UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y

BIOTECNOLOGÍA

Análisis Instrumental

DATOS INFORMATIVOS:

Nombre: Alejandro Boada

Carrera: Tercero Biotecnología “B”

Tarea. 1

Fecha de Realización:10/1/2022 Fecha de Presentación: 10/1/2022

Auxiliar de Laboratorio: Ing. María Ramos

Docente: Químico Lander Pérez

Ciclo académico: octubre 2021-febrero 2022

Tema. VALIDACIÓN MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS

1. La longitud de onda y velocidad de propagación de

cualquier onda depende de.

La longitud de onda, también conocida como periodo espacial es la inversa de

la frecuencia multiplicado por la velocidad de propagación de la onda en el medio

por el cual se propaga. La longitud de onda se suele representar con la letra griega λ.

2. ¿Qué intervalo de longitudes de onda del espectro

electromagnético abarcan las zonas visible, ultravioleta y

ultravioleta al vacío?

Por tanto el intervalo espectral de longitudes de onda que tiene efecto sobre los seres

vivos está entre 280 nm (UV de menor longitud de onda son absorbidos por la
atmósfera) y 400 nm (límite con el espectro visible). Abarca la zona del espectro

comprendida entre λ =280 nm y λ =200 nm

3. ¿Qué tipo de electrones son afectados por las radiaciones

ultravioleta y visible?

La absorción de radiación ultravioleta y visible (200–800 nm) se restringe a un número

limitado de grupos funcionales, llamados cromóforos, que contienen electrones de

valencia con energías de excitación relativamente bajos.

4. De las siguientes propiedades de la radiación

electromagnética cuáles se explican con el modelo

ondulatorio y cuales con el modelo de partículas discretas de

energía. Absorción, dispersión, difracción, emisión y

polarización.

Absorción. Por otra parte, absorción en química es un proceso que consiste en la

separación de uno o más componentes de un gas haciendo uso de un solvente líquido

que permitirá crear una solución.

Dispersión. cambio en la dirección de la luz debido a su interacción con la materia;

puede ocurrir con o sin transferencia de energía.

Emisión: transición desde estados excitados a estados de menor nivel de energía con

emisión de radiación. La espectroscopia de emisión difiere de los otros tres tipos por

qué no se necesita una fuente externa de radiación ya que la propia muestra es la

emisora. La muestra, suele ser introducida en un plasma, chispa o una llama, lo que

proporciona la suficiente energía térmica (se energetiza) y emite una radiación

característica.
Tienen generalmente una rejilla de difracción para dispersar la radiación en sus

longitudes de onda. Cuando se hace girar la rejilla se logra que diferentes longitudes

de onda pasen a través de la rendija de salida. En los instrumentos más antiguos se

utilizaban Prismas.

5. Explica el fenómeno de absorción.

Absorción: transición desde el estado fundamental a uno o varios estados excitados de un

átomo o molécula, que tiene lugar con transferencia de energía procedente de la radiación

electromagnética. En la espectroscopia de absorción se requieren de una fuente externa

de energía radiante; el haz de luz proveniente de la fuente y que ha pasado a través del

selector de longitud de onda atraviesa la muestra.

6. Explica la absorción atómica, dibuja un espectro característico

de este tipo de absorción y explica porque tiene esa forma.

La Espectrometría de Absorción Atómica, como su nombre indica, consiste en aplicar

lo que llamamos una "fuente de radiación conocida". Si hay un elemento de la misma

naturaleza que la radiación suministrada, entonces esta energía será absorbida por los

átomos excitados de la muestra analizada.

 7. Explica la absorción molecular, dibuja un espectro

característico de este tipo de absorción y explica porque tiene

esa forma.

Cuando una molécula interacciona con una onda electromagnética que porta una

cantidad de energía exactamente igual a la diferencia de energía entre el estado

fundamental y el estado excitado la molécula absorbe la energía y se produce la

excitación. La excitación originada por radiaciones visibles o ultravioleta promueve

transferencias de electrones que se hallan en niveles bajos de energía hasta orbitales de

energía superior. La transición de un electrón entre diferentes niveles de energía se

denomina transición electrónica y el proceso de absorción asociado es conocido

como absorción electrónica.

 8. En qué intervalo de longitudes de onda se llevan a cabo las

siguientes transiciones σ→σ* y π→π*.

Las transiciones electrónicas a orbitales moleculares más externos dan lugar a las

denominadas transiciones Rydberg presentes en el Ultravioleta de Vacío. Por otra parte

las transiciones electrónicas que involucran a los electrones de las capas internas son

muy energéticas y se presentan en la región de los rayos X del espectro

electromagnético

9. ¿Qué es un desplazamiento hipocrómico y un desplazamiento

bato crómico?

