Practicas Micros

COLEGIO LIBRE DE ESTUDIOS
UNIVERSITARIOS
MAESTRIA EN CRIMINALISTICA
ZONA VERACRUZ
ELABORADO POR:
M.C. JAIME RODRIGUEZ ROJAS
2011
Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 1

Justificación
La interpretación de la metodología que se requiere en cada una de las determinaciones

que sé efectúan en el laboratorio clínico depende del grado de exactitud en su
procesamiento, estando a su vez sujeto al conocimiento, habilidad y destreza en el manejo
de los instrumentos y equipo de laboratorio.
Por lo anterior se considera necesario que el estudiante de Química Clínica tenga

conocimientos suficientes sobre el manejo, cuidados y aplicaciones de los instrumentos de
laboratorio, por lo que se incluyó la presente experiencia educativa en el mapa curricular
de la licenciatura.
Objetivos:
Al terminar el curso el estudiante:
Seleccionará adecuadamente el instrumento requerido de acuerdo al tipo de muestra y

estudio solicitado.
Empleará apropiadamente los instrumentos básicos del laboratorio de acuerdo a la

metodología seleccionada.
Valorará la importancia de la interpretación de los datos obtenidos en cada uno de los

instrumentos y su implicación con el ser humano.

INDICE
PRACTICA Nº NOMBRE DE LA PRACTICA
1 DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

2 MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
3 ILUMINACION DE KOHLER
4 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
5 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
6 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
REGLAS DE LABORATORIO

Las prácticas se iniciarán a la hora indicada en los horarios, con una tolerancia de 5 min.
No se permitirá la entrada al laboratorio al alumno que llegue 5 min. Después de la hora
de entrada.
Durante el desarrollo de la práctica, queda estrictamente prohibida la estancia en el

laboratorio de personas ajenas al grupo.
Es obligatorio usar bata blanca en todas las sesiones.
Todos los objetos personales deben de quitarse de la mesa de trabajo.

El alumno deberá estar provisto del material personal y biológico indicado en la práctica de
lo contrario no podrá permanecer en el laboratorio.
El alumno deberá traer su manual en cada sesión de laboratorio que se imparta. Al final de
la práctica deberá presentar un reporte preliminar y a los ocho días de realizada la práctica
deberá entregar su reporte en limpio y enviarlo al correo: drjaimerojas@hotmail.com, una
vez revisado deberán anexarlo a su carpeta.
Queda estrictamente prohibido comer, beber, fumar y en general llevarse las cosas a la
boca dentro del laboratorio, estar jugando o provocar situaciones que pongan en peligro o
atenten contra ekl bienestar personal y de los compañeros.
Debe evitarse establecer conversaciones a voces con los vecinos de otras mesas.
Todo el material no contaminado tal como: Algodón, papeles, cerillos etc. deben de ser
depositados en el bote de la basura municipal. No se debe tirar la basura en el suelo ni en
el lavadero
Limpiar las mesas al terminar las prácticas.

En caso de romper o derramar material contaminado, verter cloro sobre él y déjelo cuando
menos 20 min. Después limpiar.

El material contaminado (pipetas, tubos de ensaye, placas de vidrio, puntas de pipetas,
etc.) deberán depositarse en un recipiente que contenga agua con hipoclorito de sodio en
una solución 6%, dejarlo cuando menos 24 hrs.
Si durante la práctica se emplean orinas, no tirarlas directamente a la tarja, antes ponerles

hipoclorito de sodio en la cantidad necesaria para que se obtenga una solución al 6%.
Usar guantes si va a manejar líquidos corporales o excretas contaminados.
Lavar las manos inmediatamente en caso de una probable contaminación.
El material de laboratorio se entregará por equipo de dos personas y ambos integrantes se

harán responsable de él.
Revisar los instrumentos al recibirlos, reportar al personal técnico del laboratorio o al

docente cualquier desperfecto encontrado en él.
Reportar al personal técnico cualquier falla mecánica observada en los instrumentos

durante su uso.
No tocar los instrumentos eléctricos que estén funcionando con las manos mojadas
No tocar material que no competa a su practica, pues puede provocar un problema a otro
docente, así como causar un lamentable accidente.
INTRODUCCIÓN

En la actualidad el uso de los instrumentos, unos relativamente sencillos y otros bastantes
complejos, facilitan el procesamiento de muestras en el laboratorio. A medida que
continúan las investigaciones para un diagnóstico más rápido y un perfilamiento más
precoz de los resultados, se están perfeccionando más y más instrumentos, y la
automatización, de una u otra manera, adelanta a pasos agigantados. Sin embargo, estos
no pueden introducirse inmediatamente en el laboratorio sin que el usuario tenga un
entendimiento básico y rutinario de ellos. Es importante, que antes de desenvolverse en el
manejo de instrumentos se adquieran las bases teóricas que los sustentan.
A su vez se tiene que el Licenciado en Química Clínica es un profesional que se

desempeña principalmente en los laboratorios de institucionales públicas o privados, por lo
que se requiere que tenga una sólida formación teórica metodológico de los instrumentos.
Por tal motivo, en el mapa curricular de la carrera en el área de formación de iniciación a la
disciplina se implementó la experiencia educativa de instrumentación básica que tiene
como finalidad proporcionar los conocimientos teóricos prácticos necesarios que permitan
al alumno utilizar correctamente cada uno de los instrumentos de uso rutinario en el
laboratorio, de acuerdo al tipo de análisis, aplicando la metodología correspondiente en
cada una de las determinaciones, así como diferenciar, analizar e interpretar resultados
obtenidos en cada uno de ellos.
La experiencia educativa se imparte en sesiones teóricas y de laboratorio, en las primeras

se abordan los principios teóricos básicos en los que funda el instrumento y en las
segundas se dan a conocer las partes que los integran, su manejo, aplicaciones y
cuidados. Esta última de gran importancia debido a que es la parte que permitirá integrar
los conocimientos obtenidos de cada uno de ellos.
Por tal motivo el presente manual tiene como objetivo

Proporcionar al estudiante la información necesaria para comprender el funcionamiento de
los instrumentos más empleados en el laboratorio, favoreciendo su manejo, cuidado y
aplicación en el diagnóstico clínico.

