[INFORME N01 MICROBIOLOGIA

AMBIENTAL-FIA]

INFORME N01
Material de laboratorio de microbiologa ambiental, limpieza, desinfeccin y
esterilizacin. Preparacin de medios de cultivo

OBJETIVOS:

Identificar y reconocer los instrumentos de laboratorio.

Poner en prctica las tcnicas de esterilizacin
Mtodos de desinfeccin y esterilizacin de los instrumentos y/o materiales
Conocer las normas para la preparacin adecuada de medios de cultivo

FUNDAMENTO TEORICO:
PRESENTACIN DEL MATERIAL DE LABORATORIO
Adems de un ambiente apto para el trabajo microbiolgico, el laboratorio de
microbiologa requiere de una instrumentacin bsica de uso corriente en
microbiologa, como la siguiente
Tubos de ensayo:

Destinados a conservar medios de cultivo en pequeos volmenes. Se utilizan tubos

de vidrio de diversos tamaos, con tapa a rosca o a presin. El vidrio debe ser de
buena calidad, neutro, transparente e inalterable a los tratamientos.
Placas de Petri:

Cajas de vidrio de seccin circular, con tapa. Existen de diferentes tamaos segn su
uso, aunque las ms frecuentemente utilizadas tienen 10 cm de dimetro.

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Pipetas graduadas:

Para su uso en el laboratorio de microbiologa se les coloca un tapn de algodn en el

extremo superior, de manera de impedir que el operador aspire lquidos
potencialmente contaminados, o que contamine el medio de cultivo al aspirarlo. Se
utilizan para realizar inoculaciones y diluciones.
Para manejar pequeos volmenes (menores de 1 ml) se recomienda el uso de
pipetas automticas que miden exactamente el volumen deseado (500, 150, 50 Ul
etc.); en el extremo se colocan puntas estriles que se reemplazan cuando se desea.

Pipetas Pasteur:

son tubos de vidrio terminados en capilar. Se usan para transportar pequeos

volmenes de lquido o para sembrar a partir de medios de cultivo lquidos.

Esptula de Drigalsky:

Se construye con una pipeta Pasteur larga o con una varilla de vidrio. Se calienta el
extremo en la llama del mechero y se dobla en ngulo recto unos 4 cm, esta ltima
porcin se dobla nuevamente del mismo modo. Se utiliza para distribuir una muestra
lquida que se siembra sobre la superficie de un medio de cultivo slido.

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Mango o cabo de Koll:

Sirve para sujetar al ansa, aguja o esptula de platino o aleaciones metlicas de lenta
oxidacin y rpido enfriamiento. Est compuesto por un mango de un material aislante,
que se prolonga en un vstago metlico que sostiene mediante una tuerca un alambre.
Cuando el extremo del alambre tiene forma de anillo se denomina ansa; si se deja el
extremo recto se llama aguja y si se dobla en ngulo recto al extremo libre se lo llama
gancho.

Marcador permanente al solvente:

Son marcadores resistentes al agua, se utilizan para marcar o escribir sobre

superficies de vidrio.
Portaobjetos:

Lmina rectangular de vidrio incoloro de 2,5 cm x 7,5 cm y aproximadamente 1 cm de

espesor. Se utilizan para hacer observaciones microscpicas de los microorganismos,
ya sea en fresco o fijados.
Portaobjetos excavados:

Se utilizan para realizar exmenes con gota pendiente, para ello presentan una
depresin de unos 10 a 12 mm de dimetro. En este caso el material a observar es
una gota de lquido suspendido.
Cubreobjetos:

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Pequeas lminas de vidrio transparente, de poco espesor (0,11 a 0,23 mm), usados
para cubrir los preparados realizados sobre el portaobjetos para su posterior
observacin microscpica.
Tubos o campanitas de Durham:

Pequeos tubos (de unos 5x30 mm) que son colocados en forma invertida dentro de
los tubos de ensayo que contienen medio de cultivo lquido, sirven para verificar la
produccin de gas por parte de los microorganismos.
Erlenmeyer:

Se utilizan para preparar los medios de cultivo, o para el desarrollo de

microorganismos en medio lquido con agitacin o aireacin.
Otros elementos y aparatos:
Al material citado debe agregarse por su uso frecuente, mecheros y gradillas. Los
aparatos ms comnmente usados en el laboratorio de microbiologa son:
microscopios, lupas, autoclave, estufas de esterilizacin y cultivo, bao termo
regulable, balanzas, espectrofotmetro, centrfuga, heladeras, etc.
La microbiologa es la ciencia que estudia los microorganismos en cualquiera de sus
aspectos: morfologa, estructura y composicin qumica, fisiologa, gentica,
taxonoma y ecologa. Adems de estudiar otros aspectos colaterales relacionados de
su interaccin con el hombre tales como, capacidad de producir enfermedades o las
aplicaciones biotecnolgicas.

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ESTERILIZACION:

Para poder desempear correctamente las tareas en un laboratorio de microbiologa,

es indispensable contar con conocimientos tericos acerca de los diferentes mtodos
de control del crecimiento microbiano (mtodos de esterilizacin, desinfeccin,
asepsia, etc.). Tambin con un buen manejo prctico de los aparatos destinados a tal
fin, del flameado de tubos y esterilizacin de asas y agujas a la llama del mechero.
CONCEPTOS
Por control del crecimientos microbiano, se entiende tanto la inhibicin del
crecimiento microbiano (evitar su multiplicacin) como la destruccin de aquellos. En
este contexto se emplean una serie de trmino:
Esterilizacin: Es el proceso de destruccin o eliminacin completa de toda forma de
vida existente en el interior o en la superficie de cualquier material, por medio del calor,
radiaciones, filtracin, etc. Por lo tanto, la esterilizacin es un trmino absoluto e
incluye la destruccin de las esporas y formas vegetativas, los virus, etc.
Desinfeccin: Es un proceso en el que se destruyen las formas vegetativas de los
microorganismos ms comunes pero no las esporas. Generalmente los desinfectantes
son productos qumicos excesivamente txicos para ser usados directamente sobre
tejidos vivos. Muy pocos desinfectantes llegan a esterilizar.
Antisepsia: Es un proceso en el que se destruyen las formas vegetativas de los
microorganismos patgenos ms comunes, pero no necesariamente esporas,
presentes sobre el cuerpo, la piel, las mucosas, los tejidos vivos, etc. El agente
empleado se denomina antisptico.
Asepsia: Se refiere a la condicin de ausencia de microorganismos de un objeto o
rea. Por ejemplo, las tcnicas aspticas son las que evitan la contaminacin propia
5

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de otros o de los materiales durante el trabajo.
Microbios tasis: Es una condicin por la que el crecimiento o la multiplicacin de los
microorganismos estn inhibidos, lo que no quiere decir que sean destruidos. Si el
agente microbios tico es eliminado, el crecimiento microbiano puede resurgir. De
igual definicin pero de aplicacin a la correspondiente categora de microorganismos
son los fungistticos y los bacteriostticos.
Microbicida: Es el agente que destruye las formas viables de los microorganismos.
De igual significado pero con mbito ms restringido son los trminos fungicida y
bactericida.
La naturaleza de estos agentes en algunos casos es fsica y en otros qumica.
Ejemplos de Agentes desinfectantes y antispticos de naturaleza qumica son: xido
de etileno, formaldehido, perxido de hidrgeno. Hay una serie de posibilidades para
el control de los microorganismos basadas en el empleo de agentes fsicos como: el
calor, las radiaciones, la filtracin.
Mtodos fsicos

Calor hmedo (en autoclave de

vapor)
Calor seco (en horno de
esterilizacin)
Flama directa
Incineracin
Aire caliente
Pasteurizacin
Ebullicin
Vapor
Tindalizacin
Radiacin
Radiacin ionizante

Radiacin no ionizante: (p.

ej:Radiacin infrarroja y
Radiacin ultravioleta)
Mtodos qumicos

Alcoholes
Etanol
Alcohol isoproplico
Aldehdos
Formol
Glutaraldehdo
Fenoles
Fenol (cido carblico)
Xileno
xido de etileno
Perxido de hidrgeno

AGENTE FSICO: EL CALOR

El calor es uno de los agentes fsicos ms usados. Su accin depende de la
temperatura alcanzada y del tiempo de aplicacin. De la consideracin de stos dos
aspectos surgen las siguientes expresiones:

Punto trmico mortal: es la menor temperatura capaz de matar una

suspensin bacteriana en 10 minutos (tiempo constante y temperatura
variable).
Tiempo trmico mortal: es el menor tiempo necesario para matar una
suspensin bacteriana a una temperatura determinada (tiempo variable y
temperatura constante).

