GUIA DE LABORATORIO VIRTUAL

UNIVERSIDAD ANTONIO JOSÉ CAMACHO

FACULTAD DE EDUCACIÓN A DISTANCIA Y VIRTUAL

ASIGNATURA: BIOQUIMICA.

INTRODUCCIÓN

Teniendo en cuenta la situación actualmente, la universidad ha realizado una sección de

laboratorio virtual pregrabado con anterioridad; Sabemos de la dificultad de realizar
prácticas reales de manera presencial, por ello se les envía el siguiente link del video para
que puedan realizar su práctica de laboratorio.

Se comparte el link video de laboratorio de bioquímica

https://youtu.be/FsfFsRQ1E8g

Este video debe verlo antes y obtener los resultados para llevarlos el día de la sección
programada para practica de laboratorio, y así con su tutor aclaren las diferentes dudas o
amplíen sus observaciones.

 Cada parte del laboratorio estará precedido del video

 Deberá observarlo y seguir los pasos de la guía y del video.
 Debe ir sacando sus observaciones y/o resultados
 En la propuesta de informe se espera que usted o su grupo virtual de trabajo,
realice las inferencias a partir de la observación de lo que pasa en cada uno de
los experimentos.
 Para ello, se le adjunta al final de este laboratorio las teorías de los reactivos
utilizados como el lugol, benedict, biuret y cristales de sudan.
 El informe debe ser entregado en plataforma luego de la fecha del laboratorio. El
docente acordara una fecha de entrega y el tipo de informe que debe elaborar

Cualquier explicación adicional favor comunicarse con su tutor.

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1. OBJETIVO GENERAL

Determinar en forma cualitativa la presencia de carbohidratos y lípidos a través de

reacciones químicas

2. MARCO TEORICO

Carbohidratos

Dentro de esta categoría se incluyen sustancias que cumplen funciones importantes como
componentes de plantas y animales, proporcionando estructura en los primeros y
constituyéndose en fuente de energía en los segundos. Los carbohidratos, también
conocidos como glúcidos, sacáridos o hidratos de carbono, están compuestos
principalmente por carbono, hidrógeno y oxigeno en una proporción mejor apreciaba en la
siguiente formula:
Cn(H2O)n
Fue precisamente está formula la que dio la idea de que estos compuestos eran hidratos,
aunque las investigaciones han declarado que no lo son en lo absoluto. Los carbohidratos
son polihidroxialdehídos, polihidroxicetonas o compuestos que, por hidrólisis, se
convierten en aquellos.

El criterio seguido a la hora de clasificarlos está establecido de acuerdo al

comportamiento seguido por el carbohidrato cuando es sometido a hidrólisis ácida. De
esta manera tenemos básicamente tres grupos:

Monosacáridos: Aquí se incluyen carbohidratos no hidrolizables a compuestos más

simples. Estos compuestos contienen de 3 a 8 carbonos (triosas, tetrosas, pentosas,
hexosas, etc.) De este grupo se destaca por su importancia y abundancia en los
organismos vivos la glucosa. Averigua su formula estructural.

Oligosacáridos: Una vez sometidos a hidrólisis, los miembros de este grupo generan por
lo regular mínimo dos moléculas de monosacáridos y máximo diez. En este grupo
encontramos compuestos que exhiben un sabor dulce y por esta razón se le conoce con
el termino azucares. Los de mayor importancia desde el punto de vista biológico son: la
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maltosa, la sacarosa, la lactosa y la celobiosa.
Averigua su formula estructural.

Polisacáridos: Hablamos ahora de macromoléculas que al hidrolizarse dan lugar a más

de 10 moléculas de monosacáridos. Ejemplos de este grupo son el almidón y la celulosa.

Lípidos

Los lípidos pertenecen a otra clase de biomoléculas, a aquellos que siendo insolubles en
agua pueden ser extraídas a partir de las células con disolventes orgánicos de polaridad
baja como el éter y el cloroformo. Cierta clase de lípidos, los fosfolipidos, son
constituyentes esenciales de las membranas celulares, y otros son importantes moléculas
de reserva energética y componentes básicos de hormonas, vitaminas y prostaglandinas.

Lípidos Simples: Son básicamente ésteres de glicerina y ácidos de cadena carbonada

larga, llamados ácidos grasos, conocidos como acilgliceroles (monoglicéridos, diglicéridos
y triglicéridos). Además de los acilgliceroles, existe otra clase de lípidos simples formados
por un alcohol de cadena larga de átomos de carbono, diferente al glicerol y, ácidos
grasos de cadena larga conocidos como ceras. Los acilgliceroles, son las moléculas
lipídicas utilizadas por la célula y el organismo para almacenar energía de reserva.

Lípidos Compuestos: Son ésteres de naturaleza diversa, formados en general por un

alcohol, ácidos grasos y ácido fosfórico o un carbohidrato.

Los lípidos compuestos formados por una unidad de 1,2-diacilglicerol en enlace éster con
ácido fosfórico en la posición 3 forman el ácido fosfatídico de donde se van a constituir los
fosfolipidos que van a formar las membranas biológicas.

