Biología General 66300 Laboratorio de Microscopia

LABORATORIO DE MICROSCOPIA CELULAR

Objetivos
Los estudiantes al final de este laboratorio deberían:

1. Saber explicar los principios fundamentales de microscopia:

a. diferenciar entre resolución y magnificación.
b. determinar el poder de resolución de los lentes de un microscopio.
c. explicar la resolución aumentada de los objetivos que usan aceite de inmersión.
d. definir distancia parafocal y distancia de trabajo.
2. describir las características generales de microscopios especializados.
3. Convertir unidades desde centímetros a Angstrom.
4. Identificar las partes de un microscopio de campo claro y sus funciones.
5. Realizar adecuados diagramas de las muestras observadas en el trabajo práctico.
6. Usar y limpiar correctamente el microscopio de laboratorio.

1. INTRODUCCION

El método científico requiere evidencias para la determinación de los hechos científicos. Si

nuestros sentidos son limitados, necesitamos herramientas para incrementar el poder y
precisión de nuestras observaciones, y de esta manera, nuestro conocimiento del mundo.
Para los biólogos, los microscopios de luz y electrónicos, se han vuelto “ojos”
indispensables para descubrir la detallada estructura de las células.

¿Cómo los microscopios extienden los límites de la visión humana?

• Ellos magnifican una imagen, incrementando su tamaño para que pueda

ser vista por el ojo humano y,
• Ellos aumentan la resolución, el nivel de detalle entregado por la
magnificación.

De esta manera, la resolución es la habilidad del instrumento (el ojo, una cámara, un
microscopio) para ver distintos objetos adyacentes como objetos separados y no como un
solo gran objeto. Por ejemplo, ¿Cuan cerca pueden estar dos líneas paralelas antes de no
ser posible observarlas separadamente? ¿Cuan delgada puede ser una línea antes de
volverse invisible?

☼ Leer cuadro de texto “El Reino de lo Ultra pequeño”

Los lentes de un ojo humano (el cristalino) tiene un limite de resolución de
aproximadamente 100 µm. Esto significa que el ojo verá dos objetos como diferentes si el
espacio entre ellos es al menos 100 µm. Si el espacio es 90 µm, ellos parecerán un solo
objeto. Los mejores microscopios de luz tienen límites de resolución de 1 nm. Ellos verán
objetos y espacios entre ellos tan pequeños como 1 nm. Si usted observa el final de esta
sentencia observará un punto. Imagine que este punto es una célula compuesta de muchas
partes. Si usted magnifica el punto una 100 veces sin incrementar la resolución (como
ocurriría al aumentar una fotografía) usted tendrá como resultado una imagen más grande
pero sin mayores detalles (esto se llama magnificación vacía). Aumentando el punto 100
veces con un microscopio, sin embargo, revela las estructuras ultra finas de la imagen. De
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esta manera la magnificación útil EL REINO DE LO ULTRA PEQUEÑO

de un sistema de visión depende
de su poder de resolución. Los Debido a su tamaño, las dimensiones de los virus, células y sus partes
dos factores más importantes que componentes son expresadas en unidades de fracciones de un metro
que pueden ser poco familiares para usted que los centímetros y
determinan el poder de resolución milímetros. Estas unidades incluyen los micrómetros, nanómetros y
son la calidad del sistema de Ángstrom
lentes y la longitud de onda de la
fuente de iluminación. La Unidad Fracción de metro Ejemplo
resolución varía inversamente Centímetro 1/100 ó 10-2 Diámetro del corazón
con la longitud de onda; una corta (cm) humano (8 cm)
Milímetro 1/1.000 ó 10-3 Diámetro de una arteria
longitud de onda permite una
(mm) (6 mm)
mayor resolución. Micrómetro 1/1.000.000 ó 10-6 Diámetro de un glóbulo
(µm) rojo (8 µm).
Diámetro de una
Microscopios de luz bacteria (1 µm)
Nanometro 1/1.000.000.000 ó 10-9 Virus del Herpes (130
(nm) nm)
Los microscopios estándares de 1/10.000.000.000 ó 10-10
Ángstrom Molécula de
laboratorio son microscopios (Å) hemoglobina (10 Å)
compuestos, están construidos
de dos lentes en serie que
enfocan los rayos de luz para iluminar el objeto.
La magnificación o aumento total es obtenida al multiplicar el aumento de ambos lentes.
Lentes de alta calidad dan a los microscopios de luz poder de resolución alrededor de 200
manómetros, un aumento de unas 500 veces con respecto al ojo humano. Esto permite al
observador visualizar los márgenes de las paredes celulares bacteriales y sólo una ojeada
a las grandes estructuras internas de las células animales y vegetales.

