METABOLISMO DE LÍPIDOS (Estéridos y esteroles)

EXTRACCION DE COLESTEROL DEL CEREBRO

I. OBJETIVOS
Realizar la extracción de colesterol del cerebro de animales, para pruebas
cualitativas de coloración.
II. PRINCIPIOS TEORICOS
Para estudiar el estado del metabolismo de lípidos en el organismo se utiliza la
determinación del contenido de los componentes lipídicos en los líquidos
biológicos. Diferentes lípidos entran en la composición de compuestos complejos
organizados — lipoproteínas, o se absorben por proteínas, principalmente
albúminas del plasma o suero sanguíneo. En la sangre están contenidos los
quilomicrones que se han formado en la mucosa del intestino delgado y que
ingresan a ésta con la linfa, pro—β-lipoproteidos (lipoproteidos de muy baja
densidad), β—lipoproteidos (lipoproteidos de baja densidad) y a-lipoproteidos
(lipoproteidos de alta densidad).
Las apoproteínas de las tres últimas clases de lipoproteidos se sintetizan en el
hígado, es por eso que, por el contenido de lipoproteidos en la sangre se
predeterminan no solo sobre el metabolismo lipídico sino también acerca de la
función del hígado.
En la investigación del metabolismo de lípidos en la clínica determinan el
contenido de lipoproteidos, lípidos totales, que incluyen la suma de todas las
sustancias lipídicas del suero o plasma de la sangre y también de sus fracciones
por separado— triacilglicerinas, ácidos grasos no esterificados, colesterol libre y
esterificado, fosfolipidos.
Los esteroles y estéridos son ampliamente difundidos en organismos animales y
vegetales. Sin embargo, el más difundido de los esteroles es el colesterol,
descubierto por primera vez en las investigaciones de cálculos biliares. Los
cálculos biliares en un 90% están constituidos por colesterol. Los ésteres del
colesterol se denominan colestéridos. En los colestéridos el ácido graso,
frecuentemente está representado por el ácido esteárico, palmítico u oleico.
En el organismo animal el colesterol constituye 0,25 — 0,30% en sustancia seca.
En mayor cantidad se le encuentra en el tejido nervioso, particularmente en la
sustancia blanca del cerebro. En total, en el tejido cerebral el contenido de este
es igual al 2-3% (por sustancia cruda); en la sustancia gris 0,9 --1,4% y, en la
sustancia blanca este alcanza el 45.3%. También se encuentra en la leche,
 yema de huevo, etc. Por un alto contenido de colestéridos se diferencia la
lanolina, que es la grasa purificada de la lana de ovejas.
La molécula de colesterol tiene la estructura de los esteroides, es decir, el núcleo
químico llamado ciclo-perhidrofenantreno, teniendo además como característica,
un doble enlace en 5-6 y la posición cis del OH alcohólico en 3, con relación al
CH3 en 10 (es un β-esterol). Su fórmula global es C27H45OH.
El colesterol es bastante soluble en una serie de solventes orgánicos. El mejor
solvente para él es el cloroformo. Los solventes orgánicos, por el grado de
solubilidad del colesterol se disponen en el orden siguiente: cloroformo, éter
sulfúrico, alcohol etílico caliente, benceno, sulfuro de carbono, tolueno, acetona.
En agua es insoluble, pero fácilmente se hincha formando una emulsión estable,
como consecuencia de lo cual puede retener gran cantidad de agua que supere
a su masa en 100 veces.
En la extracción de lípidos del cerebro o de otros tejidos, el colesterol pasa a una
fracción no saponificable sobre la cual los álcalis no muestran ninguna acción. El
colesterol no se destruye, incluso, ni bajo la influencia de álcalis concentrados.
Otros lípidos, en particular las grasas y fosfátidos en estas condiciones se
disocian completamente en sus componentes y pierden sus propiedades
naturales inherentes.
A los esteroles vegetales (fitoesteroles) se relacionan: ergosterol, estigmasterol,
β- citoesterol, fucoesterol, los que están contenidos en los aceites vegetales,
frutos, algas, etc.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

III.1. MUESTRAS
Cerebro, de animal, Aceite vegetal, yeso, lamina portaobjeto, hoja de
bisturi
III.2. MATERIALES
Estufa; mortero (diámetro 110 mm) con pilón; lámina de vidrio (10 x 10
cm); espátula de madera; espátula o bisturí; tubos de ensayo; embudo de
vidrio; papel de filtro.
III.3. REACTIVOS
Cloroformo; sulfato de calcio (yeso), en polvo; ácido sulfúrico, concentrado;
anhídrido acético; mezcla de formalina con ácido sulfúrico (1:50);

IV. PROCEDIMIENTO
Curso de la determinación. Moler cuidadosamente en un mortero 3 g de cerebro
con una cantidad doble de yeso. El homogeneizado espeso lo distribuyen
uniformemente, con una espátula de madera, sobre la lámina de vidrio y luego lo
secan cuidadosamente a 60° C en la estufa. La masa seca se raspa de la lámina
sobre un mortero seco con la ayuda de una espátula o bisturí, lo muelen bien y
luego lo pasan a un tubo de ensayo seco. Agregar al tubo de ensayo con el polvo
seco 5-6 mL de cloroformo y agitar durante 5 a 10 min. Filtrar el extracto
clorofórmico obtenido en un tubo de ensayo seco a través de un papel de filtro
seco. Conservar el extracto para las reacciones de coloración sobre colesterol.
IV.1. Reacción de Guppert-Salkowski
Fundamento. El método se basa en la deshidratación de la molécula de
colesterol por la acción del ácido sulfúrico concentrado con la formación de
colesterileno, de color rojo:
Curso de la determinación. En un tubo de ensayo tomar 1 mL del extracto
clorofórmico del cerebro y cuidadosamente, por las paredes del tubo, agregar 1
mL de ácido sulfúrico concentrado. El tubo débilmente se agita. En el límite de
los dos líquidos aparece un anillo de color rojo, luego todo el líquido toma el
color rojo, anaranjado y rojo-violeta.

IV.2. Reacción de Liebermann-Buchard

Fundamento. El método se basa en la deshidratación y oxidación del
colesterol por acción del ácido sulfúrico. Como resultado de esto, dos
moléculas de colesterol, después de perder dos moléculas de agua, se unen
entre sí en el tercer átorno de carbono, formando sustancias que corresponden
a las fórmulas generales de C54H86 y C54H88. Estos hidrocarburos no saturados
con enlaces dobles conjugados, dan diferentes derivados con el ácido sulfúrico
y anhidrido acético. Las reacciones indicadas son características no solo para
el colesterol; estas también las dan con otros esteroles y también el ácido
fólico. El producto que se forma es el bicolestadieno.
 El bicolestadieno, en presencia de anhidrido acético y sulfoácido da un
derivado sulfonado de color verde.
Curso de la determinación. En un tubo de ensayo seco agregar 2 mL de
extracto clorofórmico y le añaden 10 gotas de anhidrido acético y dos gotas de
ácido sulfúrico concentrado. Aparece al comienzo un color rojo que después
pasa a verde.

Componente
Material Reacción Coloración Resultado
investigado
1. Cerebro
2. Aceite
3.
mantequilla

V. RESULTADOS Y DISCUSION
VI. CUESTIONARIO
Indique las características del colesterol.
VII. CONCLUSIONES
VIII. RECOMENDACIONES
IX. BIBLIOGRAFIA
X. ANEXOS