DIAGNOSTICO DE HIV

Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (Centers for

Disease Control and Prevention, CDC) recomiendan que toda persona de 13 a
64 años de edad se someta a una prueba de detección del VIH al menos una
vez como parte de la atención de salud de rutina y que las personas expuestas
a mayor riesgo de contraer el VIH se hagan la prueba con más frecuencia.
Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC)
recomiendan que todas las mujeres embarazadas se sometan a estas pruebas
con el fin de que puedan comenzar a tomar los medicamentos contra el VIH si
son seropositivas.
 MÉTODOS DIRECTOS E INDIRECTOS.
Las pruebas serológicas para la detección de anticuerpos son los más
utilizados para el diagnóstico de la infección por VIH.
PRUEBAS RÁPIDAS o pruebas de inmunocromatografia, pueden ser en
casete o taco, y tira reactiva, es de rápida ejecución suele salir entre 20
minutos o menos, algunos no necesitan equipamiento ya que se puede realizar
sangre entera; tienen incorporados sistemas de control de calidad interno. En
general, tienen una sensibilidad comparable con las pruebas de ELISA, pero
son menos específicas.
Realiza la detección de VIH-1 y VIH-2 mediante la migración de la muestra a
través de una almohadilla que tiene 2 regiones que han sido previamente pre
sensibilizada con antígeno conjugado del virus 1 y 2, además como control de
calidad también tiene una región presensibilizada con el anticuerpo.
En el caso que el ensayo resultara reactivo entonces se procede a realizar un
ELISA de tercera o cuarta generación. Debido a su baja especificidad podría
dar reacciones cruzadas (por anticuerpo heterofilos) con otros virus hepatitis,
dengue sífilis, y pacientes con títulos muy elevado de Factor reumatoide
Si las pruebas rápidas resultaran no reactivas al mes de la sospecha de
contagio, se podría considerar que el individuo se encuentra en el periodo de
ventana (podría estar infectado, pero no hay desarrollo de anticuerpos) por lo
cual se recomienda que repita la prueba hasta los tres meses.
ELISA Como prueba de selección se utiliza mayoritariamente el
ENZIMOINMUNOANÁLISIS (ELISA), que determina anticuerpos IgG
específicos anti-VIH. Se basa en la captura sobre una base antigénica,
específica del VIH, de los anticuerpos anti-VIH presentes en la muestra de
suero. Presenta una gran sensibilidad superior al 98%, a pesar de eso, una
prueba de ELISA positiva debe ser repetida y posteriormente confirmada
mediante alguna de las pruebas de confirmación, por lo general, por la técnica
de Western Blot (WB) que tiene similar sensibilidad a ELISA, pero tiene mayor
especificidad.
 Primera generación: las pruebas de VIH se basaron en ELISA para detectar
el subtipo de anticuerpo inmunoglobulina G (IgG) desarrollado en respuesta
al VIH-1.
 Segunda generación: se mejoraron las pruebas del VIH para detectar
anticuerpos IgG desarrollados en respuesta al VIH-1 y al VIH-2.
 Tercera generación: las pruebas de VIH se mejoraron aún más para detectar
anticuerpos IgG e IgM en respuesta al VIH-1 y VIH-2.
 Cuarta generación: las pruebas del VIH podrían detectar anticuerpos
desarrollados en respuesta al VIH-1 y al VIH-2, así como la proteína p24 del
VIH al mismo tiempo. Los resultados positivos de la prueba fueron
confirmados por una prueba de VIH que diferencia entre VIH-1 y VIH-2. Si se
requería, el ácido nucleico del VIH-1 se detectaba con una prueba adicional.
 Quinta generación: las pruebas de VIH brindan resultados separados para el
antígeno viral VIH-1, VIH-2 y p24. Por lo tanto, eliminan la necesidad de una
prueba de diferenciación VIH-1/VIH-2 por separado.

WESTERN BLOT
Este ensayo se puede utilizar para detectar proteínas, como anticuerpos contra
el VIH y antígenos del VIH. El ensayo de transferencia Western es una técnica
electroforética que separa las proteínas en función de su peso molecular
(medido en kilo Dalton). Este proceso de purificación requiere varios pasos y
permite la identificación de diferentes proteínas al mismo tiempo. Es una
prueba altamente específica, pero por su alto costo se emplea básicamente
para corroborar los resultados indeterminados de la IFI.
