Guia

UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTONOMA DE NICARAGUA,
PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
GUIA DE LABORATORIO PARA EL CURSO 2022
Fecha emisión: 2022/03/24
COPIA NÚMERO 1/2
ELABORADO POR: MsC. FERNANDO BACA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA INDUSTRIAL Página 1 de 11

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
PRACTICA N0 1
Extracción de clorofilas
Competencia
Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

productos fitofarmacéuticos.
Alcance
Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial
Responsabilidades.
Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

Es responsabilidad de los estudiantes, asistir, elaborar y entregar el informe en tiempo y forma
al instructor responsable de cada grupo de laboratorio.
Desarrollo.
A- EXTRACCIÓN

1. Tomar dos hojas verdes y tiernas de la especie vegetal
2. Separar los pecíolos y venas grandes de las hojas y picarlas
3. Colocarlas en un vaso de precipitado de 250 ml con 50ml de agua hirviendo por dos
minutos
4. Pasar el vaso a un baño helado y enfriar, descartar el agua
5. Extraer los pigmentos de las hojas con 50ml de una mezcla de metanol 90% y éter
dietílico10%. Calentar un poco en baño maría (5 min)
6. Repetir la extracción con 50ml de metanol al 70% y éter dietílico 30%. Calentar
durante 5 min. (Las hojas quedan incoloras)
7. Combinar los extractos obtenidos de los pasos 5 y 6 en un embudo de separación
8. Añadir 50ml de éter de petróleo
9. Añadir 50ml de solución acuosa saturada de NaCl y agitar
10. Dejar separar las capas
11. Descartar la capa inferior
12. Lavar la capa superior con dos porciones de 50ml de agua destilada
13. Verter la capa verde por la parte superior del embudo, a un matraz de base redonda

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
14. Evaporar a sequedad a menos de 40ºC bajo vació (Encaso de detener aquí el
experimento almacenar el extracto evaporado en la oscuridad)
B.- PREPARACIÓN DE LA COLUMNA:

1. Colocar un tapón de lana de vidrio o algodón en el extremo de la columna
2. Empacar cuidadosamente el silicagel, añadiendo esta con un embudo, cuidando de no
forzar el empaque. La columna debe quedar de 20cm aproximadamente

C.- CORRIMIENTO DE LA MUESTRA:

1. La muestra se suspende con 0.5 ml de éter de petróleo
2. Usando la solución con cuidado. Introducir cuidadosamente la solución de la muestra
en la columna con una pipeta, y permitir que se forme una estrecha zona inicial
3. La muestra que se adhiere a la parte superior e inferior del tubo, se puede lavar con un
poco de éter de petróleo. No dejar secar
4. Desarrollar con N-propanol al 0.5% en éter de petróleo. Se puede acelerar el desarrollo
aplicando una succión de 0.5 atm. Un flujo de 1 ml/ min, da buena separación.
Registro
El instructor de cada grupo, registrará en formato Excel la nota correspondiente del informe a
cada estudiante asignado. El informe se entregara por vía electrónica dos días hábiles después
de haber finalizado el laboratorio teniendo como hora límite 6 pm, en caso contrario este
informe no será revisado.

PRODUCTOS NATURALES
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FARMACIA
PRACTICA N0 2
Validación de productos naturales (Precisión)
Competencia

Alcance
Responsabilidades.

Desarrollo.
Precisión: La respetabilidad se comprobará con 12 réplicas de ensayo, evaluándose el

coeficiente de variación.
Para el análisis de la reproducibilidad se realizaron 6 réplicas por analistas, en 2 días de

análisis, realizándose 12 determinaciones en total, a las cuales se les determinará el
coeficiente de variación y las pruebas estadísticas de Fisher y Student.
Sustancia de referencia: Se pesara con precisión 25 mg de ácido tánico, se transferirán a un

matraz aforado de 100 mL y se completará el volumen con agua destilada.
Posteriormente se medirán exactamente 20 mL y se pasarán a un matraz aforado de 100 mL

enrasando con agua destilada.
De la solución anterior se transferirán 4 mL a un matraz aforado de 25 mL y se le adicionarán

2 mL de agua destilada.
Blanco (A): Se añaden 5 mL de agua destilada a un matraz aforado de 25 mL.

