Protoco Validacion Analitica Cloruro de Sodio en Dextrosa Al 5% SS

PROTOCOLO
VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

CLORURO DE SODIO DEL PRODUCTO DEXTROSA AL 5%
EN SOLUCION SALINA - SOLUCIÓN INYECTABLE PT- VAT-XXX
FECHA DE APROBACIÓN: 22-01-XX VERSIÓN No: 00
VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 1 DE 26
Elaborado por:
Angelica Moreno Flórez

Analista de Control de Calidad
Firma Fecha
Revisado por:
Diana Mariela Burbano

Coordinador de Control de Calidad
Firma Fecha
Revisado por:
Diana María Vargas Spinel

Jefe de Control de Calidad
Firma Fecha
Aprobado por:
Jorge Enrique Parada C.

Director Técnico (E)
Firma Fecha
SELLO ORIGINAL: SELLO DE COPIA AUTORIZADA:

PROTOCOLO

CONTENIDO
1 INTRODUCCIÓN......................................................................................................... 4
2 OBJETIVO................................................................................................................... 4
3 ALCANCE.................................................................................................................... 4
4 DEFINICIONES............................................................................................................ 4
5 RESPONSABILIDADES...............................................................................................7
6 EQUIPOS, MATERIALES, RECURSOS Y REACTIVOS.............................................9
6.1 Equipos a Utilizar..................................................................................................9
6.2 Materiales y Recursos a Utilizar............................................................................9
6.3 Reactivos a Utilizar...............................................................................................9
7 FRECUENCIA.............................................................................................................. 9
8 DESARROLLO DEL DOCUMENTO..........................................................................10
8.1 Descripción del Estándar....................................................................................10
8.2 Descripción de la Muestra...................................................................................10
8.3 Descripción de la Metodología Parámetros de Validación y Criterios de
Aceptación
……………………………………………………………………………………………10
8.3.1. Preparacion de placebos.................................................................................12
8.3.2. Preparacion de soluciones estandar ...............................................................13
8.3.3. Preparación de placebo cargado ....................................................................13
8.4 Parámetros de Validación Analizados.................................................................15
8.4.1 Linealidad del Sistema.................................................................................15
8.4.2 Linealidad del Método .................................................................................17
8.4.3 Precisión del Sistema...................................................................................15
8.4.4 Precisión del Método ...................................................................................17
PROTOCOLO

8.4.5 Precisión Intermedia....................................................................................18

8.5.1 Exactitud......................................................................................................15
8.4.6 Especificidad................................................................................................19
8.4.7 Selectividad..................................................................................................20
8.6 Criterios / Límites de Aceptación para la Validación...........................................24
8.7 Gestión Ambiental...............................................................................................25
9 DOCUMENTOS RELACIONADOS............................................................................26
10 FORMATOS RELACIONADOS..............................................................................26
11 ANEXOS................................................................................................................. 26
12 HISTORIAL............................................................................................................. 26
PROTOCOLO

1 INTRODUCCIÓN
La Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio es una solución estéril de Dextrosa y Cloruro
de Sodio en Agua para Inyección. Contiene no menos de 95,0% y no más de 105,0% de
la cantidad declarada de dextrosa (C6H12O6 · H2O) y de cloruro de sodio (NaCl). No
contiene agentes antimicrobianos.
Ilustración 1 Molécula Dextrosa
Fuente: Monografías – USP – Dextrosa
2 OBJETIVO
Verificar la metodología analítica para la cuantificación de contenido del principio
activo Cloruro de Sodio, en el producto Dextrosa al 0,05g/mL en solución salina solución
inyectable y establecer las condiciones para cuantificar adecuadamente mediante el uso
del método analítico de volumetría.
PROTOCOLO

3 ALCANCE
El presente protocolo aplica para la validación de la metodología analítica del
producto en proceso y producto terminado de Dextrosa al 5%, en solución salina para
cuantificar el contenido de Cloruro de Sodio, mediante el uso del método analítico de
volumetría. De acuerdo a lo establecido en las técnicas vigentes de análisis de los
productos terminados: TAPT-013 Dextrosa al 5% en solución salina y las técnicas
vigentes de análisis de los productos en proceso: TAPP-006 Dextrosa al 5% en solución
salina.
4 DEFINICIONES
 VALIDACIÓN DE METODOLOGÍA ANALÍTICA:

