MATERIALES Y MÉTODOS USADOS EN BIOLOGÍA MOLECULAR:

MEDICIONES CON MICROPIPETA.

REPORTE DE LABORATORIO

INTEGRANTES

ALVARO JAVIER CORONA TORRES

JUAN JOSÉ URRUTIA PILLIMUE

DOCENTE

MONICA HUERTAS VALERO

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

LABORATORIO BIOLOGÍA MOLECULAR

JULIO 2022
 INTRODUCCIÓN

La biología molecular estudia la estructura, composición y función de las moléculas en los

seres vivos, se centra en el estudio de ácidos nucleicos y sus proteínas. Los ácidos nucleicos
almacenan información genética y la transmiten de generación en generación. Entre las áreas
de aplicación de la biología molecular se encuentran la medicina, agricultura, nutrición etc.
Para realizar cualquier tipo de trabajo experimental en el laboratorio se debe conocer cada
uno de los materiales, su función y su labor en la práctica que se realiza; es preciso conocer
los cuidados que se deben tomar al manipularlos ya que una inadecuada manipulación
conlleva a errores en el experimento e incrementa los riesgos. Por eso es adecuado conocer
antes de un experimento todos los materiales y equipos a nuestra disposición en el laboratorio
de biología molecular para llevar a cabo una práctica exitosa.
 RESUMEN

El laboratorio de biología molecular es necesario para desarrollar una serie de actividades que
nos conducirán a ser capaces de enfrentarnos a una situación en concreta y hallar mediante el
uso de diversos equipos las medidas que nos permitan establecer un diagnóstico certero. Para
poder desarrollar estos experimentos debemos primeramente entender y aprender a manejar
los instrumentos como las pipetas y micropipetas, las cámaras de electroforesis, el baño de
maria, el termociclador y otras herramientas disponibles en el laboratorio.
Con esto en mente nos disponemos a analizar y comprender el manejo y funcionamiento de
los equipos y su utilidad en nuestra práctica profesional, entendiendo que todos ellos pueden
o no presentar errores dependiendo del manejo realizado por cada alumno en la práctica.
Procederemos entonces a entender y desarrollar la metodología adecuada para desarrollar a
cabalidad los objetivos propuestos al inicio de curso.

Palabras claves: las pipetas y micropipetas, las cámaras de electroforesis, el baño de maria, el
termociclador, laboratorio, biología molecular, práctica profesional, erro
 ABSTRACT

The molecular biology laboratory is necessary to develop a series of activities that will lead
us to be able to face a specific situation and find, through the use of various equipment, the
measures that allow us to establish an accurate diagnosis. In order to carry out these
experiments, we must first understand and learn to handle instruments such as pipettes and
micropipettes, electrophoresis chambers, the water bath, the thermocycler and other tools
available in the laboratory.
With this in mind, we are ready to analyze and understand the management and operation of
the equipment and its usefulness in our professional practice, understanding that all of them
may or may not present an error depending on the management carried out by each student in
practice.
We will then proceed to understand and develop the appropriate methodology to fully
develop the objectives proposed at the beginning of the course.

Keywords: pipettes and micropipettes, electrophoresis chambers, bain-marie, thermocycler,

laboratory, molecular biology, professional practice, errors.
 OBJETIVOS

● Conocer el uso de los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de biología

molecular.
● Identificar los riesgos a los que se encuentran expuestos en un mal uso de los
elementos del laboratorio.
● Probar varios tipos de micropipetas ( para medir volumen) que se encuentran en el
laboratorio
● Adquirir destreza en la manipulación de micropipetas para llevar a cabo una
extracción de adn.
 FUNDAMENTO