En el manual se plantean 6 prácticas relacionadas con las unidades de teoría, cada
una contiene una sección de datos de identificación, titulo, fundamento teórico
introductoria (es importante mencionar que es solo una guía para que el alumno realice un
trabajo de investigación relacionado con él, que recibe el nombre de generalidades
debido que dentro de los objetivos de aprendizaje está que logre incorporar la teoría
expuesta en clase, lo que observa del instrumento en la práctica, y la teoría documentada
en libros, artículos, revistas etc., de tal manera que en base a ello pueda realizar una
conclusión del trabajo), material empleado.
El desarrollo de la practica consta de tres secciones. La primera, se enfoca a detectar las

partes del instrumento y sus funciones, por lo que se dan esquemas de cada instrumento
para que el alumno identifique las partes que lo integran, además se le piden que realice
esquemas de algunas partes del instrumento (estas están relacionadas con las partes en
las que el alumno debe poner más atención u observar mejor debido a que son las más
importantes de los instrumentos o que lo van a ser diferentes a otros), y finalmente se le
proporciona un cuadro de anotación de observaciones.
La segunda, se orienta al manejo del instrumento dándose la técnica, cuadros de

observaciones (donde hará anotaciones encontradas al realizar la técnica) y en algunas se
pedirán esquemas muy específicos sobre detalles encontrados o vistos al manipular el
instrumento.
La última sección se relaciona con el cuidado del instrumento, en algunas se dan una serie
de indicaciones escritas y en otras se les proporcionan durante el manejo del instrumento.
Además, en todas las prácticas se piden conclusiones con las que se espera evaluar el
conocimiento adquirido durante todo el proceso.
DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1.- INTRODUCCIÓN
Pocos instrumentos han dado el rendimiento científico del microscopio; la ciencia en general le
debe progresos admirables, siendo aplicable a sin número de áreas como son; física, química,
medicina, metalurgia, entre otras. El microscopio como su nombre lo indica, es un instrumento
óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño, las imágenes microscópicas pueden aumentar
de 100 a 2000 veces el tamaño original. No obstante, la función más importante del instrumento no
es solo ver los objetos pequeños sino interpretar lo que se ve, debido a esto, el empleo del
microscopio exige más que en ningún otro caso, un gran conocimiento del instrumento y su
adecuado manejo para lograr imágenes amplificadas con la menor cantidad posible de defectos
ópticos y el logro de contraste adecuado.
El microscopio es el instrumento que más se usa en los laboratorios que estudian imágenes
pequeñas. Actualmente existen dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. En el
microscopio óptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el
paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrónico utiliza un rayo de
electrones controlado por un campo magnético.
A nivel del laboratorio, en donde el Químico Clínico desempeña su principal función, el

microscopio es un instrumento fundamental de trabajo, por lo anterior, se considera necesario que en
la formación del Químico Clínico se ponga principal interés en su enseñanza.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN

El microscopio es un instrumento óptico de precisión que proporciona la amplificación de
las imágenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus
estructuras pequeñas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio.
Esta integrado por tres sistemas; óptico, mecánico y de iluminación, a su vez cada sistema
esta constituido por varios componentes y cada uno tiene funciones especificas, las que
son necesarias conocer para su buen funcionamiento.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

1 - Ninguno -

3.2 Equipo de Laboratorio
1. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos
3.3 Materiales de laboratorio
NUM. CANTIDAD DESCRIPCION

- - Ninguno
4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
4.1.- Preparación del sistema de medición

• Seleccionar un microscopio de campo claro que cuente con todos sus componentes
• Proporcionar al estudiante algunos componentes del microscopio de campo claro.
4.1.2.- Sistema de medición
1. Identifique las partes del sistema mecánico del microscopio.
2. Identifique las partes del sistema óptico del microscopio.
3. Identifique las partes del sistema de iluminación del microscopio.
4. Describa las principales características de cada uno de los componentes que
integran el sistema mecánico, óptico y de iluminación del microscopio.
5. Describa la función que tienen cada una de las partes que integran los sistemas
antes mencionados.
4.3 Uso del sistema de medición

4.3.1 Procurar que cuando menos se proporcione un microscopio por dos alumnos
4.3.2 Proporcionar al alumno las hojas de registro de datos antes de iniciar la practica
5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

5.1 De acuerdo al estudio realizado a los diferentes microscopios proporcionados en el
laboratorio Identificar sus partes en el esquema siguiente y poner los nombres
correspondientes a cada una
Microscopio compuesto

5.2 Dibujar las siguientes partes del microscopio identificando cada uno de sus
constituyentes

Objetivo Oculares
Condensador Fuente luminosa
Tubo óptico Platina
5.3 Redactar en el siguiente cuadro la descripción y funciones de cada una de las partes
que integran el microscopio compuesto
SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCION

Base

Estativo
Tornillo
macrométric
o
Tornillo
micrométrico
M
Platina
E
Tornillo de
ajuste de
C La platina
tornillo del
tope
A
Pinzas de
N la platina
Tornillo
I de centrado
del
condensador
Tornillo del
C condensador
Carro
O
Tornillos
del carro
Revolver
Control de
Intensidad
luminosa

SISTEM DESCRIPCIÓN FUNCION
A PARTE
Condensado
r
I
Lente auxiliar
L
U Lente frontal
M
I Diafragma iris
N
A Lámpara
C
I Diafragma
O de campo
N
Oculares
O
P
Objetivos
T
I
Tubo óptico
C
Conclusiones

6.- CONFIABILIDAD ANALÍTICA
6.1 Procurar que el microscopio a emplear sea solo para campo claro
6.2 Disponer de microscopios de campo claro de diferentes marcas
7.- PRACTICABILIDAD
7.1 En caso de no contar con el microscopio el equipo podrá ser sustituido por
diapositivas, fotografías, acetatos.
MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
1.- INTRODUCCIÓN
El microscopio, es uno de los instrumentos de uso más frecuente en los laboratorios
clínicos, muchos de los errores diagnósticos no tienen su base en el preparado, sino en la
errónea manipulación del instrumento. El uso adecuado de los recursos ópticos del
microscopio permitirá reconocer detalles y variaciones tintoriales, que ayudarán al correcto
diagnóstico, es por eso importante, que para su manejo, se cuente con técnicas
adecuadas que permitan obtener imágenes claras en el menor tiempo posible y que
además, mantengan al instrumento en buenas condiciones.
El microscopio es un instrumento óptico de precisión, mediante un sistema de lentes y

fuentes de iluminación puede hacer visible un objeto microscópico y proporciona la
amplificación de las imágenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y
claridad sus estructuras pequeñas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta
manera su estudio. Las lentes de un microscopio óptico se encuentran en el condensador,
el objetivo y el ocular. El condensador se utiliza para enfocar la luz sobre la preparación.
Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una
posición que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se
observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se
transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. En los microscopios modernos el
tubo óptico tiene una medida estándar y produce aumentos de 1x, no obstante este
aumento varia de acuerdo a su medida. Por lo tanto, el aumento total de un microscopio
compuesto se debe calcular tomando en cuenta el producto del aumento de su objetivo,
tubo óptico y de su ocular .

