UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA BIOLÓGICA Y
FISIOLOGÍA ANIMAL
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

P10. - Efecto de inhibidores sobre la cadena respiratoria

2021-I
I. INTRODUCCIÓN
I. INTRODUCCIÓN

OXIDACIÓN: Reacción química donde un elemento pierde

electrones

REDUCCIÓN: Reacción química donde un elemento gana

electrones
A

Agente oxidante: Aquel que tiende a captar/acepta

electrones.

Agente reductor: Aquel que pierde/ suministra/ cede

electrones
I. INTRODUCCIÓN

Fosforilación
oxidativa

Proceso mediante
el cual se forma
ATP por medio de la
transferencia de
electrones desde el
NADH o el FADH2
hasta el O2 por
medio de una serie
de transportadores
eléctricos. Tiene
lugar en la
mitocondria.
I. INTRODUCCIÓN

Cadena transportadora de electrones

Proceso mediante el cual los

cofactores que provienen del ciclo
de Krebs (NADH, FADH2) se
oxidan, y los electrones que ellos
ceden son transportados a lo largo
de la secuencia de reacciones de
óxido-reducción, hasta el aceptor
final de electrones, que es el
oxígeno
La Fosforilación Oxidativa depende de la transferencia de
electrones

En la fosforilación oxidativa el potencial de transferencia de electrones del NADH ó FADH2

se convierte en el potencial de transferencia de grupos fosforilo del ATP.

El potencial de transferencia electrónica de un e- se mide como potencial redox,

potencial de reducción o potencial de óxido-reducción (Eo’).

Si Eo’ es -: Forma reducida tiene < afinidad por los e- que H2.
Si Eo’ es +: Forma reducida tiene > afinidad por los e- que H2.

El flujo de electrones a través de los componentes de la cadena de transporte

electrónico se realiza en orden de potencial de reducción creciente.
 NADH (agente reductor fuerte), Eo’ = -0.32 volts)
O2 (aceptor final de los electrones agente oxidante fuerte,) Eo’ = +0.82 volts)

Una diferencia de potencial de 1.14V entre el NADH y el O2 impulsa el transporte de e-

a través de la cadena respiratoria y permite la formación de un gradiente de protones.
Transporte de electrones Bombeo de protrones

fuerza se convierte
fuerza
electrón-motriz protón-motriz

se convierte

potencial de
transferencia de
fosforilo

La fosforilación oxidativa muestra de manera fehaciente que en los sistemas biológicos, los
gradientes de protones constituyen una forma intercambiable de energía libre.
 I: NADH-Q Oxidorreductasa
La cadena respiratoria II: Succinato-Q Reductasa
consiste de 4 complejos
multienzimáticos: III: Q-citocromo c Oxidorreductasa
IV: Citocromo c Oxidasa

Cit. C
 Complejo II
Complejo I Complejo III
succinato
NADH Ubiquinona – Complejo IV
deshidrogenasa =
deshidrogenasa = Citocromo C Citocromo C
succinato
NADH-Ubiquinona reductasa = oxidasa
ubiquinona
reductasa citocromo bc1
reductasa

Membrana
externa

4 H+ 4 H+ 2 H+ 4 H+ Espacio
Citocromo Intermembranoso
C Cit. a
ubiquinona Cit.c1 ATP
Fe-
Fe. C Cu sintasa
FMN
S
Q
III
S IV Membrana
Fe- Cit. Cit.a3 interna
FADII
S b

2 e-
NADH NAD+ FADH2 FAD+ ½ O 2 + 2 H + 🡪 H 2O 1 ATP
Matriz

NADH 🡪 FMN 🡪 FeS FeS

Cit
Q 🡪 Cit C1 🡪 Cit C
C
Cit a 🡪 Cit a3 O2
FADH2 🡪 FeS Cit b
Inhibidores de la Cadena transportadora de electrones

Sustancias que interfieren con la cadena transportadora de

electrones

Función: Detener el transporte de electrones

Se unen a alguno de los componentes de la cadena

transportadora de electrones bloqueando su habilidad de
cambiar de forma reversible (forma oxidada 🡪 forma reducida)
Inhibidores de la Cadena transportadora de electrones
Inhibidores e indicadores REDOX Complejo I Complejo II Complejo III Complejo IV