El efecto hipsocrómico es un cambio de la posición de las bandas espectrales del espectro

de absorción, de transmitancia, de reflectancia o de emisión de una molécula hacia

una longitud de onda más corta (o una frecuencia más alta). En el espectro visible, el color

azul es el que tiene una longitud de onda más baja, y por ello el efecto se conoce también

como desplazamiento hacia el azul. El efecto hipsocrómico puede ocurrir por un cambio

en el medio que rodea a la molécula. Un cambio de disolvente o de ligandos de

coordinación, por ejemplo, pueden causar un desplazamiento hacia el azul de las bandas

características del espectro molecular.

En Física, se denomina efecto batocrómico o desplazamiento batocrómico al fenómeno

que se verifica cuando la longitud de onda de absorción de una sustancia se desplaza

hacia longitudes de onda más grandes o de menor energía por efecto del solvente o por la

presencia de distintos sustituyentes químicos; también se conoce como corrimiento hacia

el rojo. El fenómeno opuesto, es decir el corrimiento de una banda hacia longitudes de

onda menores o de mayor frecuencia, se denomina efecto hipsocrómico. Un ejemplo de

efecto batocrómico, descrito por primera vez por el científico alemán Richard

Willstätter (1872-1942) lo ofrecen las antocianinas.

10. Define qué es un cromóforo y da algunos ejemplos de ellos.

Un cromóforo es la parte o conjunto de átomos de una molécula responsable de su color.

También se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de

absorber energía o luz visible, y excitarse para así emitir diversos colores, dependiendo

de las longitudes de onda de la energía emitida por el cambio de nivel energético de los

electrones, de estado excitado a estado basal. Algunos ejemplos de estos cromóforos se

encuentran en la clorofila, usada por los vegetales para la fotosíntesis, la hemoglobina,

la hemocianina, y en metales coloreados como malaquita y amatista.

11. Explica el efecto de la conjugación de los cromóforos en la

longitud de onda de absorción.

Es la representación gráfica de transmitancia o absorción frente a longitudes de onda.

Además, cada sustancia tiene un espectro característico para cada sustancia.

12. Explica el efecto de los sustituyentes auxocrómicos en la

longitud de onda de absorción molecular.

Por definición un auxocromo es un grupo funcional que no absorbe por sí solo en la

región del ultravioleta pero que tiene los efectos de desplazar picos de los cromóforos

hacia longitudes de onda larga además de aumentar sus intensidades.

13. ¿Qué especies inorgánicas pueden ser estudiadas en UV-visible?

La absorción de la radiación ultravioleta o visible, se produce por lo general como

consecuencia de la excitación de los electrones de enlace; debido a esto, la longitud de

onda de los picos de absorción se puede correlacionar con los tipos de enlace existentes

en la especie que se estudia.

14. ¿Qué caracteriza a la absorción por transferencia de carga?

En química, un complejo de transferencia de carga o complejo aceptante-donante de

electrón es una asociación química de dos o más moléculas, o de diferentes partes de

una molécula muy grande, en el que la atracción entre las moléculas (o partes) se debe

a una transición electrónica hacia un estado electrónico excitado, tal que una fracción de

la carga electrostática es transferida entre las entidades moleculares. La

atracción electrostática resultante provee una fuerza estabilizadora para el complejo

molecular. La molécula fuente de donde la carga es transferida se denominada electrón

donante, y la molécula receptora es denominada electrón aceptante.

15. ¿Qué características tiene el análisis cualitativo en UV-visible?

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la

concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las

radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de

forma lineal de la concentración.

16. ¿Qué características tiene el análisis cuantitativo en UV-visible?

Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que

la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración.

17. Experimentalmente cómo se elimina la influencia de la celda

o cubeta en las medidas de absorbancia.

La absorbancia está relacionada con la concentración de la sustancia, c, por la ley de

Lambert-Beer, que se resume con la ecuación: A = ε b c , donde c se expresa en mol/L,

b es la longitud del camino óptico (anchura de la célula que contiene la disolución de

la sustancia) y se expresa en cm, y ε es la absortividad

18. Expresa la ley de Beer e indica cuáles son sus limitaciones.

Limitaciones de la Ley de Beer. Se han encontrado pocas excepciones a la generalización

de que la absorbancia está relacionada linealmente con el camino óptico. Por otra parte,

con frecuencia se han encontrado desviaciones de la proporcionalidad entre la medida de

la absorbancia y la concentración cuando b es constante. En algunas ocasiones estas

desviaciones están relacionadas con el fundamento de la ley y representan limitaciones

propias de la misma. Otras veces surgen como consecuencia de la forma en que se realizan

las medidas de absorbancia o como resultado de cambios químicos asociados con cambios

de concentración; las dos últimas son conocidas a veces como desviaciones

instrumentales y desviaciones químicas, respectivamente.

