TEMA 1: INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA

 MATERIAL USADO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

En el laboratorio de microbiología trabajamos con materiales presuntamente

contaminados. Por ello, hay que tener especiales medidas de seguridad en el trabajo para
evitar la contaminación.

Se usan técnicas muy específicas, lo que requiere también un material específico, además
del usado en el laboratorio (pipeta, matraces…).

El material general de laboratorio usado en microbiología puede clasificarse en 4 grupos:

material de vidrio o plástico, material óptico, material eléctrico, y material metálico.

1) Material de vidrio o plástico

 Pipetas: las que usamos en mb a veces son graduadas (las aforadas no se usan en mb).
Las pipetas graduadas se usan para inocular muestras líquidas o transferir cultivos
líquidos. Existen otras pipetas, las pipetas Pasteur, similares a un cuenta gotas, que
podemos encontrar de vidrio o plástico. Para tomar volúmenes pequeños, están las
micropipetas automáticas.

 Tubos de ensayo: los hay de 2 tipos:

- Tubos de ensayo sin cierre hermético: Se suelen usar de diferentes tamaños, siendo
los más habituales los de 15 x 150 mm. Se utilizan para contener medios de cultivo y
sembrar en ellos cultivos líquidos o sólidos. Deben ir tapados por algodón graso o
un tapón metálico.

- Tubos de ensayo con cierre hermético: Son tubos con un tapón de rosca. Suelen
utilizarse para cultivos de microorganismos con alto poder infeccioso.

 Placas de Petri: son planas y circulares, de poca altura, con tapas de la misma forma de
un diámetro algo mayor. Se usan para depositar en ellas un medio de cultivo sólido en el
cual observaremos si hay o no crecimiento microbiano, para aislar bacterias…

 Espátulas de Drigalski: son de vidrio. Se usan para extender una muestra líquida sobre
un medio de cultivo sólido. Se pueden presentar en diversas formas en función de la
que el operador le quiera dar.

 Campana de Durham: tubo pequeño de forma similar a la de los tubos de ensayo. Se

usa para estudiar si en un medio de cultivo líquido el microorganismo produce gases.

 Portaobjetos: lámina rectangular de vidrio en la cual se colocan muestras para ser

observadas al MO.

 Cubre objetos: lámina cuadrada de vidrio, pequeña y más fina que el portaobjetos, que
se coloca sobre la muestra que está en un portaobjetos para observarla al MO.

 Cubeta para tinción: cubetas de vidrio o plástico grandes que se usan como recipientes
para realizar la tinción.
 Varillas paralelas o puente de tinción: dos varillas de vidrio unidas en los extremos con
tubos de goma. Se utilizan para las tinciones. Sobre ellas se ponen los portas para
realizar la tinción. Se pone todo sobre la cubeta de tinción para no manchar la mesa.

 Frascos de vidrio de borosilicato y tapón roscado: útiles para esterilizar y mantener

medios de cultivo. Se denominan frascos ISO.

 Gradillas: se utilizan para poner los tubos de ensayo. Son de material autoclavable, ya
sea metal o polímero.

2) Material óptico: esencialmente, usaremos lupa y MO.

3) Material eléctrico

 Estufas: aparatos que permiten elegir y mantener una tº constante en su interior. Las
utilizadas para el crecimiento de microorganismos se denominan estufas de incubación.

 Autoclave: aparato usado para esterilizar.

4) Material metálico: pinzas, espátula-cuchara, trípode, y rejilla.

5) Otros

 Asa de siembra: Hilo de platino o de una aleación de níquel y cromo con un extremo
cerrado en círculo de 2 a 3 mm de diámetro. El otro extremo se une a una varilla
metálica con un mango aislante térmico. Se utiliza para la manipulación de
microorganismos: tomar una muestra líquida o sólida, realizar una extensión, o bien
depositar dicha muestra en un medio de cultivo.

 Hilo de siembra: Hilo fino y recto, semejante al asa de siembra, pero su extremo no está
curvado. Se utiliza para hacer siembras en profundidad (siembra en picadura). También
se usa para coger una porción de una colonia en una placa Petri que están muy cerca o
en contacto con otra y transferirla a otra placa.

 Escobillón/hisopo: varilla de madera o de plástico que en uno de sus extremos lleva

enrollada una porción de algodón. Se usa para efectuar muestreos y realizar la 1ª parte
de la siembra (inoculación). También se usa para la transferencia de cultivos líquidos a
una placa y para la inoculación masiva de éstas a partir de colonias aisladas.

 Mecheros: imprescindibles para el trabajo aséptico. Se requieren para flamear asas de

siembra e hilos de siembra, bocas de los tubos de ensayo que tengan medios de cultivo
o cultivos, flamear pipetas, y en general, para el mantenimiento de una atmósfera
estéril alrededor del mechero. En mb se utilizan fundamentalmente los de gas y en su
defecto los de alcohol.

 Pinzas de manera: se usan como aislante en el manejo de material pequeño, y en el

flameado de tubos y portaobjetos.

 Jarra de anaerobios: jarra en la que se crean las condiciones de anaerobiosis, es decir,

ausencia de O2 y adición de determinados gases.
  CONCEPTOS GENERALES DE MICROBIOLOGÍA

La mb es el estudio de los microorganismos y de los virus (éstos son microscópicos, pero

no se consideran celulares). Los microorganismos son un extenso y variado grupo de seres
microscópicos (hongos, bacterias, protozoos…) que viven como células aisladas o en
agrupaciones celulares.

La mb se estudia por 2 razones importantes:

1) Suministra algunas de las herramientas básicas de investigación más versátiles para

determinar la naturaleza de los procesos característicos de la vida. Las células
microbianas comparten con las células de organismos pluricelulares muchas
propiedades bioquímicas.

2) Se ocupa de muchos problemas prácticos que son importantes en medicina, la

agricultura y la industria. Muchas de las enfermedades más importantes de
humanos, animales y plantas son causadas por microorganismos. Éstos también
desempeñan importantes funciones en la fertilidad de los suelos, en la producción
animal y en muchos procesos industriales a gran escala (biotecnología).

 MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

Es la disciplina que usa los microorganismos, generalmente cultivados a gran escala, para
obtener productos comerciales de valor o para realizar importantes transformaciones
químicas. Se originó con procesos de fermentación alcohólica, y posteriormente, se
desarrollaron procesos microbianos para producir compuestos farmacéuticos
(antibióticos…), aditivos alimentarios… En la investigación de estos procesos, la principal
tarea del microbiólogo es modificar el microorganismo, por métodos genéticos clásicos, o
modificar el proceso para obtener el más alto rendimiento del producto deseado.

Actualmente, ha surgido la biotecnología microbiana, donde los métodos para la

manipulación de los genes han dado lugar a nuevos productos microbianos, la mayoría de
los cuales no los producen los microorganismos de forma natural.

En biotecnología se emplean los métodos de la ingeniería genética para crear nuevos

organismos que contienen nuevas dotaciones de genes que les permiten fabricar nuevos
productos.
 1. CARACTERÍSTICAS GENERALES COMUNES A TODOS LOS SERES VIVOS (uni o pluri)

1) Estructura compleja altamente organizada.

2) Tienen la capacidad de extraer energía de su entorno y usarla en construir y mantener
sus estructuras internas (la energía puede ser extraída en forma de energía química
contenida en distintas sustancias, o bien en forma de energía luminosa).
3) Tienen la capacidad de extraer sustancias de su entorno y transformarlas
químicamente.
4) Tienen la capacidad de excretar productos de desecho.
5) Tienen la capacidad de reproducirse, produciendo réplicas de sí mismos.
6) Tienen la capacidad de reaccionar a corto plazo a los cambios producidos en su medio
ambiente.
7) En determinadas condiciones pueden sufrir mutaciones (mutación: alteración del
genotipo que produce cambios en el fenotipo).

2. MODELOS DE ORGANIZACIÓN CELULAR

La teoría celular establece que los seres vivos están compuestos por células. Estas células
son subunidades microscópicas delimitadas por una fina MP que tiene dentro de sus límites
las distintas moléculas (grandes y pequeñas) necesarias para que la célula realice sus
funciones vitales. Esto es aplicable a todos los seres vivos, aunque hay 2 excepciones:

 Virus: tienen una organización mucho más simple. (Debemos tener en cuenta que,
en los virus, no se puede decir tajantemente que sean seres vivos).
 Organismos cenocíticos: no están claramente divididos en células.

Hay 3 modelos de organización celular (excluimos los virus porque su estructura no es la

célula, sino la partícula viral, con unas características estructurales y metabólicas muy
diferentes):

a) Estructura unicelular: son organismos unicelulares microscópicos. Se da en

bacterias, protozoos, algas y en algunos hongos.

b) Estructura pluricelular: forma más compleja de organización celular. Un organismo

pluricelular puede estar compuesto de unas pocas células (seguirá teniendo tamaño
microscópico; se da en algunas especies de algas y hongos), o compuesto de un
mayor nº de células (se ven a simple vista, es decir, son organismos macroscópicos).

Entre los organismos pluricelulares (micro o macroscópicos) puede haber otras 2

formas de organización: que sus células sean idénticas entre sí, o estar diferenciadas
en su estructura y función a consecuencia de su especialización para llevar a cabo una
función determinada.

c) Estructura cenocítica: no es unicelular, pero tampoco es multicelular en sentido

estricto. Consiste en un citoplasma multinucleado recubierto de una membrana
citoplasmática que aísla al organismo del exterior. No hay membranas que separen
unas células de otras. Podemos imaginar que es un organismo pluricelular al que le
 hemos quitado las porciones de mp que separan a las células que están en contacto. Es
característica de muchos hongos miceliformes y también se da en muchas algas.
3. CARACTERÍSTICAS Y COMPOSICIÓN DE LAS CÉLULAS

A. MP

La MP delimita exteriormente a la célula, y está presente en todas las células (en algunas
especies, existe una PC que rodea a la MP, y en otras, existe una cápsula que rodea a esta PC) .
Está compuesta por una doble capa de fosfolípidos (la bicapa lipídica), que generalmente
son fosfoglicéridos. También hay colesterol, proteínas, polisacáridos y algunas otras
macromoléculas que están adheridas a una de estas dos caras o bien incrustadas,
atravesando parcial o totalmente la membrana.

