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12.2 Semana Practica Metabolismo de La Bilirrubina

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Este documento describe una práctica de laboratorio sobre el metabolismo de la bilirrubina. La práctica incluye dos experimentos para medir los niveles de bilirrubina total y directa en suero, así como una prueba cualitativa para detectar urobilinógeno en orina. El marco teórico explica el proceso de metabolismo de la bilirrubina desde su producción hasta su excreción y los trastornos que pueden causar hiperbilirrubinemia e ictericia.

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Este documento describe una práctica de laboratorio sobre el metabolismo de la bilirrubina. La práctica incluye dos experimentos para medir los niveles de bilirrubina total y directa en suero, así como una prueba cualitativa para detectar urobilinógeno en orina. El marco teórico explica el proceso de metabolismo de la bilirrubina desde su producción hasta su excreción y los trastornos que pueden causar hiperbilirrubinemia e ictericia.

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Este documento describe una práctica de laboratorio sobre el metabolismo de la bilirrubina. La práctica incluye dos experimentos para medir los niveles de bilirrubina total y directa en suero, así como una prueba cualitativa para detectar urobilinógeno en orina. El marco teórico explica el proceso de metabolismo de la bilirrubina desde su producción hasta su excreción y los trastornos que pueden causar hiperbilirrubinemia e ictericia.

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ASIGNATURA : BIOQUIMICA YNUTRICION

CICLO : II
SEMESTRE ACADEMICO : 2020-1
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA
PROFESIONAL DE MEDICINAHUMANA
“Dr. Wilfredo ErwinGardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE


RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV

PRÁCTICA
METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA

PLANA DOCENTE SEDE ICA : GARCIA CALDERON Jack.


SEDE CHINCHA : COILA DE LA CRUZ, Hilda Victoria.
SEDE LIMA : RIVERA FERNÁNDEZ, Nelson
DOCENTE : SALINAS VELIZ, Yolanda.
DOCENTE : ROSAS HERNANDEZ, Gerardo
DOCENTE : CHUMBES HUAMAN, Andrea
DOCENTE : DIAZ SANCHEZ, LUIS
LOGRO A MEDIR:

Conocer el metabolismo de la Bilirrubina y el Ciclo Entero-hepático-Renal del


Urobilinógeno. Conocer a las variables que generan la Ictericia.
MARCO TEÓRICO:

La bilirrubina es un pigmento amarillo, que se produce


en el ser humano a partir del Núcleo HEM (que es una
Protoporfirina Tipo IX ó Tetrapirrol macro cíclico,
molécula que tiene insertado un átomo de
Hierro).Sobre este núcleo HEM actúa la enzima
Oxigenasa Heme de los microsomas. Esta Oxigenasa
rompe el enlace alfa meteno del anillo tetrapirrólico y
se abre la molécula, convirtiéndose en el pigmento
verde Biliverdina, el cual es subsecuentemente
hidrogenado y forma Bilirrubina .Esta reducción la
realiza la enzima citosólica Biliverdina reductasa que
es una enzima NADPH dependiente. Por cada mol de
HEME catabolizado por esta ruta se produce un mol
de bilirrubina, de CO2 y de ión férrico.
La producción diaria de bilirrubina a partir de todas sus fuentes
en el hombre es de 250 a 350 mg. Aproximadamente el 85% de
la bilirrubina total producida se deriva de la molécula del HEM de
la Hb liberada a partir de los eritrocitos senescentes que son
destruidos en el sistema retículo endotelial del hígado, bazo y
médula ósea. El 15% remanente se produce a partir de la
destrucción de las células precursoras de los eritrocitos en la
médula ósea ( llamada “eritropoyesis inefectiva”) y también
proviene del catabolismo de otras proteínas que contienen
núcleo Hem como la mioglobina, citocromos, peroxidasas y que
están distribuidas a través de todo el organismo. Después de su
producción en los tejidos periféricos, la bilirrubina es
transportada al hígado asociada a la albúmina .La Bilirrubina es
rápidamente captada por los hepatocitos, se transporta y se
conjuga al ácido glucurónico (UDP – Glucoronil transferasa) para
producir mono y diglucuronato de bilirrubina los cuales se
excretan en la bilis.
Y después de ser excretados hacia el intestino delgado. En el
tracto intestinal los glucorónidos de bilirrubina se hidrolizan a la
forma no conjugada por el pH al alcalino del intestino delgado, y
por la acción catalítica de la betaglucuronidasa del hígado,
células epiteliales intestinales y las bacterias.
La bilirrubina no conjugada es posteriormente reducida por la
flora bacteriana anaeróbica intestinal para formar un grupo de
tres tetrapirroles incoloros colectivamente llamados
Urobilinógenos que luego se reducen y forman tres productos:
estercobilinógeno, mesobilinógeno y Urobilinógeno. Hasta el
20% de los Urobilinógenos producidos diariamente son
reabsorbidos desde el intestino hacia la circulación para ir al
hígado (Circulación enterohepática). La mayor parte del
Urobilinógeno reabsorbido es captado por el hígado y es re-
excretado en la bilis y solamente un 2 a 5 % entra a la
circulación general y aparece en la orina. En la parte más baja
del tracto intestinal, los tres Urobilinógenos se oxidan
espontáneamente y producen los pigmentos estercobilina,
mesobilina y urobilina, y así estos pigmentos adquieren color
marrón y que son los pigmentos que le dan color a las heces.
Existen enfermedades congénitas y enfermedades adquiridas
que afectan a uno ó más de los pasos involucrados en la
producción, captación, depósito, metabolismo y excreción de
la bilirrubina y la hiperbilirrubinemia es frecuentemente el
resultado de estos trastornos. Esta bilirrubinemia puede ser a
predominio No conjugado (Indirecta) o Conjugado (Directa)
dependiendo del tipo de desorden.
La hiperbilirrubinemia causa Ictericia. Cuando la cifra de
bilirrubina en la sangre excede de 1 mg %, existe
hiperbilirrubinemia .La hiperbilirrubinemia puede deberse a
la producción de más bilirrubina de la que el hígado normal
puede excretar o a la insuficiencia de un hígado dañado
para excretar la bilirrubina producida en cantidades
normales. Ante la ausencia de daño hepático, la
obstrucción de los conductos excretorios del hígado,
previniendo la excreción de la bilirrubina, también causará
hiperbilirrubinemia. En todos estos trastornos, la bilirrubina
se acumula en la sangre y cuando alcanza una cierta
concentración (aproximadamente de 2 a 2. 5 mg%) se
difunde dentro de los tejidos los cuales adquieren color
amarillo, este trastorno se denomina ictericia. La
concentración de bilirrubina en el suero es de gran valor,
por eso en la presente practica la emplearemos.
Dentro de las causas de Ictericia Hemolítica tenemos:
Anemias hemolíticas, ictericia fisiológica neonatal (Inmadurez hepática para captación,
conjugación y secreción de la bilirrubina), Síndrome de Cligeer-Najar (Alteración de la
conjugación de bilirrubina), Enfermedad de Gilbert, Hiperbilirrubinemia tóxica (Agentes
farmacológicos).
MATERIAL DIDÁCTICO:

Espectrofotómetro o
fotocolorímetro
Tubos o cubetas espectrofotométricas
Micropipetas y pipetas

Cronómetro
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

Experimento A: DOSAJE DE BILIRRUBINA TOTAL SÉRICA


Fundamentos del Método

La bilirrubina indirecta, unida a la albúmina, es liberada por un


tensioactivo. La bilirrubina total (conjugada y libre) reacciona con la sal de
diclorofenildiazonio (DPD) formando un azocompuesto de color rojo en
solución ácida.
MUESTRA: Suero o plasma
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel
promedio del adulto al mes del nacimiento.
En los prematuros, los niveles tardan más en alcanzar la normalidad,
dependiendo del grado de inmadurez hepática. Se recomienda que
cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Experimento B: DOSAJE DE BILIRRUBINA DIRECTA
SÉRICA
La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, es captada por el hígado para su conjugación y excreción en
la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido es una patología provocada por incompatibilidad materno-
fetal en la que se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina
sérica con el consecuente riesgo de difusión del pigmento al sistema nervioso central, por lo que la determinación de la
bilirrubina en estos niños recién nacidos resulta sumamente importante.
MUESTRA
Suero o plasma
Experimento B: INVESTIGACIÓN DE
UROBILINÓGENO EN ORINA

