UREA -LQ

Urea-LQ
Ureasa-GLDH. Cinético. Líquido
Determinación cuantitativa de urea CÁLCULOS
IVD ( A1  A2) Muestra  ( A1  A2) Blanco x 50(Conc. Patrón) = mg/dL de urea en la
( A1  A2) Patrón  ( A1  A2) Blanco
Conservar a 2-8ºC
muestra
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en 10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1.
amoniaco (NH4+) y anhídrido carbónico (CO2).
Los iones amonio formados se incorporan al α-cetoglutarato por acción de Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a
NAD+ : CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
Ureasa SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210)
Urea + H2O + 2 H+    (NH4+)2 + CO2 Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
GLDH revisar los instrumentos, los reactivos y la calibración.
NH4+ +α-Cetoglutarato+NADH   H2O + NAD+ + L-Glutamato
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
La disminución de la concentración de NADH en el medio es proporcional
a la concentración de urea de la muestra ensayada1. VALORES DE REFERENCIA4,5
Suero o plasma:
SIGNIFICADO CLÍNICO 15-45 mg/dL  2,5-7,5 mmol/L
La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en Orina:
el hígado a partir de su destrucción. 26 – 43 g/24 h  428-714 mmol/24 h
La concentración de urea en sangre (uremia) aumenta como consecuencia Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca
de dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia sus propios valores de referencia.
cardiaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
clínicos y de laboratorio. Rango de medida: Desde el límite de detección 0,743 mg/dL hasta el límite de
linealidad 400 mg/dL.
REACTIVOS
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con
TRIS pH 7,8 80 mmol/L ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
R1
α-Cetoglutarato 6 mmol/L Precisión:
Tampón
Ureasa 75000 U/L
R2 GLDH 60000 U/L Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Enzimas NADH 0,32 mmol/L Media (mg/dL) 37,5 120 40,0 126
UREA CAL Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL SD 1,05 0,92 1,06 2,07
CV (%) 2,79 0,77 2,65 1,65
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT): Mezclar 4 vol. de R1 Tampón + 1 vol. R2
Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,00180 A
Enzimas.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
La estabilidad del RT es de 1 mes a 2-8ºC o 1 semana a temperatura
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
ambiente (15-25ºC).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
UREA CAL: Listo para su uso.
Coeficiente de regresión (r)2: 0,98209.
Ecuación de la recta de regresión: y= 1,0343x – 1,2105.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien
INTERFERENCIAS
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningún caso deben utilizarse
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
sales de amonio o fluoruro1.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
- Presencia de partículas y turbidez.
determinación de la urea2,3
- Absorbancia (A) del blanco a 340 nm < 1,00.
NOTAS
MATERIAL ADICIONAL 1. UREA CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratarlo con
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. sumo cuidado ya que se puede contaminar con facilidad.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 2. El material empleado así como el agua destilada que se utilice deben estar
- Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 2) libres de amoniaco y/o sus sales1.
3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos
MUESTRAS en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores
- Suero o plasma heparinizado1: No usar sales de amonio o fluoruro como séricos.
anticoagulantes. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
- Orina1: Diluir la muestra al 1/50 en agua destilada. Mezclar. Multiplicar el 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
resultado obtenido por 50 (factor de dilución). Evitar el crecimiento este reactivo en distintos analizadores.
bacteriano, manteniendo el pH < 4.
La urea es estable 5 días a 2-8ºC. BIBLIOGRAFÍA
1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
PROCEDIMIENTO Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418.
1. Condiciones del ensayo 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta(Nota 4): PRESENTACIÓN
Blanco Patrón Muestra Ref. 41040 R1: 1 x 40 mL , R2 : 1 x 10 mL, CAL: 1 x 2 mL
RT (mL) 1,0 1,0 1,0 Ref: 41042 R1: 1 x 100 mL, R2: 1 x 25 mL, CAL: 1 x 5 mL
Cont.
Patrón (Nota1,3) (µL) -- 10 -- Ref. 41041 . R1: 1 x 240 mL, R2: 1 x 60 mL, CAL: 1 x 5 mL
Muestra (µL) -- -- 10 Ref. 41043 R1: 1 x 480 mL , R2: 1 x 120 mL, CAL: 1 x 5 mL
4. Mezclar. Leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
5. Calcular: ΔA= A1 – A2.

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