Es el proceso por el cual se establece, mediante estudios de laboratorio, que las
características de desempeño del método cumplen con los requisitos para las aplicaciones
analíticas previstas.
 LINEALIDAD:
La linealidad de un sistema o método analítico demuestra su capacidad para
asegurar que los resultados analíticos, los cuales pueden ser obtenidos directamente o por
medio de una transformación matemática bien definida son proporcionales a la
concentración de la sustancia dentro de un intervalo determinado.
 INTERVALO DE CONCENTRACIÓN:
Se define como el rango comprendido por las concentraciones existentes entre los
niveles de concentración superior e inferior de la sustancia (incluyendo estos niveles) en el
cual se ha demostrado que el método es preciso, exacto y lineal.
 EXACTITUD:
Es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos mediante este
procedimiento y el valor verdadero. Se debe establecer en todo su intervalo.
 PRECISIÓN:
La precisión de un método analítico es el grado de concordancia entre resultados
analíticos individuales cuando el procedimiento se aplica repetidamente a múltiples
PROTOCOLO

ensayos de una muestra homogénea de un analito específico del producto; usualmente se

expresa en términos de desviación estándar o del coeficiente de variación.
La precisión es una medida del grado de reproducibilidad y/o repetibilidad del método
analítico bajo las condiciones normales de operación. La precisión intermedia (también
conocida como tolerancia o fortaleza), expresa la variación dentro de un laboratorio, por
ejemplo, en diferentes días, con diferentes analistas o con equipos diferentes dentro del
mismo laboratorio.
 REPETIBILIDAD:
Es la precisión de un método analítico expresado como la concordancia obtenida
entre determinaciones independientes realizadas bajo las mismas condiciones (Analista,
tiempo, equipo, laboratorio), durante un periodo de tiempo corto.
 ESPECIFICIDAD:
Es la capacidad de evaluar de manera inequívoca un analito en interacción con
aquellos componentes cuya presencia resulta previsible, como impurezas, productos de
degradación y / o componentes de la formulación.
 SELECTIVIDAD
El presente parámetro evalúa que las muestras de principio activo, placebo cargado
o simplemente el placebo, al ser sometidos a condiciones extremas de pH, temperatura,
oxidaciones fuertes y luz UV directa, no presenten compuestos relacionados e impurezas
que interfieran con la metodología analítica que se encuentra en estudio.
 ANALITO:
Entidad química o microbiológica susceptible de detectarse y/o cuantificarse y cuya
identidad y características físicas, químicas y microbiológicas se puedan confrontar o
corroborar en la literatura farmacéutica oficial y especializada. Los analitos están
contenidos en las muestras de análisis o aparecen como consecuencia de tratamientos
químicos o físicos ejercidos durante el método de análisis.
 TEST SKEWNESS:
Asimetría (También conocida como skewness o sesgo), es un estadístico que
describe la simetría de la distribución alrededor de la media, si el sesgo es igual a cero, la
distribución es simétrica (en este caso, es normal).
PROTOCOLO

Si no existe una cola o sesgo, la asimetría tendrá un valor de cero.

Si el sesgo lleva el signo positivo, entonces sabremos que la distribución tendrá una cola
asimétrica hacia los valores negativos, esto querrá decir que los elementos de la muestra
en general estarán sesgados hacia los valores que se agrupan más en los niveles bajos.
Si el sesgo es negativo, la distribución tendrá una cola asimétrica hacia valores negativos;
esto es, tiende a reunirse más a la derecha de la media, en los valores altos
 TEST CURTOSIS:
Curtosis, es un estadístico que describe el grado de “punta” o “achatamiento” de la
distribución de una variable con relación a la distribución normal.
La curtosis positiva indica una distribución que perfila un gráfico “más en punta”, tal como
vemos en la curva del centro, con relación a la normal; será Leptocúrtica.
Una curtosis negativa indica una distribución relativamente más achatada, como la que
vemos a la derecha; será Platicúrtica.
En una distribución normal la curtosis es igual a 3; es sobre ese valor que se determina el
nivel de Curtosis de una distribución.
 TEST G DE COCHRAN:
Cuando todas las muestras son de igual tamaño n = n1 = n2 = · · · = nk, la hipótesis
acerca de la igualdad de varianzas es rechazada si g > gα,n,k, donde el valor gα,n,k se
obtiene de la tabla de valores críticos para la prueba de Cochran en tablas especiales.
Cuando el número de observaciones en cada tratamiento no sea igual, pero sea
relativamente cercano, el mayor de los n° puede usarse en lugar de n para determinar los
grados de libertad requeridos en las tablas. La prueba de Cochran es en particular útil para
detectar si una varianza es mucho más grande que las otras.
 TEST STUDENT:
La prueba "t" de Student es un tipo de estadística deductiva. Se utiliza para
determinar si hay una diferencia significativa entre las medias de dos grupos. Con toda la
estadística deductiva, asumimos que las variables dependientes tienen una distribución
normal. Especificamos el nivel de la probabilidad (nivel de la alfa, nivel de la significación,
p) que estamos dispuestos a aceptar antes de que el cerco de datos (p < 0.05 es un valor
común).
PROTOCOLO