Con respecto a la estructura de los fosfolípidos (gracias a la cual existe la MP y por ello, la
vida), éstos tienen dos largas colas de hidrocarburos. Estas colas son apolares y, por ello,
esta parte de la molécula es hidrófoba y soluble en disolventes apolares (liposoluble). La
cabeza, sin embargo, es polar (tiene grupos polares), lo que la hace hidrosoluble (y soluble
en disolventes polares). Por esta estructura, se dice que es una molécula anfipática (uno de
sus extremos es soluble en disolventes polares y el otro, en apolares).

La estructura quedaría de la siguiente forma: forman una doble capa de fosfoglicéridos, de

forma que las cabezas se orientan hacia el exterior, en contacto con el agua (ya que muestran
afinidad a ella), y las colas, al no presentar afinidad por el agua, se orientan hacia el interior de
la MP para así no contactar con ella. Esta estructura es muy estable.

B. PROTOPLASMA O CITOPLASMA

La MP es un saco flexible lleno de protoplasma, el cual, además de ser común a todas las
células, está formado por:

 Agua (componente mayoritario).

 Iones inorgánicos (K, Na, cloruro, fosfato…).
 Moléculas orgánicas de bajo peso molecular que pueden estar o no disociadas (aa,
azúcares, ácidos carboxílicas - como ác. láctico, ác. pirúvico, o ác. nítrico -, ATP…).
 Lípidos (algunos fosfolípidos, tracilgliceroles…).
 Proteínas dispersas en el agua en forma de coloide.
 Orgánulos subcelulares.
 Material genético: AND y ARN.

La fracción soluble del citoplasma (todo el citoplasma menos los orgánulos subcelulares y
los ácidos nucleicos) se llama citosol.

C. ORGÁNULOS SUBCELULARES
Otra característica en común de todas las células es que todas presentan orgánulos
subcelulares. Éstos pueden presentar diferencias entre distintos grupos de organismos, pues
pueden estar en unos grupos y en otros o no, o diferir en sus características.

D. CONTROL GENÉTICO DEL METABOLISMO CELULAR

Metabolismo celular: conjunto de reacciones químicas que ocurren en la célula.

La mayoría de estas reacciones a tº ambiente no se producirían a una velocidad suficiente

como para mantener la vida, por lo que necesitan ser catalizadas -> los catalizadores
bioquímicos son proteínas producidas por la propia célula llamadas enzimas.

La información genética que posee una célula es el conjunto de características que heredó
de su progenitor o progenitores, y está almacenada en forma de secuencia de bases
nitrogenadas en el DNA. Todos los seres vivos han desarrollado el mismo esquema general
de funcionamiento que permite que la información genética pueda dirigir la actividad de la
célula, y es un esquema de 2 pasos llamados transcripción y traducción:

a) Transcripción: Síntesis de RNA en la que se trasvasa la información contenida en el DNA

al RNA, también en forma de secuencia de bases. Así, una molécula de RNA contiene
una copia de la información residente en una parte del DNA celular.
b) Traducción: Síntesis de proteínas codificada por el RNA. Para la síntesis de proteínas, el
RNA se acopla a unos orgánulos subcelulares: ribosomas. Esta síntesis se denomina
traducción porque la secuencia de bases nitrogenadas presente en el RNA se traduce en
una secuencia específica de los aa que van a formar la futura proteína. Cada 3 bases
nitrogenadas codifican un aa. Así, se codifican todos los aa que pueden formar parte de
las proteínas, y a este código se le llama código genético.

La traducción se da en los complejos formados por ARN-ribosomas.

Una determinada secuencia de bases en el DNA produce una secuencia específica de aa en

la proteína. La secuencia de aa de la proteína sintetizada determina sus propiedades.
Algunas de estas proteínas desempeñarán un papel estructural, otras actuarán como
catalizadores de reacciones químicas (las enzimas).

La presencia o ausencia de un determinado enzima hará posible o imposible que se

produzca una determinada reacción química. Las enzimas son el elemento central de
control del metabolismo, y el tipo de enzimas presentes determina qué reacciones
bioquímicas se van a producir y cuáles no. Su concentración determina en qué grado se va a
producir cada reacción.

En resumen: la información genética, codificada en forma de secuencia de bases de ADN,

determina la secuencia de bases de ARN y ésta determina la secuencia de aa, que a su vez
determina el tipo de enzimas presentes, lo que hace posible y regula el metabolismo celular.

E. DIVISION CELULAR: MITOSIS

Mitosis: mecanismo de división celular que permite a una célula transformarse en 2 copias
idénticas de sí misma.

F. CÉLULAS EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS

Célula eucariota:

 Tiene un núcleo bien diferenciado del resto de la célula mediante una membrana
nuclear. El núcleo contiene su material genético (DNA cromosómico).
 Es de mayor tamaño.
 Tienen ribosomas 80S.
 Tienen gran variedad de orgánulos subcelulares.
 Tienen mitocondrias y algunas, cloroplastos (orgánulos energéticos).

Células procariotas:

 No tienen membrana nuclear y su material genético está disperso por el citoplasma.

 Es de menor tamaño.
 Tienen ribosomas 70S.
 Tienen menos orgánulos subcelulares.
 Tienen mesosomas.

4. CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS, DISTRIBUCIÓN, Y NOMENCLATURA

Microorganismo: ser vivo microscópico, tan pequeño que no es visible a simple vista.

Entre los microorganismos hay seres vivos de características muy diversas. Se clasifican en:
Con respecto a su distribución, los podemos encontrar en toda la biosfera. Los hay acuáticos
(ríos, lagos, mar, aguas superficiales, aguas profundas, aguas subterráneas, sobre la piel de
peces y animales marinos o en sus intestinos, boca…). En los animales, pueden actuar como
flora normal, pero si provocan enfermedades se les denomina microorganismos patógenos.
También están en suelos en todas las latitudes del planeta (desde los polos hasta el ecuador),
en el aire, y en animales terrestres (también en su pie o en cavidades internas).

Esto hace que los microbios estén siempre en contacto con los humanos, en sus ropas,
alimentos… Pudiendo ser, como en los peces, flora microbiana normal, o siendo patógenos
para el hombre. Aquí actuaría nuestro sistema inmune para protegernos o combatir la
infección (aunque a veces no sea suficiente). Los hay patógenos para el hombre y no para
animales o plantas, o al revés… Otros, no patógenos, son aprovechados por el hombre para la
industria, y otros por los animales y plantas.

Con respecto a la nomenclatura, la nomenclatura científica asigna a cada organismo 2

nombres:

 1º va el género, con la primera letra en mayúscula.

 2º va la especie, todo en minúsculas.

Y todo ello subrayado o en cursiva.

Algunas especies de microorganismos tienen también nombres comunes, que se escriben

normalmente. A la Neisseria meningitidis también se le llama meningococo.

Una vez que se ha mencionado un nombre científico, las demás veces que mencionemos el
mismo nombre o el de otras especies del género, se puede abreviar sustituyendo el nombre
del género por su inicial, pero sólo si se ha nombrado completo antes y en medio no se ha
nombrado ningún otro. Ejemplo: Staphylococcus aureus, S. epidermidis…

5. BACTERIAS: MORFOLOGÍA, ESTRUCTURA, Y PRINCIPALES ESPECIES

Las principales características morfológicas de las bacterias son: tamaño, forma, y tipo de
agrupación. El estudio de la morfología bacteriana es importante para su identificación:
mediante un estudio microscópico de preparaciones de bacterias, podemos identificar su
género (y a veces su especie) o, al menos, reducir el nº de posibilidades existentes.

 Forma, agrupación, y tamaño de las bacterias

Existen miles de especies de bacterias, y todas las bacterias individuales adoptan una de
estas 3 formas:

a) Cocos: células esféricas u ovales. Ej.: meningococo.

b) Bacilos: células con forma de bastón/alargada. Ej: bacilo de Koch.

Algunas tienen una forma intermedia entre ambas (coco alargado o bacilo acortado),
llamadas cocobacilos.
 c) Espirilos: células espirales, onduladas, o helicoidales. Hay gran diversidad de
formas. Ej.: el causante de la sífilis. Si la espiral es corta e incompleta, se llaman
vibriones. Ej.: el causante del cólera.

Una especie pleomórfica es

aquella que puede mostrar
morfología variable (por
ejemplo, a veces aparece como
coco, otras como bacilo… todo
en una misma preparación).

Con respecto a la agrupación de bacterias, un gran nº de especies bacterianas, tras

reproducirse por fisión binaria, se separa y quedan independientes, por lo que en
preparaciones microscópicas las vemos aisladas (ej.: E. coli). Sin embargo, otras, tras
dividirse, quedan unidas dando agrupaciones de tamaño limitado (2, 3 4 individuos aprox.),
o grandes grupos de bacterias.

Cada especie bacteriana cuyas células forman agrupaciones, adopta un determinado

modelo de agrupación (determinado por la orientación del plano en el que se produce la
división celular), lo que ayuda a su identificación. Las agrupaciones bacterianas más
comunes son:

Agrupaciones de cocos:

a) Diplococos: quedan en parejas.

b) Tetradas: grupos de 4 células.
c) Sarcinas: agrupamiento cuboidal.
d) Estafilococos: forman “racimos” de
cocos.
e) Estreptococos: forman cadenas.

Agrupaciones de bacilos:

No forman las agrupaciones características de los

cocos. En la mayoría de casos, se observan aislados
o, muy poco frecuente, en parejas (diplobacilos) o
en cadenas (estreptobacilos).

Destaca el género Corynebacterium, que

frecuentemente se agrupa en empalizada.

Las agrupaciones de espirilos son muy poco

frecuentes, y normalmente se observan aislados.

Con respecto al tamaño de las bacterias, la unidad de longitud usada para expresar sus
dimenciones es la micra.
Los estafilococos y estreptococos tienen diamentros entre 0.75 y 1.25 micras. Los bacilos,
estudiados frecuentemente en laboratorio, tienen diametros entre 0.5 y 1 micras y
longitudes de entre 2 y 3 micras.

Las bacterias de menor tamaño son del orden Mycoplasmatales, y las de mayor tamaño se
encuentran entre los espirilos.

 Estructura bacteriana

Las bacterias tienen estructuras definidas dentro y fuera de su PC. Algunas de estas
estructuras están solo en algunas especies (flagelos, fimbrias, y cápsula), y otras son
comunes a todas las bacterias (PC).

