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Actividad Numero 3

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Espectro de absorción de la hemoglobina

El color rojo de la hemoglobina se debe a que absorbe radiación


visible, aunque también presenta picos de absorción en y cerca
de la región ultravioleta.

• Espectrofotómetro
• Hemoglobina
• 3 Cubetas
• Pipeta.
• Piseta con agua
• Recipiente de desechos.

Diseño del experimento: Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, prepara


distintas diluciones y analiza su espectro UV-VIS completo. Para ello, llena una
cubeta con hemoglobina y en las otras dos cubetas prepara sendas mezclas
diferentes de hemoglobina con agua. Todas las cubetas deben tener un volumen
total de 3 mℓ.

Medida: A continuación, introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en


una, y pulsa el botón para registrar el espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el
icono de cámara de fotos y copia la imagen resultante para poderlas comparar
todas al terminar el experimento.

Cubeta N°1

Cubeta N°2
Cubeta N°3

Análisis cualitativo de resultados: Compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se


observa al diluir la hemoglobina de partida? ¿Cambia la posición (λ) de los picos
de absorción máxima? Describe lo que observas.

 Con la hemoglobina más concentrada se observa un pico de absorción


mayor, a medida que se diluye la hemoglobina este pico también va
disminuyendo.

2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región


visible, no ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción).
A continuación mide y anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas
dos longitudes de onda. Representa tus resultados en una gráfica, considerando
que la concentración de partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/ℓ.

C1.V1=C2.V2

 200mg/L.3ml=C2.3ml C1=200mg/L

800mg/L.3ml / 3ml=C2

C2=200mg/l

C1.V1=C2.V2

 200mg/L.2ml=C2.3ml C1=200mg/L

800mg/L.2ml / 3ml=C2

C2=133,33mg/l

C1.V1=C2.V2

 200mg/L.1ml=C2.3ml C1=200mg/L

800mg/L.1ml / 3ml=C2

C2=66,66mg/l

Cubeta Concentración A420


(mg/L)
1 200 1,597
2 133,33 1,101
3 66,66 0,606

1.8
1.6
f(x) = 0.00743212839358032 x + 0.110407654617269
1.4 R² = 0.999999660584799
1.2
1
A 420

0.8 Series2
0.6 Linear (Series2)
0.4
0.2
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
CHb (mg/l)

Cubeta Concentración A540


(mg/L)
1 200 0,273
2 133,33 0,226
3 66,66 0,165

0.3

0.25 f(x) = 0.000809959502024899 x + 0.113341432928354


R² = 0.994429919290667

0.2

0.15
A 540

Series2
0.1 Linear (Series2)

0.05

0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
C Hb (mg/l)

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