UNIVERSIDAD CATÓLICA

DE SANTA MARÍA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS,

BIOQUÍMICAS Y BIOTECNOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TEMA
PEROXIDACION LIPIDICA

DOCENTE
Dra. Julitza L. Paredes Fuentes

PRESENTADO POR
 Carcausto Vega, Yuli Margot
 Cutipa Llotahui, Jeniffert Solanch
 Dávila Ortiz, Rosa Elvira
 Miranda Aroni Dapne Yamile
 Postigo Maldonado, Matias Josue

AREQUIPA-PERU
2021
 Práctica nº12

Objetivos:

o Preparar los sistemas biológicos de estudio, a partir de hígado de rata para

la inducción de peroxidación lipídica.
o Determinar la concentración de malondialdehido en los sistemas de estudio.
o Interpretar los resultados y discutir los alcances del uso de esta técnica en
trabajos de investigación.

Fundamento

El Malondialdehido (MDA) forma un aducto 1:2 con el ácido tiobarbitúrico

produciendo el siguiente compuesto (complejo Acido Tiobarbitúrico-
Malondialdehido):
 Concentración de Absorbancia Absorbancia Factor de Factor
MDA (uM) (DO) neta Calibración Promedio
Estand. 1 10 0.036 0.033 303.03

Estand. 2 20 0.061 0.058 344.83

Estand. 3 30 0.094 0.091 329.67

Estand. 4 40 0.101 0.098 408.16

377.59
Estand. 5 50 0.153 0.150 333.33

Estand. 6 100 0.250 0.247 404.86

Estand. 7 150 0.354 0.351 427.35

Estand. 8 200 0.429 0.426 469.48

Blanco 0 0.003 --- 3020.71 ---

ASDFGHJKJHGFDFGDFDGFGFGFHGHGDGFTHRGHEDGVDFVSFTVRGBDFHBGNGB NHMKJHM
JHM GHMGMGHGNNHNHGN HGNFHJHMK JGM JMJMHVBEGTFVRCFVRTHBTRGBHTRHBV CRG
 Estándar 1 Estándar 2
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.036 − 0.003 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.061 − 0.003

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.033 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.058

𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏

𝑆𝑡𝑑 𝑆𝑡𝑑
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
𝐴𝑏𝑠 𝐴𝑏𝑠

10 20
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
0.033 0.058

𝐹𝐶 = 303.03 𝐹𝐶 = 344.83

Estándar 3 Estándar 4
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.094 − 0.003
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.101 − 0.003
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.091
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.098
𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏
𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏
𝑆𝑡𝑑
𝐹𝐶 = 𝑆𝑡𝑑
𝐴𝑏𝑠 𝐹𝐶 =
𝐴𝑏𝑠
30
𝐹𝐶 = 40
0.091 𝐹𝐶 =
0.098
𝐹𝐶 = 329.67
𝐹𝐶 = 408.16
 Estándar 5 Estándar 6
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.153 − 0.003 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.250 − 0.003

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.150 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.247

𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏

𝑆𝑡𝑑 𝑆𝑡𝑑
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
𝐴𝑏𝑠 𝐴𝑏𝑠

50 100
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
0.150 0.247

𝐹𝐶 = 333.33 𝐹𝐶 = 404.86

Estándar 7 Estándar 8
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝑵𝒆𝒕𝒂

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.354 − 0.003 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.429 − 0.003

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.351 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑁𝑒𝑡𝑎 = 0.426

𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏

𝑆𝑡𝑑 𝑆𝑡𝑑
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
𝐴𝑏𝑠 𝐴𝑏𝑠

150 200
𝐹𝐶 = 𝐹𝐶 =
0.351 0.426

𝐹𝐶 = 427.35 𝐹𝐶 = 469.48
 Factor promedio
303.03 + 344.83 + 329.67 + 408.16 + 333.33 + 404.86 + 427.35 + 469.48
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 =
8

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 377.59

Sistemas de estudio Concentración de MDA (uMoles/L)