1. PC

Se encuentra por fuera de la MP y dentro de la posible cápsula, y tiene gran rigidez (gracias a
la presencia de un peptidoglucano, mureína). Esta resistencia mecánica permite a las
bacterias sobrevivir a procesos de congelación y descongelación, y soportar medios muy
hipotónicos sin sufrir una citolisis. La PC puede ser de 2 tipos, que difieren en su
composición química:

a) PC G+: formada por una gruesa capa de peptidoglucano, y con ácidos teicoicos no
presentes en la PC G-.

b) PC G-: formada por una delgada capa de peptidoglucano, sobre la que hay una capa de
lipopolisacáridos que actúa como endotoxina.

2. MP y mesosoma

MP: doble capa fosfolipífica (la de antes) con inclusiones de proteínas y otras sustancias
que realizan funciones concretas.

Mesosoma: invaginación de la MP que llega a tener una organización compleja. Desempeña

varias funciones importantes que aún se están estudiando.

3. Citoplasma y orgánulos subcelulares

Tiene características comunes al citoplasma de las células eucariotas, pero también tiene
unas características propias:

 Citoesqueleto simple o inexistente.

 El citoplasma tiene un área con ribosomas (son ARN + proteínas) y distintos gránulos.
La función de los ribosomas, como en células eucariotas, es sintetizar proteínas.

Un ribosoma está formado por ARN + proteínas, y sirven como sitio para la sintesis de
proteinas de la célula. Lee la secuencia del ARNm y, usando el código genético, traduce
esa secuencia de bases a una secuencia de aa -> por tanto, son los encargados de la
síntesis de proteínas a partir de la información contenida en el ADN, la cual llega
transcrita a los ribosomas en forma de ARNm.
 ADN circular, formado por un único cromosoma circular y por varios plásmidos.

Los plásmidos son moléculas ADN doble circular extracromosómico, generalmente de

menor tamaño que el cromosoma circular. Están en muchas especies bacterianas, y se
pueden replicar independientemente del ADN cromosómico. Su nº es variable, y
pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia del hospedador en
condiciones especiales, por ejemplo, genes que condifican proteínas que las hacen
resistentes a antibióticos.
No están asociados a proteínas, y poseen informacion genética importante para las
bacterias (no es información esencial para la célula, pero puede conferirle ventajas).
Algunos plásmidos, los plásmidos integrativos, pueden llegar a integrarse en el ADN
cromosómico, y se denominan episomas. Así, se duplican en cada división celular y pasan a
formar parte la informacion genética básica de la bacteria.

Algunos tipos de plásmidos son:

o Plásmidos de resistencia: o plásmidos R, son aquellos con la información

genética necesaria para conferir resistencia a algunos antibióticos que, de otra
manera, matarían al hospedador. Estos plásmidos son los responsables de que
muchas bacterias actuales sean resistentes a los antibióticos que se usan a
diario.

o Plásmidos de fertilidad: o plásmidos F11, son aquellos que contienen genes

relacionados con la capacidad de conjugación. Algunos permiten la formación
de pilis para la transferencia de plásmidos, otros facilitan la unión de la célula a
otras células… Estos plásmidos contienen secuencias de inserción, que son las
que permiten la integración del plásmido en el ADN cromosómico.

o Plásmidos bacteriocinogénicos: son aquellos que confieren a las bacterias

inmunidad frente a un determinado tipo de bacteriocinas o bien la capacidad de
secretar un tipo concreto de bacteriocinas (las bacteriocinas son sustancias que
segregan las bacterias para destruir a otras bacterias). En definitiva, confieren
una ventaja competitiva respecto a los que no tienen este plásmido.

4. Inclusiones citoplasmáticas

Son reservas de nutrientes, aunque se les supone más funciones.

5. Material nuclear

Las bacterias son células procariotas, por lo que no tienen una membrana nuclear que
delimite un núcleo separado del citoplasma, pero sí tienenen 1 solo cromosoma formado
por una doble hélice de ADN circular, y entre 1 y 20 moleculas de ADN doble circular más
pequeñas llamadas plásmido (es ADN extracromosómico), que pueden ser transferidos de
una célula a otra durante la conjugación sexual a través de las fimbrias: la información
genética del plásmido se transfiere de una célula donadora a una célula receptora. Este
proceso requiere un contacto directo entre ambas células.

6. Flagelos
Son apéndices de naturaleza proteina con forma de filamento largo y fino que sobresalen
de la PC. Son frecuentes en bacilos y raros en cocos, y su nº depende de la especie (puede
haber 1 o más, pero son pocas las especies con más de 15). Su funcion es dotar de motilidad
a las bacterias. Son demasiado finos para verse al micro con los procedimientos más
frecuentes, pero hay técnicas especiales de tincion que permiten su visualización.

7. Fimbrias (vellos, o pilis)

Son apendices filamentos presentes en muchas bacterias G-, más cortos, delgados y
numerosos que los flagelos. Se encuentran en especies móviles e inmóciles, y sólo se ven al
ME. No dotan de motilidad, si no que cumplen varias funciones:

o Fimbrias sexuales: actúan como canales de transferencia de material genético

durante el apareamiento bacteriano. Pueden intercambiar plásmidos, lo que puede
añadir nuevas caracteristicas a la bacteria, como por ejemplo, resistencia a un
antibiótico.

o Fimbrias de adhesión a superficies: permiten a las bacterias fijarse a tejidos de

donde extraen nutrientes. Su presencia es un factor que aumenta la virulencia de
muchas bacterias patógenas para el hombre.

8. Cápsula (o capa mucosa)

Es una sustancia viscosa que forma una envoltura alrededor de la célula y su volumen está
influido por el medio en el que crece la bacteria. Es externa a la PC, y su presencia aumenta la
virulencia de algunas bacterias patógenas. Ejerce posiblemente un papel protector de la
célula bacteriana y puede estar implicada en la nutrición, pero aún no está demostrado.

 Endosporas

Algunas células tienen la capacidad de producir cuerpos esféricos u ovales de pared gruesa
(uno por célula), que son células de alta resistencia a los agentes físicos y químicos
externos nocivos: las endosporas. Suponen un sistema de resistencia a un ambiente
adverso, en espera de la llegada de condiciones favorables. Todas las especies de los
géneros Bacillus y Clostridium forman endosporas (pueden pasar generaciones sin formar
endosporas, pero cuando llegan condiciones desfavorables, en respuesta a ellas, sintetizan la
epora en el interior de su citoplasma).

El material genético, orgánulos, y sustancias fundamentales se encapsulan y se produce un

proceso de deshidratación (tras ello, la PC y la MP se lisan y la endospora es liberada). Así,
cuando la endospora llega a un medio favorable para su desarrollo, se rehidrata y germina,
reconstituyendo la célula vegetativa.

 Motilidad bacteriana
Hay bacterias que para su movilidad no usan flagelos. Estas bacterias, llamadas bacterias
deslizantes (solo 2 órdenes: Myxobacteriales y Cytophagales), se mueven o deslizan usando
un movimiento sinuoso de flexión similar al usado por gusanos o septientes.

 Principales especies de bacterias

Los distintos géneros de bacterias pueden agruparse según 3 criterios:

 Respuesta a la tinción de Gram: las divide en dos grandes grupos, G+ y G-, según
cómo se tiña su PC.

 Morfología.

 Metabolismo respiratorio: aerobios (necesitan O2), anaerobios (no necesitan O2),

anaerobio facultativo (usan el O2 cuando hay, pero no lo necesitan para
desarrollarse)…

 Diferencia entre infección gastrointestinal e intoxicación alimentaria

Una infección gastrointestinal es debida a la presencia de un microorganismo vivo que

llega al estómago o al intestino y allí parasita al humano. Se reproduce y daña nuestro
cuerpo debido a las toxinas que produce y su invasión a otros órganos.

Una intoxicación alimentaria debida a micfroorganismos no son infecciones y que no hay

microorganismos patógenos reproduciéndose en el interior de la persona, sino que son
envenenamientos por sustancias que han sido producidas por microorganismos (toxinas)
en el exterior del cuerpo, antes de ingerir el alimento.

6. HONGOS: MORFOLOGÍA, ESTRUCTURA, Y ECOLOGÍA DE LOS HONGOS

 Importancia de los hongos

La ciencia que estudio los hongos es la micología. Son heterótrofos y pueden ser:

 Saprófitos: de vida libre, obtienen su almento de materia orgánica muerta. Destruyen

restos de plantas y animales degradándolos a sustancias químicas simples (CO2,
H2O…), que pasan a la atmósfera o a formar parte del suelo y, finalmente, son
absorbidas por otras generaciones de plantas.

Esta actividad de los hongos es importante en la fertilidad del suelo, en la producción

de etanol, vitaminas, antibióticos, y ácido cítrico; pero esta actividad saprófita no
siempre es beneficiosa, pues puede ocasionar grandes pérdidas si ocurre sobre
 maderas o alimentos, y no solo destruir alimentos, sino que algunos hongos pueden
contaminar alimentos con venenos (micotoxinas) muy tóxicos y algunos también son
carcinógenos (producen cáncer). Por ello, es importante no consumir alimentos
contamidos por hongos, aunque sea de forma leve.

 Parásitos: se alimentan de huéspedes vivos. Pueden producir enfermedades en el

hombre, plantas, y animales, aunque la mayor parte de estas enfermedades son más
leves que las causadas por virus y bacterias.

 Clasificación

Los podemos clasificar en 2 grandes grupos: hongos miceliformes (o mohos), y hongos

levaduriformes (levaduras).

Diferencias entre mohos y levaduras:

 Morfología: los mohos tienen un cuerpo alargado formado por hifas (filamentos), que
en conjunto se llama micelio.

 Estructura: los mohos presentan una estructura pluricelular o cenocítica, y las levaduras
son unicelulares con células ovoideas.

 Reproducción: los hongos se reproducen mediante esporas, y las levaduras mediante

gemación.

(Las esporas en hongos tienen función reproductiva, mientras que en las bacterias son formas
de resistencia).

Características comunes entre mohos y levaduras:

 Son microorganismos eucarióticos heterótrofos, que obtienen la energía necesaria para

su metabolismo de la oxidación de sustancias orgánicas.

 No tienen clorofila.

 La mayoría son inmóviles, aunque algunos forman esporas móviles.

 Tienen una PC formada por quitina o celulosa o ambas, además de otros polisacáridos
complejos.