Para medir el efecto del calor se debe tener en cuenta si se trata de formas
vegetativas o esporuladas (de resistencia). Para eliminar las formas vegetativas no se
requiere de temperaturas muy altas ya que la mayora se destruye a los 50 y 70C,
especialmente las patgenas. Las bacterias esporuladas requieren de temperatura
superiores a los 100C. Adems de la temperatura y el tiempo de exposicin es
importante tener en cuenta la humedad, el pH y la naturaleza del material a
esterilizar. La humedad hace ms efectivo el poder de penetracin del calor; en cuanto
al pH, el agregado de ciertas sales alcalinas aumenta la temperatura de ebullicin.
Fundamento de la esterilizacin por calor: El calor acta desnaturalizando
(coagulando) las protenas. En las formas esporuladas (de resistencia), esta accin se
ve disminuida por la presencia de lpidos formando parte de su estructura qumica, que
acta protegiendo las uniones peptdicas de las protenas.
FORMAS POSIBLES DE LA UTILIZACIN DEL CALOR COMO AGENTE
ESTERILIZANTE
El calor puede ser aplicado para la esterilizacin de tres maneras diferentes:
CALOR SECO. Es aire a temperatura elevada. Existen tres tipos:
a) Fuego directo: Consiste en exponer directamente a la llama el material a
esterilizar, lo que se logra por oxidacin violenta. Este mtodo se utiliza para asas,
agujas, flameado de bocas de tubos u otros recipientes y destruccin de material
contaminado. En las llamas de los mecheros Bunsen se alcanzan temperaturas
superiores a los 2.500C, por lo que una breve exposicin es suficiente. Sin embargo,
cuando las ansas de siembra estn muy cargadas con microorganismos, la aplicacin
directa de la llama provoca la dispersin irregular del contenido de aqullas, con el
consiguiente peligro de la contaminacin. Un sistema alternativo a los mecheros son
los incineradores elctricos bacterianos, en los que el riesgo de contaminacin no
existe., ya que la dispersin es recogida en el tubo del aparato.
b) Incineracin en hornos crematorios: Se aplica a elementos contaminados de
los que no importa su destruccin, como apsitos, cadveres de animales infectados o
material plstico contaminado. Se utiliza la combustin directa o el horno crematorio.
c) Aire caliente (ej. Horno Pasteur): Se emplean las estufas de calor seco, en
las que el aire caliente circula por el espacio que existe entre la doble pared,
transmitiendo as el calor a los objetos que se encuentran en su interior. Los