Es una técnica de inmunotransferencia que se basa en la especificidad de la
unión entre una molécula de interés y una sonda para permitir la detección de
la molécula de interés en una mezcla de muchas otras moléculas similares.
El Western Blot para HIV 1 y 2 se fabrica a partir de la línea celular HIV-1. Los
antígenos virales del VIH-1 se purifican y luego se separan mediante
electroforesis en gel SDS (es un agente desnaturalizante que ayuda a
descomponer la proteína en su estructura de aminoácidos, y también recubre
la proteína con cargas negativas en una proporción de masa uniforme). SDS
desnaturaliza los componentes virales y produce proteínas que migran en el gel
según su peso molecular para producir varias bandas. Los componentes de
bajo peso molecular migran más rápido y se encuentran en la parte inferior del
gel, mientras que las proteínas de alto peso molecular permanecen cerca de la
parte superior. Luego se transfieren del gel SDS-PAGE (electroforesis en gel
de poliacrilamida) a una membrana de nitrocelulosa, que también está
impregnada con el antígeno del VIH-2 (gp36) y una banda de control. La
membrana se corta y envasa en tiras. Para realizar el ensayo, la tira se incuba
con el suero/plasma del paciente diluido en un tampón. Los anticuerpos contra
el VIH-1 y 2, si están presentes, se unen a los antígenos virales ubicados en la
tira. El material no unido se lava y luego la tira se incuba con anti-IgG humana
conjugada con fosfatasa alcalina (AP). Después de lavar el conjugado no
unido, se agrega sustrato (BCIP/NBT), lo que da como resultado la tinción de
las bandas.
Según el centro de control y prevención de enfermedades se considera positiva
la prueba de WB cuando aparecen la p24 + (gp160, gp120 o gp41) o la p41 +
(gp160 o gp120). El resultado positivo confirma definitivamente la infección por
el VIH.
El negativo la descarta, excepto cuando existe evidencia de exposición reciente
y reiterada a esta infección. En tales circunstancias se debe repetir el ensayo
luego de tres y seis meses. Cuando el resultado es indeterminado, que ocurre
cuando sólo aparecen algunas bandas que no cumplen con los criterios del
CDC, se recomienda repetir la prueba después de tres y seis meses,
dependiendo de los factores de riesgo
Los resultados indeterminados pueden ocurrir en las fases tempranas o
estadios avanzados de la infección con deterioro inmunológico grave, en los
recién nacidos de madre VIH positiva, en sueros hemolizados y que contienen
el factor reumatoide o niveles altos de bilirrubina, en las reacciones cruzadas
con otros retrovirus (HTLV-I y HTLV-II), en la hipergammaglobulinemia
secundaria a la hiperestimulación antigénica, en multitransfundidos y en las
enfermedades autoinmunes (por ejemplo, el LES).
Una de las limitaciones del WB es el diferente valor predictivo diagnóstico que
tiene la presencia de cada una de las bandas, así los anticuerpos contra las
proteínas de la envoltura del VIH son mucho más específicos.
CÉLULAS CD4
El sistema inmunológico, es decir las defensas, es el mecanismo natural del
cuerpo humano para protegerse de las enfermedades. Los CD4 son receptores
celulares que se encuentran, sobre todo, en los linfocitos T, las células del
sistema inmunológico que son el blanco preferido del VIH. A medida que la
cantidad de virus en el organismo aumenta, las células CD4 disminuyen; a
medida que la infección pueda ser controlada, éstas habrán de volver a
proliferar.
El VIH infecta a las células y las utiliza para replicarse (hacer copias de sí
mismo). Los nuevos virus saldrán de la célula y acabarán por destruirla. Esto
significa que las células, al morir, liberan copias del virus, por lo que el sistema
inmunológico se debilita ya que el organismo es incapaz de defenderse y la
persona puede desarrollar infecciones oportunistas.