Lípidos Derivados: Desde el punto de vista químico estos compuestos pueden

considerarse ésteres cuya molécula básica es un sistema de anillos conocidos como
ciclopentanoperhidrofenantreno que constituye la molécula de colesterol, algunas
vitaminas liposolubles y las hormonas esteroideas.
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3. MARCO EXPERIMENTAL

PROTOCOLOS

Para determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos y lípidos en una muestra

debemos emplear sustancias que reaccionen específicamente con ellos.

Determinación De Glúcidos
REACTIVOS MATERIALES
Solución de Glucosa al 1% 12 Tubos de ensayo
Solución de Sacarosa al 1% 4 pinzas para tubos de ensayo
Suspensión de Almidón al 1% estufa
Leche (estudiante)1 baño
Leche deslactosada (estudiante) beaker
Reactivo de Benedict pipetas de 5 mL
Lugol peras para pipetas

MÉTODOS
Nota: Antes de preparar los tubos de ensayo con los reactivos en los volúmenes
indicados en cada tabla, no olvides rotularlos.

1
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 DETERMINACIÓN DE GLUCOSA (MONOSACÁRIDOS)

TUBOS
REACTIVOS 1 2 3
Solución de Glucosa al 1% (mL) 2 2 2
Lugol (gotas) 5
Reactivo de Benedict (mL) 1
Reactivo de Biuret (mL) 1
Coloca los tubos 2 y 3 al baño de agua hirviendo durante 5
minutos
¿Qué ocurrió? Registra lo observado

 DETERMINACIÓN DE SACAROSA Y LACTOSA (DISACÁRIDOS)

TUBOS
REACTIVOS 1 2 3 4 5 6
Solución de Sacarosa al 1% (mL) 2 2
Leche (mL) 2 2
Leche deslactosada (mL) 2 2
Reactivo de Benedict (mL) 1 1 1
Reactivo de Biuret (mL) 1 1 1
Coloca los tubos al baño de agua hirviendo durante 5 minutos
¿Qué ocurrió? Registra lo observado

 DETERMINACIÓN DEL ALMIDÓN Y EL GLUCÓGENO (POLISACÁRIDOS)

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TUBOS
REACTIVOS 1 2 3 4 5 6
Suspensión de Almidón al 1% (mL) 2 2 2
Homogenizado de células hepáticas
2 2 2
(mL)
Lugol (gotas) 5 5
Reactivo de Benedict (mL) 1 1
Reactivo de Biuret (mL) 1 1
Coloca los tubos 2, 3, 5 y 6 al baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
¿Qué ocurrió? Registra lo observado

Determinación De Lípidos
REACTIVOS MATERIALES
Agua de grifo 5 tubos de ensayo
Cristales de sudan IV 3 pinzas para tubos de ensayo
Aceite de mesa pipetas de 5 mL
Coco peras para pipetas
Solución de Colesterol al 1% goteros
Suspensión de yema de huevo al 10% espátula
Albumina de huevo al 20%
Solución de ácido acético glacial
Solución de ácido sulfúrico

MÉTODOS
Nota: Antes de preparar los tubos de ensayo con los reactivos en los volúmenes
indicados en cada tabla, no olvides rotularlos.
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 Determinación De Lípidos
TUBOS
REACTIVOS 1 2
Agua de grifo (mL) 2 2
Cristales de sudan IV (g) 0.2 0.2
Agita y deja en reposo por 3 minutos
Aceite de mesa (mL) 1
Aceite de coco (mL) 1
Agita y deja en reposo por 3 minutos

 Reconocimiento Del Colesterol

TUBOS
REACTIVOS 1 2 3
Solución de Colesterol al 1% (mL) 2
Suspensión de yema de huevo al 10% (mL) 2
Albumina de huevo al 20% (mL) 2
Solución de ácido acético glacial (gotas) 5 5 5
Solución de ácido sulfúrico (gotas) 5 5 5
Agita suavemente y deja en reposo durante 5 minutos
¿Qué ocurrió? Registra lo observado

PARA TENER EN CUENTA

No olvide incluir en Su informe:

 Las observaciones apreciadas (preferiblemente adicionar un gráfico) en el ítem
 La explicación de dichas observaciones
 Lo solicitado por su tutor durante la práctica.

4. PREGUNTAS DE CONSULTA
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4.1 ¿Qué reacción explica los cambios apreciados en

cada caso?
4.2 ¿son estas reacciones específicas para cada tipo de biomolécula? Justifícalo
4.3 ¿Por qué algunos reactivos no generan cambios apreciables con algunas sustancias?
Por ejemplo, ¿Por qué el reactivo de Benedict no genera cambios cuando trabaja con
algunos de los sacáridos? ¿Por qué el Lugol no genera cambios cuando trabaja con
algunos sacáridos?