3.1 Reactivos

Xilol
Mezcla de alcohol-cetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
NUM. CANTIDAD DESCRIPCION

- - Porta objetos
Cubre objetos
Papel para lentes

4.1 Muestra
Cortes histológicos, frotis sanguíneos y bacterianos.
4.2 Preparación del sistema de medición

4.2.1. Seguir las instrucciones para enfocar en el microscopio una muestra biológica
4.2.2. Disponer cuando menos de dos laminillas por alumno .
4.3- Sistema de medición

Seguir las indicaciones para enfocar adecuadamente con el microscopio compuesto
1. Colocar el microscopio en una mesa que permita una cómoda observación a través
del ocular.
2. Limpiar el sistema óptico y el de iluminación.
3. Subir el condensador hasta el tope y cerrar el diafragma iris aproximadamente a la
mitad.

4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento (10 X).
Bajar la platina y colocar la preparación (fijarse que quede firmemente sujeta al carro, y
que el cubre objetos y el objeto estén situados hacia arriba) acomodando la porción de
la preparación que se va examinar en la apertura central de la platina
5. Mirando por los extremos subir la platina hasta el tope, si no hay tope acercar la
platina lo más cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levemente sobre la
preparación. Normalmente los microscopios convencionales poseen un tope que
impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo, puede darse el caso
que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lente objetiva de 10X)
6. Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macrométrico hasta que
empiecen a distinguirse los detalles de la preparación.

7. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico.
8. Ajustar la distancia interpupilar ( distancia entre los ojos).
9. Ajustar dioptrías (agudeza visual) en el porta ocular izquierdo, o bien con el ocular
enfocable izquierdo
10 Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparación, a fin de

ir reconociendo imágenes que le sean familiares. recordar que el objetivo de 10X
permite ver la visión panorámica del preparado. Es decir, los tejidos, su ubicación, y
sus relaciones (función importante al inicio del estudio que ahorrará tiempo
dedicado al análisis de la muestra).
11 Cambiar a un objetivo de más aumento (sin bajar la platina con el tornillo
macrométrico) y enfocar únicamente con el tornillo micrométrico.
12 Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una
gota de aceite de inmersión en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina)
en el punto de mayor concentración luminosa, acerque la lente de 100 lentamente
hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observar lateralmente éste
movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente el tornillo micrométrico
hasta encontrar la imagen.

13 Recordar que los objetivos de 40X y 100X, permiten ver detalles de una
célula, o la conformación celular de una estructura. Se puede observar la forma y
tamaño de células o grupo de ellas, aspecto que permite analizar la muestra de
manera eficiente.
14 Al finalizar su observación, apague la fuente de luz, colocar la lente de
menor aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes
objetivas y la platina.
Si al llevar a cabo el proceso no enfoco con la lente objetiva de 10X ó la lente

objetiva de 40X, Checar los siguientes aspectos:
1) No enfoco con la lente objetiva de 10X
Ver si la iluminación es correcta

Una mala iluminación puede hacer que el punto máximo de enfoque se vea poco
nítido, dándonos la falsa impresión de un problema en el sistema de lentes.
La búsqueda de la mejor iluminación o la apertura del diafragma resolverá el
problema.
Limpiar el ocular.
Muchas veces ocurre que la inexperta (y comprensible) manipulación del
microscopio, hace que uno toque el ocular con los dedos, dejando la impronta de
las huellas digitales. La simple limpieza del ocular puede resolver el problema (error
muy frecuente cuando no se observa una imagen).
Acomodar correctamente el revólver

Generalmente los revólveres de cualquier microscopio tienen una traba para cada
objetivo. Acomodarlo incorrectamente, o no trabarlo en su punto exacto, puede
desalinear el objetivo del ocular, impidiéndonos una correcta apreciación de la
muestra. Al acomodar el revólver correctamente, alineará al objetivo 10X con el
ocular, y permitirá ver correctamente.
Limpiar el cubreobjetos.
Al acomodar la preparación en la platina, muchas veces apoyamos nuestros dedos
sobre el cubreobjetos. La simple limpieza garantizará la resolución.
2) No enfoco con la lente objetiva de 40X
Fijarse en las características del cubreobjetos

El cubreobjeto está colocado hacia el objetivo, un error tan simple se comete diariamente.
Por eso es necesario garantizar, antes de acomodar la preparación en la platina, que el
cubreobjetos esté colocado hacia arriba. Su incorrecta acomodación nos permitirá ver la
preparación en 10X, pero será imposible su observación en 40X. Checar el grosor del cubre
objetos si este es demasiado grueso impide cualquier enfoque o es de mala calidad.
Fijarse el estado del objetivo de 40X

La gran mayoría de los objetivos 40X presentan un sistema de resorte en su lente
inferior (el que se encuentra cercano a la preparación), a fin de evitar la rotura del
cubreobjetos. Sin embargo, muchas veces dicho resorte no funciona correctamente,
desacomodando de esta manera los lentes que conforman al objetivo al quedar
trabado en un tramo de su recorrido. En estos casos es conveniente avisar al
personal del laboratorio, debido a que la manipulación errónea se podría
transformar en un error irreparable.
Fijarse si se está utilizando el objetivo correcto

Los microscopios presentan a la par de los dos objetivos convencionales (10X y
40X), un tercer objetivo llamado de inmersión (100X). Este objetivo utiliza como
fundamento el uso de un aceite especial (aceite de inmersión) interpuesto entre
dicho objetivo y el cubreobjeto. De esta manera, se altera el índice de difracción del
medio interpuesto entre el preparado y el objetivo, y por simple fórmula de límite de
resolución, se consigue un mayor aumento. Puede darse el caso que erróneamente
hayamos acomodado el objetivo de inmersión en lugar del objetivo 40X,
imposibilitando la visión correcta al microscopio. En las lentes objetivas de 100X las
causas de no observación de la imagen son las mismas que para el de 40X, la
diferencia es que siempre usan aceite de inmersión.
4.4.- Uso del sistema de medición
4.4.1 Checar el sistema óptico, de iluminación y mecánico del microscopio

4.4.2 Confirmar que el sistema óptico se encuentre limpio
4.4.3 Revisar el sistema eléctrico del instrumento (clavijas en buenas condiciones)
4.4.4 Seguir las instrucciones para el enfoque de la muestra
4.4.5 Terminado el trabajo apagar el microscopio, limpiar su sistema óptico y entregarlo al
encargado del laboratorio
4.4.6
4.4.7 5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS
5.1 DIBUJAR LOS CAMPOS MICROSCÓPICOS OBSERVADOS AL ENFOCAR

SIN ENFOCAR 10 X ENFOCADO
AL CAMBIAR A 40 X (sin enfocar)