 Hongos miceliformes: estructura del talo

Talo: cuerpo del hongo, tanto las partes vegetativas (las que mantienen vivo al individuo)
como las reproductoras. El talo está formado por unos filamentos tubulares microscópicos,
las hifas, de 5 a 10 micrómetros de diámetro y ramificadas. Al conjunto de tejido formado
por las hifas se le llama micelio.

Hay 3 tipos de hifas:

a) No septadas (no segmentadas): estructura cenocítica. Sólo se forman tabiques en

la base de las estructuras reproductoras.
 b) Septadas con células
mononucleadas: es una
estructura multicelular.

c) Sepatadas con células

multinucleadas: es una
estructura multicelular, pero
cada MP envuelve al citoplasma
y a varios núcleos, no a uno
solo.
 Reproducción de los hongos miceliformes

Los mohos se reproducen normalmente mediante esporas. De modo ocasional, pueden

reproducirse de otros modos: un fragmento de micelio desprendido por accidente del resto
del talo puede originar un individuo nuevo.

Las esporas de los hongos tienen tamaño microscópico, y contienen el ADN y los nutrientes
necesarios para originar un nuevo individuo. Las esporas son para los hongos lo que las
semillas para las plantas, son producidas en grandes cantidades, y sus características
facilitan su dispersión (con frecuencia a grandes distancias). Como vehículos de dispersión
usan el aire, agua, o animales, por lo que podemos afirmar que en casi todos los rincones de
la biosfera hay esporas de hongos miceliformes de diversas especies. Los alimentos
también están a menudo contaminados con esporas.

Una vez la espora llega a un lugar con unas condiciones adecuadas para el desarrollo del
hongo, germina. Cuando las condiciones no son las adecuadas, las esporas permanecen en
estado latente (esporas de reposo). Son muy resistentes a condiciones ambientales
extremas.

Las esporas se producen en unas estructuras reproductoras específicas (distintas del resto
del micelio vegetativo) llamadas micelio reproductivo, las cuales puede ser individuales o
estar agrupadas en cuerpos fructificantes.

Todos los mohos producen esporas de forma asexual, mientras que solo una parte de ellos
lo hace de modo sexual.

 Fisiología y nutrición de los hongos miceliformes

Las principales características fisiológicas de los mohos son:

i. Casi todos son aerobios estrictos.

ii. Se desarrollan en un rango de temperaturas de 0 a 62 °C, pero para la mayoría de las

especies, la temperatura óptima se sitúa entre 22 y 30 °C. Los que crecen a bajas
temperaturas pueden dañar los alimentos refrigerados.

iii. Son capaces de usar como nutrientes una gran variedad de sustratos. La mayoría
pueden utilizar glucosa.
 iv. Tienen capacidad de sobrevivir o desarrollarse en condiciones ambientales más
severas que el resto de microorganismos.

Situaciones que los mohos soportan mejor que las bacterias:

 Medios hipertónicos: se debe principalmente a la gran resistencia de la PC fúngica. Por

ejemplo, los mohos se desarrollan en sustratos, como las mermeladas, que tienen
concentraciones de azúcares que las bacterias no pueden tolerar.

 Medios de acidez relativamente elevada: el pH óptimo para casi todas las especies está
en 5'6. Pueden soportar valores de hasta 2, mientras que son raras las bacterias que
toleren valores menores de 4. El pH más alcalino que soportan los mohos es de 9.

 Los mohos necesitan agua para su desarrollo, pero tienen recursos para cuando el
medio se deshidrata -> pueden hacer una de estas dos cosas: producir esporas y morir
después, o adoptar formas de resistencia (las únicas bacterias que presentan un grado
de resistencia similar a la de los mohos son las bacterias formadoras de endosporas).

 Algunos hongos de interés microbiológico

a) Mucor: en suelo, estiércol, y muchos vegetales. Algunos descomponen alimentos, y

otros se usan para elaborar quesos y otros alimentos. Si se cultivan en medios líquidos
se desarrollan como levaduras -> llamamos hongos dimórficos a los que tienen la
capacidad de cambiar de moho a levadura y viceversa.

b) Rhizopus: mohos del pan; a menudo estropean otros alimentos.

c) Aspergillus: ampliamente distribuidos en la naturaleza. Algunos estropean alimentos, y

otros se usan por su capacidad fermentadora en la producción de ácido cítrico.

d) Penicillium: los más difundidos en la naturaleza. Algunos descomponen alimentos

(frescos y en conserva), otros se usan en el curado de quesos (roquefort,
camembert…), otros en la industria de la fermentación, y otros en la producción de
penicilina.

e) Alternaria: algunos son patógenos de plantas, otros descomponen alimentos… Algunas

especies son a menudo contamiantes de placas de cultivo bacterianas.

 Asociaciones simbióticas de hongos miceliformes con otros organismos

Hay asociaciones de hongos con otros organismos en las que las especies integrantes no
pueden vivir separadas. En otras sí pueden llevar una vida independiente, pero la vida es
más fácil para ambos en la asociación  estas asociaciones de distintos organismos que
producen un beneficio mutuo se llama simbiosis o asociaciones simbióticas, y a cada
organismo integrante se le llama simbionte.

1. Líquenes: asociaciones simbióticas más conocidas en las que participan los hongos. En
ellas, un hongo está asociado a un alga. El alga produce sustancias orgánicas realizando
la fotosíntesis y las comparte con el hongo, quien proporciona agua y sales minerales.

2. Micorrizas. Son asociaciones de raicillas de plantas superiores con hongos. El hongo

incrementa la absorción de sales minerales por parte de la planta, la cual a cambio,
proporciona nutrientes orgánicos al hongo.
 Características generales de las levaduras

Son hongos cuya estructura predominante es la unicelular, y se diferenciar de las bacterias

por su mayor tamaño, su morfología, y por ser eucariotas. Se reproducen por gemación, y
crecen y se reproducen más deprisa que los hongos filamentosos.

En realidad, se reproducen también por esporulación (sexual o asexual), fisión, o gemación,

pero la gemación es el más común: en ella, la célula madre forma una protuberancia
llamada yema, que crece hasta alcanzar un tamaño algo menor que el de la célula madre. El
núcleo se divida, y una vez la yema queda dotada de núcleo, se forma una pared
transversan entre la yema y la célula madre que las divide, tras lo que se separan.

Son más eficaces en las fermentaciones industriales que los mohos. Son especialmente
destacables por su importancia económica en la fermentación alcohólica de muchos jugos
azucarados vegetales y en la fermentación usada en la panificación de la harina de trigo,
ambas producidas principalmente por Saccharomyces cerevisiae.

 Fisiología y bioquímica de las levaduras

Entre las levaduras hay gran diversidad fisiológica, pero podemos establecer unas
generalidades:

a. El catabolismo (respiración) de azúcares, como la glucosa, puede ser:

 aerobio: C6H12O6 + 9 O2 ------------> 6 CO2 + 6 H2O

 anaerobio: fermentación. Una de ellas es la fermentación alcohólica:

C6H12O6 ------------> 2 C2H5OH + 2 CO2

Las levaduras, en condiciones de O2 abundante (condiciones aerobias) prefieren

realizar una respiración aerobia, pues así obtienen una mayor cantidad de energía
por cada molécula de glucosa que metabolizan.

b. La tº óptima para la mayor parte de ellas está entre 20 y 30 °C. Las levaduras
patógenas (entre las que destaca Candida albicans, patógeno humano con especial
incidencia entre los pacientes inmunodeprimidos) crecen bien entre 30 y 37 °C.
 c. En general crecen bien en medios ácidos, de pH entre 3'5 y 3'8. Este pH inhibe el
crecimiento de la mayor parte de las especies de bacterias. Para evitar infecciones
bacterianas en los tanques de fermentación, se utiliza un rango de pH como este.

 Ecología de las levaduras

Están muy difundidas en la naturaleza. Son diseminadas por el agua, el viento y los insectos.
La mayoría son hongos saprófitos pero otras son parásitos obligados u oportunistas que
producen infecciones en personas, animales, y plantas. Algunas pueden encontrarse como
flora normal en distintas partes del cuerpo (boca, vagina, intestino). Están en muchos tipos
de suelos, tanto áridos como húmedos y con mucha vegetación, también viven en aguas
dulces y saladas.

7. GENERALIDADES SOBRE LAS ALGAS

Son organismos eucariotas y autótrofos (fotosintetizadores).

 Morfología

Pueden ser unicelulares, pluricelulares, o cenocíticos.

Pueden ser microscópicas, o de varios metros de largo. Las grandes se asemejan a las
plantas superiores pero sin raíces.

El tamaño de las algas unicelulares es muy superior al del promedio de las bacterias.
Chlamidomonas, un alga verde típica, mide entre 3 y 29 micrometros de longitud.

 Estructura

1. Núcleo: son eucariotas, por lo que tienen núcleo.

2. Clorofila y cloroplastos: la clorofila y otros pigmentos están en unos orgánulos

llamados cloroplastos, que es donde ocurre la fotosínteis. Puede haber de 1 a muchos
cloroplastos por células. Además de las algas, los únicos microorganismos con clorofila
con algunas especies de bacterias, las cianobacterias (tienen clorofila, pero no
cloroplastos).

3. PC: la mayoría de algas tienen PC externas a la MP, son rígidas, y están formadas a
menudo por celulosa (es quien aporta la rigidez). Otras, como la de las diatomeas, están
impregnadas en sílice. Euglena no tiene celulosa en su PC, lo que le da flexibilidad a la
célula.

4. Flagelos: hay especies de algas unicelulares móviles, cuya movilidad se debe a la

existencia de 1 o varios flagelos polares.

 Reproducción
Puede ser asexual o sexual. Algunas especies se limitan a 1 de los procedimientos, y otras
combinan los 2. La reproducción asexual tiene varias modalidades. Una de ellas es una
simple mitosis celular. Otras modalidades son más complejas e incluyen la formación de
esporas unicelulares.

 Bases de la clacificación de las algas: pigmentos y cloroplastos

Los cloroplastos contienen varios pigmentos distintos. La ultraestructura de los

cloroplastos y la composición química de los pigmentos son la base de la clasificación
taxonómica de las algas.

Hay 5 tipos de clorofilas, y cada especie de algas contiene uno o varios tipos de clorofila.
Además, hay otros tipos de pigmentos: carotenos, xantofilas y ficobilinas, con colores que
oscilan entre el rojo, marrón, anaranjado y amarillo.

8. GENERALIDADES SOBRE LOS PROTOZOOS

Son protistas y eucariotas.