Muestra 1 45.36
Abs. Bruta: 0.123
Muestra 2 32.13
Abs. Bruta: 0.088

Determinaremos la concentración de MDA (uMoles / L) en las muestras para obtener

la cantidad de radicales libres de oxígeno las cuales causaran daños a la mayoría de
macromoléculas de las células. Como observamos en la tabla 2 tiene mayor
concentración de MDA en la muestra 1 que es de 45.36uMoles / L y la muestra 2
presenta menor concentración de MDA (33.26uMoles / L) en ambos casos se añadió el
sulfato ferroso, y así poder llegar a la conclusión de que en la muestra 1 existe más
cantidad de radicales libres.

Interrogantes bioquímicas:

1. Qué otros daños provocan los radicales libres? Descríbalos.

o Los radicales libres se pueden acumular en las células y dañar otras

moléculas, como el ADN, los lípidos y las proteínas. Este daño puede
aumentar el riesgo de cáncer y otras enfermedades.
o Los RL alteran el ADN, rompen las membranas celulares, inactivan enzimas,
interfieren con la inmunogenicidad y provocan carcinogénesis. En
 relación con las enfermedades, los RL son liberados durante la inflamación,
isquemia o hipoxia de los tejidos.
o Otros daños provocados por los radicales de dieta inadecuada, tabaco,
alcohol, ciertos medicamentos, radiaciones solare, estrés , ejercicio muy
intenso, deshechos metabólicos

 Estudiante: Dávila Ortiz, Rosa Elvira

 Fuentes: https://scielosp.org/article/rpsp/1997.v1n5/399-
400/es/#:~:text=Causan%20la%20oxidaci%C3%B3n%20y%20peroxi
daci%C3%B3n,la%20inmunogenicidad%20y%20provocan%20carcinog
%C3%A9nesis.

2. Describa el proceso de peroxidación lipídica.

o La peroxidación lipídica o lipoperoxidación hace referencia a la degradación

oxidativa de los lípidos.
o Es el proceso a través del cual los radicales libres capturan electrones de
los lípidos en las membranas celulares.
o Este proceso es iniciado por un mecanismo de reacción en cadena de un
radical libre.
o En la mayoría de los casos afecta los ácidos grasos poliinsaturados, debido a
que contienen múltiples dobles enlaces entre los cuales se encuentran los
grupos metileno (-CH2-) que poseen hidrógenos particularmente reactivos.
o Al igual que cualquier reacción con radicales, esta se modela en tres pasos
fundamentales: iniciación, propagación y terminación.

 E
 studiantes: Dávila Ortiz, Rosa Elvira
 Fuentes: https://scielosp.org/article/rpsp/1997.v1n5/399-
400/es/#:~:text=Causan%20la%20oxidaci%C3%B3n%20y%20peroxi
daci%C3%B3n,la%20inmunogenicidad%20y%20provocan%20carcinog
%C3%A9nesis

3. Qué otros métodos conoce Ud. para evaluar la producción de

radicales libres de Oxígeno?

Medición de la concentración de agentes oxidantes. Durante los últimos

años se ha tratado de medir la concentración de agentes oxidantes en el
organismo, pero ha resultado difícil en muchos casos, por tener éstos un
tiempo de vida media muy corto. El radical hidroxilo tiene una vida de 10. La
espectrometría de la resonancia de la rotación (espín) de electrones
es la única técnica analítica que mide directamente las especies
reactivas del oxígeno (EROs), pero su aplicación en el ser humano no es
factible aún, además de ser muy caros los equipos necesarios.

La prueba está basada en el hecho de que los metales de transición, una vez
liberados de su forma quelante, forma en que generalmente se encuentran
en el plasma y dentro de las células, tienen la capacidad de catalizar
reacciones del tipo REDOX, cuyos productos son atrapados por derivados
fenólicos, que resultan en la formación de una solución coloreada que puede
ser medida espectrofotométricamente

 Estudiante: Carcausto Vega, Yuli Margott

4. Escriba la reacción del Malondialdehido con el ácido Tiobarbitúrico.

Medición de compuestos que reaccionan con el ácido tiobarbitúrico (TBA).