Blanco (B): Se adicionan 100 mL de agua destilada, 50 mL de solución de gelatina al 25 %,
100 mL de solución saturada de cloruro de sodio acidificada y 10 g de caolín en un
erlenmeyer de 250 mL con tapa.
PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
Se tapa y agitar durante 30 min, se deja en reposo para posteriormente filtrar.
Del filtrado se toman 10 mL y se transfieren a un matraz aforado de 50 mL, enrasando con

agua destilada, del que se tomarán 5 mL y se llevarán a un volumétrico de 25 mL.
Solución tungsto-fosfomolíbdico. Se disolven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de

ácido fosfomolíbdico hidratado y 5,0 mL de ácido fosfórico al 85 % en 75 mL de agua
destilada.
La solución se reflujó por 2 h y se completó con agua destilada a 100 mL. Realizar esta
solución un día antes de la práctica.
Desarrollo de color: A cada matraz aforado de 25 mL, con las respectivas muestras, patrones
y blancos, se le añaden 2 mL de solución tungsto-fosfomolíbdico, se agita y se deja reposar
durante 5 min.
Luego se añade 1 mL de solución de carbonato de sodio al 20 %, se agita, enrasando con agua

destilada y homogenizar.
Leer la absorbancia de dichas soluciones a 700 nm después de transcurridos 2 min.
Registro

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
PRACTICA N° 3
Validación de productos naturales (Repetibilidad y reproducibilidad del sistema)
Competencia

Alcance
Responsabilidades.

Desarrollo.
Precisión: La respetabilidad se comprobará con 12 réplicas de ensayo, evaluándose el

coeficiente de variación.
Para el análisis de la reproducibilidad se realizaron 6 réplicas por analistas, en 2 días de

análisis, realizándose 12 determinaciones en total, a las cuales se les determinará el
coeficiente de variación y las pruebas estadísticas de Huber, Dixon, Fishert.
Sustancia de referencia: Se pesara con precisión 25 mg de ácido tánico, se transferirán a un

matraz aforado de 100 mL y se completará el volumen con agua destilada.
Posteriormente se medirán exactamente 20 mL y se pasarán a un matraz aforado de 100 mL

enrasando con agua destilada.
De la solución anterior se transferirán 4 mL a un matraz aforado de 25 mL y se le adicionarán

2 mL de agua destilada.

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
Blanco (A): Se añaden 5 mL de agua destilada a un matraz aforado de 25 mL.

Blanco (B): Se adicionan 100 mL de agua destilada, 50 mL de solución de gelatina al 25 %,
100 mL de solución saturada de cloruro de sodio acidificada y 10 g de caolín en un
erlenmeyer de 250 mL con tapa.
Se tapa y agitar durante 30 min, se deja en reposo para posteriormente filtrar.
Del filtrado se toman 10 mL y se transfieren a un matraz aforado de 50 mL, enrasando con

agua destilada, del que se tomarán 5 mL y se llevarán a un volumétrico de 25 mL.
Solución tungsto-fosfomolíbdico. Se disolven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de

ácido fosfomolíbdico hidratado y 5,0 mL de ácido fosfórico al 85 % en 75 mL de agua
destilada.
La solución se reflujó por 2 h y se completó con agua destilada a 100 mL. Realizar esta
solución un día antes de la práctica.
Desarrollo de color: A cada matraz aforado de 25 mL, con las respectivas muestras, patrones
y blancos, se le añaden 2 mL de solución tungsto-fosfomolíbdico, se agita y se deja reposar
durante 5 min.
Luego se añade 1 mL de solución de carbonato de sodio al 20 %, se agita, enrasando con agua

destilada y homogenizar.
Leer la absorbancia de dichas soluciones a 700 nm después de transcurridos 2 min.
Registro

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
PRACTICA N° 4
Linealidad
Competencia

Alcance
Responsabilidades.

Desarrollo.
Preparar el estándar para 5 puntos en un rango de 30 a 120 % del valor esperado. según le
indique el instructor del laboratorio tomando en consideración el punto de la repetibilidad
como 100%.
Se debe de partir de una solución madre de 1 mg/mL, a partir de la cual se prepararon

los restantes puntos de la curva, se realizaran 5 repeticiones por cada nivel de
concentración.
Determinar la recta de mejor ajuste, los coeficientes de correlación (r) y de

determinación (r2), así como la pendiente y el intercepto; se tomó como criterios de una
adecuada linealidad cuando r > 0,99; r 2 > 0,98; y que la pendiente y el intercepto no
difiriera de 1 y 0, respectivamente.
Registro

PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
PRACTICA N° 5
Cuantificación de cafeína en muestras vegetales
Competencia

Alcance
Responsabilidades.

Desarrollo.
PREPARACIÓN DE MUESTRAS PATRÓN PARA ELABORAR LA RECTA DE

CALIBRADO
Preparación de las muestras patrón

Primero se ha preparado la disolución patrón de cafeína, a partir de 40 mg de cafeína
(previamente secada que se disuelven, en matraz aforado de 100 ml, en agua Milli-Q
(400ppm). Seguidamente, se traspasan, con ayuda de pipeta aforada, 10 ml de esta disolución
a otro matraz aforado de 100 ml y se lleva a enrase con la misma agua Milli-Q (40 ppm). A
partir de esta última solución patrón de c0
1afeína de 40 ppm, se preparan 5 soluciones más diluidas de concentraciones de 4, 8, 16, 24

y 32 microgramos de cafeína por mililitro:
(5 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+2 ml HCl 0,01 M)/50 ml de agua (4 ppm)

