Taller de clase Membrana

02 de marzo de 2023

1. Dos preparados de membrana fueron derivados de la membrana plasmática

de los eritrocitos y están presenten es una solución amortiguadora: (1) las
vesículas de membrana normales en las cuales la hojuela exoplasmática de la
vesícula enfrenta la solución amortiguadora (equivalentes en su orientación a
las de la hojuela exoplasmática de la membrana plasmática intacta) y (2) las
vesículas de membrana evertidas (inside-out) en las cuales la hojuela
exoplasmática enfrenta el interior de las vesículas.

a. La anexina V es una proteína que une fosfatidilserina, uno de los

fosfolípidos presentes en las membranas celulares. La anexina V marcada
con fluorescencia se mezcla con cada preparado de vesículas. Las
vesículas se lavan para eliminar la anexina V no unida y luego se examinan
con microscopia de fluorescencia. La presencia de la anexina V se detecta
mediante fluorescencia verde, como se muestra en la ilustración más arriba.
¿Qué puede deducirse de estos datos?

b. Un anticuerpo monoclonal fue preparado contra la banda 3, una proteína

integral de la membrana plasmática del eritrocito. El anticuerpo reconoce un
epítopo en el extremo carboxi terminal de la banda 3. La incubación de los
dos preparados de vesículas de membrana con este anticuerpo, seguida de
la tinción con un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia, genera
datos similares a los que se muestran en la fotomicrografía más arriba.
¿Qué puede deducir acerca de la estructura de la banda 3 a partir de estos
datos?
2. Suponga que ustedes están planeando usar liposomas como transportador de
fármacos a un tipo particular de células en el cuerpo, tales como adipocitos o
células musculares. Como construiría el liposoma para incrementar la
especificidad al objetivo?

3. El transportador de glucosa al interior de las células epiteliales del lumen

+ +
intestinal (Na /glucose), lleva dos iones Na consigo. Si esta proporción fuera
1:1 en vez de 2:1, como afectaría esto al gradiente de concentración en el cual
el transportador debería bombear glucosa?

4. En células musculares no estimuladas, el transportador de glucosa Glut4 está

presente en la membrana de los endosomas. Al estimular estas células con
insulina, los endosomas se fusionan con la membrana plasmática y depositan
en ella Glut4, donde sirve para el transporte de glucosa al interior de las
células (véase la Fig. 15-34 de la p. 659). Para que la insulina genere este
cambio en la localización de Glut4, esta debe unirse a su receptor presente en
la membrana plasmática de algunas células. Para determinar si una línea de
células madre puede ser inducida en cultivo a diferenciarse a células
musculares en las cuales Glut4 se exprese y exhiba este cambio de conducta
dependiente de la insulina, se llevaron a cabo los siguientes estudios. 

Una línea de células madre fue incubada en condiciones de cultivo tales que las
células pudieran diferenciarse a varios tipos celulares específicos. Las células se
incubaron luego en presencia de insulina y en ausencia de la hormona. Para
determinar si Glut4 o el receptor de insulina estaban presentes en la superficie
celular de las células de esta población, se emplearon anticuerpos que reconocían
específicamente cada proteína a fin de marcar las células. La Glut4 de la
superficie celular fue detectada por un anticuerpo anti-Glut que fluoresce verde; el
receptor de insulina de la superficie celular fue detectado por un anticuerpo
antirreceptor de insulina, que fluoresce rojo. Luego, estas células se ubicaron en
un equipo FACS, un seleccionador de células activado por fluorescencia (véase la
Fig. 9-29 del texto) y se separaron de acuerdo con su fluorescencia roja o verde.
Se obtuvieron los siguientes datos. Cada • de las gráficas representa 20 células.
Un valor aumentado en la intensidad de la fluorescencia indica que se ha unido
más anticuerpo a esas células. 
 a. ¿Las células en la población expresan el receptor de insulina en la
superficie? ¿Esta expresión depende de la presencia de insulina? Explique.
b. ¿Algunas células de la población expresan Glut4 en su superficie? ¿Esta
expresión depende de la presencia del receptor de insulina? ¿Esta
expresión depende de la presencia de insulina? Explique.

Respuestas
1)
A) En la figura A tenemos menos fluorescencia que en la figura B, por esto
podemos deducir que los datos sugieren que las vesículas que se examinaron
contienen fosfatidilserina en sus membranas celulares, sin embargo la figura B
cuenta con más fosfatidilserina que la figura A, podríamos decir que esto se debe
a la hojuela exoplasmatica ya que en la figura A se encuentra en menor proporción
en el interior que en el exterior, a diferencia de la figura B que se encuentra en
mayor proporción en el interior que en el exterior. La anexina V es una proteína
que se une específicamente a fosfatidilserina, por lo que la presencia de
fluorescencia verde en las vesículas indica que hay anexina V unida a
fosfatidilserina presente en las membranas celulares de las vesículas. La ausencia
de fluorescencia verde indicaría que no hay anexina V unida a fosfatidilserina y,
por lo tanto, no hay fosfatidilserina presente en las membranas celulares de las
vesículas examinadas. Este método de detección de fosfatidilserina puede ser
utilizado para estudiar la exposición de fosfatidilserina en la superficie celular en
diferentes tipos de células y en diferentes condiciones fisiológicas y patológicas.
B) La descripción de la fotomicrografía sugiere que la proteína de membrana
llamada banda 3 se encuentra de manera homogénea en toda la superficie del
eritrocito, y que al menos una parte de esta proteína se encuentra en la cara
externa de la membrana plasmática. En resumen, los resultados sugieren que la
banda 3 es una proteína integral de membrana plasmática.
2) DEFINICION: Los liposomas son vesículas micro o nanoscópicas formadas por
bicapas concéntricas de fosfolípidos que encierran un compartimento acuoso.
Estos fosfolípidos están formados por una parte polar, denominada cabeza, y por
una región apolar denominada cola. La disposición de los fosfolípidos en las

bicapas se basa en que las cadenas hidrofóbicas (cola o parte apolar) se disponen
de manera “paralela” entre sí y enfrentadas a su vez con la otra capa. Quedando
así las cabezas (parte polar) a ambos lados y formando una zona hidrófoba entre
las dos capas y en el interior y exterior zonas hidrófilas.

A. LIPOSOMA CON SU SUPERFICIE MODIFICADA Y LAS

CARACTERÍSTICAS DE CADA COMPARTIMENTO:

Los liposomas pueden proteger al fármaco de la degradación hasta llegar a la

diana terapéutica; también pueden sufrir cambios en la variación de ciertas
magnitudes, como por ejemplo el pH, la fuerza iónica o la temperatura. Debido a
sus propiedades, hay autores que los han considerado como “balas mágicas”
  Protegen a la sustancia o principio activo contra la inactivación, ya sea
enzimática, química o inmunológica, desde el lugar de administración hasta la
diana terapéutica.
  Permiten mejorar el transporte de principios activos hasta lugares difíciles de
alcanzar utilizando el fármaco libre u otro transportador.
  Aumentan la especificidad de acción y eficacia a nivel celular y/o molecular.
  Incrementan el tiempo de vida media del principio activo en circulación.
  Alteran la solubilidad de la sustancia o principio activo y reducen su
antigenicidad
e inmunogenicidad.
  Disminuyen la toxicidad para ciertos órganos por modificación de la distribución
tisular del principio activo
  Se pueden preparar con componentes biocompatibles y biodegradables.
Además,
pueden prepararse industrialmente a gran escala.

3) Cuando la proporción de iones de sodio y glucosa es de 2:1, el gradiente

electroquímico generado por la Na+/K+-ATPasa ayuda al transportador a bombear
glucosa al interior de la célula a través de la membrana celular en contra de su
gradiente de concentración. Sin embargo, si la proporción fuera 1:1, se necesitaría
el doble de transportadores para transportar la misma cantidad de glucosa, lo que
resultaría en una menor eficiencia en el transporte de glucosa y un mayor gasto de
energía para lograr el mismo resultado.

4) A) Si las células en la población expresan el receptor de insulina y este ha sido

detectado en la superficie celular por un anticuerpo antirreceptor de insulina que
fluoresce en rojo, entonces es posible concluir que las células tienen el receptor de
insulina en su superficie.La fluorescencia roja producida por el anticuerpo
antirreceptor de insulina indica la presencia del receptor de insulina en la
membrana celular de las células, y no depende de la presencia de insulina en el
medio. Por lo tanto, el anticuerpo antirreceptor de insulina utilizado para detectar la
presencia del receptor de insulina en las células está diseñado para unirse
específicamente al receptor de insulina y no a la insulina. Esto significa que la
fluorescencia roja producida por el anticuerpo antirreceptor de insulina no depende
de la presencia de insulina en el medio, sino que depende únicamente de la
presencia del receptor de insulina en la superficie celular.El receptor de insulina es
una proteína que se encuentra en la membrana celular de las células y es
responsable de la captación de insulina y la regulación del metabolismo de la
glucosa en el organismo. Si las células en la población expresan el receptor de
insulina en su superficie, esto indica que tienen la capacidad de responder a la
insulina y regular su metabolismo de la glucosa.
B) Glut4 es un transportador de glucosa que se encuentra en la membrana
plasmática de las células y es responsable de la captación de glucosa por parte de
las células en respuesta a la insulina. En condiciones normales, la expresión de
Glut4 se limita a ciertos tipos de células, como las células musculares y
adiposas.En general, otras células en la población no expresan Glut4 en su
superficie en condiciones normales. Sin embargo, en ciertas condiciones
patológicas, como la diabetes mellitus tipo 1 o la diabetes mellitus gestacional, se
ha observado una expresión anormal de Glut4 en células que normalmente no lo
expresan, como las células del hígado. La expresión de Glut4 en la superficie
celular está regulada principalmente por la presencia del receptor de insulina y la
presencia de insulina en la sangre. La insulina se une a su receptor en la
superficie de las células musculares y adiposas, lo que activa una cascada de
señalización intracelular que finalmente conduce a la translocación de las
vesículas que contienen Glut4 a la membrana celular. Una vez en la membrana
celular, Glut4 puede transportar glucosa hacia el interior de la célula.En resumen,
la expresión de Glut4 en la superficie celular se limita normalmente a ciertos tipos
de células y está regulada por la presencia del receptor de insulina y la presencia
de insulina en la sangre. En condiciones patológicas, se ha observado una
expresión anormal de Glut4 en células que normalmente no lo expresan.Glut4 es
un transportador de azúcar que se aloja en la membrana celular de algunas
células y se encarga de asimilar la glucosa mediante la insulina. Regularmente, la
expresión de Glut4 es exclusiva de ciertos tipos celulares, como las células
musculares y adiposas.En general, el resto de células en una población no
presenta en su superficie la presencia de Glut4. Sin embargo, en condiciones
patológicas como la diabetes mellitus tipo 1 o gestacional, se ha detectado una
expresión atípica de Glut4 en células hepáticas que no la generan normalmente.La
expresión de Glut4 en la membrana celular está regida por la presencia del
receptor de insulina y la cantidad de insulina en circulación. Cuando la insulina se
une a su receptor en la superficie de las células musculares y adiposas,
desencadena una serie de reacciones intracelulares que desembocan en la
translocación de las vesículas con Glut4 a la membrana celular. De esta manera,
Glut4 transporta la glucosa al interior de la célula.