Son heterótrofos y muchos son depredadores de bacterias.

Hay protozoos inofensivos, otros son útiles para los humanos y otros son patógenos.

Los hay de vida libre y otros son parásitos.

Pueden reproducirse asexual o sexualmente.

 Morfología y estructura

Presentan una enorme variedad de formas y tamaños (van desde 1 micrómetro hasta 600).

Se presentan como células aisladas o asociadas en colonias. Estas asociaciones son sólo
conglomerados de células independientes, por lo que no hay una verdadera especialización.

Muchos protozoos pueden presentarse en 2 formas:

a. Trofozoíto: forma de vida activa.

b. Quiste: forma de resistencia en respuesta a condiciones medioambientales

desfavorables.

 Locomoción y clasificación de protozoos

Los procedimientos de locomoción son un importante criterio para clasificar los protozoos:

i) Seudópodos: prolongaciones temporales del citoplasma que pueden emitir los

protozoos que no presentan cutícula rígida. Estos protozoos forman el grupo de los
rizópodos.
ii) Flagelos: largos apéndices filamentosos que se mueven como látigos empujando al
protozoo a través de medios líquidos. Pueden haber entre 1 y 8, pero lo normal 1 o 2.
Estos protozoos forman el grupo de los flagelados.

iii) Cilios: numerosos apéndices cortos vibrátiles que permiten el desplazamiento en

medios líquidos (además de tener otras funciones). Estos protozoos forman el
grupo de los ciliados.

iv) Deslizamiento (flexión del cuerpo): lo usan los esporozoos. Todos son parásitos
obligados.

9. CARACTERÍSRICAS GENERALES DE LOS VIRUS

Son un grupo grande y heterogéneo de agentes infecciososo. Pueden definirse

enumerando sus características, algunas exclusivas de ellos. Las principales son:

o Son mucho más pequeños que una bacteria.

o Son parásitos intracelulares obligados de huéspedes seleccionados y se reproducen
en su interior.
o Sus descendientes heredan sus características, aunque pueden mutar.
o No tienen metabolismo.
o Se reproducen pero no crecen.
o No responden a cambios en su medio ambiente.
o Tienen un solo tipo de ácido nucleico: ADN o ARN.
o No tienen movilidad propia.

 Replicación

Los virus no tienen metabolismo propio que les permita reproducirse por sí solos ->
parasitan una célula y se reproducen en su interior.

Las fases de este proceso son las siguientes:

1) Adsorción. Una partícula viral se une mediante una parte específica de su cubierta a un
receptor determinado de la superficie de la célula que va a ser parasitada.

2) Penetración y desnudamiento. La cubierta del virus se funde con la MP de la célula que

va a ser parasitada, y esto permite la penetración del ácido nucleico del virus en el
citoplasma celular. Si es un DNA, el virus puede llegar hasta el núcleo.

3) Replicación bioquímica. El ácido nucleico viral es replicado por la maquinaria

bioquímica de la célula huésped. También se producen proteínas de la cápside y otros
 componentes virales. El ácido nucleico de este modo "esclaviza" los componentes
internos del huésped y los pone a su servicio.

4) Ensamble y maduración. Las distintas partes del virus son ensambladas por los
componentes internos del huésped. La célula huésped está, en esta etapa, llena de
viriones.

5) Salida o liberación. El mecanismo varía según el virus. En unos casos, se produce la lisis
celular y la liberación simultánea de todos los nuevos viriones. En otros, los viriones van
saliendo a través de la membrana lentamente y sin destrucción de la célula huésped.
 TEMA 2: SEGURIDAD BIOLÓGICA

1. SEGURIDAD EN MICROBIOLOGÍA

Riesgos biológicos: aquellos asociados con la exposición a agentes biológicos y que pueden
causar distintos tipos de enfermedades (infecciones) que pueden transmitirse de un
individuo a otro o a animales (zoonosis).

No es necesario sentirse en peligro cuando trabajamos en laboratorios de microbiología,

siempre que tengamos en cuenta:

 Los riesgos potenciales de los microorganismos en cuestión.

 Las vías por las que estos gérmenes pueden penetrar en el organismo y causar
infecciones.
 Los métodos correctos de «contención» de estos gérmenes para que no lleguen a
acceder a dichas vías.

 Clasificación de los microorganismos en función del riesgo

La OMS propone una clasificación microorganismos que hace referencia al riesgo que
generan para humanos, animales y/o el medio ambiente.

Esta clasificación se realiza con el fin de establecer los niveles de bioseguridad,

considerando el tipo de actividad que se desarrolla con los propios microorganismos.

 Grupo de nivel de riesgo 1: Riesgo individual y comunitario escaso o nulo.

Grupo de riesgo constituido por microorganismos que tienen pocas probabilidades de
provocar enfermedades en humanos o en animales (microorganismos que no son
patógenos).

 Grupo de nivel de riesgo 2: Riesgo individual moderado, riesgo comunitario bajo.

Grupo de riesgo formado por agentes patógenos que pueden provocar enfermedades
leves en humanos o en animales, pero que tiene pocas probabilidades de entrañar un
riesgo grave para el personal del laboratorio, la comunidad, los animales o el ambiente.
Existen medidas eficaces de tratamiento y prevención.

 Grupo de nivel de riesgo 3 : Riesgo individual elevado, riesgo comunitario moderado.

Grupo de riesgo formado por agentes patógenos que pueden provocar enfermedades
graves en humanos o en animales, con riesgo moderado de propagarse en la
comunidad.
Se dispone de medidas eficaces de tratamiento y de prevención.

 Grupo de nivel de riesgo 4: Riesgo individual y comunitario elevado.

Grupo de riesgo formado por agentes patógenos que pueden provocar enfermedades
graves e incluso la muerte en las personas o en los animales, con alto riesgo de
propagarse en la comunidad.
No suele disponerse de medidas eficaces de tratamiento y prevención.
Algunos agentes biológicos del grupo 1, aún sin tener riesgos significativos, si están en
elevadas [ ], pueden provocar trastornos cutáneos o intestinales si no son manipulados
adecuadamente.

2. VÍAS DE INFECCIÓN

Las vías de infección habituales y las situaciones en las que penetra el organismo son:

 Oral (por ingestión): la ingestión de microorganismos puede ocurrir cuando se pipetea

con la boca, o mediante los dedos y artículos contaminados en las mesas de laboratorio
(por ej.: cigarros, comida…). Esta contaminación puede ser consecuencia de
derramamientos y salpicaduras que no se descubren o se desinfectan
inadecuadamente.

 Respiratoria (por inhalación oral o nasal): la de mayor probabilidad, ya que muchas

operaciones que se realizan en los laboratorios (centrifugación, vertido, apertura de
tubos y placas de cultivo...) son susceptibles de producir polvo y aerosoles a los que,
habitualmente, irán asociados microorganismos.

 Ocular (a través de la conjuntiva), a través de salpicaduras en los ojos.

 Parenteral (pinchazos): la inyección puede ser a consecuencia de heridas accidentes

por agujas hipodérmicas, pipetas Pasteur, o material de vidrio roto infectado.

 Dérmica (a través de lesiones y/o roturas de la piel): los gérmenes pueden entrar en el
organismo por lesiones o heridas, algunas tan pequeñas que pasan desapercibidas para
el propio investigador.

3. TIPOS DE BARRERAS O MEDIOS DE CONTENCIÓN

La definición de medios de contención pasa por la creación de distintos tipos de barreras de

contención, que son:

1) Barreras primarias: se ponen alrededor de los microorganismos para impedir su

dispersión en el laboratorio.

Son las técnicas y equipos diseñados para la contención de los microorganismos y para
impedir que accedan directamente al operador y a que se difundan como aerosoles. Ej.:
uso de cementerios biológicos (agua con lejía a la concentración adecuada), reemplazar
el material roto, no llevar a la boca ningún objeto…

2) Barreras secundarias: se ponen alrededor de operador para que actúen como una red
de seguridad si se rompieran las barreras primarias.

Ej.: llevar batas siempre y siempre abrochadas, recubrirse con apósitos impermeables
cortes o abrasiones, lavarse las manos tras manipular material infeccioso y siempre
antes de salir del laboratorio…
3) Barreras terciarias: se ponen para impedir el alcance a la comunidad cualquier germen
que no sea contenido por las barreras primarias y secundarias. Ofrece una protección
adicional, y se relacionan con los laboratorios microbiológicos.
4. CLASIFICACIÓN DE LOS DISTINTOS TIPOS DE LABORATORIOS SEGÚN LAS
MEDIDAS DE SEGURIDAD

La Ley 31/1995 de PRL establece 3 tipos de diseño de laboratorios en función del riesgo que
produzcan los microorganismos con los que se trabaje (grupos de riesgo 1, 2 ,3 ó 4).

 Laboratorio básico: ideado para trabajar con gérmenes de los grupos de riesgo I y II.

 Laboratorio de seguridad: diseñado para trabajar con gérmenes del grupo de riesgo III.
Se caracteriza por estar aislado físicamente de otras habitaciones, tener presión
negativa y verter el aire totalmente a la atmósfera sin recirculación.

 Laboratorio de máxima seguridad: para trabajar con gérmenes del grupo de Riesgo IV.

 Niveles de bioseguridad exigible a cada laboratorio

Su objetivo es evitar la liberación de cualquier agente biológico dentro y fuera del lugar de
trabajo, para proteger al trabajador, la comunidad, la población, el medio ambiente, y la
muestra. De la interrelación entre los grupos de riesgo y las actividades que se realizan en un
laboratorio, se establece el nivel de bioseguridad necesario entre los 4 posibles:

o Nivel de bioseguridad 1: requisito básico de contención, sin barreras primarias ni

secundarias (la única sería un lavamanos). Por sus características (equipos de seguridad,
estructura, diseño…) es el adecuado para la educación y para instalaciones que trabajen
con cepas definidas y caracterizadas. Debe cumplir:

 El trabajo es generalmente realizado sobre mesas abiertas y se usan técnicas

microbiológicas adecuadas.

 No se requiere equipamiento de contención ni diseño especial de infraestructura.

 El personal de laboratorio debe tener capacitación continua y supervisión de un

profesional habilitado.