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FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA
(20 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+ 1 ml HCl 0,01 M)/25 ml de agua (32 ppm)
MUESTRAS DE CAFEÍNA DE CAFÉ

PROCEDIMIENTOS DE SEPARACIÓN DE LA
CAFEÍNA DEL CAFÉ
1. Se pesan aproximadamente 300 mg y se ponen a reflujo con 200 ml de Agua Milli-Q

durante 15 minutos.
2. Seguidamente, se filtra la solución en caliente y se añaden 5 g de Na2CO3 hasta la
total disolución.
3. Se deja enfriar y se agregan 15 ml cloroformo que se extraen agitando suavemente
durante unos minutos y se repite esta operación una vez más.
4. Después de la separación de las dos fases, se añaden pequeñas cantidades de Na2SO4
para absorber el agua.
5. Se filtra la fase clorofórmica haciéndola pasar por papel filtro hacia un matraz
erlenmeyer o balón, y se deja evaporar hasta sequedad.
6. Una vez eliminado el cloroformo, se añade al mismo matraz o balón, 50 ml de Agua
Milli-Q y se agita bien hasta perfecta disolución.
7. Posteriormente, mediante un embudo se enrasa a 100 ml en un matraz aforado.
8. Finalmente, se toman 10 ml de esta última solución, se añade 1 ml de la solución de
ácido clorhídrico 0,01 M y se enrasa a 25 ml con Agua Milli-Q.
9. Lecturas en HPLC
Condiciones cromatograficas
Fase Movil: Agua; Acetonitrilo (20:80)
Columna: Nucleosil 100 C18, 5 micrómetros, 100 x 4,6 mm.
Detector: UV (273 nm).
Flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 μL
Lecturas en espectrofotometro UV-vis
Agilent 8453 Sistema de Espectroscopía UV-Visible

Cubeta de cuarzo de 10 mm
Reactivos: Cafeína anhidra
Agua Milli-Q (Millipore).
Ácido clorhídrico 0,01 M
Longitud de onda: 271 nm -273 nm

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Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

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Validación de productos naturales (Precisión)

Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

Precisión: La respetabilidad se comprobará con 12 réplicas de ensayo, evaluándose el

Para el análisis de la reproducibilidad se realizaron 6 réplicas por analistas, en 2 días de

Sustancia de referencia: Se pesara con precisión 25 mg de ácido tánico, se transferirán a un

Posteriormente se medirán exactamente 20 mL y se pasarán a un matraz aforado de 100 mL

De la solución anterior se transferirán 4 mL a un matraz aforado de 25 mL y se le adicionarán

Blanco (A): Se añaden 5 mL de agua destilada a un matraz aforado de 25 mL.

Se tapa y agitar durante 30 min, se deja en reposo para posteriormente filtrar.

Del filtrado se toman 10 mL y se transfieren a un matraz aforado de 50 mL, enrasando con

Solución tungsto-fosfomolíbdico. Se disolven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de

Luego se añade 1 mL de solución de carbonato de sodio al 20 %, se agita, enrasando con agua

Leer la absorbancia de dichas soluciones a 700 nm después de transcurridos 2 min.

DEPARTAMENTO DE FARMACIA INDUSTRIAL Página 5 de 11

Validación de productos naturales (Repetibilidad y reproducibilidad del sistema)

Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

Precisión: La respetabilidad se comprobará con 12 réplicas de ensayo, evaluándose el

Para el análisis de la reproducibilidad se realizaron 6 réplicas por analistas, en 2 días de

Sustancia de referencia: Se pesara con precisión 25 mg de ácido tánico, se transferirán a un

Posteriormente se medirán exactamente 20 mL y se pasarán a un matraz aforado de 100 mL

De la solución anterior se transferirán 4 mL a un matraz aforado de 25 mL y se le adicionarán

DEPARTAMENTO DE FARMACIA INDUSTRIAL Página 6 de 11

Blanco (A): Se añaden 5 mL de agua destilada a un matraz aforado de 25 mL.

Se tapa y agitar durante 30 min, se deja en reposo para posteriormente filtrar.

Del filtrado se toman 10 mL y se transfieren a un matraz aforado de 50 mL, enrasando con

Solución tungsto-fosfomolíbdico. Se disolven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de

Luego se añade 1 mL de solución de carbonato de sodio al 20 %, se agita, enrasando con agua

Leer la absorbancia de dichas soluciones a 700 nm después de transcurridos 2 min.

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Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

Se debe de partir de una solución madre de 1 mg/mL, a partir de la cual se prepararon

Determinar la recta de mejor ajuste, los coeficientes de correlación (r) y de

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Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

PREPARACIÓN DE MUESTRAS PATRÓN PARA ELABORAR LA RECTA DE

Preparación de las muestras patrón

1afeína de 40 ppm, se preparan 5 soluciones más diluidas de concentraciones de 4, 8, 16, 24

(5 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+2 ml HCl 0,01 M)/50 ml de agua (4 ppm)