microorganismos se mueren por oxidacin de sus estructuras previa deshidratacin,

pudindose llegar a una ligera carbonizacin.
Tiempo requerido: Una hora y media a dos horas, a una temperatura de 160 a 180C.
El tiempo se mide desde el momento en que se alcanz la temperatura indicada y est
condicionado por la cantidad de material y su distribucin dentro de la estufa. El aire
caliente no tiene mucho poder de penetracin, por esta razn es que se requiere
mayor temperatura y tiempo que con otros mtodos.
Aplicacin: se utiliza preferentemente para esterilizar material de vidrio. Recordar que
todo el material debe ir perfectamente acondicionado, preferentemente envuelto en
papel blanco de modo tal que una vez retirado de la estufa, permanezca estril hasta
el momento de ser usado.
Descripcin de la estufa: La estufa de esterilizacin a seco es una caja metlica de
paredes triples. La pared interior es generalmente de acero inoxidable y presenta
orificios para la libre circulacin del aire caliente. La pared intermedia encierra, junto
con la externa, el material aislante, que puede ser lana de vidrio o amianto. La fuente
de calor es una resistencia elctrica aunque tambin existen estufas a gas. Viene
provista de un termorregulador para graduar la temperatura deseada.
En la cara superior de la estufa existen orificios para permitir la salida de gases y
vapores, pudiendo existir otro para la colocacin de un termmetro en caso de no
traerlo incorporado. En el interior posee rejillas metlicas de altura graduable para
acondicionar sobre ellas el material a esterilizar.
Uso: esterilizacin de material de vidrio y otros materiales termo resistentes que
interese mantenerlos secos. Todo el material a esterilizar debe estar debidamente
empaquetado con papel de estraza o contenido dentro de cajas metlicas.
CALOR HMEDO. El vapor de agua es uno de los mtodos ms eficaces para
destruir microorganismos y, a igualdad de temperatura, es mucho ms eficaz que el
calor seco (aire). Hay varias formas de emplear el calor hmedo.
a) Agua a ebullicin: Se colocan los objetos en el agua y se lleva a ebullicin
durante un tiempo no menor de quince minutos. Se utiliza para jeringas, agujas,
ampollas, etc. Precaucin: Los grmenes esporulados y ciertos virus no mueren con
15 minutos de ebullicin.
b) Vapor fluente: Consiste en colocar el material en el autoclave pero con la
espita abierta. Se utiliza para esterilizar sustancias que se descomponen por encima
de los 100 C. Ejemplos: medios de cultivo que contienen ciertos glcidos, leche,
antibiticos, etc. Este mtodo puede complementarse con la Tindalizacin (se explica
ms adelante).
c) Vapor a presin: Es uno de los mtodos ms utilizados; se emplea el
autoclave para esterilizar material en general y particularmente para medios de cultivo
y otros compuestos qumicos utilizados en el laboratorio de microbiologa.
Descripcin del autoclave:
El autoclave consiste en un cilindro de bronce, horizontal o vertical, con una tapa del
mismo material que se apoya sobre una arandela de goma y se cierra por pestillos o
cerrojos quedando hermticamente cerrado. Adems, posee en la parte superior una
llave de vapor (o espita), un manmetro y una vlvula de seguridad. En el interior del

autoclave se coloca un volumen de agua que se hace hervir, ya sea por medio de
quemadores externos que se encuentran en la parte inferior del aparato, o mediante
calentadores elctricos de inmersin.
Se cierra luego la tapa, se atornilla dejando abierta la espita hasta que todo el aire del
interior haya sido desplazado por el vapor. Debe dejarse que el vapor salga por la
espita unos 5 minutos antes de cerrarla.
Es muy importante que la eliminacin del aire ya que, de lo contrario, la presin
marcada por el manmetro indicar la temperatura a la que se encuentra la mezcla
vapor aire en el interior, que es menor a la esperada para el vapor saturado a esa
presin.
Una vez que se ha cerrado la llave de vapor (espita), comienza a elevarse la presin
en el interior del autoclave; usualmente se fija la vlvula de seguridad para que se abra
a 15 libras/pulgada2, estas presiones corresponden a 115 y 121C.
Presin (Libras/pulg.2)
5
7
10
15
20

Temperatura (C)
107
110
115
121
126

Los equipos autoclaves son probados por los fabricantes hasta presiones de 60
libras/pulg.2 o ms, pero para mayor seguridad puede fijarse una virola sobre la
vlvula de seguridad para que no pueda ser desplazada accidentalmente, pudiendo
alcanzarse una presin mayor que la necesaria. Cuando el manmetro indica que se
ha alcanzado la presin deseada, se disminuye la entrada de gas, y as la llama del
mechero, ya que el calor necesario para mantener la presin es menor que el
requerido para alcanzarla.

La presin se mantiene durante unos 20 minutos momento en que se cierra el paso

del gas. No deben abrirse ni el autoclave ni la espita hasta que el manmetro indique
0 (cero). Si la presin se libera violentamente los lquidos en el interior del aparato
hierven tumultuosamente, pudiendo an reventar los elementos de vidrio.
Una vez que el manmetro indique que no hay sobrepresin en el interior del aparato,
se abre primero la llave de vapor y luego de algunos minutos se puede levantar la tapa
del autoclave. No se debe retirar el contenido inmediatamente