En la actualidad las técnicas de biología molecular han facilitado y permitido el estudio de

procesos bioquímicos en los seres vivos, así mismo ampliar el conocimiento de las
características genéticas y herramientas para comprender procesos fisiológicos y los
organismos vivos como un todo en su complejidad. El laboratorio de biología molecular
requiere unos materiales y equipos de laboratorio que son esenciales para el desarrollo de las
técnicas básicas en el área de biología y genética molecular, así como los principios de la
ingeniería genética y su aplicación en diferentes campos como el diagnóstico clínico y la
investigación. En su mayoría estos equipos son costosos y de difícil mantenimiento, por tanto
es muy importante aprender el uso correcto de cada uno de los equipos del laboratorio, así
como su utilidad y aplicación en cada técnica a realizar. Dentro de estos equipos hay algunos
de los más importantes: Balanzas, centrífugas, espectrofotómetro, cámaras de electroforesis,
termocicladores, baños maría, micropipetas. Igualmente, la realización de las técnicas y los
protocolos de trabajo dentro del laboratorio requieren la correcta manipulación y medición de
las cantidades requeridas de cada reactivo en cada caso particular, en la mayoría de las
técnicas de biología molecular se requieren procedimientos de microquímica, donde se
emplean soluciones o cantidades muy pequeñas a usar. En estos procedimientos, se requiere
exactitud, precisión y reproducibilidad, que en algunos casos influye el error manual y el del
equipo, entre otros.

MATERIALES Y MÉTODOS

En esta práctica de laboratorio se analizó y determinó el uso de todos los equipos con los que
cuenta el laboratorio de biología molecular, entre los que destaca el termociclador,
centrifugadoras, baño maria, camaras de electroforesis, cabina de seguridad tipo I,
micropipetas, nevera etc.
En un recorrido guiado se constató el estado del laboratorio, los lugares donde están ubicados
los equipos y la manera correcta con la que debemos actuar a la hora de utilizar todos los
elementos con los que se cuenta.
Mediante práctica se adquirió destreza en el manejo de las micropipetas de distintas medidas,
(5-10 µl, 10-25 µl, 100-500 µl) para que en los próximos laboratorios los resultados sean
óptimos a la hora de tomar muestras de ADN.

RESULTADOS

Conocimos los elementos con los que contamos en el laboratorio, y el sitio donde se
encuentran, la cabina de seguridad, termociclador, centrifugadoras; elementos que nos
permitirán realizar los experimentos, aplicando los conocimientos obtenidos en teoría, de las
técnicas de biología molecular como pcr, electroforesis etc.

Aprendimos el manejo correcto de las micropipetas de distinta medidas µl, mediante una
práctica de medida de agua destilada, con lo que nos queda claro la forma adecuada de
manipulación de este elemento esencial en el laboratorio de biología molecular.
 PRELABORATORIO

1. Describa brevemente cada uno de los siguientes equipos: Balanza, centrifuga, centrifuga
refrigerada, micro centrifuga, espectrofotómetro, cámaras de electroforesis, termociclador,
baño maría.
La balanza es un instrumento que sirve para medir la masa de un objeto.
La centrífuga es una máquina que pone en rotación una muestra para poder separar sus
componentes por fuerza centrífuga en función de su densidad.
La centrífuga refrigerada son equipos utilizados para lograr la sedimentación de los
componentes en una solución homogénea en sus distintas densidades a una temperatura
predeterminada. Esto es posible debido a que la centrífuga posee un control de temperatura
para llevar a cabo los procedimientos.
Microcentrífuga se emplea para centrifugar muestras ubicadas en pequeños tubos capilares,
con el objeto de separar los componentes de la muestra en dos fases. Es capaz de trabajar con
muestras en estado líquido o sólido, es un equipo de tamaño reducido ideal para los
laboratorios clínicos.
El Espectrofotómetro se utiliza para medir la absorbancia de muestras problema midiendo la
cantidad de luz absorbida después de atravesar una solución muestra, mediante la longitud de
onda se pueden analizar el suero de la sangre y obtener los valores definidos de colesterol
presente en este.
Las Cámaras de electroforesis funcionan permitiendo la generación de un campo eléctrico
alrededor de un gel, de agarosa o policarbonato. Este campo dentro del buffer, debido a la alta
concentración de electrolitos, permite la transmisión de la corriente eléctrica que proviene de
la fuente de poder, dos cables que posee cada uno un polo opuesto. Mediante esta técnica se
intenta separar las proteínas (o la muestra) por carga y por peso molecular.
El termociclador es un instrumento utilizado para realizar ciclos de temperaturas necesarios
para la amplificación de diversas hebras de ADN en la técnica de PCR, o para reacciones de
secuencia con el método de Sanger. Esta permite, por medio de un bloque de resistencia
eléctrica, distribuir una temperatura homogénea a través de una placa durante el tiempo, que
puede ser programable, con rangos de temperatura de entre 4°C-96°C, donde ocurre la
desnaturalización, hibridación y extensión de una molécula de ADN.
Baño de maria es un equipo conformado por un recipiente lleno de agua. Es utilizado para
incubar muestras en agua a una temperatura constante durante largos periodos de tiempo.