5 RESPONSABILIDADES
Tabla 1 Responsabilidades
PERSONAL
RESPONSABILIDAD
INVOLUCRADO
Ejecutar las actividades descritas en este protocolo tales como:
Analista de  Emitir y firmar el Protocolo de Validación / Verificación de la

Técnica Analítica
Investigación y  Preparar las muestras y realizar los análisis
Desarrollo correspondientes a cada parámetro analítico de acuerdo
con el procedimiento descrito en el presente protocolo.
 Registrar los datos de los análisis realizados en las Hojas de
Analista de control de Trabajo Analítico de Validación de Técnicas Analíticas
calidad  Procesar los resultados y comparar frente a los criterios de
aceptación.
 Emitir y firmar el Informe de Validación / Verificación de la
Técnica Analítica
Coordinador de
Investigación y Ejecutar las actividades descritas en este protocolo tales como:
Desarrollo
 Revisar y firmar el Protocolo de Validación / Verificación
 Coordinar y garantizar la ejecución de los análisis.
Coordinador de  Revisar y firmar el Informe de Validación / Verificación
Control de Calidad
 Garantizar los recursos suficientes para el cumplimiento de

los parámetros descritos en el presente protocolo
Jefe de Control de  Revisar y firmar el Protocolo y el informe de Validación /
Calidad Verificación
 Actualizar el Listado de Validaciones de Métodos Analíticos
 Solicitar la actualización de las técnicas analíticas validadas.
 Archivar el Informe de Validación / Verificación
PROTOCOLO

 Garantizar la ejecución de todas las actividades descritas en

el presente protocolo
 Aprobar y firmar el Protocolo de Validación / Verificación
Director Técnico  Aprobar y firmar el Informe de Validación / Verificación
 Solicitar la actualización de las técnicas analíticas validadas.
 Archivar el Informe de Validación / Verificación
6 EQUIPOS, MATERIALES, RECURSOS Y REACTIVOS
6.1 Equipos a Utilizar
 Balanza Analítica
 Cabina de Extracción
 Ultrasonido
 Lámpara UV
 Agitador magnético
6.2 Materiales y Recursos a Utilizar
 Micro espátula
 Erlenmeyer de 250mL
 Matraz volumétrico de100 mL
 Pipeteador
 Probeta graduada de vidrio de 100 mL
 Pipetas Pasteur
 Frasco lavador
 Excel
6.3 Reactivos a Utilizar
 Agua Purificada
 Acido Acético
 Nitrato de plata 0,1N
 Metanol
PROTOCOLO

 HCl 0,1N
 NaOH 0,1N
7 FRECUENCIA
La validación de la metodología analítica para la cuantificación de cloruro de sodio en

el producto dextrosa al 0,05g/ml en solución salina solución inyectable por el método
analítico de volumetría tendrá una vigencia de 5 años, por lo tanto, la próxima verificación
se realizará en enero del año 2027.
8 DESARROLLO DEL DOCUMENTO
8.1 Descripción del Estándar
o Estándar a emplear en la validación
Tabla 2 Información del Estándar
Fecha de
Nombre # Lote Potencia
Vencimiento
Cloruro de Sodio USP XXX XXX XXX
8.2 Descripción de la Muestra
o Materia prima empleada en la validación
Tabla 3 Información de la Materia Prima
# de Análisis Fecha de Potencia

Nombre # Lote
Interno Vencimiento
xxx
Dextrosa USP xx 2xx Xx
Xxx
Cloruro de Sodio USP xxx Xxx Xxx
Agua para inyección

PROTOCOLO

8.3 Descripción de la Metodología Parámetros de Validación y Criterios de

Aceptación
Valoración de Cloruro de Sodio
Tomar 10 mL muestra, adicionar 10 mL de Ácido Acético, 75 mL de Metanol y 3

gotas de eosina, agitar y valorar con Nitrato de Plata 0,1N hasta viraje rosado.
Cálculos
Para calcular los mEq/L de Cloruro de Sodio en el producto Dextrosa al 5% en

solución salina se aplica la formula descrita a continuación:
mEq / L NaCl=mL AgNO 3 0,1 N x factor x 10 mL