 El personal debe usar indumentaria de protección adecuada.

o Nivel de bioseguridad 2: sus prácticas, equipos, diseño, y construcción es aplicable a

laboratorios educativos, de diagnósticos, clínicos, y aquellos donde se trabaje con agentes
de riesgos moderado. Debe cumplir:

 El personal de laboratorio debe tener un entrenamiento especígico para manipular

agentes patógenos y estar supervisado por un profesional habilitado.

 El acceso al laboratorio debe estar restringido al personal autorizado.

 Se deben tomar precauciones extremas con elementos cortantes o punzantes.

  Las operaciones que generen aerosoles potencialmente peligrsos deben realizarse
con equipamiento y/o procedimientos de contención física.

 El personal debe usar la indumentaria adecuada.

o Nivel de bioseguridad 3 o laboratorio de contención : sus prácticas, equipos, diseño, y

construcción es aplicable a instalaciones clínicas, de producción, de investigación, de
diagnóstico, y aquellas en las que se trabaje con agentes exóticos o indígenas (con
potencial transmisión respiratoria como resultado de la exposición a aerosoles y que
puedan provocar una infección grave y potencialmente letal). Debe cumplir:

 El acceso queda restringido a personal formado previamente.

 Obligatorio llevar la vestimenta de protección adecuada.

 La manipulación se los patógenos se realiza en cabinas de seguridad.

 El recinto será con presión negativa para evitar la salida de microorganismos al

exterior.

 Todo el material que salga de las instalaciones se inactiva previamente.

 Todas las personas que trabajen en sus dependencias deberán conocer en profundidad
los protocolos de trabajo y seguridad.

o Nivel de bioseguridad 4 o laboratorio de contención máxima : son laboratorios que

trabajan con agentes patógenos peligrosos o con agentes tóxicos (con alto riesgo
individual de enfermedades que ponen en peligro la vida) que puedan transmitirse a
través de aerosoles. No existen terapias o vacunas. Es un edificio aislado o una zona
totalmente aislada.
 5. SEGURIDAD E HIGIENE EN EL TRABAJO DEL LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

Un laboratorio de mb tiene, en principio, los mismos peligros que cualquier laboratorio en

cuanto al uso de equipo eléctrico, materiales volátiles, explosivos y sustancias que son
tóxicas cuando se ingieren, pero a todos estos riesgos hay que añadir el riesgo de trabajar
con bacterias, virus y hongos potencialmente peligrosos y el de que casi todas las
manipulaciones se realizan sobre el fuego de mecheros de alcohol o gas.

 Plan de actuación ante riesgos biológicos

Derrame de un material biológico sobre el cuerpo:

1) Quitar la ropa inmediatamente.

2) Lavar vigorosamente el área expuesta con agua y jabón durante un minuto.
3) Comunicar el incidente al profesor.
4) Buscar atención médica si es necesario.
5) La ropa contaminada debe colocarse en una solución desinfectante antes de
lavarse.

Salpicaduras en los ojos con materiales peligrosos:

1) Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del párpado con

abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para asegurar
efectivamente el lavado, comenzando por los párpados.
2) Comunicar el incidente al profesor.
3) Buscar atención médica inmediatamente.

Cortadas menores y heridas por pinchazo:

1) Lavar vigorosamente la herida con agua y jabón por varios minutos.

2) Aplicar un antiséptico adecuado.
3) Comunicar el incidente al profesor.
4) Buscar atención médica inmediatamente.

En caso de derrames:

1) Comunicar el incidente al profesor.

2) Colocarse guantes y cubrir con papel absorbente el área del derrame.
3) Verter un desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario.
4) Retirar el material absorbente junto al material roto y colocarlos en un recipiente
para
5) residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto con los
guantes utilizados.
 6) Limpiar y desinfectar nuevamente el área empleando nuevas toallas
de papel y desinfectante.
7) Lavarse las manos con abundante agua y jabón.

 Señalización

Riesgo biológico -> En cumplimiento de lo dispuesto en el anexo III del Real Decreto
664/1997, de 12 de mayo, se colocará esta señal en todos los laboratorios en los que se
manipulen agentes biológicos de los grupos 2, 3 ó 4.

 Medios de protección colectiva e individual

Medios de protección colectiva. Los más habituales en los laboratorios son las vitrinas de
gases y las duchas y lavaojos de emergencia.

Equipos de protección individual (EPIs). Los que más se usan son los de protección de las
manos, ojos y protección respiratoria.

6. CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Es una cabina proyectada para ofrecer protección al usuario y al ambiente de los riesgos
asociados al manejo de material infeccioso y otros materiales biológicos peligrosos,
excluyendo materiales radiactivos, tóxicos y corrosivos."

Constituyen el principal elemento del equipo de contención física, actuando como

barreras que evitan el paso de los aerosoles generados en su interior al ambiente del local
de trabajo.

A menudo, y de forma errónea, se las llama “cabinas de flujo laminar”, y aunque es cierto que
alguno de sus tipos tiene este tipo de
flujo, no todas lo poseen. Además, hay
cabinas de flujo laminar que no protege
al trabajador, ya que se usan en el
cultivo de células eucariotas y su funcion
es impedir que estos cultivos se
contaminen.

Tipos de cabinas:

i) Cabinas de seguridad biológica de

Clase I
Trabaja a “presión negativa” (absorbiendo aire) y está abierta frontalmente. El aire
procedente del local se introduce por la abertura frontal y es extraído al 100% de la misma.

El aire extraído de la cabina es descontaminado antes de su vertido a la atmósfera a través

de filtros HEPA.

No previene la exposición por contacto a materiales peligrosos, ni tampoco garantizan la

protección del producto manipulado.

ii) Cabinas de seguridad biológica de Clase II

El área de trabajo es recorrida por

un flujo descendente de aire filtrado
estéril (flujo laminar vertical).

Protege a los trabajadores de los

materiales manipulados y protege
dichos materiales de la
contaminación externa. La
protección al trabajador se da por la
creación de una barrera de aire
formada por la entrada de aire desde
el local a través de la abertura
frontal, y por el flujo de aire estéril.
Ambos flujos de aire son conducidos
a través de unas rejillas y
redistribuidos, de forma que una
parte es extraído mientras que el
resto es recirculado sobre el área de
trabajo.

Tanto el aire recirculado como el extraído pasa a través de filtros HEPA. Un tanto por ciento
del mismo es extraído mientras que el resto es recirculado sobre el área de trabajo.

iii) Cabinas de seguridad biológica

de Clase III

La cabina está herméticamente

sellada. Por ello, el trabajador está
completamente separado del
trabajo que esté realizando
mediante barreras físicas (panel
frontal completamente cerrado,
manipulación a través de guantes
de goma). Ofrece el grado
máximo de protección al
trabajador, obviando incluso la
exposición por contacto.
El aire es tomado del local o del exterior y filtrado (filtro HEPA). Suele haber dos filtros
HEPA montados en serie.

 Selección de la cabina de seguridad biológica

La selección del tipo de cabina más adecuado deberá basarse en estos criterios:

 Riesgos que presenta el material manipulado.

 Posible generación de aerosoles debidos a las técnicas manipulativas empleadas.
 Grado de protección a obtener frente a la contaminación ambiental.
 7. TRATAMIENTO DE LOS RESIDUOS PARA SU ELIMINACIÓN

Existen 3 métodos prácticos para el tratamiento de los materiales desechados y los

deshechos contaminados:

 Esterilización en autoclave: vapor a 121 ºC durante 15/20 minutos.

 Incineración.

 Desinfección química (pipetas recuperables, material que no puede autoclavarse,

superficies, etc.)

Para saber cómo tratar el material que hay en el laboratorio es importante conocer su
procedencia y qué ha contenido.
 TEMA 3: DESCONTAMINACIÓN Y AGENTES ANTIMICROBIANOS

1. INTRODUCCIÓN
Razones principales para controlar o eliminar microorganismos:
 Combatir las enfermedades infecciosas y evitar su transmisión.
 Evitar la contaminación y deterioro de agua y alimentos.
 Evitar la contaminación y deterioro de otros materiales valiosos, tales como madera,
fibras textiles, etc.
 Evitar la contaminación de medios de cultivo y otros materiales de laboratorio para
evitar errores en el análisis microbiológico.

Los microorganismos se eliminan, se inhibe su crecimiento, o se matan mediante agentes

físicos o químicos. Hay una gran variedad de ellos, y cada uno tiene sus propias limitaciones
diferentes, por ello es necesario elegir el más adecuado en cada caso.

 Definiciones
a. Asepsia: ausencia de microorganismos causantes de enfermedades.
b. Aséptico: que no es séptico, que se encuentra libre de gérmenes patógenos.
c. Esterilización: es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto
esterilizado está libre de microorganismos vivos.
d. Desinfección: es el proceso de destruir las formas de vida vegetativa (activa), pero no
necesariamente las esporas. Un desinfectante normalmente es un agente químico que
se usa sobre objetos, no sobre seres humanos o ganado.
e. Antiséptico: agente que umpide el desarrollo de los microorganismos (por impedir su
crecimiento o por matarlos) Generalmente se refiere a sustancias aplicadas al cuerpo
humano o a animales domésticos.
Condiciones de asepsia: aquellas en las que se impide el desarrollo y la contaminación
por microorganismos.
f. Saneamiento: consiste en reducir la población bacteriana a niveles aceptables.
Normalmente se logra mediante un agente químico que mata el 99'9 % de las bacterias.
g. Bactericida: es un agente que mata bacterias.
Fungicida: Sustancia que mata hongos.
La sustancia que mata todos los tipos de microorganismos es un microbicida o
germicida.
h. Bacteriostático: es una sustancia que no mata bacterias pero impide su crecimiento.
Fungistático: Sustancia que impide el crecimiento de los hongos.
La sustancia que impide el crecimiento de todos los microorganismos es un
microbiostático.
 Debemos tener en cuenta que hay sustancias que a una determinada [ ] son
bacteriostáticos mientras que a [ ] más elevadas llegan a ser bactericidas. En general, los
agentes que matan terminan en “-cida” mientras que lo que detienen el crecimiento
terminan en “-stático”.
i. Agentes antimicrobianos: son los que impiden el crecimiento, la actividad o la vida de
los microorganismos. De esta forma, tanto los bactericidas, fungicidas, bacteriostáticos
y fungistáticos son agentes antimicrobianos.
Podemos diferenciar dos grupos principales:
 Antibacterianos: son los que actúan sobre bacterias (bactericidas y
bacteriostáticos).
 Antifúngicos: actúan sobre los hongos (fungicidas y fungistáticos).
j. Agentes quimioterapeuticos: Sustancias químicas usadas para combatir infecciones o
tumores malignos. Deben de cumplir la condición de ser poco tóxicos para el paciente
pero muy activos contra el microbio parásito, es decir, deben ser selectivos. Un
subgrupo muy importante son los antibióticos, que originalmente eran extraídos de
algunos seres vivos pero hoy en día se producen mayoritariamente mediante síntesis
química.