Con el recuento de CD4 se puede ver en qué estado se encuentra el sistema
inmunológico. Se considera que la infección alcanza la etapa SIDA cuando el
número de CD4 es menor a 200 cel/ml, momento a partir del cual lo más
probable el médico comienzara un tratamiento antirretroviral, visto que es
aconsejable es que el número de tus CD4 estén por encima de este umbral.
Se esperaría que una persona sin VIH usualmente tiene entre 600 y 1200 CD4
por mililitro (ml) de sangre, pero esto es completamente variable dado que está
sujeto a la muestra y tu estado de salud del momento (algo tan simple como un
resfrío podría hacer que ese número se vea disminuido). Fuera del rango de
riesgo (200/ml), más CD4 no significa necesariamente mejor. Lo importante es
que estés fuera de cualquier posibilidad de contraer enfermedades
oportunistas. Tu valor como persona no está representado por el conteo de tus
defensas ni tus resultados de laboratorio deben resultar una fuente de estrés y
malestar, más cuando no conllevan un beneficio directo de tu salud más allá de
un valor numérico en un papel. Somos mucho más que nuestros exámenes de
laboratorio. Vos sos tu propio margen de referencia y la única normalidad con
la que te podés comparar.
ANTIGENEMIA P24 Es una prueba altamente especifica pero su sensibilidad
no es óptima, presentando falsos negativos; limitándose su uso al diagnóstico
precoz durante el periodo de ventana, cuando hay signos clínicos de
primoinfección o presunción de exposición. Por ello se ha preferido incorporarla
a los ELISA de cuarta generación. Puede detectarse de once a trece días
después de la infección, su concentración permanece alta y detectable en
sangre aproximadamente por un mes y medio después de la infección, pero a
medida que aparecen los anticuerpos anti-VIH, su concentración disminuye y
aumentan los complejos p24/ anti-p24. En la etapa de SIDA, la replicación viral
aumenta nuevamente y la p24 alcanza niveles muy altos. Los resultados
dudosos o débilmente positivos deben confirmarse por medio de la prueba de
neutralización
En tu primer consulta con un médico infectólogo, y antes de iniciar el
tratamiento para el VIH, tu profesional tratante deberá conocer tu historia
clínica, realizarte un examen físico completo y pedir varios análisis de sangre
que incluyen dos items muy importantes, que habrás de escuchar bastante a
partir y sobre los cuales tendrás que prestar particular atención. En primer
lugar, se encuentra la Prueba de Carga Viral, y, luego, el Recuento de CD4.
Posteriormente también abordaremos un estudio (desgraciadamente) no tan
frecuente pero sí sumamente necesario: el Test de Resistencia Genotípica al
VIH.
LA CARGA VIRAL (CV) es el número de copias de ARN viral. Par esto se
puede utilizar tres métodos de detección de la CV en plasma: retro
transcripción y amplificación o RT- PCR; método de ADN ramificado o bDNA y
replicación secuencial de ácidos nucleicos o NASBA. Este test posee gran
sensibilidad, especificidad, por lo que resulta un buen marcador. La
Cuantificación de la carga viral se utiliza para determinar la valoración inicial de
una infección por VIH, la decisión de iniciar tratamiento y como marcador de
respuesta terapéutica
El VIH se multiplica en el interior de la CD4 hasta que ésta se rompe. Entonces,
gran cantidad de virus pasa a la sangre. La carga viral es la cantidad de virus
que hay en determinados fluidos o tejidos de una persona infectada, y se mide
en cantidad de “copias” de VIH. Los estudios habituales de control miden la
carga viral en sangre: el número de copias de VIH por mililitro (ml).
Las personas con una carga viral alta tienen más posibilidades de llegar a la
etapa SIDA que aquellas con niveles bajos de virus. Este tipo de análisis, junto
con el recuento de linfocitos CD4, sirve para saber cuándo comenzar el
tratamiento, ver cómo respondés a él y evaluar cómo vas evolucionando.
Cuanto más alta sea la carga viral, más probable es que tus defensas
disminuyan y puedas desarrollar otras infermedades; o dicho de otro modo: a
menor cantidad de virus en la sangre, menos riesgo de enfermedad.