Ecuación 1. Calculo para la determinación mEq/L de Cloruro de Sodio
Para calcular el porcentaje de Cloruro de Sodio en el producto Dextrosa al 5%, en

Solución Salina se aplica la formula descrita a continuación:
mEq /L NaCl
% NaCl= x 100
154 mEq / L
Criterios de Aceptación del Cloruro de sodio en el Producto Dextrosa al 5%

SS:
146,3 – 161,7 g/100mL (95,0 – 105,0%)
Formula cualicuantitativa dextrosa al 5% solución salina

o
Tabla 4 Formula Maestra Dextrosa al 5% en solución salina – Solución Inyectable
Sustancia Cantidad
Dextrosa Monohidrato 5,0 g
Agua para Inyección 100 mL
PROTOCOLO

Cloruro de sodio 0,9 g
8.3.1. Preparación de placebo
Pesar 5,0 g de Dextrosa Monohidrato y transferir a un matraz volumétrico de

100mL, adicionar 50mL de agua para inyección, someter a ultrasonido por 10
minutos a una temperatura de 30°C. Dejar enfriar a temperatura ambiente,
homogenizar y completar a volumen con diluente.
Preparación de solución estándar
Pesar el equivalente a 0,720 g de Cloruro de Sodio USP en un matraz volumétrico

de 100 mL, agregar aproximadamente 50 mL de diluente, agitar de forma continua
para garantizar un proceso de homogenización completo, y completar a volumen
con diluente. Esta solución corresponde a una concentración final de trabajo del
80% [0,072 g/mL]

90% [0,081 g/mL]
Pesar el equivalente a 0,9 g de Cloruro de Sodio USP en un matraz volumétrico de

100 mL, agregar aproximadamente 50 mL de diluente, agitar de forma continua
100% [0,090 g/mL]

110% [0,099 g/mL]

PROTOCOLO

120% [0,0108 g/mL]
Preparación de placebo cargado
Pesar el equivalente a 5,0 g de Dextrosa Monohidrato USP + 0,720 g de Cloruro

de sodio en un matraz volumétrico de 100 mL, agregar aproximadamente 50 mL
de diluente, agitar de forma continua para garantizar un proceso de
homogenización completo y completar a volumen con diluente. Esta solución
corresponde a una concentración final de trabajo del 80% [0,0072 g/mL]

Pesar el equivalente a 5,0 g de Dextrosa Monohidrato USP + 0,90 g de Cloruro de

sodio en un matraz volumétrico de 100 mL, agregar aproximadamente 50 mL de
diluente, agitar de forma continua para garantizar un proceso de homogenización
completo y completar a volumen con diluente. Esta solución corresponde a una
concentración final de trabajo del 100% [0,009 g/mL]


8.4 Requisitos de Idoneidad del Sistema
Desviación Estándar Relativa: No más de 3,0% para la valoración de Cloruro de

Sodio
PROTOCOLO

8.5 Parámetros de Validación Analizados
8.5.1. Linealidad del sistema

 Preparar 5 estándares de concentraciones crecientes (80% 90% 100% 110% y
120%).
 Realizar el análisis por triplicado de cada valor de concentración.
 Tabular los resultados.
 Elaborar la curva de calibración.
CRITERIOS DE EVALUACIÓN
 Coeficiente de variación de los factores de respuesta % CVf ≤ 2,0%

 Coeficiente de correlación “r” ≥ 0,99
 Coeficiente de determinación “r2“≥ 0,98
 t student experimental para la pendiente t exp > t tablas con GL= n-2, p = 0.05
 Desviación estándar relativa de la pendiente %Sb rel ≤ 2,0%
 Los límites de confianza del intercepto deben incluir el valor cero
 Límites de confianza para la pendiente no deben incluir el valor cero
Los anteriores criterios permiten evaluar la correlación entre las variables y la Linealidad.
Se tabulan los resultados con base en el siguiente formato:
Concentración de la
Dilución de la solución Propiedad medida (y)
Patrón (X)
X1 Y11 Y12
X2 Y21 Y22
X3 Y31 Y32
X4 Y41 Y42
PROTOCOLO

X5 Y51 Y52
t = Número de diluciones
n = Número de réplicas (propiedad medida) de cada solución patrón
r = Coeficiente de correlación
r2 = Coeficiente de determinación
y = Promedio de la propiedad medida
DE = Desviación estándar
a = Intercepto
b = Pendiente
%CVf = Coeficiente de variación de los factores de respuesta
Syx = error estándar de la estimación
Sb2 = Varianza de la pendiente
Sb = Desviación estándar de la pendiente
%Sb = Desviación estándar relativa de la pendiente
Sa = Desviación estándar del intercepto
Sa2 = Varianza del intercepto
Cálculos
cálculos para coeficiente de variación de los factores de respuesta
 Calcular para cada punto de la linealidad del sistema el siguiente factor:
Propiedad medida(Y )
f=
Concentración de la solución Patrón (X )
PROTOCOLO