Tiempo requerido: usualmente, para esterilizar medios de cultivo son necesarias

temperaturas de 107-121C durante 10 a 15 minutos.
Limitaciones: en funcin de la termolabilidad de ciertos materiales y componentes de
medios de cultivo. Adems es inadecuado para sustancias que son inmiscibles en
agua, como las grasas, en las que la penetracin del vapor es muy limitada.
d) Tindalizacin: Es un procedimiento de calentamiento discontinuo creado por
Tyndall, que permite esterilizar, a bajas temperaturas, aquellas sustancias que se
alteran a altas temperaturas como algunos azcares. Se puede realizar a bao Mara
o autoclave abierta.
La temperatura utilizada es generalmente de 60-80 C; a esta temperatura se eliminan
las formas vegetativas pero no las esporuladas. Por esta razn es que despus de un
perodo de calentamiento de 30 minutos, se deja el material a 30-37C hasta el da
siguiente, y se lo somete nuevamente al tratamiento inicial. Esta operacin se repite
despus de 24 horas (esterilizacin fraccionada). La discontinuidad de calor- reposo
permite a las bacterias desarrollar nuevas clulas vegetativas a partir de sus esporas,
hasta que por ltimo, en el tercer calentamiento, ya no quedarn formas esporuladas.
e) Pasteurizacin: Debe su nombre a Pasteur quien fue el primero en utilizar este
mtodo que actualmente presenta una serie de modificaciones. Tiene muy poca
aplicacin en bacteriologa y es usada especialmente en leche, ya que destruye la
totalidad de los grmenes patgenos y la mayora de la flora banal, respetando la
estructura fsica y composicin qumica de la misma (otros ejemplos son la nata,
bebidas alcohlicas, mosto, etc.).
Consiste en someter el lquido a un calentamiento rpido seguido de un enfriamiento
posterior. La temperatura aplicada es de 63C, durante 30 minutos con lo que se
consigue la destruccin de las formas vegetativas, excepto las termfilas. Existe una
pasteurizacin denominada alta o instantnea, en las que mantienen delgadas
pelculas de leche vaporizada sobre tubos o placas a 71C, con lo que se requiere una
exposicin de slo quince segundos
Aplicaciones
1. En investigacin de laboratorios cientficos es empleado principalmente para
eliminar microorganismos de los elementos de trabajo, evitando as la
contaminacin de la muestra, recipientes y material de trabajo.
2. En la industria alimentaria se emplea para aumentar la vida til de los
alimentos. Los alimentos esterilizados ms comunes son los enlatados.
3. Se usa tambin para la conservacin y alargamiento de la vida de libros,
muebles, obras de arte y otros bienes.
4. En los hospitales es empleado principalmente para eliminar agentes patgenos
de los instrumentos quirrgicos reutilizables.
5. Los fabricantes de productos sanitarios esterilizan los productos para poder
utilizarlo con asepsia en un procedimiento quirrgico o de laboratorio por los
profesionales sanitarios.

MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes
para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e
hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativamente y cuantitativamente.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.
Segn su consistencia:
a) LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin
acuosa.
b) SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn
de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrido (hidrato de carbono)
que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las
bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Este conjunto
convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos
de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias,
"procesos que antes no eran posibles en medio lquido".
c) SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio
Segn su composicin: A causa de los requerimientos qumicos del mundo microbiano,
a veces es necesario agregar o eliminar componentes qumicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte
de los microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente
utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar comn o
caldo comn.
b) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico, etc. Se
utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes
qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicas
cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de
un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para
seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por
ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos
estafilococos).

d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre

varios gneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le
ha aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz
de fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el
consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de
Simmons es un medio cuya nica fuente de carbono es el citrato sdico,
entonces en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse utilizando
como nica fuente de carbono ese componente. A menudo la separacin se
basa en la diferencia de color de las colonias aisladas, como en el agar con
azul de metileno - eosina que permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de
brillo metlico) de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin
brillo). Estos dos microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color
gris blancuzco.
e) DE ENRIQUECIMIENTO: son medios lquidos que contienen un agente que
inhibe las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del
agente infeccioso. El medio de Muller - Kauffman, permite el crecimiento de
Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos coliformes. Esto es de gran
importancia ya que en ciertas muestras, por ejemplo fecales, el agente
infeccioso (Salmonella) es frgil y puede ser superado en nmero por agente
bacterianos indgenas como E. coli; por lo tanto antes de realizar las pruebas
de laboratorio es necesario aumentar su nmero con respecto a sta en un
caldo de enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldos de tetrationato y
selenito. El agua de peptona alcalina se utiliza para Vibrio choleare.
f)

DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin

multiplicacin significativa de los microorganismos desde el momento de su
extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las
muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un lmite
de dos horas desde la recoleccin de las muestras y su estudio en el
laboratorio, pero este lmite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se
trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el
uso de medios de transporte adecuados. Los medios de transporte ms
frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una
unidad descartable de cultivo de transporte llamada Culterette que consiste en
un tapn estril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior que se rompe
cuando se ejerce presin liberando el medio de transporte de Stuart alrededor
del extremo del tapn impregnado en la muestra

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Materiales:

Matraz Erlenmeyer.
Mechero de Bunsen.
Vaso precipitado
Balanza analtica.
Esptula
Tubos de ensayo 16x150mm.
Pipeta

Reactivos:

Peptona
Agua destilada
Triptona
Glucosa
Extracto de levadura
Agar Agar

Agua peptonada:

Pesar 0.15gr de Peptona y diluir en 150ml de Agua destilada

Calentar en el mechero Bunsen para disolver la peptona. Homogenizar
Repartir 90ml de medio en un matraz y 9ml en cada tubo de ensayo.
Cubrir el matraz y los tubos con algodn y papel craft.

Pesar 0.15 gr de Peptona y

diluir
en 150ml

Diluir en 150ml de Agua destilada

y calentar para disolver

Repartir 90ml en un matraz, y 9ml en cada tubo de ensayo

Cubrir el matraz y tubos de ensayo

con algodn y papel craft

Agar Platecout (Agar para recuento total de bacterias).

Pesar 0.75gr de Triptona, 0.15gr de Glucosa, 0.38gr de Extracto de levadura,

2.3gr de Agar Agar. Mezclar todo en 150ml de Agua destilada.
Calentar en el mechero Bunsen para disolver. Homogenizar
Cubrir el matraz con algodn y papel craft.

Pesar 0.75gr triptona, 0.15

glucosa, 0.38 extracto levadura,
2.3 gr Agar Agar

Diluir en 150ml de Agua destilada

y calentar para disolver

Cubrir el matraz con algodn y

papel craft

RESULTADOS:
Luego de esperar varios das llevamos el Agua Peptonada y el Agar Platecout
a la refrigeradora.
Estas muestras servirn para poder realizar el laboratorio N02 donde
utilizaremos muestra de carne y muestra de suelo, identificando distintos
microorganismos.

OBSERVACIONES:

 Para la preparacin del agua peptonada y Agar platecout debemos trabajar con
el mechero encendido para crear un campo con condiciones de esterilidad.
Las proporciones de los reactivos a utilizar deben ser las adecuadas para
obtener el resultado ptimo.

RECOMENDACIONES:

Antes de utilizar los materiales (pipetas, tubos, asas, etc.) stos deben de ser
esterilizados correctamente en el laboratorio tomando siempre las
precauciones.

Es obligatorio el uso del mandil en el laboratorio, no se debe comer ni beber a

fin de evitar contaminaciones.

La mesa del laboratorio debe estar libre para poder llevar a cabo la prctica.

No debemos acercar nuestra boca con los tubos de ensayo, ya que hay que
recordar que hay que evitar todo contacto de contaminacin

BIBLIOGRAFIA

http://cienciamicrobiologica.blogspot.com/2011/12/microbiologia-definicion.html
http://html.rincondelvago.com/microbiologia_concepto-y-contenido.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Esterilizaci%C3%B3n_(microbiolog%C3%ADa)
Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, y colaboradores, 2 a edicin.
Ed. Masson,
Barcelona, 1999
Manual de bioseguridad para tcnicos de laboratorio. Celia E. Coto y
colaboradores,
publicacin de la Asociacin Argentina de Microbiologa, 1992
Manual de Bioseguridad en Laboratorio, Organizacin Mundial de la
Salud, 1983