• Desviaciones químicas.

• Desviaciones instrumentales originadas por la radiación policromática.

• Desviaciones instrumentales originadas por la radiación parásita.

19. Explica las desviaciones a la ley de Beer originadas por la

radiación policromática y por la radiación parásita.

Desviaciones químicas. Cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con un

disolvente para dar lugar a un producto con un espectro de absorción diferente al del

analito, se producen desviaciones de la ley de Beer. Las disoluciones acuosas de los

indicadores ácido/base son un ejemplo característico de este comportamiento. Por

ejemplo, el cambio de color asociado con un indicador típico HIn se produce como

consecuencia de los cambios en el equilibrio.

Desviaciones instrumentales originadas por la radiación policromática. El

cumplimiento estricto de la ley de Beer sólo se observa cuando la radiación es

realmente monocromática; esta observación es otra manifestación aun del carácter

límite de la ley. En la práctica es muy difícil obtener radiación restringida a una sola

longitud de onda debido a que los dispositivos que aíslan porciones de la señal de salida

de una fuente continua generan una banda de longitudes de onda más o menos

simétrica en torno a la deseada.

20. Con qué tipo de excitación trabaja la lámpara de deuterio.

Cuando retornan al estado inicial, el deuterio emite luz ultravioleta durante dicha

transición. Este proceso se repite continuamente mientras la lámpara esté en

funcionamiento, por lo que emite una radiación ultravioleta continua.

21. En qué intervalo de longitudes de onda se obtiene un espectro

continuo con la lámpara de deuterio.

Estas lámparas producen un espectro radiante entre 360-950 nm. Por su parte, las

Lámparas de Deuterio generan un espectro continuo en la región ultravioleta entre 220-

360 nm.

22. Con qué tipo de excitación trabaja la lámpara incandescente

de tungsteno, W.
 La gran excitación que produce la fricción en los átomos del tungsteno o wolframio (W),

metal del que está compuesto el filamento, provoca que algunos electrones salgan

despedidos de su órbita propia y pasen a ocupar una órbita más externa o nivel superior

de energía dentro del propio átomo.

23. Qué porcentaje de la energía que emite la lámpara de

tungsteno cae dentro de la zona del visible.

En la práctica, la temperatura más alta que soporta una lámpara incandescente ordinaria

fabricada con filamento de volframio es de 2900 K. A estas temperaturas solamente,

una pequeña fracción de de la energía emitida está en la región visible, menos del 11%,

la mayor parte de es radiación infrarroja.

24. Con frecuencia se utilizan filtros al trabajar con lámpara de

tungsteno para eliminar la energía de ciertas longitudes de onda

¿de qué zona?

Este tipo de instrumento consta de una lámpara de tungsteno o de deuterio, un filtro o

monocromador, cubetas ajustadas que pueden interponerse de manera alternada en el haz

de radiación, un transductor, un amplificador y un dispositivo de lectura. Por lo regular,

un instrumento de haz sencillo necesita una fuente de alimentación estabilizada para

evitar errores como resultado de los cambios en la intensidad del haz durante el tiempo

que se requiere pare efectuar la medición de 100% de T y determina el % T del analito

25. ¿Cuáles son los elementos principales de un filtro de

interferencia?

Filtros de interferencia. Como su nombre lo indica se fundamentan en las interferencias

ópticas para producir bandas estrechas de radiación. Consta de un dieléctrico transparente

(con frecuencia fluoruro de calcio o de magnesio) que ocupa el espacio entre dos películas
metálicas semitransparentes. (con frecuencia plata). Esta disposición se coloca entre dos

placas de vidrio u otro material transparente. El espesor de la capa dieléctrica se controla

cuidadosamente para tener solamente una, dos o tres medias ondas (se denominan como

filtros de primero, segundo y tercer orden) y determinan la longitud de onda de la

radiación transmitida

26. ¿Qué caracteriza la radiación colimada?

Se denomina luz colimada a la luz cuyos rayos son paralelos entre sí, lo que se puede

lograr de diferentes formas, siendo la más sencilla hacerla incidir en un espejo cóncavo

desde una fuente situada en el foco. Se dice que un haz de luz está colimado si la

divergencia del vector de Poynting correspondiente es nula.