40 X ENFOCADO
AL CAMBIAR A 100 X (sin enfocar) 100 X ENFOCADO

5.2 De acuerdo a las imágenes observadas al microscopio redactar en el cuadro siguiente
tomando como base el aumento y poder de resolución las diferencias encontradas en
cada una de ellas
Al enfocar con el objetivo de 10 X
Al cambiar al objetivo 40X (sin

enfocar)
Imagen enfocada con el objetivo

40X
Cambiar al objetivo 100 X (sin

enfocar)
Imagen enfocada con el objetivo

100 X
5.3 Analizando las indicaciones sobre el uso del microscopio y lo observado en el manejo
del instrumento redactar los principales cuidados que se deben dar a:
Objetivos
Oculares
Fuente
luminosa
Sistema
mecánico

6.1 Lo más conveniente es dejar fijo el microscopio en la mesa de trabajo cubierto con
una funda para evitar el polvo cuando no se utiliza o bien guardarlo en un armario.
6.2 La mesa que se vaya a utilizar debe ser estable para evitar molestas vibraciones de
la muestra durante el examen, estar alejada de las ventanas y de preferencia ser de
fondo negro.
6.3 Mantener el microscopio por lo menos 15 cm del borde de la mesa de laboratorio.
6.4 La posición ante el microscopio debe ser cómoda y estar a una altura correcta.
6.5 Mantener limpio el sistema óptico y el de iluminación (libre de polvo, aceite, grasa,
etc)
6.6 Al limpiar las lentes primeramente eliminar las partículas de polvo, ya sea con un
bulbo inyector de aire, un pincel o bien soplando fuertemente sobre la lente.
Posteriormente usar de preferencia papel para lentes seco, en caso de estar sucios
de grasa o aceite usar una mezcla de alcohol – acetona- éter (80%/10%/10%) y en
última instancia con xilol . Esta limpieza debe de realizarse antes y después de usar
el microscopio.
6.7 Las partes externas del microscopio se limpian con un lienzo seco, o en su efecto
humedeciendo un algodón con un detergente suave, posteriormente limpiar con un
trapo húmedo, nunca limpiar con alcohol o acetona.
6.8 Evitar que las lentes estén en contacto con saliva debido a que al mezclarse con el
polvo forma una capa difícil de remover .
6.9 Cuando se observe a través del ocular no pegar los ojos a la lente(los cosméticos
las dañan).
6.10 Evitar que las lentes objetivas se rayen o quiebren al enfocar. Para realizar el
enfoque hay una de operaciones que facilita y acelera el enfoque y evita al mismo
tiempo que se estropee la preparación o el microscopio la más indicada y sencilla
para el enfoque inicial es el usar el objetivo de 10X, porque la mayoría de los
microscopios tienen un tope que impide que esta lente pegue con el portaobjetos.
6.11 Al enfocar hacerlo siempre tratando de alejar la lente de la muestra y nunca en
sentido contrario.
6.12 Nunca deje la lente sumergida en el aceite o en contacto con muestras líquidas.
6.13 No quitar las lentes objetivas y oculares de su lugar.
6.14 No cambiar las lentes objetivas tomándolas con los dedos por su estructura
metálica, ya que el sudor contiene ácidos grasos y otras sustancias que los dañan,
además al moverlos de esta forma los desajusta.
6.15 No quitar el condensador, ni tratar de ver si estos tienen diafragma con el dedo usar
siempre en dispositivo provisto por fabricante para hacerlo.
6.16 Al desconectar los enchufes del microscopio no tirar del alambre, sujetar
firmemente el enchufe y luego desconectarlo de la toma.
6.17 El microscopista que use anteojos debe quitárselos cuando vaya a observar al
microscopio, excepto el que sufre astigmatismo, o que las lentes oculares tengan
indicaciones de que pueden usarse con gafas, en este caso evitar el contacto de las
lentes oculares con los anteojos pues los oculares pueden rayarse e inutilizarse.

6.18 Nunca mueva ninguna parte del microscopio si antes no sabe para que sirve.
6.19 Siempre que enfoque primero localice visualmente las partes que va utilizar y
posteriormente proceder a moverlas.
7.- GARANTIA DE CALIDAD

7.1 Dar al microscopio cuidados y mantenimiento Diario, Mensual y Semestral
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Las indicaciones del manejo y cuidados del microscopio pueden llevarse a cabo en
cualquier microscopio moderno

ILUMINACION DE KÖHLER
1.- INTRODUCCIÓN
En microscopia, la iluminación de la muestra es la variable más importante para obtener imágenes
de alta calidad. No obstante, con frecuencia la mayoría de los sofisticados y bien equipados
microscopios no pueden rendir las imágenes excelentes debido al uso incorrecto de la fuente de luz,
que conduce generalmente a la iluminación inadecuada de la muestra. Toda muestra correctamente
iluminada debe estar libre de brillo y la luz dispersada uniformemente en el campo visual.
Los cambios más importantes en la microscopia surgieron a partir de los comienzos del siglo XX,
cuando el gran físico Alemán, el Dr. August Köhler, desarrolló un nuevo sistema de iluminación,
que aún hoy en día se maneja y lleva su nombre. esta es recomendada por todos los fabricantes de
los microscopios modernos del laboratorio permitiendo así que el microscopista utilice el
microscopio a su capacidad máxima.

La iluminación Köhler consiste en regular la marcha de los rayos de luz, centrando la
mayor intensidad de luz y cubriendo exactamente el diámetro frontal de cada lente objetiva
en su apertura numérica específica, de esta manera, poder aprovechar al 100% la luz
emitida por la fuente emisora. Esta técnica utiliza dos diafragmas; un diafragma
denominado de campo, situado al nivel de la lámpara colectora de bajo poder y un
diafragma llamado de abertura (iris) situado en el condensador, en la práctica, la imagen
del diafragma de campo es proyectada en el plano de la preparación por el condensador,
el cual se desplaza verticalmente hasta obtener una imagen lo más nítida posible del
diafragma de campo. El diafragma de campo sirve para regular la abertura de la
iluminación, es decir, el contraste, la profundidad de campo y el poder de resolución y el
diafragma iris controla el ángulo de los rayos luz que emergen del condensador y que
alcanzan la muestra, tiene gran ingerencia en la resolución, contraste, profundidad de foco
y en el brillo de la imagen.
3.1 Reactivos

Xilol
Mezcla de alcohol-acetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml

NUM CANTIDAD DESCRIPCION

Porta objetos
Cubre objetos
Papel para lentes
4.3 Muestra
Cortes histológicos, frotis sanguíneos y bacterianos.
4.4.1 Proporcionar un microscopio óptico que tenga en su lámpara diafragma de campo

4.4.2 Disponer cuando menos de dos preparaciones teñidas
4.3- Seguir las indicaciones para regular la iluminación en el microscopio compuesto.
1. Enfocar la muestra (proceder de acuerdo a la técnica de la práctica 2, del inciso 3

-10)
2. Cerrar gradualmente el diafragma de la fuente de luz hasta ver una imagen

poligonal.