2. Para las mediciones volumétricas usamos las pipetas pasteur, pipetas de medición,
micropipetas y pipetas multicanal, explique la diferencia entre cada una de ellas.

Pipetas pasteur: La pipeta de Pasteur es parecida a un gotero, generalmente conformada por

un tubo con borde cónico. Sirve para hacer la transferencia de pequeñas cantidades de
líquidos de forma rápida y segura. La pipeta de Pasteur se emplea principalmente cuando no
se necesita un volumen exacto al transferir el volumen.
Esta pipeta no proporciona un volumen dado, consta sólo de una abertura inferior para la
entrada de líquido. En su borde superior, tiene un globo que, cuando se pulsa expulsa el aire.
El extremo inferior se sumerge en el líquido a ser transferido y luego soltar el frasco, el
líquido es aspirado en la pipeta.

Pipetas de medición: Este tipo de pipetas permite la transferencia de un volumen

generalmente no mayor a 20 ml de un recipiente a otro de forma exacta.
La función principal de la pipeta es medir la alícuota de un líquido con bastante precisión.
Del mismo modo, junto a la pipeta se utiliza la propipeta. Es un instrumento de laboratorio
que permite succionar el líquido y, de esta manera, transferir todo tipo de líquidos de un
envase a otro. No obstante, también se puede usar la pera de succión que posee la misma
función de la propipeta. La función de ambas herramientas es evitar la succión con la boca de
líquidos venenosos, tóxicos, corrosivos o que emitan vapores.
Está calibrada en unidades convenientes para permitir la transferencia de cualquier volumen
desde 0.1 a 25 ml.

Micropipetas: La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y

transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas
científicas.

Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales,
denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl, respectivamente.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que
lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son
estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volúmenes
pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes (por ejemplo,
800 μl).

Pipetas multicanal: Una pipeta multicanal es una versión mejorada de la pipeta clásica, una
herramienta de mano que dispensa cantidades precisas de líquidos en varios canales. Ideales
para aplicaciones de alto rendimiento, las pipetas multicanal están disponibles de forma
manual o electrónica en formatos de 8 o 12 canales. Las pipetas multicanal ergonómicas con
una recogida de muestras superior en todos los canales. Para una variación del multicanal, el
espaciador ajustable pipetea con exactitud muestras de tubos con un solo movimiento de la
muñeca.

3. ¿Cuáles son los componentes de la micropipeta? Describa la técnica del pipeteo.

Las micropipetas están compuestas por diferentes jeringas que se utilizan en conjunto para ir
graduando el volumen a medir, posee un eyector de puntas, una punta desechable, un
indicador de volumen, el sistema que permite determinar el volumen de la muestra, y el botón
de succión que cuenta con dos topes.
Para pipetear correctamente primero debemos definir el volumen de la muestra que queremos
captar, posterior a esto se le adecua las puntas desechables que no hayan sido utilizadas para
de esta manera asegurarnos de que la muestra no será contaminada. Una vez realizados estos
pasos procedemos a tomar la muestra, para esto en el botón de inyección se puede elegir dos
métodos, primero, al tener dos topes se puede presionar el botón hasta el primer tope, luego
de esto al depositar la muestra utilizamos el botón hasta el segundo tope para depositar toda
la muestra, o podemos captar la muestra hasta el segundo tope del botón para en el momento
de depositar la muestra solo utilizar hasta el primer tope.

4. Respecto a las técnicas de laboratorio, cual es la diferencia respecto a exactitud, precisión y

reproducibilidad.