2 2
2 Propiedad medida (Y )
f =
Concentraciónde la solución Patrón 2( X 2)
Ejemplos
Y 11
f=
X1
2 Y 112
f =
X 12
 Calcular la suma de factores, la suma de cuadrados de factores y la media del factor
∑ f = ( f 11+ f 12+f 21+ f 22+ f 31+f 32+ f 41+ f 42+ f 51+ f 52 )

 Calcular el promedio y la desviación estándar
f=
∑f
N
N= Números de datos
√
N
1
N −1 ∑
DE= ( fi−f )2
i=1
PROTOCOLO

√
10
1
DE= ∑ ( f 11−f ) + ( f 12−f ) + ( f 21−f ) + ( f 22−f ) + ( f 31−f ) + ( f 33−f ) + … ( f 52−f )
2 2 2 2 2 2 2
9 i=1
 Cálculos finales para el coeficiente de variación
DE
% CVf = 100
f
Cálculos para coeficiente de correlación y coeficiente de determinación
∑ X=n ( X 1+ X 2+ X 3+ X 4+ X 5 )
∑ Y =( Y 11+Y 12+Y 21+Y 22+Y 31+Y 32+Y 41+Y 42+Y 51+ Y 52 )
∑ X 2=n ( X 12 + X 22 + X 32 + X 4 2 + X 52 )
∑ Y 2=( Y 112+Y 122 +Y 212+Y 222 +Y 312+Y 322 +Y 412 +Y 422+Y 512 +Y 522 )
∑ XY =X 1 ( Y 11+Y 12 ) + X 2 ( Y 21+Y 22 )+ X 3 (Y 31+Y 32 ) + X 4 (Y 41+Y 42 )+ X 5 ( Y 51+Y 52 )
2
2
r=
[ nt (∑ xy )−(∑ x )(∑ y ) ]
¿¿
√
2
r=
2
[ nt (∑ xy )−(∑ x )(∑ y ) ] ¿
¿¿
cálculos para la desviación estándar relativa de la pendiente

PROTOCOLO

 Cálculo de la pendiente a partir de las siguientes ecuaciones:
x=
∑x
N
y=
∑y
N
b=
∑ ( x−x )( y− y )
∑ ( x−x )2
 Calculo del intercepto
a= y−b x
 Cálculos finales para la desviación estándar relativa de la pendiente % Sb rel
sy , x=
∑ y 2−( a × ∑ y )−(b × ∑ xy )
N −2
sy , x
S b2=
(∑ x )
2
∑x − 2
N
PROTOCOLO

sb= √2 sb 2
sb
% sb rel= × 100
b
calculos para determinar los limites de confianza para la pendiente
b=b ± t tabla × sb
t tabla = es el valor de la tabla de la distribución de student con las siguientes condiciones

N-2 grados de libertad
Probabilidad de cometer error (p) de 0.05 es decir un grado de confianza del 95%.
Cálculos para el valor “t de student”
b
t de Student =
sb
Test de hipótesis para la pendiente “b”
 Hipótesis Nula (Ho): “b” es igual a cero

 Hipótesis alterna “b” es significativamente diferente de cero
Cálculos para determinar los limites de confianza para el intercepto
(∑ x)
2
2 2
Sa =sb ×
N
PROTOCOLO

Sa=√ Sa
2 2
sa
% sa rel= ×100
a
a=a ± t tabla × sa
t tabla = es el valor de la tabla de la distribución de student con las siguientes condiciones:

N-2 grados de libertad
Probabilidad de cometer error (p) de 0.05 es decir un grado de confianza del 95%.
6.3.3. LINEALIDAD DEL METODO
 Preparar placebos adicionados correspondientes a las concentraciones de 80 %,

90 %, 100 %, 110 % y 120 % de cada principio activo.
 Realizar el análisis de cada concentración por triplicado.
 Tabular los resultados
 Elaborar la curva de calibración para el analíto.
Los criterios de aceptación y sus respectivos cálculos se realizan de acuerdo con lo

anterior mencionado en la linealidad del sistema.
8.5.1. Precisión del sistema
 Realizar la preparación de la solución estándar al 100%.

