Location via proxy:   [ UP ]  
[Report a bug]   [Manage cookies]                
Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 26 vistas

    Fluorometría A-E 2021-1

    Cargado por

    Reymundo Segura
    El documento describe un experimento para determinar cómo afectan diferentes factores la intensidad de fluorescencia de la riboflavina utilizando un fluorómetro de filtros. Se elaborarán curvas de calibración variando la concentración de riboflavina en agua, ácido clorhídrico, ácido acético e hidróxido de sodio para determinar el efecto del pH. También se evaluará cómo afecta la exposición a luz visible la intensidad de fluorescencia.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Fluorometría A-E 2021-1

    Cargado por

    Reymundo Segura
    26 vistas34 páginas
    El documento describe un experimento para determinar cómo afectan diferentes factores la intensidad de fluorescencia de la riboflavina utilizando un fluorómetro de filtros. Se elaborarán curvas de calibración variando la concentración de riboflavina en agua, ácido clorhídrico, ácido acético e hidróxido de sodio para determinar el efecto del pH. También se evaluará cómo afecta la exposición a luz visible la intensidad de fluorescencia.

    Título original

    Fluorometría A-E 2021-1

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    El documento describe un experimento para determinar cómo afectan diferentes factores la intensidad de fluorescencia de la riboflavina utilizando un fluorómetro de filtros. Se elaborarán curvas de calibración variando la concentración de riboflavina en agua, ácido clorhídrico, ácido acético e hidróxido de sodio para determinar el efecto del pH. También se evaluará cómo afecta la exposición a luz visible la intensidad de fluorescencia.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    26 vistas34 páginas

    Fluorometría A-E 2021-1

    Cargado por

    Reymundo Segura
    El documento describe un experimento para determinar cómo afectan diferentes factores la intensidad de fluorescencia de la riboflavina utilizando un fluorómetro de filtros. Se elaborarán curvas de calibración variando la concentración de riboflavina en agua, ácido clorhídrico, ácido acético e hidróxido de sodio para determinar el efecto del pH. También se evaluará cómo afecta la exposición a luz visible la intensidad de fluorescencia.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 34

    Laboratorio de Métodos de Análisis

    OBJETIVOS
    01
    Conocerá el manejo de un fluorómetro de filtros.

    02
    Determinará el efecto del pH del disolvente sobre la
    intensidad de fluorescencia.
    El alumno:
    03
    Determinará el efecto de la concentración sobre la
    intensidad de fluorescencia

    04
    Determinará el efecto de la luz visible sobre la
    intensidad de fluorescencia
    INTRODUCCIÓN
    La emisión de radiación fluorescente (fluoresceína), se presenta
    en un compuesto después que ha sido expuesto a radiación
    electromagnética, en las regiones visible o ultravioleta. Como
    resultado de la absorción de la energía radiante, los electrones
    de valencia del compuesto pasan a un nivel de mayor energía,
    que, al disiparse el exceso de ésta, regresan al estado basal
    emitiendo energía radiante fluorescente
    Excitación electrónica
    molécula + hn molécula*

    molécula* molécula + calor

    Estado excitado

    Estado basal o fundamental


    T1
    Estado
    singulete
    excitado

    Estado
    triplete
    excitado

    (10-9 s) (10-4 s - 10)


    (10-15 s)
    Estado
    singulete
    excitado

    Estado
    singulete So S2 So S1 No radiantes
    fundamental

    Diagrama de niveles de energía parcial para un sistema fotoluminiscente (diagrama de energía de Jablonski)
    Variables que afectan a la fluorescencia
    1) Rigidez estructural
    2) Temperatura: Aumenta la probabilidad de desactivación por conversión externa.
    3) Disminución de la viscosidad: Aumenta la probabilidad de desactivación por conversión
    externa.
    4) Disolvente: Disminuye la fluorescencia por disolventes que tienen átomos pesados como
    tetrabromuro de carbono, yoduro de etilo.
    5) pH: La fluorescencia de un compuesto aromático con sustituyentes ácidos o básicos,
    depende del pH.
    6) Oxígeno disuelto: Disminuye la fluorescencia porque favorece el cruce entre sistemas y
    la conversión de las moléculas excitadas al estado triplete.
    7) Concentración
    Para llevar a cabo la determinación cuantitativa de un
    compuesto por fluorometría, es necesario conocer las
    longitudes de onda de máxima excitación y máxima
    emisión. Conociendo o determinando experimentalmente
    estas longitudes de onda, se elabora una curva de
    calibración , representada por la intensidad de la emisión
    contra la concentración del analito y, por interpolación en
    esta curva, se determina la concentración del compuesto
    Hay diversos factores que afectan la intensidad de
    fluorescencia, entre ellos se encuentra la
    concentración, el pH y la presencia de luz visible.