La precisión es el grado de proximidad entre los resultados de mediciones de la misma

muestra bajo las mismas condiciones de medición, y la exactitud estima la concordancia entre
el resultado de una medición y el valor real de una cantidad mensurable.
La reproducibilidad es la variación causada por el sistema de medición. Es la variación que se
observa cuando diferentes operadores miden la misma parte muchas veces, usando el mismo
sistema de medición, bajo las mismas condiciones. Los operadores 1, 2 y 3 miden 20 veces la
misma parte con el mismo sistema de medición.

5. ¿Cuáles son los tipos de error que podemos encontrar en resultados analíticos? Explique
brevemente cuales son los errores determinados y los ocasionales.
Los errores analíticos son indicadores de la calidad analítica y su uso es necesario dentro de
cualquier sistema que pretenda aumentar la confianza en los resultados del laboratorio. Los
principales errores son:
- Error aleatorio: Es la variabilidad habitual que se presenta en un sistema analítico
cuando se procesa una muestra en repetidas ocasiones. Es un error que puede ser
medido y es expresado como el coeficiente de variación. Es un error aleatorio y
natural presente en cada sistema analítico. Nunca desaparece pero se puede mejorar

con la automatización total del proceso, pero nunca desaparece.

- Error sistemático: Es la desviación que tiene un sistema analítico en relación con el
valor verdadero. Este error o veracidad puede ser constante a lo largo del intervalo
reportable. Puede ser expresado en forma de %, y puede ser el sesgo. Depende de la

calibración de los objetos con los que se haya trabajado.

 - Error total: Es la combinación del error sistemático más el error aleatorio. Se puede
calcular de la siguiente manera: Error total = error sistemático + 1,65 * error aleatorio.

DISCUSIÓN

Los materiales presentados en el laboratorio están diseñados para ayudarnos a esclarecer las
incógnitas que nuestros sentidos nos otorgan, esto es debido a que no es posible con solo la
vista realizar medidas precisas, es incluso más importante reconocer que incluso con este tipo
de instrumentos las mediciones poseen cierto grado de error, que debemos tener en cuenta
para poder interpretar correctamente los resultados obtenidos. Así las cosas, aunque
utilicemos equipos modernos y actualizados, su correcta manipulación e interpretación de los
resultados nos ayudarán en las etapas posteriores de nuestra práctica médica a comprender
por qué existen los falsos positivos y negativos, y que su presencia no es más que el resultado
de tratar de leer la realidad de las personas en una escala donde la precisión y la técnica son
fundamentales para poder hallar las respuestas correctas.
 CONCLUSIONES

Manipulando las pipetas y micropipetas se pudo empezar a comprender su uso y su objeto,

este se define como un instrumento volumétrico, en especial las micropipetas quienes son
capaces de medir con cierto intervalo de precisión, medidas sumamente pequeñas
(microlitros), necesarias para captar pequeñas cantidades de compuestos necesarios para
prácticas futuras.
Las diversas máquinas que serán empleadas por los estudiantes son sofisticadas y posee cada
una una metodología de uso que se necesita entender a priori para poder utilizarlas sin
generar errores, pero es cierto que los errores son parte de lo esperado aun con equipos
automatizados, por ende en nuestros cálculos debemos tenerlos en cuenta siempre.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Biología molecular y sus aplicaciones . (s/f). Universidad Central. Recuperado el 18

de julio de 2022, de https://www.ucentral.edu.co/noticentral/biologia-molecular

Paoletti, M. (s/f). Pipeta graduada . Edu.ar. Recuperado el 18 de julio de 2022, de

https://kitlab.exa.unicen.edu.ar/pipeta_graduada.html

¿Qué es un estudio de repetibilidad y reproducibilidad (R&R) del sistema de

medición? (s/f). Recuperado el 18 de julio de 2022, de
https://support.minitab.com/es-mx/minitab/18/help-and-how-to/quality-and-proce
ss-improvement/measurement-system-analysis/supporting
-topics/gage-rr-analyses/qué-es-un-estudio-gage-rr/

Rodríguez, V., & Rodríguez, V. (2020, 6 de julio). Función de la Pipeta Pasteur

88337 Citoplus . Com.co.
https://instrumentalia.com.co/Instrumentalia-Informa/Enviar/funcion-de-la-pipeta-
pasteur-88337-citoplus.html