Rotenona (insecticida) Cianuro (CN-), azida(N3-): bloquean la forma Membrana

férrica (Fe3+) del hemo a3
Amital (barbitúrico) externa
monóxido de carbono (CO): bloquea la forma
ferrosa (Fe2+)del hemoa3

4 H+ Antimicina A 4 H+ 2 H+ 4 H+ Espacio
(antibióico) Intermembranoso
Cit. a
Cit.c1
Fe-S C Cu ATP sintasa

FMN Q
III Fe.S IV Membrana
interna
Fe-S Cit.b Cit.a3
FAD II

Matriz
+
NADH NAD +
FADH2 +
FAD ½ O2 + 4 H -- H2O 1 ATP

Aceptores
2,6-diclorodenolindofenol Tetrametil p-fenilendiamina Ferricianuro artificiales de
Azul de metileno
Azul (oxidado) Azul o granate(oxidado) electrones
Azul (oxidado)
Incoloro (reducido) Incoloro (reducido)
Incoloro (reducido)

El uso de inhibidores ha ayudado a deducir la secuencia de cadena respiratoria, y ha permitido mejorar el

mecanismo de acción de algunos fármacos y venenos.
UBICACIÓN: 2,6-diclorofenolindofenol (oxid/ red)

Q III IV

II

AZUL INCOLORO
 • Indicador de óxido reducción
UBICACIÓN: P-fenilendiamina • Dador artificial de electrones
• Sustrato

Q III IV

II

INCOLORO PURPURA OSCURO

Barbiturato de sodio

Es un inhibidor que bloquea la transferencia de electrones entre la flavina

(FMN) y la ubiquinona (Complejo I)

Q III IV

II
Malonato

Es un inhibidor competitivo de la reacción de la succinato deshidrogenasa y

bloquea la transformación del succinato a fumarato (Complejo II)

Q III IV

II
Cianuro
Es un potente veneno que inhibe la cadena de transporte de electrones y la
fosforilación oxidativa, bloqueando el paso de electrones del citocromo (hemo a3)
al oxígeno (Complejo IV)

Q III IV

II
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

El objetivo de la presente experiencia es demostrar el

funcionamiento de la cadena respiratoria a través del efecto de
inhibidores sobre la cadena oxido-reducción biológica, utilizando
aceptores y dadores artificiales.
EQUIPAMIENTO

INDICADOR OX-RED
INDICADOR OX-RED SUSTRATO
SUSTRATO
INHIBIDOR DEL COMPLEJO 2
INHIBIDOR DEL COMPLEJO 4
INHIBIDOR DEL COMPLEJO 1

COMPLEJOS DE LA CTe-
MÉTODO
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO
Tabla 1.
Sistema de incubación para la enzima succinato deshidrogenasa (C-2)

C1V1 = C2V2
Ox. 🡪 Azul 0.1(0.2) = C2(2.7)
C2 = 0.007 M (SUSTRATO)

C1V1 = C2V2
0.1(0.5) = C2(2.7)
C2 = 0.02 M (INHIBIDOR)
 RESULTADOS
5 4
1 2 3 6 Sistema de incubación para la enzima
succinato deshidrogenasa (C-2)

S+E+I S+E+I S+E+I

S E S+E
(Barb) (Mal) (CN)
Características TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5 TUBO 6
Color inicial azul Azul azul Azul azul azul
Color final Azul Azul Incoloro Incoloro Azul incoloro
Ocurrió óxido-reducción
No No Si Si No Si
(SI/ NO)
2,6-diclorofenolindofenol
Oxid Oxid Red Red Oxid Red
(oxid/ red)

Rx Enzimática (SI/NO) No No Sí Sí No Sí

Ocurrió inhibición
no No no no SI no
enzimática (SI/ NO)
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 1

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA

No hay transporte
de electrones por
ausencia de la CTE

AZUL
FORMA
OXIDADA
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 2

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA

No hay transporte de
electrones por ausencia
del SUSTRATO

AZUL
FORMA
OXIDADA
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 3

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA
SI hay transporte de
electrones todo el
sistema completo
(enzima y sustrato)