    La riboflavina es una vitamina


    hidrosoluble, precursora de
    cofactores enzimáticos que tienen
    un papel clave en el metabolismo
    de las células. Es una vitamina
    resistente a ácidos fuertes,
    inestable en álcalis, sensible a la
    radiación visible y ultravioleta.
    Cuando absorben energía
    radiante de 223, 267, 374 y 444
    nm a pH entre 6 y 7, emiten
    radiación electromagnética de
    color amarillo verdoso a 540 nm.
    FLUORÍMETRO
    Materiales y equipo
    ➢ Un matraz aforado opaco de 250 mL
    ➢ Un matraz aforado opaco de 50 mL
    ➢ Cinco matraces aforados opacos de 10 mL
    ➢ Dos pipetas de 1 mL, graduadas en centésimas
    ➢ Dos pipetas de 5 mL graduadas en décimas
    ➢ Dos pipetas de 10 mL graduadas en décimas
    ➢ Una probeta de 25 mL
    ➢ Un matraz Erlenmeyer de 250 mL
    ➢ Un fluorómetro de filtros
    ➢ Filtros de absorción y emisión para el flurómetro
    ➢ Cubetas para el fluorómetro
    ➢ Gradilla de acrílico para celdas
    PROCEDIMIENTO
    Elaboración de la curva tipo

    Prepara 250 mL de una solución Disolver la riboflavina en aproximadamente


    1 madre de 50 ppm de riboflavina 2 30 mL de agua destilada caliente (55-65°C) y
    en agua bidestilada. completar el volumen de aforo con agua a
    temperatura ambiente.

    Transferir 10 mL a un matraz aforado de 50 mL y completar el


    volumen del aforo con agua. Esta solución tendrá una
    3 concentración de 10 ppm. A partir de la solución anterior, elaborar
    una curva tipo como se indica en la Tabla 1.
    TABLA 1. PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN
    DE RIBOOFLAINA EN AGUA BIDESTTILADA.

    Matraz Riboflavina, 10 ppm Agua bidestilada Concentración final


    (mL) (mL) de riboflavina
    (ppm)

    1 1.0 9.0 1.0

    2 2.0 8.0 2.0

    3 3.0 7.0 3.0

    4 4.0 6.0 4.0

    5 5.0 5.0 5.0


    Leer la intensidad de emisión (fluorescencia) de cada matraz, y de
    un blanco de reactivos, empleando los filtros de excitación y
    emisión adecuados para la riboflavina, de acuerdo a las
    instrucciones del profesor. Además, determine la intensidad de la
    fluorescencia de las soluciones que tienen 10 y 50 ppm de
    riboflavina.

    Filtros
    Filtros
    EFECTO DE LA LUZ VISIBLE

    Colocar las soluciones de la curva tipo de


    riboflavina (1, 2, 3, 4, 5, 10 y 50 ppm) entre 2
    lámparas de luz visible, por un período de una
    hora, al término de la exposición, leer la
    intensidad de fluorescencia de todas las
    soluciones
    Preparar 250 mL de una solución madre de 50 ppm de riboflavina en
    ácido clorhídrico 0.1 M. Disolver la riboflavina en aproximadamente 150
    mL de ácido clorhídrico 0.1M (55-65°C) y completar el volumen de aforo
    con ácido clorhídrico 0.1 M a temperatura ambiente.
    Transferir 10 mL a un matraz aforado de 50 mL y completar el volumen
    de aforo con ácido clorhídrico 0.1M. Esta solución tendrá una
    concentración de 10 ppm. A partir de la solución anterior, elaborar una
    curva tipo como se indica en la Tabla 2.
    TABLA 2. PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE
    CALIBRACIÓN DE RIBOFLAVINA EN HCL 0.1 M

    Matraz Riboflavina, 10 ppm HCL 0.1M Concentración


    (mL) (mL) final de riboflavina
    (ppm)