2. CURVA DE LA MUERTE BACTERIANA

Se entiende por muerte en microbiología a la pérdida definitiva de la capacidad de

reproducción. Los microorganismos viables tienen la capacidad de multiplicarse (crecer). En
cambio, los muertos no se multiplican (no
crecen).

Cuando una población de bacterias se

somete a un tratamiento antibacteriano, si
este tratamiento es drástico (como poner al
rojo un asa de siembra) mueren todas de
modo casi instantáneo. Con un tratamiento
más suave (como la aplicación de un
desinfectante diluido) no mueren todas al
mismo tiempo, sino que hay una curva
exponencial decreciente de células
bacterianas viables:
 3. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LA ACCIÓN ANTIMICROBIANA

a) Temperatura: la acción de los germicidas químicos es más rápida al elevarse la

temperatura.
b) Tipo de microorganismo: las distintas especies de microorganismos tienen resistencias
diferentes a los distintos agentes antimicrobianos.
c) Estado fisiológico de los microorganismos : las células jóvenes (fase de crecimiento
exponencial) son más sensibles que las viejas (fase estacionaria). Las esporas son aún
más resistentes.
d) Dureza del tratamiento antimicrobiano : cuanto más drástico es el tratamiento antes
mueren o dejan de crecer los microorganismos.
e) Características del medio ambiente microbiano: tienen una gran influencia en la
velocidad y eficacia de la acción antimicrobiana. Por ejemplo, la presencia de materia
orgánica a concentraciones elevadas suele disminuir la eficacia antimicrobiana; también
un medio muy viscoso puede disminuir la penetración del agente antimicrobiano.

Fases de crecimiento:

1. Latencia: los
microorganismos se
acostumbran al medio
(se adaptan a él).
2. Exponencial: aumentan
su nº.
3. Estacionaria: su nº se
mantiene pues unas
mueren, y otras nacen.
4. Muerte.

4. MODO DE ACCIÓN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS

i) Dañando la pared celular: la célula termina lisándose.
ii) Alterando la permeabilidad celular: la membrana deja de ejercer su función de
permeabilidad selectiva de nutrientes y muere por falta de nutrientes, etc..
iii) Alterando las macromoléculas de proteínas y ácidos nucleicos: algunos agentes,
especialmente el calor, desnaturalizan estas macromoléculas, así que dejan de ejercer
su papel imprescindible para el metabolismo microbiano. (Desnaturalización: alteración
de la estructura de la macromolécula, por lo que deja de ejercer sus funciones).
iv) Inhibiendo determinados enzimas: se alteran algunas rutas metabólicas que son
imprescindibles para la reproducción o para la vida de la célula.
v) Inhibiendo la síntesis de ácidos nucleicos: el metabolismo celular se ve alterado, de
modo que se impide la reproducción del microorganismo y, más adelante, se da su
muerte.
5. CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES FÍSICOS

Los agentes físicos que más influyen en la fisiología de los microorganismos son: tº,
humedad-desecación, radiaciones ionizantes, y agentes mecánicos.

A. Temperatura elevada

Hay 2 formas de controlar microorganismos por acción del calor: por calor húmedo, y por
calor seco.

 Calor húmedo (ebullición, tyndalización, pasteurización, vapor a presión: autoclave…):

La tº elevada combinada con un alto grado de humedad es uno de los medios más
eficaces de matar microorganismos.
Mecanismo de acción: destruye los microorganismos por coagulación y desnaturalización
de las proteínas (incluidas sus enzimas). Es más rápido y eficaz que el calor seco, que
destruye los microorgasnismos al oxidar su materia orgánica en presencia de aire.
- En bacterias: las células vegetativas son más sensibles al calor que las esporas: las
células vegetativas de la mayoría de las bacterias mueren en 5-10 minutos a 60-70 °C
de calor húmedo, mientras que sus esporas necesitan temperaturas superiores a
100 ºC durante unos pocos o muchos minutos.
- En hongos: Son más sensibles que las bacterias: sus células vegetativas mueren en
5-10 minutos a 50-60°C de calor húmedo, y sus esporas mueren en el mismo tiempo
pero a 70-80°C.
- En virus: tienen una resistencia similar a la de las células vegetativas bacterianas
mesófilas.

Vapor a presión y autoclave: El vapor a presión permite esterilizar con calor húmedo a
temperaturas superiores a 100°C. El fundamento es el siguiente: la tº de ebullición del
agua depende de la presión externa, de modo que una presión elevada permite que la
temperatura de ebullición también sea alta. Esto permite que a tº superiores a 100 °C se
pueda tener agua en fase líquida, lo que garantiza que la fase gaseosa estará saturada
de vapor. El aparato de laboratorio que permite alcanzar esta situación es el autoclave
y funciona de modo similar a una olla a presión regulada.
Al poner en marcha el autoclave, la 1ª porción del vapor producido se emplea en
arrastrar el aire del interior hacia fuera (purga de aire). En el autoclave no es la presión
lo que mata a los microorganismos, sino la temperatura elevada del vapor. Todos los
recipientes que se introduzcan en el autoclave deben estar abiertos, al menos
parcialmente, de modo que el vapor de agua pueda penetrar en ellos.
Precauciones al usar el autoclave:
1) La tapa debe cerrarse con fuerza para asegurar que no escape vapor cuando la
presión sea elevada.
2) No abrirlo hasta que la presión no sea igual a la presión ambiental (el manómetro
indicará que P = 0 atm) y el termómetro indique que la tº ha bajado de 98-95 ºC. Si lo
abriéramos, saldría de golpe mucho vapor muy caliente que podría quedar, además de
que los líquidos del interior hervirían de repente y se derramarían.
3) No introducir frascos ni tubos cerrados herméticamente (podrían estallar por la
presión). Los que tengan tapones a rosca deben dejarse con el tapón a medio
roscar.
4) Los frascos y tubos con líquido nunca deben llenarse hasta el borde, sino hasta 2/3
de su volumen máximo, pues de la presión, a veces hierven un poco y si estuvieran
totalmente llenos, se desbordarían.
5) No tocar la tapa del autoclave: puede ocasionar quemaduras.
6) Antes de ponerlo en marcha hay que comprobar que tiene suficiente cantidad de
agua.
7) La carga debe repartirse en el interior del cestillo de modo equilibrado y procurando
que queden espacios entre los distintos recipientes para que el vapor circule
libremente entre ellos.

Normas para una correcta esterilización:

1) Para que la esterilización de medios de cultivo sea eficaz, la tº y el tiempo
seleccionados deben alcanzarse en todo el líquido. No conviene esterilizar juntos
recipientes grandes y pequeños.
2) Los recipientes con cierre hermético deben ser introducidos en el autoclave sin
cerrar totalmente el tapón, para facilitar la entrada del vapor durante el proceso.
3) Los recipientes vacíos precisan de un tiempo de esterilización mayor que los
recipientes con líquido en su interior.
4) Algunas sustancias químicas son termolábiles a las temperaturas de esterilización
con autoclave: será necesario utilizar otros sistemas de esterilización, como el
filtrado.

Fases del ciclo de esterilización:

a) Fase de calentamiento de la cámara: desde que se pone en marcha hasta que el
interior de la cámara alcanza la temperatura programada (normalmente 121 °C).
b) Fase de penetración del calor al interior de la carga: a medida que la cámara se va
calentando, el calor va atravesando las paredes de los recipientes y calentando su
contenido.
c) Fase de esterilización: es el tiempo durante el cual la carga se mantiene a la
temperatura elegida. A 121°C suele ser de 15 minutos.
d) Fase de enfriamiento: la tº de la cámara va descendiendo lentamente hasta la tº
elegida para abrirlo (95 °C). Al bajar hasta 100 °C la presión también habrá bajado a 0
atm (no hay diferencia de presión entre el interior de las cámara y el exterior).

El ciclo de esterilización más usado es de 121º C durante 15 (o 20 minutos), con el que se

alcanza una presión en el interior del autoclave a 1 atm superior a la presión ambiental.

El autoclave se usa en todo laboratorio de microbiología de modo rutinario. Se

esterilizan aquí: medios de cultivo sólidos y líquidos recién preparados, medios de
cultivo ya usados antes de tirarlos a la basura para matar los microorganismos
cultivados, y diferentes disoluciones, tapones de caucho, etc. Algunos autoclaves tienen
ciclos de secado que permiten la esterilización de material de vidrio y metálico.

Pruebas de eficiencia del autoclave para comprobar su correcto funcionamiento:

a. Indicadores físicos: Revisiones periódicas del manómetro, termómetro, reloj,

válvulas y demás componentes.
b. Indicadores biológicos: Por ej., las tiras de esporas: son tiras de papel impregnadas
de esporas bacterianas (suele usarse Bacillus stearothermophilus) envasadas en
sobres permeables al vapor. El sobre se introduce en el autoclave, se somete a un
ciclo de esterilización normal, y después se cultiva la tira. Si el autoclave funciona bien,
no debe haner sobrevivido ninguna espora (el cultivo sería negativo).
c. Indicadores químicos: Los hay de varios tipos. Los más comunes indican mediante
un cambio de color si efectivamente se alcanza la temperatura deseada.

Tyndalización o esterilización fraccionada al vapor: Emplea el calor húmedo. Se usa

cuando un material o sustancia no puede calentarse por encima de los 100ºC sin que
resulte dañado.

Consiste en elevar la tº del material que se quiere someter a tratamiento, entre 60ºC y
100ºC entre 30 y 60 minutos, varias veces seguidas con sucesivos periodos de
incubación a intervalos de 24 horas. Las esporas germinan durante los periodos de
incubación y en la siguiente exposición al calor, las células vegetativas se destruyen:

- 1er calentamiento: mueren las formas vegetativas. Mantener la estufa 24 h para

inducir el paso de las esporas a formas vegetativas.
- 2º calentamiento: mueren las nuevas formas vegetativas. Mantener la estufa por 24
h para inducir el paso de alguna espora rezagada a forma vegetativa.
- 3er calentamiento: elimina las formas vegetativas formadas en último término.