El Urobilinógeno se forma en la fase intestinal del metabolismo de la bilirrubina y se encuentra en todas las
orinas normales en muy pequeñas cantidades, menores de 4 mg / 24 hs. Se forma en el intestino como
hemos señalado en las clases teóricas por la acción de las bacterias sobre los pigmentos biliares
excretados por el hígado. También dijimos que luego que se excreta la bilirrubina conjugada al conductillo
biliar llega al duodeno; la bilirrubina conjugada no es reabsorbida sino que: o bien se excreta como tal en la
heces, o bien se transforma en UROBILINÓGENO (y derivados asociados) por acción de las bacterias del
colon. El urobilinógeno se puede reabsorber en el intestino delgado (íleon) y en el colon y pasa a la
circulación portal, llega al Hígado y allí se re-excreta a la bilis y el resto llega al riñón y se excreta con la
orina.
Cuando existe una alteración en la captación y excreción hepática de Urobilinógeno ( como en la
enfermedad hepatocelular) ó la síntesis de bilirrubina como en la hemólisis, la excreción diaria del
urobilinógeno aumentará en forma significativa Por el contrario, si no pasa bilis al intestino, como en la
colestasis u obstrucción biliar extrahepática interfieren en la fase final del catabolismo de la bilirrubina y
ocasiona un descenso notable en la producción y excreción urinaria del urobilinógeno. Entonces, la medida
del urobilinógeno en la orina resulta muy útil para diferenciar las posibles causa de hiperbilirrubinemia como
ocurre en la obstrucción completa de los conductos biliares, la urobilina estará ausente en la orina.
La excreción se incrementará en todas aquellas condiciones en que exista una excesiva destrucción de los
eritrocitos y en aquellos casos de daño parcial del parénquima hepático. En las nefritis muy avanzadas
puede estar ausente la Urobilina
Fundamento de la prueba de Ehrlich para la
investigación de Urobilinógeno en orina (Método
Cualitativo).
Esta prueba se basa en la reacción entre el urobilinógeno y el reactivo de paradimetil
aminobenzaldehido, para rendir un complejo coloreado rojo cereza
Reactivo de Ehrlich:
Disolver 10 gm de Paradimetilaminobenzaldehido en una disolución de 75 ml de
agua y 75 ml de HCl concentrado.
Procedimiento: A 2 ml de orina en un tubo de prueba, añadirle 0.5 ml del
Reactivo de Ehrlich y mezclar bien. Observar el color de la mixtura.
Interpretación. Cantidades normales de Urobilinógeno en la orina no producirán
color. Cantidades aumentadas (patológicas) del pigmento urobilinógeno
producirán un color rojizo cereza que se observa bien mirando el tubo desde
arriba del tubo (boca del tubo) contra un fondo blanco.
En la actualidad usamos para la investigación de Urobilina en orina el método de
las tiras reactivas que se introducen directamente en la muestra de orina. Estas
cintas están impregnadas en el área correspondiente de una sal de
metoxibenceno diazonio estable que produce con el urobilinógeno, casi
instantáneamente un complejo de color rojo azoico. Se considera normal que en
la zona reactiva para urobilinógeno no se produzca decoloración alguna o que los
colores que parezcan sean más claros que los observados para l mg % .Esta
prueba es específica para el urobilinógeno.
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN:
1.- Explique la formación de la bilirrubina.
2.- ¿En qué casos se produce una elevación de la bilirrubina total,
tanto a expensas de la bilirrubina directa como de la indirecta?
3.- ¿Cómo se forma el Urobilinógeno y qué importancia tiene?
4.- ¿Qué es la ictericia y como se evalúa?
5.- ¿Cuáles son los métodos conocidos para el dosaje de bilirrubina?

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