    1 1.0 9.0 1.0

    2 2.0 8.0 2.0

    3 3.0 7.0 3.0

    4 4.0 6.0 4.0

    5 5.0 5.0 5.0


    Leer la intensidad de emisión (fluorescencia) de cada
    matraz, y de un blanco de reactivos, empleando los
    filtros de excitación y de emisión adecuados para la
    riboflavina, de acuerdo a las instrucciones del
    profesor. Además, determine la intensidad de
    fluorescencia de las soluciones que tienen 10 y 50
    ppm de riboflavina.
    Preparar 250 mL de una solución madre de 50 ppm riboflavina en ácido
    acético 0.9 M. Disolver la riboflavina en aproximadamente 150 mL de
    ácido acético 0.9M (55-65°C) y completar el volumen de aforo con ácido
    acético 0.9 M a temperatura ambiente.
    Transferir 10 mL a un matraz aforado de 50 mL y completar el volumen de
    aforo con ácido acético 0.9 M. Esta solución tendrá una concentración de
    10 ppm. A partir de la solución anterior, elaborar una curva tipo como se
    indica en la Tabla 3.
    TABLA 3. PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE
    CALIBRACIÓN DE RIBOFLAVINA EN ÁCIDO
    ACÉTICO 0.9 M

    Matraz Riboflavina 10 ppm CH 3 COOH 0.9 M Concentración final


    (mL) (mL) de riboflavina
    (ppm)

    1 1.0 9.0 1.0

    2 2.0 8.0 2.0

    3 3.0 7.0 3.0

    4 4.0 6.0 4.0

    5 5.0 5.0 5.0


    Leer la intensidad de emisión (fluorescencia) de cada matraz, y
    de un blanco de reactivos, empleando los filtros de excitación y
    de emisión adecuados para la riboflavina, de acuerdo a las
    instrucciones del profesor. Además, determine la intensidad de
    fluorescencia de las soluciones que tienen 10 y 50 ppm de
    riboflavina.
    Preparar 250 mL de una solución madre de 50 ppm de riboflavina en hidróxido
    de sodio 0.1 M. Disolver la riboflavina en aproximadamente 150 mL de
    hidróxido de sodio 0.1 M (55-65°C) y completar el volumen de aforo con
    hidróxido de sodio 0.1 M a temperatura ambiente. Transferir 10 mL a un
    matraz aforado de 50 mL y completar el volumen de aforo con hidróxido de
    sodio 0.1 M. Esta solución tendrá una concentración de 10 ppm. A partir de la
    solución anterior, elaborar una curva tipo como se indica en la tabla 4.
    TABLA 3. PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE
    CALIBRACIÓN DE RIBOFLAVINA EN HIDRÓXIDO
    DE SODIO 0.1 M

    Matraz Riboflavina 10 ppm NaOH 0.1M Concentración final


    (mL) (mL) de riboflavina
    (ppm)

    1 1.0 9.0 1.0

    2 2.0 8.0 2.0

    3 3.0 7.0 3.0

    4 4.0 6.0 4.0

    5 5.0 5.0 5.0


    Resultados
    Tabla 5. Resultados de la Curva de Calibración de
    Riboflavina en diferentes medios

    Riboflavina Intensidad de la Intensidad de la Intensidad de la Intensidad de la


    (ppm) fluorescencia en fluorescencia en fluorescencia en fluorescencia en
    H2O HCl 0.1M CH3COO 0.9 M NaOH 0.1M
    0 4.89 4.88 4.89 4.89
    1.0 6.14 5.03 5.66 4.92
    2.0 7.16 5.16 6.33 4,93
    3.0 8.22 5.29 7.04 4,95
    4.0 9.14 5.38 7.64 4.96
    5.0 10.0 5.48 8.26 4.97
    10.0 13.34 5.92 10.58 5.01
    50.0 25.96 6.64 14.94 5.05
    pH 5 1 3 13
    Tabla 6. Resultados de la Curva de Calibración de
    Riboflavina bajo efecto de la luz visible.
    Riboflavina Intensidad de Intensidad de
    (ppm) fluorescencia en fluorescencia en H2O
    H2O expuesta a luz visible
    0 4.89 4.21
    1.0 6.14 5.15
    2.0 7.16 5.85
    3.0 8.22 6.63
    4.0 9.14 7.52
    5.0 10.0 8.86
    10.0 13.34 11.7
    50.0 25.96 16.4

    También podría gustarte