27. De qué variables depende la longitud de onda

seleccionada por el filtro. Expresa la relación.

El ancho de banda efectivo de un monocromador depende de la dispersión de la red o del

prisma así como de la anchura de las rendijas de entrada y de salida. La mayor parte de

los monocromadores contiene rendijas variables de modo que el ancho de banda efectivo

se pueda modificar. Se recomienda usar la anchura mínima de rendija cuando se debe

resolver bandas de absorción o de emisión angostas. Por otro lado, la potencia radiante

disponible disminuye de manera notable cuando las rendijas son angostas, y se vuelve

más difícil medir con exactitud la potencia.

28. ¿Qué anchura de banda específica es posible obtener con este

tipo de filtros?

El resultado es que se refuerza está determinada longitud, mientras que la mayoría de las

demás longitudes, que no están en fase, sufren una interferencia destructiva.

 29. ¿Qué variables afectan la longitud de onda nominal del filtro?

Se disponen de cuñas de interferencia para la región del visible (400 a 700 nm), para la

regióninfrarrojocercano (1000 a 2000 nm) y para varias zonas de la región del infrarrojo

(2500 a 14500 nm)

30. En general cómo trabaja un filtro de absorción.

Estos filtros que en general son más baratos que los filtros de interferencia,

se han utilizado mucho para la selección de bandas en la región visible. Estos filtros

funcionan absorbiendo ciertas zonas del espectro. El tipo más habitual es un vidrio

coloreado o una suspensión de un colorante en gelatina que de

coloca entre dos placas de vidrio. El primero tiene mayor estabilidad térmica.

31. ¿Qué anchura de banda se obtiene con un filtro de absorción?

Los filtros de absorción tienen anchuras de banda efectivas que oscilan entre 30 y 250 nm

32. Indica cuáles son las principales desventajas y ventajas de

trabajar con filtros de absorción.

Los filtros de corte y los de corte agudo son ampliamente utilizados como filtros de

bloqueo para suprimir algunas órdenes espectrales indeseables, que resultan

de los filtros de interferencia o de las redes de difracción. Unos filtros de corte agudo

permiten el paso de longitudes de onda grandes, o sea las series roja y amarilla.

Otros filtros son para longitudes de onda para permitir el paso de longitudes de onda

pequeñas, o sea, permiten el paso de las series azul y verde. Los filtros de absorción de

vidrio combinados se construyen con dos filtros de corte agudo. La separación espectral

entre el 50% de los puntos de corte y corte agudo en la curva de transmitancia contra

longitud de onda, varía de 20 a70nm. No obstante que estos filtros no alcanzan el paso de
banda tan estrecho y alta transmisión típica de los filtros de interferencia tienen la ventaja

de ser relativamente insensibles al ángulo de entrada

33. Indicar los componentes básicos de un monocromador.

Los requisitos básicos de los monocromadores son: simplicidad de diseño, resolución,

gama espectral, pureza de la radiación de salida y poder de dispersión. El funcionamiento

de un monocromador comprende tres factores relacionados: la resolución, el poder de

captación de la luz y el poder de dispersión.

34. ¿Cuáles son las diferencias más importantes entre un dispersor

de prima y uno de red?

Hay dos tipos de dispersores en los monocromadores, a saber, redes y prismas de

reflexión. Para ilustrar su función se considera un haz que emerge de la rendija de entrada

constituido por dos longitudes de onda λ1 y λ2 (λ1 > λ2).

35. ¿Qué diferencia un monocromador de escalerilla de uno de

escalera?

Como transductores se emplean tubos fotomultiplicadores y la señal de salida, a menudo,

se digitaliza, se procesa y se almacena en una computadora para que pueda imprimirse o

registrarse de diversas formas.

36. ¿Cómo trabaja una celda fotovoltaica de capa-barrera?

Al combinar ambas capas se genera un campo eléctrico el cual no deja a los electrones

moverse más que de una manera, generando así una corriente eléctrica la cual puede ser

almacenada fácilmente en una batería.

37. Indica cuales son los beneficios y limitaciones de las celdas

fotovoltaicas de capa- barrera como detectores de radiación.

Es un dispositivo sencillo que se usa para detectar y medir radiación en la región visible.