El MDA es un aldehído de bajo peso molecular que se forma durante la

descomposición de Endo peróxidos en las últimas etapas. La metodología del
TBARS consiste en la reacción entre el MDA y el TBA. En un medio con pH
ácido y a alta temperatura dos moléculas de TBA reaccionan con una
molécula de MDA, formando un complejo coloreado en una relación de 1:2
MDA: TBA, que puede ser medido fluorimétrica o colorimétricamente a
532nm (figura 3).
 El TBARS es muy utilizado ya que es simple, económico y sensible, pero bajo
ciertas condiciones presenta importantes problemas. Esta metodología
funciona bien cuando se utiliza en sistemas de membranas aislados (por
ejemplo, en microsomas o liposomas), pero cuando se aplica a fluidos
biológicos y a extractos de tejidos presenta varios problemas relacionados
principalmente con su inespecificidad.

El principal problema con el ensayo de TBARS es su falta de especificidad.

TBA reacciona con una variedad de aldehídos, no sólo con aquellos formados
como resultado de la peroxidación lipídica sino también con glucosa,
desoxirribosa, ácido ascórbico, homocisteína y algunos aminoácidos tales
como, prolina, arginina y glutamato, por esta razón el análisis en fluidos
biológicos por este método resulta complejo. Otra limitación del ensayo de
TBA es que el MDA y otros productos de cadena corta no son estables por
largos períodos de tiempo. Esto se debe a que la oxidación de estos
compuestos genera alcoholes y ácidos orgánicos que no son determinados
por el ensayo de TBA.

 Estudiante: Cutipa Llotahui Jeniffert Solanch

 Fuente:http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/273

9/Anexo.pdf

5. Cuáles son los sistemas antioxidantes con que cuenta nuestro

organismo? y cómo funcionan?

Los sistemas antioxidantes de nuestro organismo se clasifican en:

 o Enzimáticos: Son la primera barrera contra los radicales libres
o No enzimáticos/proteínas de unión
Estos sistemas van a actuar sinérgicamente para neutralizar las
diferentes especies reactivas del oxígeno.

ANTIOXIDANTES NO ENZIMÁTICOS

HIDROSOLUBLES LIPOSOLUBLES FUNCIÓN

Ácido ascórbico Tocoferol Ácido ascórbico: Predominante en la piel.

Elimina la mayoría de las especies reactivas
Glutatión Ubicuinol
del oxígeno por la oxidación del ascorbato a
Cisteína Retinoides monodihidroascorbato y, posteriormente, a
dihidroascorbato.
Ácido lipoico Carotenos
Las células generan tioles como el glutatión,
el cual reduce el radical semiascorbil (forma
oxidada) a ascorbato (forma reducida).

Vitamina E: parte a su grupo hidroxilo, el

Ácido úrico cual dona el H+ para neutralizar los radicales
libres.

Carotenos tienen la habilidad de mitigar el

O2 y los radicales lipídicos.

gfbhgfhbfghgfhfgh
 ANTIOXIDANTES ENZIMÁTICOS

ENZIMÁTICOS FUNCIÓN

Superóxido dismutasa Superóxido dismutasa: Junto con el glutatión peroxidasa,

es una de las enzimas más activas. Son proteínas que
Glutatión peroxidasa contienen metales que catalizan la remoción de O2,
generando H2O2 como producto final.
Catalasa
Catalasa: Se localiza principalmente en los peroxisomas y,
en pequeñas cantidades, en la mitocondria. Es una
dismutasa, por lo que no necesita cofactores. Elimina el
H2O2 en la piel.

Glutatión reductasa Glutatión peroxidasa: Es uno de los antioxidantes

celulares más abundantes. Al igual que la catalasa, elimina
el H2 O2 en presencia de glutatión reducido y, además,
limita la peroxidación de lípidos

Estudiante: Postigo Maldonado, Matías

6. Cómo se generan las especies reactivas de oxígeno (ROS) en nuestro

organismo?