3. Descender, ligeramente el condensador hasta ver nítido el borde del diafragma de
campo.
4. Si la imagen poligonal no está en el centro, centrarla utilizando los tornillos del

condensador.
5. Una vez centrado el condensador abrir el diafragma de la fuente de luz hasta que el
polígono abarque todo el campo, realizado este paso ya no mover el diafragma de
campo ni la altura del condensador.
6. Abrir completamente el diafragma del condensador, volver a cerrar lo necesario

(hasta que la imagen tenga un buen contraste).

7. Al cambiar de objetivo, enfocar con el tornillo micrométrico y contrastar la imagen
con el diafragma iris y para ajustar el brillo modificar la intensidad de la fuente
luminosa o colocar filtros.
4.4. Uso del sistema de medición
4.4.1 Previo al uso del microscopio limpiar su sistema óptico y de iluminación

4.4.2 Enfocar primero la muestra usando la lente objetiva de 10X
4.4.3 Proceder a regular la iluminación
4.4.4 Terminada la observación de la muestra apagar la lámpara del instrumento y
desconectarlo.
4.4.5 Limpiar el sistema óptico
4.4.6 Entregar el instrumento al encargado del laboratorio

5.1 De acuerdo a los pasos seguidos al regular la iluminación en el microscopio dibujar
las imágenes captadas en los campos microscópicos al efectuar cada uno de los pasos de
la técnica de iluminación de Kohler
Sin regular la iluminación Al cerrar el diafragma de campo
Bajar el condensador Tener el diafragma de campo enfocado

Al abrir el diafragma de campo Con la iluminación regulada
5.2 Describir en la tabla siguiente las imágenes de los campos observados al llevar a cabo
cada uno de los pasos de la técnica de iluminación
IMAGEN CAPTADA DESCRIPCION
AL
Enfocar con 10 X
sin regular la
iluminación
Cerrar el diafragma
de campo
Bajar el condensador
Tener enfocado el
diafragma de campo
Abrir el diafragma
de campo
Cerrar el diafragma
de condensador

Tener regulada
la iluminación

6.1 Colocar el microscopio en una mesa alejada de las ventanas.
6.2 Al mover el diafragma iris o el de campo hacerlo con suavidad
6.3 Al desplazar el condensador hacerlo lentamente y siempre procurar alejarse de la platina nunca
en sentido contrario
6.4 El diafragma de campo se mueve cuando se regula la trayectoria de la luz y solo se utiliza
con la lente objetiva de 10X
6.5 Para regular la luz en las lentes objetivas de 40X ó 100X solo se mueve el diafragma iris o
el botón de encendido (control de intensidad de luz).
6.6 Generalmente las muestras teñidas requieren más luz y las traslucidas menos.

7.1 Regular la iluminación siempre que use el microscopio
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Se pueden utilizar diferentes muestras teñidas

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
1.- INTRODUCCIÓN
La microscopia de campo oscuro es una técnica de iluminación especial que se
caracteriza en la iluminación oblicua para realzar el contraste en las muestras que no son
reflejadas bien bajo condiciones normales de la iluminación del campo claro,
observándose partículas que aparecen como puntos brillantes sobre un fondo oscuro. Este
tipo de iluminación se utiliza en preparaciones en fresco o sin coloración y cuando se
quiere estudiar el relieve de las estructuras a observar (bordes, grietas, flagelos, bacterias,
fibras, cristales) o aquellos objetos que, a causa de la falta de contraste apenas se
distinguen o no se aprecian en campo claro. Las estructuras internas de los objetos no se
reproducen tan satisfactoriamente. Las partes principales de este microscopio son: un
condensador y un objetivo especial.
En el microscopio de campo oscuro, los rayos centrales de luz son suprimidos

completamente dando lugar a un campo negro, los rayos periféricos sólo pueden penetrar
al sistema óptico cuando algún objeto presente en el campo de visión microscópica los
desvía de su trayecto, al chocar la luz con algún elemento del preparado se reflejan o
refractan penetrando en el eje óptico, entonces se pueden ver, partículas que aparecen
como puntos brillantes sobre un fondo oscuro,. Para obtener este tipo de iluminación se
utilizan diafragmas o interceptores para campo oscuro (obturadores). También hay
condensadores formados por una lente gruesa oscura plano convexa, cuya curvatura es
paraboloide o cardiode; su finalidad es concentrar los rayos en la cara superior del
portaobjeto. Una característica importante en este instrumento es que siempre la apertura
numérica del objetivo debe ser inferior a la abertura del condensador.
3.1 Reactivos

Xilol

4. Microscopio de campo oscuro

Porta objetos
Cubre objetos
Papel para lentes
4.5 Muestreo y muestra

4.1.1.Recolectar una muestra de orina (primera micción de la mañana previa limpieza de
genitales)
4.1.2. Mezclar la muestra, después centrifugar a 2000 rpm durante 5 minutos
4.1.3. Obtener el sedimento y colocarlo entre porta y cubre objetos

4.6.1 Instalar un microscopio de campo oscuro
4.6.2 Seleccionar el lugar adecuado para su colocación, colocarlo en una mesa alejada
de las ventanas de preferencia en un área oscura.
4.6.3 Alistar muestras biológicas para su observación al microscopio
4.7 Sistema de medición

4.3.1 Descripción del microscopio de campo oscuro
6. Identifique las partes del sistema mecánica del microscopio de campo oscuro.
antes mencionados.

4.3.2 Manejo del microscopio de campo oscuro
1. Colocar la fuente luminosa al microscopio y centrarla (la lámpara se centra con el
objetivo seco débil y con el condensador de campo claro).
2. Una vez centrada la luz colocar el condensador de campo oscuro
3. Colocar el porta objeto con muestra en la platina.
4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento ( 10 X ).
5. Bajar la platina y colocar la preparación (fijarse que quede firmemente sujeta al
carro, y que el cubre objetos y el objeto estén situados hacia arriba) acomodando la
porción de la preparación que se va examinar en la apertura central de la platina
preparación. Normalmente los microscopios convencionales poseen un tope que
impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo, puede darse el caso
que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lente objetiva de 10X)
8. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico.
9. Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparación, a fin de ir
reconociendo imágenes que le interesen. Cambiar a un objetivo de más aumento
(sin bajar la platina con el tornillo macrométrico) y enfocar únicamente con el tornillo
micrométrico.
10. Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gota de
aceite de inmersión en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina) en el
punto de mayor concentración luminosa, acerque la lente de 100 lentamente hasta
que esta se encuentre en contacto con el aceite (observar lateralmente éste
movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente el tornillo micrométrico
hasta encontrar la imagen.
11. Al finalizar su observación, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor

aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes objetivas
y la platina.
4.4. Uso del sistema de medición

