaminas, factores
de crecimiento, etc.

 La filtración tiene la desventaja de que es ineficaz con determinados

microorganismos, como los virus o los micoplasmas. Los primeros son
mucho más pequeños que el tamaño del poro, por lo que no son retenidos.
Los segundos son pleomórficos ya que carecen de una pared de
peptidoglicano y pueden adaptarse al tamaño de poro, por lo que tampoco
son retenidos.

 El material filtrante debe de ser inerte para no reaccionar con los

componentes de la solución, presentar resistencia mecánica y tener un
tamaño de poro menor que los microorganismos que deben ser retenidos.
Tradicionalmente se usan filtros de nitrocelulosa desechables con tamaño
de poro de 0,45 o de 0,22 micras. El fluido es impulsado mediante la presión
ejercida por el embolo de una jeringuilla, o bien mediante el uso de un
quitasato y un sistema de vacío

 En el caso de los micoplasmas hay filtros especiales con un tamaño de poro

inferior a 0,1 micras capaces de retenerlos, pero no serán usados en el
laboratorio.

3. ¿Cuál es el fundamento de la esterilización del horno de microondas?

Las microondas son un conjunto de radiaciones electromagnéticas que corresponde
a la parte de baja energía del espectro electromagnético.
La energía de microondas posee un bajo contenido energético en sus fotones (0.03
kcal/mol), la cual al ser comparada con la energía de los enlaces químicos, que va
de un intervalo de 20 a 80 kcal/mol se considera relativamente baja, en
consecuencia, las microondas no podrían afectar directamente la estructura
molecular. Por lo tanto, el efecto de la excitación de las moléculas por las
microondas es puramente incremento de la energía cinética. Las microondas no
contienen suficiente energía para provocar cambios químicos en los compuestos
por ionización y se consideran como una radiación no ionizante.
Para lograr el efecto de las microondas, estas deben acoplarse directamente con
las moléculas de la sustancia en exposición, llegando así a un rápido incremento de
 la temperatura. El resultado de esto es un calentamiento instantáneo de cualquier
material que presente conducción iónica o rotación bipolar, que son los dos
mecanismos fundamentales para la transferencia de energía de microondas hacia
la materia. La rotación bipolar hace referencia a una interacción en la cual las
moléculas o especies polares intentan alinearse con la rapidez cambiante de dicho
campo eléctrico, el movimiento y fricción entre las moléculas origina la transferencia
de energía que se convierte en calor.
La habilidad de acoplamiento está relacionada con la polaridad de las moléculas y
su capacidad de alineamiento. La segunda forma de transferir esta energía es por
conducción iónica, en la cual si existen especies iónicas o iones libres presentes en
la sustancia, el campo eléctrico generará movimiento iónico cuando las moléculas
intenten orientarse con el campo, causando así un rápido calentamiento. Esta forma
de transferir energía ofrece una marcada ventaja sobre el calentamiento
convencional, cabe mencionar que la conductividad térmica no es absolutamente
necesaria para el calentamiento con microondas porque este es un proceso de
volumétrico.
Se puede considerar que las microondas provocan un calentamiento dieléctrico
sobre compuestos con momento dipolo diferente de cero.

4. Indique los cuidados a tener en cuenta en el uso del autoclave

 Ninguna persona ajena al Laboratorio o no instruida en su uso deberá
manipular el AUTOCLAVE.

 Previo al desarrollo de la tarea de operación del AUTOCLAVE, Ud. Deberá

cumplir con las normas de trabajo, higiene y seguridad general que se le
indiquen, y en especial aquellas que hagan al desarrollo de su tarea diaria en
forma segura para Ud., sus compañeros de trabajo, terceras personas y los
bienes del probien.

 Deberá conocer este procedimiento, el MOP y la Norma General para el trabajo

en laboratorio (NT-PRBIEN Nº 001/2015)

 Siempre deberá trabajar con los EPP necesarios para la operación del equipo.

 Ud. Será el responsable de verificar las condiciones de seguridad del equipo,

estado y posibles desperfectos que pueda tener el mismo antes de comenzar a
utilizarlo.

 Será responsable por las condiciones de higiene y seguridad durante la

operación del AUTOCLAVE.

 Vigile permanentemente el AUTOCLAVE cuando esté en funcionamiento.

 Siempre esté pendiente del manómetro cuando el AUTOCLAVE esté en

funcionamiento nunca opere el equipo en caliente.
  Nunca manipule la válvula de sobrepresión para liberar presión del equipo y
acelerar algún proceso.
 Cuando desagüe la cámara, luego de haberla desocupado, y antes de
limpiarla, asegúrese que el mismo este fría.
 Nunca limpie o mande a limpiar el equipo, sin previamente haberse asegurado
que el mismo se encuentra desconectado de la fuente eléctrica (autoclaves
eléctricas).

5. Esquematice un horno bacteriológico, señale sus partes.

Control de temperatura
Termómetro
Interruptor

Chasis

Cámara

Resistencias Puerta
calefactoras
CONCLUSIONES
1. Gracias a la práctica realizada llegamos a conocer las diversas técnicas de
esterilización de medios de cultivo de uso común en un laboratorio de microbiología.

2. Desarrollamos el uso de la autoclave desde su preparación hasta su manejo con los

materiales para esterilizar.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁGICAS

1. Esterilización Procedimientos relacionados (citado el 28 de setiembre del 2020)

[internet]. Disponible en:
https://www.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf
2. Esterilización Procedimientos relacionados (citado el 28 de setiembre del 2020)
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https://www.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf
3. Acosta S. Manual de esterilización para centros de salud. Estados Unidos –
Washington: Pan American Health Org. 2008.
4. Eulogio D, Calva C. Rehabilitación y repotenciación de un Autoclave Eléctrico de
esterilización para la Clínica San Agustín. 2009.
5. López Tevez L, Torres C. Preparación del material para el trabajo en Microbiología
Limpieza y Esterilización. 2006; 6. Available from:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf
6. 1. FES Zaragoza. Uso del autoclave. (Internet). Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=SKPrmRPnyzc; 2013.
7. Sánchez M, Torreblanca M, Colom K. Filtración [Internet]. Prácticas de Microbiología.
2020 [citado 27 de setiembre de 2020]. Disponible en:
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/esterilizacion-desinfeccion-y-antisepsis/filtracion
8. Correa L, Hernández E. El uso de las microondas en la industria farmacéutica
[Internet]. Scielo: Revista mexicana de ciencias farmacéuticas. 2011 [citado 27 de
setiembre de 2020]. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1870-
01952011000400002
9. PROBIEN CONICET UNCO, Procedimiento y cuidado en el uso de autoclave,
[Internet] [Consultado el 29 sep. 2020], pdf Disponible en:
https://probien.conicet.gov.ar/wp-content/uploads/sites/56/2017/06/002-
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