Los ROS presentes en el organismo son mayoritariamente de procedencia

endógena. Aunque también pueden ser generadas en respuesta a estímulos
externos como la luz ultravioleta, la radiación ionizante, fármacos o agentes
tóxicos (fig. 4). Como consecuencia del metabolismo celular normal, los
organismos aeróbicos están sujetos a la constante producción de pequeñas y
controladas cantidades de ROS. En los seres vivos se producen
continuamente, durante se metabolismo fisiológico, reacciones bioquímicas
con producción de radicales libres. Procesos oxidativos que, si no
controlamos, pueden poner en peligro la integridad celular.
Fig. 1. Formación y metabolización celular de las especies reactivas de oxígeno (ROS).

Estas especies se forman de manera narural como subproducto del

metabolismo normal del oxígeno y tienen un importante papel en la
señalización celular. Sim embargo, en épocas de estrés ambiental sus niveles
pueden aumentar en gran manera, lo cual puede resultar en daños
significativos a las estructuras celulares. Esto lleva en una situación
conocida como estrés oxidativo.

Sobrepasados los límites oxidativos permitidos, estas moléculas se

convierten en potentes destructores celulares. Para combatir el potencial
cito tóxico de los ROS, los seres vivos han desarrollado eficientes sistemas
antioxidantes y maquinarias de reparación del daño oxidativo. A pesar de
ello, la célula puede ser sorprendida por una excesiva o rápida formación de
los ROS. Ello comporta el ataque oxidativo indiscriminado sobre lípidos,
proteínas y ADN celular, situación que conocemos como estrés oxidativo.

 Estudiante: Miranda Aroni Dapne

 Fuente: https://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-
hepatologia-14-articulo-especies-reactivas-oxigeno-enfermedades-
inflamatorias-13078997
7. A qué se denomina antioxidante, y de que maneras podrían actuar?

Los antioxidantes, moléculas capaces de captar el electrón desapareado del

orbital externo de los radicales libres y de esta forma desactivarlos,
disminuyen el estrés oxidativo y actúan sobre el mismo inhibiéndolo, para
evitar la oxidación de las proteínas, los lípidos y el ADN. Las alteraciones en
estas bio moléculas como consecuencia del estrés oxidativo producirán el
desarrollo de patologías siendo la más relevante diabetes, enfermedades
cardiovasculares, enfermedades neurodegenerativas como el Párkinson y
Alzhéimer, o incluso cáncer. Como en el siguiente mapita.

Figura 1: Inhibición del estrés oxidativo, los cuales están relacionas con el desarrollo de
diversas patologías, por parte de los antioxidantes.

Los antioxidantes de prevención impiden la formación de los radicales libres

mediante la descomposición del H2O2 o la quelación de los metales (que
participan de las cadenas redox por sus características oxido/reductoras).
Algunos de estos antioxidantes son enzimas como las catalasas, glutatión
per oxidasa, superóxido dismutasa, transferrina o ceruloplasmina.

Los eleminadores/secuestrantes de radicales libres inhiben el inicio de la

cadena redox. Entre estos podemos encontrar las vitaminas A, C Y E, la
coenzima Q10, y los flavonoides y polifenoles. Y por último los de reparación
o ‘’síntesis de novo’’ reparan los daños y la reconstrucción de la membrana
 como es el caso de los enzimas de reparación del ADN, proteasas y
transferasas.

Los radicales libres como los antioxidantes se pueden encontrar em el

citosol, núcleo, cadena respiratoria mitocondrial, sistema retículo-endotelial
(RE), lisosoma, peroxisoma, cadenas de transporte a nivel microsomal,
cloroplastos.

 Estudiante: Miranda Aroni Dapne

 Fuente:http://147.96.70.122/Web/TFG/TFG/Memoria/CRISTINA%20HU
ET%20BRE%C3%91A.pdf