Este documento describe la clonación de ADN y los diferentes tipos de vectores utilizados en el proceso de clonación molecular. Explica que la clonación de ADN implica la inserción de un fragmento de ADN llamado inserto dentro de un vector de ADN que puede replicarse de forma autónoma. Luego clasifica los vectores en vectores de clonación, como plásmidos y fagos, que almacenan secuencias de ADN, y vectores de expresión, que producen proteínas a partir del ADN insertado. Finalmente, proporciona más de
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Este documento describe la clonación de ADN y los diferentes tipos de vectores utilizados en el proceso de clonación molecular. Explica que la clonación de ADN implica la inserción de un fragmento de ADN llamado inserto dentro de un vector de ADN que puede replicarse de forma autónoma. Luego clasifica los vectores en vectores de clonación, como plásmidos y fagos, que almacenan secuencias de ADN, y vectores de expresión, que producen proteínas a partir del ADN insertado. Finalmente, proporciona más de
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Este documento describe la clonación de ADN y los diferentes tipos de vectores utilizados en el proceso de clonación molecular. Explica que la clonación de ADN implica la inserción de un fragmento de ADN llamado inserto dentro de un vector de ADN que puede replicarse de forma autónoma. Luego clasifica los vectores en vectores de clonación, como plásmidos y fagos, que almacenan secuencias de ADN, y vectores de expresión, que producen proteínas a partir del ADN insertado. Finalmente, proporciona más de
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CLONACIÓN
ALEJANDRO GIL ALONSO
MARCO ANTONIO LEYVA AVALOS WENDY GUADALUPE LÓPEZ CHICO VICTOR MANUEL PÉREZ ROSADO CLONACIÓN La clonación de ADN, o clonación molecular, es la introducción de un fragmento de ADN denominado inserto dentro de una molécula de ADN denominada vector, que puede replicarse de manera autónoma e independiente del genoma de la célula hospedera. El resultado es la obtención de millones de copias de una molécula recombinante o clona molecular compuesta por ADN proveniente del inserto y del vector.
INSERTO VECTOR Puede ser ADN obtenido de cualquier organismo Un vector se define como una molécula de y puede permanecer como ADN genómico (ADNg), ADN complementario (ADNc), producto ADN de doble cadena (DNAds), con de la retrotranscipción del ARN, un producto de capacidad de albergar un fragmento de ADN PCR o un ARN obtenido por transcripción in vitro. exógeno (de otro origen).
CLASIFICACIÓN DE VECTORES
VECTOR DE CLONACIÓN VECTOR DE EXPRESIÓN
Los vectores son de clonación si su finalidad Los vectores de expresión son es el almacenamiento de secuencias y la aquellos cuyo objetivo es producir un obtención de grandes cantidades del ADN tránscrito (ARN) o la proteína insertado o de la molécula recombinante. VS Los vectores de clonación suelen ser producto de ese tránscrito. Los plásmidos, fagos, fagémidos, cósmidos y vectores de expresión pueden ser cromosomas artificiales bacterianos o de plásmidos o fagos levadura. ELEMENTOS QUE LO FORMAN 1 ORIGEN DE REPLICACIÓN: ES UNA SECUENCIA EN EL ADN DEL VECTOR QUE PROVEE UN SITIO ÚNICO DE RECONOCIMIENTO A LAS PROTEÍNAS QUE IDENTIFICAN EL SITIO DE INICIO DE LA REPLICACIÓN (ORI). UN VECTOR DE EXPRESIÓN SE UTILIZA PARA PRODUCIR UNA PROTEÍNA 2 RECOMBINANTE Y CONTIENE, ADEMÁS DE LOS ELEMENTOS MENCIONADOS: MARCADOR DE SELECCIÓN: ES UN GEN QUE GENERALMENTE
CONFIERE RESISTENCIA A UN ANTIBIÓTICO O GENERA UN
FENOTIPO PARTICULAR CON EL CUAL PUEDE UN PROMOTOR
SELECCIONARSE LA CÉLULA Q UE INCORPORÓ EL VECTOR.
3 UN SITIO IRES (SITIO DE ENTRADA INTERNA AL RIBOSOMA)
SITIO DE CLONACIÓN MÚLTIPLE(SMC): ES UN FRAGMENTO DE ADN QUE CONTIENE UNA SERIE DE SITIOS ÚNICOS DE RECONOCIMIENTO PARA ENZIMAS DE RESTRICCIÓN, MUY UNA SECUENCIA DE POLIADENILACIÓN. CERCANOS ENTRE SÍ, CON UNA AMPLIA GAMA DE POSIBILIDADES DE INSERTAR CUALQUIER FRAGMENTO DE ADN. VECTORES DE CLONACIÓN LOS VECTORES DE CLONACIÓN SE HAN CREADO CON LA FINALIDAD DE CONTENER Y PERMITIR LA AMPLIFICACIÓN DE FRAGMENTOS DE ÁCIDOS NUCLEICOS.