Consiste de una simple extracción de sangre, muestra a partir de la cual harán
un análisis sobre la presencia del virus en tu organismo. Esta constituye la
prueba de cabecera de la atención en VIH, dado que es la forma a partir de la
cual se puede evaluar el estado de la infección en el cuerpo: la realizarás
apenas te hayan diagnosticado como antes del tratamiento y en repetidas
oportunidades a lo largo de los años para medir la eficacia del tratamiento en la
respuesta al virus.
ANTIGENEMIA P24 Es una prueba altamente especifica pero su sensibilidad
no es óptima, presentando falsos negativos; limitándose su uso al diagnóstico
precoz durante el periodo de ventana, cuando hay signos clínicos de
primoinfección o presunción de exposición. Por ello se ha preferido incorporarla
a los ELISA de cuarta generación. Puede detectarse de once a trece días
después de la infección, su concentración permanece alta y detectable en
sangre aproximadamente por un mes y medio después de la infección, pero a
medida que aparecen los anticuerpos anti-VIH, su concentración disminuye y
aumentan los complejos p24/ anti-p24. En la etapa de SIDA, la replicación viral
aumenta nuevamente y la p24 alcanza niveles muy altos. Los resultados
dudosos o débilmente positivos deben confirmarse por medio de la prueba de
neutralización
En tu primer consulta con un médico infectólogo, y antes de iniciar el
tratamiento para el VIH, tu profesional tratante deberá conocer tu historia
clínica, realizarte un examen físico completo y pedir varios análisis de sangre
que incluyen dos items muy importantes, que habrás de escuchar bastante a
partir y sobre los cuales tendrás que prestar particular atención. En primer
lugar, se encuentra la Prueba de Carga Viral, y, luego, el Recuento de CD4.
Posteriormente también abordaremos un estudio (desgraciadamente) no tan
frecuente pero sí sumamente necesario: el Test de Resistencia Genotípica al
VIH.
¿QUÉ ES LA CARGA VIRAL INDETECTABLE?
En la actualidad existen combinaciones de antirretrovirales que frenan la
reproducción del VIH, consiguiendo que con el tiempo no sea detectable en la
sangre. Ese es el objetivo del tratamiento antirretroviral.
Tomando regularmente la medicación la carga viral descenderá hasta alcanzar
niveles indetectables en un plazo de aproximadamente 6 meses.
Tradicionalmente, se considera indetectable a todx aquel que alcance la
SUPRESIÓN VIROLÓGICA: es decir tener una carga viral menor a 200
copias/ml. A medida que avanzan las tecnologías de estas técnicas este límite
es cada vez más bajo, permitiéndonos detectar cantidades cada vez más
pequeñas de virus. Hoy en día, en la mayoría de los laboratorios se puede
detectar hasta 20 copias por ml de sangre mediante métodos cuantitativos.
Cuando la cantidad de virus en sangre sea inferior al mínimo que pueda
cuantificar la prueba utilizada, entonces diremos que la carga viral es
indetectable. Es decir, hay una cantidad tan pequeña del virus que no la
podemos encontrar con las técnicas que utilizamos.
Tener una carga viral indetectable no quiere decir estar curado, sino que, sólo
hay una cantidad insignificante del virus, tan insignificante que cualquier
persona viviendo con VIH que haya llevado su carga viral a estos niveles
indetectables a partir de un tratamiento antirretroviral no transmitirá el virus
durante sus relaciones sexual o en el embarazo.
carga viral indetectable pronunciar término
Cuando la concentración del VIH en la sangre es demasiado baja para
detectarla con una prueba de la carga viral (ARN del VIH). La carga viral de
una persona se considera “indetectable de forma prolongada” cuando se
mantiene así por un mínimo de seis meses después de haber obtenido ese
resultado en la prueba correspondiente por primera vez. Los medicamentos
antirretrovirales (ARV) pueden reducir la concentración de la carga viral de una
persona a un nivel indetectable; sin embargo, eso no significa que la persona
esté curada. Una cierta concentración del VIH, en forma de reservorios del
virus latente, permanece dentro de las células y en los tejidos del cuerpo.