Una celda típica tiene una sensibilidad máxima de alrededor de 550 nm; la respuesta

disminuye a casi 10% del máximo 350 y 750 nm. El intervalo es similar al del ojo

humano. Está constituida por un electrodo plano de cobre o hierro en el que se deposita

una capa de material semiconductor, como el selenio. La superficie externa del

semiconductor se reviste con una película fina y transparente de oro o plata, la cual

funciona como el segundo electrodo o colector; el sistema completo se protege mediante

una cubierta transparente. Esta celda proporciona una respuesta que se puede medir con

prontitud con altos niveles de iluminación, pero carece de sensibilidad a bajos niveles.

Otra desventaja de esta organización es que manifiesta fatiga es decir, su salida de

corriente disminuye en forma gradual durante la iluminación continua. Estas celdas se

utilizan en instrumentos sencillos, portátiles en los que el bajo costo es importante. En el

caso de análisis rutinario, estos instrumentos proporcionan información analítica

perfectamente confiable.

38. ¿Cómo trabajan los fototubos de vacío e indica cuáles son sus

ventajas y desventajas?

Fototubos, en los cuales la radiación ocasiona la emisión de electrones de una superficie

sólida fotosensible, tubos fotomultiplicadores que cuentan con una superficie foto

emisiva así como varias superficies adicionales que emiten una cascada de electrones

cuando son golpeadas por electrones provenientes del área fotosensible; 4) transductores

de fotoconductividad en los que la absorción de radiación por un semiconductor produce

electrones y huecos, lo cual causa una mejora de la conductividad

39. Indica cuales son las ventajas de los tubos fotomultiplicadores.

Por lo que toca a las mediciones de la potencia radiante baja, el tubo fotomultiplicador

tiene ventajas en comparación con un fototubo ordinario. La superficie del fotocátodo es

similar en composición a la de las superficies de los fototubos ordinarios y emite

electrones cuando se expone a la radiación. El tubo también contiene electrodos

adicionales llamados dinodos. Los fotomultiplicadores son muy sensibles a las

radiaciones ultravioleta y visible. Además, tienen tiempos de respuesta en extremo

rápidos. Con frecuencia la sensibilidad de un instrumento con un fotomultiplicador está

limitada por su corriente residual. Puesto que la emisión térmica es la principal fuente de

electrones de corriente residual, el rendimiento de un fotomultiplicador puede aumentar

si se le enfría. En general es suficiente una temperatura de -30° C. Estos tubos están

limitados a medir radiación de baja potencia porque la luz intensa ocasiona daños

irreversibles en la superficie fotoeléctrica.

40. ¿Cuáles son las diferencias más importantes entre los

instrumentos de haz sencillo y de doble haz?

Instrumentos de haz sencillo. Este tipo de instrumento consta de una lámpara de

tungsteno o de deuterio, un filtro o monocromador, cubetas ajustadas que pueden

interponerse de manera alternada en el haz de radiación, un transductor, un

amplificador y un dispositivo de lectura. Por lo regular, un instrumento de haz

sencillo necesita una fuente de alimentación estabilizada para evitar errores como

resultado de los cambios en la intensidad del haz durante el tiempo que se requiere

pare efectuar la medición de 100% de T y determina el % T del analito. Estos equipos

utilizan como fuentes intercambiables lámparas de tungsteno o de deuterio, celdas

de sílice rectangulares y están equipados con un monocromador de red de alta

resolución y rendijas variables. Como transductores se emplean tubos

fotomultiplicadores y la señal de salida, a menudo, se digitaliza, se procesa y se

almacena en una computadora para que pueda imprimirse o registrarse de diversas

formas.

Instrumentos de doble haz. Muchos fotómetros y espectrofotómetros modernos se

basan en un diseño de haz doble. Una un caso se forman dos haces mediante un

espejo en forma de V llamado divisor de luz. Un haz pasa a través de la solución de

referencia y continúa hasta un fotodetector. En forma simultánea, el segundo rayo

atraviesa la muestra hasta un segundo detector ajustado. Las dos señales de salida se

amplifican y su cociente, o bien, el logaritmo de su cociente, se determina de manera

electrónica y se representa mediante un dispositivo de lectura. En el caso de los

instrumentos manuales, la medida consta de dos etapas, a saber, primero el ajuste del

cero mediante un obturador entre el selector y el divisor de haz, en segundo lugar

ocurre la apertura del obturador y la lectora directa de la transmitancia o absorbancia

en el sistema de medición. Los instrumentos de doble haz ofrecen la ventaja de que

compensan todo menos la mayoría de las fluctuaciones cortas en la salida radiante

de la fuente, así como la deriva en el transductor y el amplificador. También

compensan las grandes variaciones de intensidad de la fuente con la longitud de

onda. Además, el diseño de doble haz permite el registro continuo de espectros de

transmitancia o absorbancia.