4.4.1 Checar que el sistema óptico y de iluminación del microscopio se encuentren limpios.
4.4.2 Previo a la observación de las muestras regular la trayectoria de la luz utilizando la
técnica de iluminación de Köhler.
4.4.3 Enfocar la muestra de acuerdo a las indicaciones establecidas

5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de campo oscuro proporcionado en el
laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente y poner los
nombres correspondientes a cada una.
5.2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO

OSCURO

Condensador vista frontal Condensador vista lateral
Obturador Lente objetiva
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTERIORES REDACTAR LA DESCRIPCION

DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
(solo se citan las partes que son diferentes al microscopio de campo claro)
SISTEMA PARTE DESCRIPCIÓN FUNCION
Condensad
or
I
Lente
L auxiliar
U
Lente frontal
M
I
N Obturador
A
C
I Tornillos de
O centrado
N
DESCRIPCION DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

SISTEMA PARTE DESCRIPCIÓN FUNCIÓN
Objetivos
O
P
T
I Oculares
C
O
El sistema mecánico esta integrado por las mismas partes que constituyen al microscopio
de campo claro
5.4 DE ACUERDO A LOS PASOS SEGUIDOS AL ENFOCAR CON EL MICROSCOPIO

DE CAMPO OSCURO DIBUJAR LAS IMÁGENES CAPTADAS
Campo observado antes de enfocar la muestra
Campo con la muestra enfocada

5.5 DE ACUERDO A LAS IMÁGENES CAPTADAS ANTERIORMENTE REDACTAR SUS
OBSERVACIONES EN EL SIGUIENTE CUADRO
CAMPO DESCRIPCION
INICIAL
FINAL
CONCLUSIONES
6.- CONFABILIDAD ANALÍTICA
6.1 Para una mejor observación de los objetos utilizar muestras sin teñir.
6.2 Checar que el condensador este colocado en el microscopio de forma adecuada.
6.3 Utilizar porta objetos cuyo espesor se encuentre entre 0.9 – 1.1mm y cubre objetos
de 0.17mm.
6.4 Cuidar que la abertura numérica del objetivo sea aproximadamente 0.1 menor que
la abertura límite inferior del condensador.

6.5 Usar cubre objetos, portaobjetos nuevos (libres de arañazos) perfectamente
limpios.
6.6 Confirmar la perfecta limpieza del sistema óptico (sin grasa y polvo)
6.7 Al montar la preparación procurar que no sea demasiado gruesa.
6.8 Evitar que se formen burbujas al colocar el cubre objeto o el aceite de inmersión a
la preparación.
6.9 Los objetos a examinar deben de estar en el seno de un líquido límpido (agua,
aceite de inmersión, etc,) de ningún modo al aire o en un líquido turbio

7.1 Checar constantemente el sistema eléctrico
7.2 Cada vez que el instrumento se use revisar el sistema óptico, mecánico y de
iluminación
8.- PRACTICABILIDAD
8.1. Se pueden utilizar acetatos o diapositivas para describir al microscopio
8.2. La muestras pueden ser sustituidas por otras
9.- BIBLIOGRAFÍA
Barrera Escorcia R. EL MICROSCOPIO OPTICO. Ed Escuela Nacional de Estudios

Profesionales Iztacala,
UNAM. México DF
Brock BIOLOGÍA DE LOS MICROORGANISMOS ed. Prentice Hall, Madrid España
Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-

ngl+JavaNavigator
Lich, Raphael. MÉTODOS DE LABORATORIO, Segunda edición Ed. Interamericana
S.A. .C.V. México DF
Marcel Locquin, Mauricel Langeron PRINCIPIOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA México ,

Ed. Labor S.A.
EL MICROSCOPIO http://mrmbers.nbci,com/microscopio/main.html
MICROSCOPIOS http://microcirncia.com/Principal%20microscopios.htm
MICROSCOPIOS http://www.opticaroma.com/microscopios/index.html
MICROSCOPE WORLD http://www.microscopeworld.com/

MICROSCOPIA http://charfacnu.cie.umn.edu/glossary/
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
NIKÓN MICROSCOPES ttp://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat=5
Rincón Sánchez A.R., Reyes Ortiz N. MANUAL DE MICROSCOPIA ÓPTICA Editado:

Asociación de Químicos del Instituto Nacional de Nutrición Salvador Subirán. México
Sanpedro J. TÉCNICA MICROGRÁFICA Y DE ORGANOGRAFIA MICROSCÓPICA.

Universidad Nacional Autónoma de México

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
1.- INTRODUCCIÓN
El ojo humano es capaz de observar diferencias de color y de intensidades de color, no así
diferencias de fases (producidas por distintos índices de refracción que tienen los objetos),
por eso se recurre al microscopio de contraste de fase. La microscopia de contraste de
fases hace posible observar células en estado vivo más fácilmente, ayudando así a evitar la
creación de condiciones artificiales tales como las introducidas por la tinción (aparición de
artefactos que interfieren con la correcta visión y alteración de las estructuras naturales
de las célula). En muchos laboratorios de bacteriología, el microscopio de contraste de
fases ha reemplazado prácticamente el microscopio óptico común como instrumento de
investigación.

El microscopio de contraste de fases tiene como objetivo transformar la diferencia de fase,
insensible al ojo, en diferencia de amplitud, visibles por medios puramente ópticos.
Cuando la luz pasa por las muestras se originan dos tipos de haces: haces directos y
difractados. Estos inciden sobre las lentes convergentes del objetivo de modo tal que
originan en el plano focal posterior, una imagen de difracción (imagen de amplitud).
Desde el punto de vista del espectro de difracción un objeto de fase, difiere de uno de
amplitud, en que el de fase tiene los rayos difractados retrasados un cuarto de longitud de
onda. Por tal motivo para transformar un objeto de fase en uno de amplitud, se debe
corregir esa diferencia de fase de tal forma que los rayos difractados y los no difractados
experimenten fenómenos de interferencia destructiva, formando de esa manera la imagen
de la estructura en observación. Desde el punto de vista del funcionamiento se puede
recurrir por medio de la placa de fase que se encuentra en la lente objetiva a un atraso de
la marcha de los rayos difractados en un cuarto de longitud de onda, significa un medio de
retardo total. De esta manera se produce un fenómeno de interferencia destructiva lo que
permite que las estructuras en observación resalten en color negro sobre fondo claro. Este
fenómeno recibe el nombre de contraste de fase negativa. Por otra parte, se puede atrasar
la luz directa un cuarto de longitud de onda, por lo cual se elimina la diferencia de fase
permitiendo que los rayos directos y difractados interfieran entre sí en forma
constructiva. Las estructuras en observación se muestran brillantes y se llama contraste
de fase positiva.
3.1 Reactivos

Xilol
5. Microscopio de contraste de fase

Porta objetos
Cubre objetos
Papel para lentes

4.1.1.Recolectar una muestra de orina (primera micción de la mañana previa limpieza de
genitales)
4.1.2. Mezclar la muestra, después centrifugar a 2000 rpm durante 5 minutos
4.1.3. Obtener el sedimento y colocarlo entre porta y cubre objetos

4.9.1 Instalar un microscopio de contraste de fase
4.3. Sistema de medición

4.3.1. Descripción del microscopio de contraste de fase
1. Identifique las partes del sistema mecánica del microscopio de contraste de fase

antes mencionados.
4.3.2 Manejo del microscopio de contraste de fase.