AZUL
FORMA
OXIDADA
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 4

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA
SI hay transporte de
electrones todo el
sistema completo
(enzima y sustrato).
Hay inhibición del
complejo I por el
inhibidor (barbiturato de
sodio), pero el complejo
AZUL
FORMA II sigue funcionando.
OXIDADA
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 5

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA No hay transporte de
electrones a pesar que
todo el sistema esta
completo (enzima y
sustrato).
Hay inhibición del complejo
II por el inhibidor
Malonato), pero el complejo
AZUL I sigue funcionando.
FORMA
OXIDADA
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO OXIDABLE SUCCINATO

ANÁLISI DEL TUBO 6

2 5 4
1 3 6

FORMA
SUCCINATO INCOLORO
REDUCIDA
DESHIDROGENASA
SI hay transporte de
electrones todo el sistema
completo (enzima y
sustrato).
Hay inhibición del
complejo IV por el
inhibidor (Cianuro de
AZUL sodio).
FORMA
OXIDADA
MÉTODO
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

Tabla 2.
Sistema de incubación para la enzima citocromo oxidasa (C-4)

Red 🡪 Incoloro
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
1 2 3 4
5 Sistema de incubación para la enzima
citocromo oxidasa (C-4)

S+E+I S+E+I S+E+I

S S+E
(Barb) (Mal) (CN)
Características TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5
Color inicial incoloro incoloro incoloro incoloro incoloro
Color final Incoloro Marrón marrón Marrón Incoloro
Ocurrió óxido-reducción
No Si sí Sí No
(SI/ NO)
p-fenilendiamina (oxid/
Red Oxid oxid Oxid Red
red)
Rx Enzimática (SI/NO) No Si si Si No
Ocurrió inhibición (SI/
no no no no SI
NO)
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

ANÁLISI DEL TUBO 1

FORMA 1 2 4
OXIDADA
3 5
(O2)
FORMA
REDUCIDA
INCOLORA
CITOCROMO OXIDASA

No se encuentra la CTE, solo

FORMA esta presente el indicador
REDUCIDA
(H2O) sustrato en su estado reducido.
FORMA OXIDADA
AZUL OSCURO A
GRANATE
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

ANÁLISI DEL TUBO 2

FORMA 1 2 4
3 5
OXIDADA
(O2)
FORMA
REDUCIDA
INCOLORA
CITOCROMO OXIDASA

FORMA Esta la CTE y el sustrato,

REDUCIDA
(H2O)
si hay REDOX.
FORMA OXIDADA
AZUL OSCURO A
GRANATE
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

ANÁLISI DEL TUBO 3

FORMA 4
1 2 3
OXIDADA 5
(O2)
FORMA
REDUCIDA
INCOLORA
CITOCROMO OXIDASA

FORMA El barbiturato de sodio inhibe el

REDUCIDA
(H2O) complejo I, pero el complejo II
FORMA OXIDADA sigue funcionando, habiendo
AZUL OSCURO A REDOX.
GRANATE
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

ANÁLISI DEL TUBO 4

FORMA 1 2 3 4
OXIDADA
5
(O2)
FORMA
REDUCIDA
INCOLORA
CITOCROMO OXIDASA

FORMA
El Malonato inhibe el complejo
REDUCIDA II, pero el complejo I sigue
(H2O) funcionando, habiendo REDOX.
FORMA OXIDADA
AZUL OSCURO A
GRANATE
B. SISTEMA DE INCUBACIÓN CON EL SUSTRATO INDICADOR p-Fenilendiamina

ANÁLISI DEL TUBO 5

FORMA
OXIDADA 1 2 3 4
(O2) 5
FORMA
REDUCIDA
INCOLORA
CITOCROMO OXIDASA

FORMA El cianuro inhibe el complejo IV,

REDUCIDA sin no hay síntesis de ATP, no
(H2O)
hay ingreso de NADH o FADH2.
FORMA OXIDADA
AZUL OSCURO A no hay REDOX.
GRANATE
¿Preguntas?