PLÁSMIDO FAGOS CÓSMIDOS
Un plásmido consta de Los fagos provienen de la Los cósmidos, como su nombre componentes básicos como el modificación del genoma ADNds indica, combinan propiedades sitio de clonación múltiple, un lineal de virus bacterianos. de los plásmidos con la gene de resistencia y un sitio presencia de los sitios COS del ORI. fago.
YAC BAC Los YAC se construyen a partir de la ligación de fragmentos de ADN de gran Un BAC, o cromosoma tamaño con genomas de levadura bacteriano, permite la ligación modificados que contienen genes de de fragmentos grandes de ADN resistencia a antibióticos, secuencias que contienen secuencias de teloméricas y de codificación para resistencia a antibióticos, y sitio centrómeros. de clonación múltiple. PLÁSMIDOS LOS PLÁSMIDOS SON PEQUEÑAS MOLÉCULAS CIRCULARES DE ADN QUE SE REPLICAN Y SE LOS PLÁSMIDOS TRANSMITEN CON INDEPENDENCIA DEL CROMOSOMA USADOS COMO VECTOR BACTERIANO. DE MANERA EN GENERAL ESTÁN NATURAL CONSTITUYEN EL MATERIAL GENÉTICO MÓVIL FORMADOS POR DE 2 A DE LAS BACTERIAS, DONDE FUNCIONAN COMO MEDIO 5 KB DE ADN, LO DE TRANSPORTE DE GENES A OTRAS BACTERIAS, COMO QUE FACILITA EL LA ANÁLISIS DE LOS RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS. LOS PLÁSMIDOS INSERTOS PERMANECEN DE MANERA EPISOMAL EN LA BACTERIA, INCORPORADOS A ÉL. ESTO ES, SIN INCORPORARSE EN SU GENOMA, Y EN ELLA PUEDE HABER MÚLTIPLES COPIAS DEL MISMO PLÁSMIDO. CUANDO UNA BACTERIA SE REPRODUCE, ESTOS PLÁSMIDOS SE TRANSMITEN A LAS CÉLULAS ENTRE LOS PLÁSMIDOS DESCENDIENTES POR DISTRIBUCIÓN EQUITATIVA DEL CITOPLASMA MÁS UTILIZADOS SE BACTERIANO DURANTE LA DIVISIÓN CELULAR. SIN ENCUENTRAN EMBARGO, TAMBIÉN PUEDEN TRANSMITIRSE A TRAVÉS DE LOS PILI ENTRE LAS PBLUEESCRIPT, PUC19, BACTERIAS. LA REPLICACIÓN Y TRANSCRIPCIÓN PBR322 Y PGLO. PLASMÍDICA DEPENDE DE LA MAQUINARIA ENZIMÁTICA DE LA CÉLULA HUÉSPED. PLÁSMIDOS
LOS PLÁSMIDOS SE CARACTERIZAN POR TENER UN SOLO SITIO
ORI EN SU GENOMA Y REALIZAR UNA REPLICACIÓN UNIDIRECCIONAL. CÓSMIDOS LOS CÓSMIDOS SON VECTORES HÍBRIDOS DEL ADN DE UN PLÁSMIDO (PROPORCIONA LA RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS) Y LOS SITIOS COS DEL BACTERIÓFAGO (LE PERMITEN EMPAQUETAR EL ADN). LOS CÓSMIDOS DERIVADOS DEL FAGO P1 PUEDEN ADMITIR 85 KB DE ADN EXÓGENO. ADEMÁS, CONTIENEN LOS GENES DE SELECCIÓN Y UN SITIO ORI DEL PLÁSMIDO, POR LO QUE SE REPLICAN DE MANERA INDEPENDIENTE DEL GENOMA BACTERIANO, COMO LO HACEN LOS PLÁSMIDOS. REFERENCIAS INSERCIÓN DE FRAGMENTOS. (S.F.). OBTENIDO DE HTTP://AGREGA.JUNTADEANDALUCIA.ES/REPOSITORI O/18072017/EB/ES- AN_2017071813_9095206/0001/VIGINSERCION.HTML
SANDOVAL RODRÍGUEZ, A. S., MENA ENRÍQUEZ, M., &
MÁRQUEZ AGUIRRE, A. L. (S.F.). CAPÍTULO 14: VECTORES DE CLONACIÓN Y EXPRESIÓN. EN BIOLOGÍA MOLECULAR. FUNDAMENTOS Y APLICACIONES EN LAS CIENCIAS DE LA SALUD. MCGRAW HILL.