12. Colocar la fuente luminosa al microscopio y centrarla (la lámpara se centra con el
objetivo seco débil y con el condensador de campo claro).
13. Ajustar el condensador de fase, colocando la ranura anular de 10 X y la lente
objetiva de 10X
14. Quitar el ocular de la izquierda y sustituirlo por el ocular de fase. Enfocar la imagen
girando el ocular de fase y con la ayuda de los botones de ajuste situados en el
condensador, centrar los anillos.
15. Retirar el ocular de fase y colocar nuevamente el ocular normal.
16. Bajar la platina y colocar la preparación (fijarse que quede firmemente sujeta al
carro, y que el cubre objetos y el objeto estén situados hacia arriba) acomodando la
porción de la preparación que se va examinar en la apertura central de la platina.
preparación.
19. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico
20. Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparación, a fin de ir
reconociendo imágenes que le interesen.
21. Al cambiar a un objetivo de mayor aumento (sin bajar la platina con el tornillo
macrométrico), cambiar la posición del condensador colocando la ranura anular
correspondiente y enfocar únicamente con el tornillo micrométrico.
22. Al finalizar su observación, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor
aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes objetivas
y la platina.

4.4.1 Checar que el sistema óptico y de iluminación del microscopio se encuentren limpios.

5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de contraste de fase proporcionado en
el laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente y poner los
5. 2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DE

CONTRASTE DE FASE

Condensador vista frontal Ranuras anulares del Condensador
Lente objetiva vista lateral Placa de fase
Ocular de fase Ocular normal
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTERIORES REDACTAR LA DESCRIPCION DE

LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCION

Ocular
normal
Ocular de
fase
O

P Objetivo
de
T fase
I Placa de
fase
C
O Anillo
circu-
lar
Zona
comple-
mentaria
Condensad
or
I
L Lentes
frontal
U condensad
or
M Lente
auxiliar
I condensad
or
N
A Ranuras
anu-
C larres
O Lámpara
El sistema mecánico esta integrado por las mismas partes que constituyen al
microscopio de campo claro

5.4 dibujar los campos microscópicos detectados al llevar a cabo la regulación de la
trayectoria de la luz y el enfoque de la muestra en el microscopio de contraste de fases
OCULAR NORMAL AL COLOCAR EL OCULAR DE FASE
CON OCULAR DE FASE ENFOCADO ANILLOS CENTRADOS
IMAGEN EN CAMPO CLARO IMAGEN EN CONTRASTE DE FASE

5.5 REDACTAR LAS OBSERVACIONES AL REGULAR LA TRAYECTORIA DE LA LUZ
EN EL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
PASO DESCRIPCION DEL CAMPO

EFECTUADO EN
LA TECNICA
Con el ocular
normal
Colocar el ocular
de fase
Con el ocular de
fase enfocado
Anillos centrados
Al colocar
nuevamente el
ocular normal
5.6 DESCRIPCION DE LAS IMAGENES OBSERVADAS EN EL MICROSCOPIO DE

CONTRASTE DE FASE AL ENFOCAR LA MUESTRA
CAMPO DESCRIPCION
Imagen en
campo claro
Imagen en
contraste de
fase

6.1 Las estructuras a observar deben estar sin teñir o escasamente teñidas
6.2 Los objetos a estudiar no deben tener paredes gruesas y deben ser
extremadamente delgados
6.3 Las superficies ópticas, tanto del microscopio como de la preparación deben
de estar perfectamente limpias.
6.4 La fuente luminosa deberá tener una luz muy intensa.
6.5 Checar que este colocado en el microscopio el condensador de contraste de
fase y las lentes objetivas de fase adecuadas.
6.6 Confirmar que coincida la ranura anular con el tipo de lente objetiva a utilizar
6.7 Evitar que se formen burbujas al colocar el cubre objeto o el aceite de
inmersión a la preparación.
6.8 Los objetos a examinar deben de estar en el seno de un líquido límpido
(agua, aceite de inmersión, etc,) de ningún modo al aire o en un líquido turbio

7.1 Checar constantemente el sistema eléctrico del instrumento
iluminación
8.- PRACTICABILIDAD
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

1.- INTRODUCCIÓN
La fluorescencia es la propiedad que tienen ciertas sustancias de emitir luz de longitudes de
onda larga, cuando son expuestas a una radiación de longitud de onda corta. Esta
capacidad de fluorescencia puede ser débil o alta o que no la tengan; pero este último
puede ser corregido con el coloreado con sustancias fluorescentes llamada fluorocromo
que inducen fluorescencia que facilitan diferenciarlos. La microscopía de fluorescencia
utiliza dispositivos especiales que permiten aprovechar este fenómeno para visualizar
estructuras que con otro tipo de microscopía no se puede realizar. En la actualidad el
microscopio e fluorescencia se ha convertido en un instrumento esencial en el área de
inmunología, autoinmunología, bacteriología, micología, virología, parasitología citología,
genética, etc. Otras áreas en donde se aplica la microscopia de fluorescencia son;
industria textil para la detección de fibras especificas, en lapidaria para la certificación de
gemas, materiales metálicos, petróleo y sus derivados.

La mayoría de los microscopios producen una imagen a partir de la luz que pasa a través de
una muestra, pero un objeto se puede verse también porque emite luz; esta es la base del
microscopio de fluorescencia. Cuando algunas moléculas absorben energía radiante
quedan excitadas electrónicamente y posteriormente liberan energía en forma de luz.
Cualquier luz emitida por una molécula excitada (luz fluorescente) tendrá una longitud
de onda superior (o de energía inferior) a la radiación original absorbida. La luz
fluorescente es emitida muy rápidamente por una molécula excitada al liberar energía
atrapada y recuperar un estado más estable. Si un objeto que fluoresce es iluminado a su
longitud de onda absorbente y visualizado a través de un filtro que sólo permita pasar la
luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida, el componente aparece brillante sobre
un fondo oscuro. La intensidad y el color de la luz es una propiedad característica de la
molécula fluorescente utilizada. Los colorantes fluorescentes empleados para la tinción
celular son detectados con ayuda del microscopio de fluorescencia. Este microscopio es
similar al microscopio convencional, a excepción de que la luz incidente que procede de
una potente fuente atraviesa un primer filtro que selecciona la longitud de onda capaz de
excitar al fluorocromo, antes de incidir sobre la muestra. La luz emitida por la muestra
(reflejada y fluorescente) atraviesa un segundo filtro que selecciona la longitud de onda de
emisión del fluorocromo.
3.1 Reactivos