Agua hirviendo: No consigue esterilizar, sino desinfectar, por lo que no debe usarse en
el laboratorio como sustituto de la esterilización.
 Pasteurización: es la exposición de un material a una tº alta bien controlada durante un
tiempo determinado. Se usan 62 ºC durante 30 minutos o 72 °C durante 15 minutos.
Algunos microorganismos sobreviven, y por ello los alimentos pasteurizados hay que
conservarlos refrigerados. No es un proceso de esterilización.

 Calor seco (flameado directo, incineración, horno Pasteur…): aumenta los procesos de
oxidación (que destruye los microorgasnismos al oxidar su materia orgánica en
presencia de aire.).

Flameado: es un calor directo: Cuando pasamos una pipeta o la boca de un tubo de

ensayo por la llama de un mechero realizamos una esterilización bastante fiable. Lo
mismo ocurre con las asas o hilos de siembra.

Incineración: el material contaminado se destruye por combustión directa o en horno

crematorio. Se emplea en hornos para destruir esqueletos, animales de laboratorio
infectados, material de laboratorios clínicos y otros materiales infectados por
patógenos (gasas, vendas, jeringas, agujas, etc.). La incineración a pequeña escala la
llevamos a cabo en el asa de siembra cuando lo ponemos al rojo vivo en el mechero
Bunsen, pero debemos tener cuidado con chisporroteos, pues pueden diseminar gotitas
con microorganismos. Para evitarlo, antes tocamos el asa con un poco de papel
absorvente, que desecharemos en un frasco cementerio.

Estufa de Pasteur u hornos de aire caliente (esterilización por aire caliente): Requiere
tratamientos severos, 171ºC durante 1 hora, 160ºC durante 2 horas, etc. Los objetos de
gran tamaño requieren incluso más tiempo.

B. Bajas temperaturas

No mata a los microorganismos, sólo ralentiza o detiene su crecimiento. Si se mantiene

durante mucho tiempo el descenso de temperatura, terminarán muriendo.

Una excepción es la técnica del choque frío, que consiste en someter un cultivo en
crecimiento a un enfriamiento rápido y repentino, por lo que muchos microorganismos
morirán rápidamente.

Ni el frío ni la congelación son métodos de esterilización: son métodos de conservación.

C. Desecación

Produce la detención del crecimiento y después, paulatinamente, la disminución de la

población viable. Su efecto depende de la especie microbiana tratada. Se utiliza para
conservar algunos alimentos y para conservar cultivos. Produce la muerte de muchas
bacterias, resistiendo sólo algunas endosporas muy resistentes.

Se puede llevar a cabo por dos métodos: evaporación y liofilización.

 Evaporación: no se usa en el laboratorio porque causa daños químicos, pero es muy
usada en la industria alimentaria. El mecanismo de inactivación se debe al calor, la
distorsión de las membranas celulares y la falta de agua.
 Liofilización: se elimina el agua de una muestra por previa congelación y sublimación a
baja presión, evitando los daños provocados por el secado mediante calor. Detiene el
crecimiento microbiano.

D. Presión osmótica

La mayoría de las bacterias sobreviven en disoluciones de osmolaridad muy baja gracias a la

elevada resistencia de su PC.

Los medios muy hipertónicos inhiben el crecimiento de la mayoría de los microorganismos

y también pueden dañar las células por plasmólisis, acabando con la vida de
microorganismos (en estos medios, el agua sale de la célula, aumenta la presión osmótica
interna, y la MP se separa de la PC, dándose la plasmólisis).

Algunos géneros bacterianos resisten a altas concentraciones de sales (halófilas) o a

azúcares (osmófilas).

E. Radiaciones

Existen 3 tipos de radiaciones usadas como antimicrobianos: la radiación IR, UV, y las
radiaciones ionizantes. Las que poseen longitud de onda más bajas (que tienen más
frecuencia, es decir más energía) son las más efectivas contra los microorganismos.

 Rayos UV (no ionizantes) : Engloban radiaciones de 10 a 400 nm, aunque las más letales
son las de 265 nm debido a que dañan a la molécula de ADN. Los microorganismos
disponen de sistemas de reparación de éste, pero mucha intensidad de RUV hace
inservible este mecanismo porque sobrepasa ampliamente su capacidad.
Además de dañar el ADN, producen O3 en contacto con el aire, que es tóxico para algunos
microorganismos, y H2O2, que en cantidades elevadas también lo es.
 Radiaciones ionizantes (X e Y) : Son más penetrantes y energéticas que las UV. Su
mecanismo de acción es producir una serie de ionizaciones en cadena (radicales libres)
que son capaces de degradar el ADN y las proteínas, provocando la muerte celular.
A nivel de laboratorio se utilizan poco, se utilizan mucho a nivel industrial para
esterilizar plásticos como placas de Petri, botellas para cultivo de tejidos, etc.
Desventajas: requieren un equipo especial y personal entrenado, no todos los materiales
resisten el tratamiento, pueden dar reacciones no deseadas en alimentos.

F. Otros procedimientos antibacterianos

Filtracción: Todos los microorganismos, excepto los virus, pueden ser eliminados de los
líquidos por filtración (por ello no es una esterilización propiamente dicha, porque los virus
atraviesan el tamaño de poro utilizado). Su mecanismo de acción es evitar el paso de las
células suspendidas, que no atraviesan el tamaño del poro.
En el

laboratorio de mb se utiliza mucho para eliminar microorganismos de disoluciones líquidas

que se degradan con el uso de calor (termolábiles), como vitaminas, antibióticos, etc.

En la industria se está introduciendo igualmente para reemplazar la pasteurización en

líquidos que se degradan por el calor, como en vinos dulces, cervezas “filtradas en frío”,
etc.

Los filtros HEPA son muy eficaces para los sistemas de ventilación ambiental, como
campanas de flujo laminar, ventilación de los laboratorios, etc.

6. CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES QUÍMICOS

Son sustancias químicas que, a determinadas concentraciones, son capaces de matar o
impedir el crecimiento de los microorganismos. Ninguna de ellas es óptima para todos los
microorganismos en todas las situaciones medioambientales posibles.

Para seleccionar la sustancia química más adecuada hay que tener en cuenta:

 Naturaleza del material que se va a tratar.

 Tipo de microorganismos que se quieren eliminar.
 Condiciones ambientales (temperatura, pH, presencia de materia orgánica extraña,
etc.).

A. Fenol y compuestos fenólicos: Son los desinfectantes más importantes y más potentes.
Hay que usarlo a bajas concentraciones 2-5 ‰, y es muy efectivo contra las bacterias y
menos contra los virus, hongos y esporas. Sin embargo tiene mal olor y es tóxico, por lo
que apenas se usa actualmente.
Se ha sustituido por la clorhexidina, que no es un compuesto fenólico pero tiene
muchas de sus propiedades y es menos tóxico.

B. Alcoholes: Son deshidratantes muy potentes y desnaturalizan las proteínas de los

microorganismos con los que están en contacto. También disuelven la capa lipídica de
las MP.
El alcohol etílico es un desinfectante eficaz contra células vegetativas, pero no actúa
contra las esporas bacterianas. La concentración más eficaz es al 70 % v/v en agua (70°).
El isopropanol es más efectivo y solo un poco más tóxico. Sin embargo, tiene el
inconveniente de que no destruye las endosporas.
C. Halógenos y sus compuestos: Son eficaces por su acción oxidante y parece ser que
también por su acción halogenante de moléculas orgánicas. Se utilizan, en general, como
desinfectantes y en procesos de saneamiento.
Iodo: Es uno de los mejores desinfectantes de la piel humana (desinfecta la piel sin
dañar los tejidos) y éste es su principal uso, aunque es algo irritante. Es efectivo contra
esporas en una concentración de 1600 ppm de iodo libre.
Cloro: Se usa como desinfectante en las formas de cloritos, hipocloritos, cloraminas
inorgánicas y orgánicas. Sus propiedades desinfectantes dependen de su potencial
para generar cloro activo (Cl2). La actividad microbicida del cloro disminuye mucho en
presencia de materia orgánica (ya que reacciona con ella).

D. Metales pesados y sus compuestos : La mayoría de los metales pesados y sus compuestos
dañan a los microorganismos. Los más eficaces son el Hg, la Ag y el Cu. Sin embargo, su
uso está restringido a aplicaciones específicas debido principalmente a su toxicidad para
el hombre y animales.

E. Colorantes: Diferentes sustancias que actúan como colorantes tienen actividad

germicida. Destacan el cristal violeta, el verde brillante y el verde malaquita. Por regla
 general, son más eficaces contra bacterias G+ que contra las G-. Actualmente, se
utilizan principalmente para preparar medios selectivos.

F. Detergentes: Se usan para lavar y sanear la piel, cabello, superficies, instrumentos, etc.,
por facilitar el arrastre mecánico de las bacterias por un chorro de agua. Además,
algunos tienen altas propiedades bactericidas. Destacan los detergentes catiónicos
cuyo catión es un compuesto de amonio cuaternario: tienen gran poder bactericida y
también actúan como fungicidas y contra protozoos patógenos. Se usan como
antisépticos de la piel y para sanear carnicerías, plantas procesadoras de alimentos, etc.

G. Ácidos y alcalisis: Los pH extremos son letales para la inmensa mayoría de los
microorganismos. Son excepcionalmente resistentes las micobacterias y pocos
microorganismos más. Los ácidos son, en general, más eficaces que los álcalis. Sin
embargo, sus aplicaciones como desinfectantes son escasas debido a su capacidad
corrosiva.

H. Esterilizadores gaseosos: Hay muchos productos hechos con materiales que no se

pueden esterilizar por medio de altas temperaturas o de esterilizadores líquidos. Con
estos materiales se emplean los esterilizadores gaseosos.
Óxido de etileno: Es un poderoso germicida usado para esterilizar salas en hospitales,
industrias y laboratorios, y también muchos productos entre los que se encuentran las
placas de Petri desechables y los hisopos. Su espectro de actividad es muy amplio e
incluye también las esporas.

I. Peróxido de hidrógeno: es un antiséptico débil, con capacidad oxidante, y formadora

de radicales libres. Actualmente, el H2O2 se usa como desinfectante de superficies o
descontaminante de gabinetes biológicos debido a que no posee las propiedades
tóxicas y cancerígenas del óxido del etileno y el formaldehído.