5. Las conclusiones de su trabajo en el laboratorio

Recuerde que no se trata de responder estas preguntas como un cuestionario, solo

constituyen una guía a la hora de realizar su informe y le indican lo que debe incluir en él
de acuerdo al formato que le fue indicado anteriormente por su tutor.

BIBLIOGRAFIA

MARTIN, W. David. y Mayes A. Peter. Bioquímica de Harper. Editorial

El Manual Moderno S.A. México. 1987

Nivel de riesgo: 2- Riesgo medio (Bata de laboratorio, guantes, cofia, tapabocas, zapato
cerrado bajo, pantalón largo)

REACTIVOS USADOS EN EL ALBORATORIO.

A. Reactivo de Benedict

En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que

tienen su OH libre del C anomérico), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa.
En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita
de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.

El reactivo de Benedict consta de:

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Sulfato cúprico; Citrato de sodio; Carbonato Anhidro
de Sodio.
Además se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion cúprico

(otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehído del
azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo
ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).

El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en
solución forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su
grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico en solución.

En estos ensayos es posible observar que la fructosa (una cetohexosa) es capaz de dar
positivo. Esto ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino
caliente esta cetohexosa se tautomeriza (pasando por un intermediario enólico) a glucosa
(que es capaz de reducir al ion cúprico).

Los disacáridos como la sacarosa (enlace α (1 → 2) O) y la trehalosa (enlace α(1→1)O),

no dan positivo puesto que sus OH del C anoméricos están siendo utilizados en el enlace
glucosídico.

En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH del C anomérico libre,

y éstos son los que dan positivo en la prueba de Benedict.

B. Reactivo de Biuret

Fórmula química del Biuret

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Representación 3D del Biuret

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y

otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición
desconocida.

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de
sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en
presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena
corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio
alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite

determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopia
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560 nm (para detectar el ion Cu2+).

Procedimiento
Se toma un tubo de ensayo y se colocan tres centímetros cúbicos de albúmina de huevo,
es decir la clara.

1. Se añaden 2 centímetros cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%.

2. Más adelante se agregan 4 o 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida
al 1%.
3. El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la
presencia de proteínas.
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C. Reactivo de Lugol

El lugol o solución de Lugol es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI

en agua destilada. Fue preparada por primera vez en 1829 y nombrada en honor al
médico francés J.G.A. Lugol

Este producto se emplea frecuentemente como un reactivo para la prueba del yodo en
análisis médicos y de laboratorio.

Fórmula

Consiste en 5 gr de I2 y 10 gr de KI diluidos con 85 mL de agua destilada, obteniéndose

una disolución marrón con una concentración total de yodo de 150 mg/mL. El yoduro de
potasio también hace al yodo diatómico soluble en agua, debido a la formación de iones
triyoduro I3-.

No debe confundirse con la tintura de yodo, que consiste en yodo diatónico y sales de
yodo diluidas en agua y alcohol etílico ( etanol). La solución de Lugol no contiene alcohol.

Aplicaciones

En microbiología, es empleado en la tinción de Gram para retener el colorante cristal

violeta. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el
colorante cristal violeta.

Quiste de Giardia con tinción de lugol

También se utiliza como contraste visual en parasitología

Se utiliza esta disolución como indicador en la prueba del yodo, que sirve para identificar
polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo
de inclusión termolábil que se caracteriza por presentar distintos colores según las
ramificaciones que presente la molécula.

El Lugol no reacciona con azúcares simples como la glucosa o la fructosa.

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D. Reactivo de Sudán III

Sudán III

Nombre (IUPAC) sistemático

1-((4-(fenildiazenil)fenil)diazenil) naftaleno-2-ol

Sudán III es un tinte diazo del tipo lisocromo (tinte soluble en grasa) usado para manchar
de triglicéridos en secciones congeladas, y algunos lípidos y lipoproteínas encuadernados
de la proteína en secciones de la parafina. Tiene el aspecto de cristales rojizos y una
absorción máxima en 507 (304) nanómetros.

Fundamento Biológico La presencia de un exceso de grasas en las heces obedece a

uno o varios de los siguientes mecanismos: tránsito acelerado, déficit enzimático en su
evolución, déficit de absorción o hipersecreción endógena, por lo cual el organismo no
puede procesarlas y digerirlas y las elimina directamente con la materia fecal.

Fundamento Técnico Las heces sospechosas de presentar ácidos grasos en su

contenido, se mezclan con la solución Sudan III, lisoenzima que permite diferenciar las
grasas neutras que se tiñen de color amarillo, las grasas minerales son incoloras y las
ácidas adquieren una coloración roja.

Técnica del sudán III

La técnica del sudán III es un método utilizado generalmente para demostrar la presencia
mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos.

Pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por
estructuras ácidas o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen aquellas sustancias que
tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución
colorante.
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Fundamento

Los colorantes para grasas son más solubles en las propias grasas que en el medio en el
que van disueltos. Así, al bañar la grasa con la solución del colorante, éste tiende a
disolverse en la grasa que se va cargando del colorante. Por regla general estos
colorantes siempre van en solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o
alcohol/agua.