Laboratorio de Bioquímica 2-Catalasa

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
IDENTIFICACION DE LA ENZIMA CATALASA

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN N. CORPAS
TEMAS DE REVISIÓN
1. Estudie las generalidades de las enzimas

2. Investigue acerca de los mecanismos catalíticos de las enzimas
3. Defina cofactor, coenzima y grupo prostético.
4. Revise la reacción de la enzima catalasa
5. Investigue sobre las enzimas que presentan un valor diagnóstico importante
OBJETIVOS
1. Afianzar el concepto de enzima y determinar su importancia en los procesos

metabólicos
2. Identificar factores que afectan la actividad enzimática.
3. Diferenciar entre inhibición competitiva e inhibición no-competitiva.
INTRODUCCION
Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas
necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan
inmediatamente, y si no fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no
se producirían tan rápido.
Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos

que agilizan una reacción que envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos.
Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual
no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando
un complejo enzima sustrato; esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio
activo de la enzima. Las enzimas son muy selectivas porque pocas moléculas pueden
interactuar bien con este sitio (Figura 1).
Figura1. Reacción con participación de una enzima. Se forma el complejo Enzima-Sustrato al unirse la enzima
a los sustratos en lugares específicos de la enzima donde “encajan” los sustratos. Se forma el producto y la
enzima no se altera en el proceso; quedando libre para otra reacción.
Las enzimas trabajan óptimamente bajo condiciones específicas y ciertos cambios
pueden alterar el funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla. Algunas
enzimas necesitan activadores para cambiar su conformación de modo que pueda
formarse el complejo enzima–sustrato. Estos activadores se conocen como cofactores y
pueden ser tan simples como iones metálicos. Los cofactores orgánicos se conocen como
coenzimas. Las enzimas pueden afectarse negativamente por inhibidores que impidan la
actividad enzimática. Estos inhibidores pueden afectar el sitio activo de dos maneras:
competitivamente, al bloquear el sitio activo, o no competitivamente, al pegarse en otro
lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma del sitio activo.
METODOLOGÍA
1. FUNCIONAMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA EN VARIOS ORGANISMOS
MATERIALES
Peróxido de hidrógeno
Papa
Hígado
Espinaca
Gasa
Placas de porcelana
Goteros
Morteros
PROCEDIMIENTO
Se prepararán varios homogenizados para obtener partículas pequeñas y uniformes al

mezclarlas con el agua.
1. Para preparar los homogenizados, corte en pedazos por separado las muestras de
papa, hígado y espinaca.
2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir
parte de la muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy
pequeños del material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.
4. Coloque cada homogenizado en un tubo de ensayo.
5. Usando un gotero, coloque cinco gotas de cada homogenizado en las fosas de la placa
de porcelana y añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
RESULTADOS
Observe y anote los resultados en la Tabla 1:
Tabla 1 Resultados homogenizado con peróxido de hidrógeno

homogenizado Reacción al añadir gotas de peróxido
Agua
Papas
Hígado
Espinaca
 Describa la reacción que se llevó a cabo
 ¿Ocurrió lo mismo en todas las muestras?
 ¿Por qué se forman burbujas?
 ¿Por qué se prepararon los homogenizados? ¿Por qué no se añadió el peróxido
directamente a los tejidos sin macerarlos?
 Explique por qué la gran mayoría de las especies de plantas y de animales
producen la enzima.
2. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS
MATERIALES
Homogenizado de hígado
Baño de agua
Termómetro
Hielo
Congelador
PROCEDIMIENTO
1. Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un baño de agua hasta 37 °C y otro
hasta 80°C.
2. Añada 5 mL de hígado homogenizado a cada tubo.
3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:
Tubo 1 = Congelador a 4 °C por 30 minutos
Tubo 2 = Hielo por 30 minutos
Tubo 3 = 80 °C por 15 minutos
Tubo 4 = 37 °C por 15 minutos
Tubo 5 = Temperatura ambiente
4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo de ensayo.

5. Determine el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se
comienzan a producir burbujas, y el tiempo que duró la reacción. Anótelos en la Tabla 2.
6. Compare sus resultados y grafique en términos de tiempo de reacción vs. Temperatura.
RESULTADOS
Tabla 2. Resultados del efecto de temperatura

Tiempo en Tiempo que
que tardo en toma la
Tubo Temperatura Observaciones
comenzar la reacción en
reacción completarse
1 Congelador 4°C
2 Hielo
3 80°C
4 37°C
5 Ambiente
A. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?

B. ¿Qué le sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas?
3. EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS
PROCEDIMIENTO
1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

2. Añada 3 mL de homogenizado de hígado a cada tubo.
3. Añada soluciones 3M de HCl y 3M de NaOH a los tubos como sigue, y agite
suavemente hasta mezclar:
Tubo A – 3 ml de 3M HCl
Tubo B – 3 ml de 3M NaOH
Tubo C – control (sin ácido ni base)
4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.
5. Observe y anote las reacciones en la Tabla 3.
Tabla 3. Resultados del efecto del pH sobre la actividad enzimática
Tiempo que toma la Descripción comparativa de

Tubo
reacción en completarse las reacciones
A
B
C
A. ¿Cómo se relacionan el pH y la actividad enzimática?

B. Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo se afectaría
la digestión si el pH aumenta a 4?
C. ¿De qué otras maneras se podría explorar el funcionamiento de las enzimas
estudiadas en el laboratorio?
D. ¿Puede mencionar otras enzimas que actúan en nuestro cuerpo?
E. ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las
enzimas?
F. ¿Mencione algunas condiciones médicas que se deban al mal funcionamiento de una
enzima?

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1. Estudie las generalidades de las enzimas

1. Afianzar el concepto de enzima y determinar su importancia en los procesos

Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos

1. FUNCIONAMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA EN VARIOS ORGANISMOS

Se prepararán varios homogenizados para obtener partículas pequeñas y uniformes al

Observe y anote los resultados en la Tabla 1:

Tabla 1 Resultados homogenizado con peróxido de hidrógeno

2. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS

4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo de ensayo.

Tabla 2. Resultados del efecto de temperatura

A. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?

1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

Tabla 3. Resultados del efecto del pH sobre la actividad enzimática

Tiempo que toma la Descripción comparativa de

A. ¿Cómo se relacionan el pH y la actividad enzimática?

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