 Realizar los análisis a una misma muestra por sextuplicado con los mismos
equipos, reactivos y en el mismo laboratorio
 Tabular los datos.
 Determinar el Coeficiente de variación CV y el promedio del porcentaje
recuperado.
8.5.2. Precisión del Método

PROTOCOLO

 Realizar los análisis a una misma muestra de placebo cargado al 100% de cloruro
de Sodio por sextuplicado con los mismos equipos, reactivos y en el mismo
laboratorio.
Criterios de evaluación
Coeficiente de variación % CV ≤ 2 %
Porcentaje de recuperación entre 97,0% y 103,0%
Numero de Placebo Propiedad medida (y)

Cargado al 100% (X)
X1 Y1
X2 Y2
X3 Y3
X4 Y4
X5 Y5
X6 Y6
Cálculos
Cálculos para el coeficiente de variación
y=
∑y
N
N= Número de datos
√
N
1
DE= ∑ ( yi− y )2
N −1 i=1
√
6
1
DE= ∑
5 i=1
( y 1− y )2 + ( y 2− y )2 + ( y 3− y )2 + ( y 4− y )2 + ( y 5− y )2
PROTOCOLO

DE
% CV = 100
y
Cálculo para el porcentaje de recuperación
X experimental
% de Recuperación= ×100
X teórico
Promedio % de Recuperación=
∑ % de recuperación
N
6.3.4. PRECISION INTERMEDIA
 Analizar dos muestras de producto por duplicado en dos días diferentes y por dos
analistas distintos.
 Tabular los datos en la siguiente tabla
Porcentaje de
recuperación (y)
Muestra (x)
Día 1 Día 2
Muestra A
Y111 Y121
Analista 1
Muestra A
Y112 Y122
Analista 2
Muestra B
Y211 Y221
Analista 1
PROTOCOLO

Porcentaje de
recuperación (y)
Muestra (x)
Día 1 Día 2
Muestra B
Y221 Y222
Analista 2
 Determinar el coeficiente de variación de los Porcentajes de recuperación

obtenidos en los análisis desarrollados por cada analista.
6.3.4.1. CRITERIOS
El coeficiente de variación GLOBAL debe ser menor al 3%.
6.3.4.2. CALCULOS
y=
∑y
N
N= Número de datos
√
N
1
DE= ∑
N −1 i=1
( yi− y )2
PROTOCOLO

√
12
1
DE= ∑
11 i=1
( y 111− y )2+ ( y 112− y )2+ ( y 211− y )2 + ( y 221− y )2 +… ( y 222− y )2
DE
% CV = 100
y
8.5.3. Exactitud
 Preparar placebos cargados con la siguiente composición:

Placebo + 80% de la cantidad etiquetada de cada componente.
 Analizar cada uno por triplicado.
 Tabular los datos
 Los resultados obtenidos se expresan en porcentaje de recuperación y se realiza
un análisis estadístico haciendo uso del test de Student
Criterios
T student experimental para el porcentaje de recuperación t exp < t tablas con GL= N-1, p
= 0.05
Porcentaje de recuperación entre 97,0% y 103,0%
Concentración de la
Dilución de la solución Porcentaje de Recuperación (y)
Patrón (X)
X1 Y11 Y12 Y13

X2 Y21 Y22 Y23
X3 Y31 Y32 Y33
Cálculo de t student experimental para la el porcentaje de recuperación

PROTOCOLO

 Calcular el promedio, la desviación estándar y el coeficiente de variación.
y=
∑y
N
N= Número de datos
√
N
1
DE= ∑ ( yi− y )2
N −1 i=1
√
9
1
DE= ∑ ( y 11− y )2 +( y 12− y )2 +( y 13− y )2 + ( y 21− y )2 +… ( y 33− y )2
8 i=1
DE
% CV = 100
y
 Cálculos finales para t de student experimental.
ABS = Valor absoluto o real

t de student =|( y −1 )|
√ 2 3
CV
Cálculo para el porcentaje de recuperación
X experimental
% de Recuperación= ×100
X teórico
Promedio % de Recuperación=
∑ % de recuperación
N
8.5.4. Especificidad del Método
 Analizar 3 veces cada una de las siguientes Preparaciones:

a) Solución estándar al 100 %
b) Placebo adicionado al 100 %
c) Placebo
d) Diluente
PROTOCOLO