Xilol

Equipo para la detección de 1
anticuerpos antinucleares
6. Microscopio de fluorescencia

Porta objetos
Cubre objetos
Papel para lentes

4.1.1.Obtener sangre venosa de un paciente con ayuno de 8 horas. Sin anticoagulante.
4.1.2. Dejar coagular por lo menos durante 30 minutos, después centrifugar a 2000 rpm
durante 15 minutos
4.1.3. Obtener con pipeta Pasteur aproximadamente 0.5 ml de suero

4.11.1 Instalar un microscopio de fluorescencia
4.12 Sistema de medición
4.3.1 Descripción del microscopio de fluorescencia

11. Identifique las partes del sistema mecánica del microscopio de fluorescencia

antes mencionados.
4.3.2 Manejo del microscopio de fluorescencia
1.Colocar el tablero de defensa de la luz.

2.Poner el condensador en posición DF.
3.Introducir el filtro excitador (Presione el tornillo de la derecha).
4.Checar que el obturador este hacia afuera.
5.Prender la lámpara de halógeno.
6.Bajar la platina para colocar la muestra
7.Subir la platina hasta el tope.
8.Bajar la platina lentamente hasta encontrar la imagen del objeto.
9.En caso de que la imagen sea demasiado brillante, regular el brillo con la ayuda de
los filtros ND.
10. Si por algún motivo no esta revisando la preparación introduzca el obturador para
evitar perdida de fluorescencia de la muestra.

4.5.1 Checar que el sistema óptico y de iluminación del microscopio se encuentren
limpios.
4.4.3. Colocar al microscopio la placa protectora
4.5.3 Utilizando la técnica de anticuerpos antinucleares proceder a teñir dos laminillas
5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de fluorescencia proporcionado en el
laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente y poner los

• DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA
Lámpara Filtros ND

Filtro exitador Placa obturadora
Lente Objetiva Tornillos laterales del filtro exitador
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTERIORES REDACTAR LA DESCRIPCION

DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
SISTEM PARTE DESCRIPCION FUNCION

A
Pantalla
M protectora
E
C
A
N
I
C Tornillos
O laterales
del filtro
exitador

O Objetivo
P
T
I Ocular
C
O Filtro de
barrera
Lámpara
I Filtros ND
L
U Diafragma
de
M campo
I Tornillo de
N centrado
A Obturador
C
I Filtro
exitador
O
N
5.4 DIBUJAR LOS CAMPOS MICROSCOPICOS OBSERVADOS AL ENFOCAR CON EL
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
CAMPO CLARO EN FLUORESCENCIA

5.5 DESCRIPCION DE LOS CAMPOS OBSERVADOS EN EL MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA, De acuerdo a las imágenes captadas anteriormente redactar sus
observaciones en el siguiente cuadro
CAMPO DESCRIPCION
CAMPO
CLARO
EN
FLUORE
SCENCI
A
CONCLUSIONES

6.1 Evite trabajar con el microscopio frente a una ventana ya que impedirá
apreciar la fluorescencia en su totalidad
6.2 Ajuste la trayectoria de la luz de acuerdo a las indicaciones establecidas en
el manual de operaciones del instrumento.
6.3 Debido a que la vida media de la lámpara es corta y lo que limita su vida es
el numero de encendidas, se recomienda usarla por periodos de 2 horas mínimo
cada vez tratando de programar horarios específicos
6.4 Una vez apagada la iluminación de fluorescencia, es importante esperar 30
minutos antes de volver a prenderla.
6.5 Utilizar lentes objetivas de abertura numérica elevada, ya que tienen mayor
luminosidad y mejor resolución.
6.6 En epifluorescencia se recomienda usar objetivos de inmersión debido a que
la imagen aparece más luminosa.
6.7 Los objetivos acromáticos y planacromáticos solo se deben utilizarse para
fluorescentes excitables de 450nm en adelante.
6.8 Checar que el condensador este colocado en la posición DF

7.1 Checar constantemente el sistema eléctrico del instrumento
iluminación
8.- PRACTICABILIDAD

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COLEGIO LIBRE DE ESTUDIOS

M.C. JAIME RODRIGUEZ ROJAS

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 1

La interpretación de la metodología que se requiere en cada una de las determinaciones

Por lo anterior se considera necesario que el estudiante de Química Clínica tenga

Al terminar el curso el estudiante:

Seleccionará adecuadamente el instrumento requerido de acuerdo al tipo de muestra y

Empleará apropiadamente los instrumentos básicos del laboratorio de acuerdo a la

Valorará la importancia de la interpretación de los datos obtenidos en cada uno de los

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 2

PRACTICA Nº NOMBRE DE LA PRACTICA

1 DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 3

Durante el desarrollo de la práctica, queda estrictamente prohibida la estancia en el

Es obligatorio usar bata blanca en todas las sesiones.

Todos los objetos personales deben de quitarse de la mesa de trabajo.

Limpiar las mesas al terminar las prácticas.

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 4

Si durante la práctica se emplean orinas, no tirarlas directamente a la tarja, antes ponerles

Lavar las manos inmediatamente en caso de una probable contaminación.

El material de laboratorio se entregará por equipo de dos personas y ambos integrantes se

Revisar los instrumentos al recibirlos, reportar al personal técnico del laboratorio o al

Reportar al personal técnico cualquier falla mecánica observada en los instrumentos

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 5

A su vez se tiene que el Licenciado en Química Clínica es un profesional que se

La experiencia educativa se imparte en sesiones teóricas y de laboratorio, en las primeras

Por tal motivo el presente manual tiene como objetivo

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 6

El desarrollo de la practica consta de tres secciones. La primera, se enfoca a detectar las

La segunda, se orienta al manejo del instrumento dándose la técnica, cuadros de

DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 7

A nivel del laboratorio, en donde el Químico Clínico desempeña su principal función, el

2.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN

3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 8

1. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos

3.3 Materiales de laboratorio

NUM. CANTIDAD DESCRIPCION

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

4.1.- Preparación del sistema de medición

4.3 Uso del sistema de medición

5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 9

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 10

Condensador Fuente luminosa

Tubo óptico Platina

SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCION

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 11

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 12

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 13

MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

2.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN

El microscopio es un instrumento óptico de precisión, mediante un sistema de lentes y

Diseño: M.C. Jaime Rodríguez Rojas 14

NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

3.2 Equipo de Laboratorio

2. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos