BIOQUÍMICA MÉDICA

Espectrofotometría
Isabella Duque Velez, Isabella Muñoz Becerra, Valentina Rodriguez Vargas, Isabella Romero Peña

Universidad Autónoma de Occidente

Cali, Colombia

Isabella.duque_velez@uao.edu.co
isabella.munoz_bec@uao.edu.co
Valentina.rodriguez_v@uao.edu.co
isabella.romero_pena@uao.edu.co

was possible to obtain the percentage of

transmittance, absorbance, and
Resumen— El presente artículo trata concentration of each sample.
como tema principal la espectrofotometría,
con el objetivo de realizar una práctica que Keywords—Spectrophotometry;
permita aplicar la ley de Beer-Lambert- absorbance; transmittance; concentration.
Bouguer para determinar las
concentraciones de varias muestras
incluyendo una desconocida, denominada
como “muestra problema” por medio de I. INTRODUCCIÓN
un espectrofotómetro. La
espectrofotometría es una técnica analítica Varias disciplinas científicas como la
utilizada para medir cuánta luz absorbe química analítica requieren de métodos
una sustancia química. Por medio de esta que permitan determinar parámetros
técnica y el equipo especializado usado en cualitativos (tipo de sustancia), como
el laboratorio se pudo obtener el cuantitativos (concentración) según el tipo
porcentaje de transmitancia, la absorbancia de compuesto químico que se desea
y la concentración de cada muestra. analizar a partir de las moléculas que este
contenga, el estudio de cualquier
Palabras clave— Espectrofotometría; biomolécula o compuesto químico a nivel
absorbancia; transmitancia; concentración. bioquímico precisa de ciertas técnicas
analíticas. Uno de los métodos que
Abstract—The main topic of this article permiten de forma sencilla y diversa
is spectrophotometry, with the aim of encontrar dichas determinaciones es la
carrying out a practical exercise that espectrofotometría que corresponde a la
allows the application of the Beer- interacción entre las radiaciones
Lambert-Bouguer law to determine the electromagnéticas y la materia, es decir, a
concentrations of several samples, la capacidad que tienen las moléculas para
including an unknown one, referred to as absorber energía radiante. Este estudio
the "problem sample", through the use of a mide las concentraciones totales de
spectrophotometer. Spectrophotometry is elementos en específico, de acuerdo a la
an analytical technique used to measure luz que pueden absorber y emitir las
how much light a chemical substance muestras; esta técnica funciona de acuerdo
a el tipo de luz y su descomposición en
función de las diferentes longitudes de
ondas visibles como no visibles.
absorbs. By using this technique and
specialized equipment in the laboratory, it
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En este laboratorio se usó el instrumento El método usado para llevar a cabo el

con el cual se realizan tales mediciones de laboratorio de manera exitosa fue la
las concentraciones, el espectrofotómetro. espectrofotometría, la cual consiste en
En el transcurso de este experimento se determinar la absorbancia y transmitancia
logró entender la transmitancia y la de determinadas sustancias químicas,
absorbancia en concordancia con la Ley de cumpliendo de este modo con el objetivo
Beer-Lambert-Bouguer la cual consiste en principal a resolver, el cual era determinar
relacionar la absorción de la luz y las las concentraciones de ciertas muestras
propiedades de la materia como se específicas.
establece en la siguiente ecuación: A =
εbc donde A es la absorbancia, b es la El laboratorio se llevó a cabo siguiendo
longitud del recorrido y c es la una lista ordenada de pasos a seguir para
concentración de la materia. obtener resultados precisos; el primer paso
y el más importante fue el de calibrar el
Una de las áreas en la que más se aplica espectrofotómetro. Debido a la delicadeza
esta relación o esta técnica es en la salud, del equipo fue el profesor el encargado de
puesto que a partir de una muestra, como supervisar el proceso, el cual consistía en
por ejemplo de sangre, se puede analizar y transferir agua destilada en una celda al
reportar ciertos niveles de moléculas que espectrofotómetro, verificar que esté en
están en ella como el colesterol. Los absorbancia y que la longitud sea la
profesionales ya conocen que elevados primera a calcular, es decir, 470nm,
niveles de enzima en ciertas áreas del posteriormente ajustar a 0,000 A y 100%
cuerpo indican que hubo actividad reciente T.
relacionada con un órgano. Una sonda
sensible de encima puede entonces En el segundo paso se debían preparar 5
interactuar con esas enzimas para producir mL de permanganato de potasio (KMnO₄)
colores y tintas, las cuales pueden ser y en una cubeta agregar 3 mL, y calcular
medidas con un espectrofotómetro. por medio del espectrofotómetro la
absorbancia y transmitancia de la solución
Ahora bien, este laboratorio se realizó con en cada longitud de onda desde 470 a 580
el fin de determinar concentraciones nm en rangos de 10 en 10.
partiendo de la Ley de Beer-Lambert-
Bouguer mencionada anteriormente, y
lograr observar lo práctico que resulta la
aplicación de esta técnica a la hora de El tercer paso consistía en preparar las
hacer análisis a nivel bioquímico. Todo soluciones a usar a partir de una solución
esto se reconoce dado que en el área de la de permanganato de potasio y una
ingeniería biomédica se necesita de concentración específica de agua destilada,
constantes análisis para la mejora y marcar cada tubo y con la información de
modernización de biomateriales que la longitud de onda donde se presentó la
ayudan a perfeccionar la eficacia en el máxima absorbancia calibrar el
ámbito de la salud y calidad de espectrofotómetro con el blanco.
tratamientos y/o fármacos, puesto esta es Finalmente medir la absorbancia,
una profesión que abarca muchos campos transmitancia y concentración de las
en los cuales aplicar el desarrollo de soluciones incluyendo la muestra
tecnología médica. problema.

Los instrumentos, reactivos e insumos

MÉTODOS utilizados a lo largo de toda la práctica
fueron:
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1 Espectrofotómetro, 4 Cubetas para 520 2,248 0.6%

espectrofotometría, Botella con 300 mL de
solución madre de permanganato de 530 2,250 0.6%
potasio (KMnO4) 5 mM, Botella con 300
mL de solución de permanganato de 540 2,162 0.7%
potasio (KMnO4) de concentración
desconocida, 3 Frascos lavadores con 550 2,127 0.7%
agua destilada, 6 Pipeteadores, 6 Pipetas
volumétricas 1 mL, 6 Pipetas volumétricas 560 1,472 3.4%
5 mL, 6 Pipetas volumétricas 10 mL, 50 570 1,294 5.1%
Tubos de ensayo de vidrio de 7 mL, 6
Gradillas para tubos de ensayo de vidrio, 2 580 0,715 19.3%
Beakers de 500 mL, 1 Cinta de
enmascarar.

RESULTADOS

Presenta los datos experimentales más

importantes y los explica en relación con
los conceptos o teorías abordados. En esta
sección incluye las tablas completas con
los datos obtenidos. También incluye
representaciones visuales de los datos
consignados en las tablas 1 y 2, usando
gráficos de planos cartesianos con las

DISCUSIÓN
variables independientes o dependientes
(X vs. Y, respectivamente). Finalmente, no En la discusión de sus resultados debe
olvide mostrar los cálculos realizados para explicar la relación entre la absorbancia y
hallar las concentraciones de KMnO4 en la concentración y cómo este conocimiento
cada uno de los tubos de la curva estándar permitió calcular la concentración de una
y dos métodos diferentes para calcular la muestra desconocida en la práctica.
concentración de la muestra desconocida a También complementa cómo puede
partir de su absorbancia. aplicarse este principio en las Ciencias
Biomédicas y la importancia de conocerlo
Tabla 1. Registro de datos del espectro de para los Ingenieros Biomédicos.
KMnO4 1 mM Finalmente, describa posibles errores que
ocurrieron durante la toma de datos en el
λ (nm) A %T laboratorio y cómo se podrían reducir o
470 1,036 9.2% mejorar para no repetirlos.

480 1,215 6.1%

CONCLUSIÓN
490 1,477 3.3%
Existen varios factores a tener en cuenta a
500 1,731 1.9% la hora de hacer mediciones con el
espectrofotómetro las cuales pueden
510 2,0 1.0% interferir con los resultados que este arroje,
como estar limpiando constantemente la
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celda con la muestra, la calibración de este la correcta manipulación del

instrumento cada que se cambia la espectrofotómetro lo cual indica que los
longitud de onda, entre algunas otras, y al resultados fueron lo más óptimos posibles
ser conscientes de tales factores permitió y con un alto índice de confiabilidad.
De acuerdo a los resultados obtenidos Sensing. Konica Minolta Sensing.
anteriormente en el laboratorio, se puede https://sensing.konicaminolta.us/mx/blog/b
apreciar que la absorbancia, la cual es la uena-salud-con-espectrofotometros/
#:~:text=Los%20espectrofot
cantidad de luz absorbida por una
%C3%B3metros%20se%20utilizan
sustancia cuando se le somete a una fuente %20com%C3%BAnmente,ser%20los
de luz, es inversamente proporcional a la %20niveles%20de%20colesterol.
transmitancia, que se define como la
cantidad de luz que pasa a través de una
sustancia. Por lo tanto, cuanto mayor es la
Utilización de espectrómetros en la
absorbancia, menor es la transmitancia. industria y laboratorios. (2021, febrero
16). Mesurex.
La absorbancia y la transmitancia se https://mesurex.com/utilizacion-de-la-
relacionan de la siguiente manera: espectrometria-en-la-industria-y-
laboratorios/
Transmitancia (T) = 1 / (10^Absorbancia)

BIBLIOGRAFÍA

Espectrometría. (2019, October 9).

Argentina.gob.ar.
https://www.argentina.gob.ar/quimica/espe
ctrometria#:~:text=La%20espectrometr
%C3%ADa%20UV%2Dvisible%20es,y
%20el%20camino%20%C3%B3ptico
%20empleado.

Konica Minolta Sensing Americas. (2021,

April 26). Buena Salud con
Espectrofotómetros - Konica Minolta
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