 Determinar el coeficiente de variación de los valores de recuperación entre

Analitos y Placebo adicionado al 100%.
Criterios de evaluación
Confirmar que el método desarrollado es capaz de cuantificar la sustancia de interés sin

que exista interferencia de otras sustancias presentes.
Coeficiente de variación % CV entre Analitos y Placebo adicionado al 100%. ≤ 2,0%
El placebo evaluado bajo las condiciones del ensayo no debe presentar ningún resultado
que pueda interferir con los valores del analito a determinar.
Se tabulan los resultados con base en el siguiente formato
Placebo Porcentaje de recuperación (y)
Placebo (Xo) Yo1 Yo2 Yo3 Yo4

Placebo + Analito 100 % (X1) Y11 Y12 Y13 Y14
Analito (X2) Y21 Y22 Y23 Y24
Cálculos para el coeficiente de variación
y=
∑y
N
Sin incluir los datos Yo1, Yo2, Yo3

N= Número de datos
√
N
1
DE= ∑
N −1 i=1
( yi− y )2
√
6
1
DE= ∑ ( y 11− y ) + ( y 12− y ) + ( y 13− y ) + ( y 21− y ) + ( y 22− y ) + ( y 23− y )
2 2 2 2 2 2
5 i=1
DE
% CV = 100
y
8.5.5. Selectividad
PLACEBO CARGADO
PROTOCOLO

- Hidrolisis Neutra
Verter en un Erlenmeyer de boca esmerilada de 250 mL condicionado con un

equipo para reflujo, una alícuota de 100mL del estándar del 100 % del analíto,
Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo dejar enfriar y valorar el analíto.
- Hidrolisis Acida

equipo para reflujo, una alícuota de 100mL del estándar del 100 % del analito,
Adicionar 10 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Calentar por espacio de 30 minutos a
reflujo dejar enfriar y valorar el analito.
- Hidrolisis Alcalina

Adicionar 10 mL de NaOH 0.1 N. Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo
dejar enfriar y valorar el analito.
- Oxidación

Adicionar 10 mL de H2O2 al 3%. Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo dejar
enfriar y valorar el analito.
- Fotolisis

someter a exposición de luz UV directa por 8 horas.
PRINCIPIO ACTIVO
- Hidrolisis Neutra
PROTOCOLO

Verter en un Erlenmeyer de boca esmerilada de 250 mL condicionado con un equipo

para reflujo, una alícuota de 100mL de placebo cargado al 100 % del analíto,
Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo dejar enfriar y valorar el analíto.
- Hidrolisis Acida

para reflujo, una alícuota de 100mL de placebo cargado al 100 % del analito,
Adicionar 10 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Calentar por espacio de 30 minutos a
reflujo dejar enfriar y valorar el analito.
- Hidrolisis Alcalina

Adicionar 10 mL de NaOH 0.1 N. Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo dejar
- Oxidación

Adicionar 10 mL de H2O2 al 3%. Calentar por espacio de 30 minutos a reflujo dejar
- Fotolisis

para reflujo, una alícuota de 100mL de placebo cagado al 100 % del analito, someter
a exposición de luz UV directa por 8 horas.
8.6. Criterios / Límites de Aceptación para la Validación
Tabla 5 Criterios - Límites de Aceptación
CARACTERÍSTICA PARAMETRO DE EVALUACION CRITERIO DE

PROTOCOLO

S ANALÍTICAS
ACEPTACION
PARA VALIDAR
Coeficiente de variación de los factores de

≤ 2,0%
respuesta % CVf
Coeficiente de correlación “r”, r ≥ 0,99
Coeficiente de determinación “r2“ r2 ≥ 0,98
t exp > t tablas con Nº Grados

LINEALIDAD DEL Prueba t-Student experimental para la de libertad GL= n-2 ,
SISTEMA pendiente
p = 0.05
Desviación estándar relativa de la

 2%
pendiente % Sb rel.
Límites de confianza del intercepto Deben incluir el valor cero
No deben incluir el valor

Límites de confianza para la pendiente cero
LINEALIDAD DEL Coeficiente de variación de los factores de

< 2,0%
METODO respuesta % CVf
Coeficiente de correlación “r”, r ≥ 0,99
Coeficiente de determinación “r2“ r2 ≥ 0,98
t exp > t tablas con Nº Grados

T Student experimental para la pendiente de libertad GL= n-2 ,
p = 0.05
Desviación estándar relativa de la  2%

pendiente %Sb rel
PROTOCOLO

Límites de confianza del intercepto Deben incluir el valor cero
No deben incluir el valor

Límites de confianza para la pendiente cero
Coeficiente de variación %CV de los

PRECISIÓN DEL porcentajes de recuperación ≤ 3,0 %
SISTEMA – n=6
REPETIBILIDAD
% de recuperación
97.0% - 103.0%
Coeficiente de variación %CV de los

PRECISIÓN DEL porcentajes de recuperación ≤ 3,0 %
MÉTODO –
REPETIBILIDAD n=6
% de recuperación 97.0% - 103.0%
PRECISIÓN
INTERMEDIA ≤ 3,0 %
(Reproducibilidad Coeficiente de variación global %CV
intralaboratorio).
t exp < t tablas con Nº Grados

Prueba t-Student experimental para el de libertad GL= n-1 ,
EXACTITUD porcentaje de recuperación.
p = 0.05
(% recuperación)
% de Recuperación Entre 97 % y 103 %
ESPECIFICIDAD Coeficiente de variación de Analito y

CV≤2 %
Placebos adicionados al 100%
No debe aparecer ningún

Valoración de placebo
valor de lectura.
SELECTIVIDAD
Porcentaje de recuperación de las
muestras sometidas a los procesos de Entre 90 % y 110 %
hidrólisis, fotolisis.
PROTOCOLO

8.7. Gestión Ambiental

Efectuar de manera adecuada la disposición de los residuos generados durante la
ejecución de la validación, vertiendo los desechos en los recipientes adecuados en el
laboratorio de Control de Calidad.
9. DOCUMENTOS RELACIONADOS
 POE-VAL-019 PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTÁNDAR DE VALIDACIÓN DE

LAS METODOLOGÍAS ANALÍTICAS
 TAPT-013 TÉCNICA DE ANÁLISIS DE PRODUCTO TERMINADO DEXTROSA
5% EN SOLUCION SALINA
 TAPP-006 TECNICA DE ANALISIS DE PRODUCTO EN PROCESO DEXTROSA
5% EN SOLUCION SALINA
 EPT-013 ESPECIFICACIÓN DE PRODUCTO TERMINADO DEXTROSA AL 5%
EN SOLUCION SALINADA
10. FORMATOS RELACIONADOS

 F-01-VAL-019 Datos primarios para la validación de metodología analítica
11. ANEXOS
No aplica
12. BIBLIOGRAFÍA
 Conferencia internacional sobre armonización (2005) – Validación de

procedimientos analíticos.
 USP – NF (2021). Farmacopea de Estados Unidos.
PROTOCOLO

13. HISTORIAL
Fecha de Nueva
Descripción del cambio Responsable
modificación versión
A.MORENO
Creación del documento Analista de Control 22-01-XX 00
de Calidad

Protoco Validacion Analitica Cloruro de Sodio en Dextrosa Al 5% SS

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VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

FECHA DE APROBACIÓN: 22-01-XX VERSIÓN No: 00

VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 1 DE 26

Angelica Moreno Flórez

Diana Mariela Burbano

Diana María Vargas Spinel

Jorge Enrique Parada C.

SELLO ORIGINAL: SELLO DE COPIA AUTORIZADA:

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

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VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 2 DE 26

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8.4.5 Precisión Intermedia....................................................................................18

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

FECHA DE APROBACIÓN: 22-01-XX VERSIÓN No: 00

VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 4 DE 26

Fuente: Monografías – USP – Dextrosa

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

FECHA DE APROBACIÓN: 22-01-XX VERSIÓN No: 00

VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 5 DE 26

 VALIDACIÓN DE METODOLOGÍA ANALÍTICA:

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

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VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 6 DE 26

ensayos de una muestra homogénea de un analito específico del producto; usualmente se

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

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VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 7 DE 26

Si no existe una cola o sesgo, la asimetría tendrá un valor de cero.

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

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VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 8 DE 26

Ejecutar las actividades descritas en este protocolo tales como:

Analista de  Emitir y firmar el Protocolo de Validación / Verificación de la

 Garantizar los recursos suficientes para el cumplimiento de

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

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VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 9 DE 26

 Garantizar la ejecución de todas las actividades descritas en

6 EQUIPOS, MATERIALES, RECURSOS Y REACTIVOS

6.1 Equipos a Utilizar

6.2 Materiales y Recursos a Utilizar

6.3 Reactivos a Utilizar

VALIDACION DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CÓDIGO

FECHA DE APROBACIÓN: 22-01-XX VERSIÓN No: 00

VIGENTE HASTA: 27-01-XX PÁGINA: 10 DE 26

La validación de la metodología analítica para la cuantificación de cloruro de sodio en

8 DESARROLLO DEL DOCUMENTO

8.1 Descripción del Estándar

o Estándar a emplear en la validación

Tabla 2 Información del Estándar

8.2 Descripción de la Muestra

o Materia prima empleada en la validación

Tabla 3 Información de la Materia Prima

# de Análisis Fecha de Potencia

Agua para inyección