Microscopio de campo claro

El microscopio de luz más común es el microscopio de campo claro, es el que usa luz
visible para iluminar el espécimen.

☼ ¿Para que sirven cada una de los componentes indicados?

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2. ACTIVIDADES.
Cuando use un microscopio, tenga en mente las siguientes consideraciones:
• Al transportar el microscopio, siempre tómelo del brazo. Sosténgalo verticalmente y apoye
la base sobre su mano libre.
• El brazo sostiene un tubo inclinado que a su vez sostiene los elementos magnificadores
del microscopio. Al final del tubo está el ocular, uno de estos elementos. Los otros
elemento de magnificación están atornillados en una pieza al final del tubo, estos se
llaman objetivos.
• Bajo el tubo inclinado y los objetivos, hay una placa plana, la plataforma o platina, sobre
la cual se posicionan los elementos que serán observados. Directamente bajo la abertura
de la plataforma, hay un sistema de lentes, el condensador, que sirve para concentrar la
luz desde la fuente de iluminación de más abajo.
• La luz juega un papel muy importante en la operación de un microscopio compuesto. Esta
debe ser ajustada adecuadamente, para lo que existen varios controles. El diafragma se
puede ver debajo del sistema condensador.
Los cambios y ajustes de foco, necesarios cuando un objeto se pone sobre la plataforma para su
observación, se realizan con las perillas de ajuste grueso y fino (macro y micrométricos).

El uso correcto del microscopio requiere varios tipos de ajuste, los cuales son necesarios
para que veas con claridad y en todo su detalle cada objeto que debes estudiar. Bajo la
supervisión de los ayudantes y profesor de laboratorio, aprenderás a manejar el
microscopio compuesto a través de la siguiente práctica:

1. Antes de usar el microscopio, verifica que los lentes oculares y objetivos estén
limpios. Si es necesario limpiar los lentes u otras partes del microscopio (como el
condensador o el filtro azul) sólo debes usar papel de lente seco; la única humedad
que puede emplearse es la del aliento para empañar el lente y luego frotarlo
suavemente. Si la muestra está sucia o si está mojada por debajo, puedes usar un
papel secante para limpiarla. Una de las principales causas de una imagen borrosa
y poco definida es la presencia de sucio en los lentes o en la preparación,
especialmente polvo y huellas digitales en los oculares. Nunca debes tocar los lentes
o la parte central de la muestra con los dedos. Puedes localizar suciedades de la
siguiente manera:
a. si la interferencia se mueve al mover la muestra, está en la muestra
b. si la interferencia se mueve al mover los oculares, está en los oculares
c. si la interferencia desaparece al cambiar el objetivo, está en el objetivo
anterior
d. si la interferencia entra y sale de foco al subir y bajar el condensador, está en
el condensador
e. si la interferencia no se mueve y no está en ninguno de los lugares anteriores,
puede estar dentro del microscopio; debes notificar a la profesora o ayudantes
de laboratorio; no remuevas ninguna parte del microscopio

2. Enchufa el microscopio. Prende el iluminador; la luz roja debe indicar que está
encendido, aunque puede ser que no se vea iluminado. Ajusta la intensidad de luz a
un nivel cómodo. Hay que volver a ajustar la intensidad de luz al cambiar el objetivo
o la muestra. Si la luz no funciona, avisa a la profesora o ayudantes de laboratorio
para que se cambie la ampolleta.

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3. Ajusta la distancia ínter ocular para adaptar la distancia entre los oculares a la
distancia entre los ojos, moviendo lateralmente la base de los oculares hasta que
veas claramente una sola imagen. El propósito principal de los dos oculares es el de
minimizar la interferencia de luz ambiental y de otras imágenes y,
consecuentemente, la fatiga visual. Los dos oculares no proporcionan una imagen
estereoscópica, porque hay un solo objetivo. La distancia interpupilar varía para cada
estudiante; por lo tanto, hay que hacer este ajuste al principio de cada laboratorio.

4. Escoge una muestra preparada y límpiala. Sólo debes montar preparaciones en

la platina o removerlas con el objetivo de 4x ó 10x (los objetivos más cortos) en la
posición vertical—nunca con el de 40x (el más largo). En este caso, el objetivo de 4x
debe estar en la posición vertical, directamente encima del condensador. Abre la
grapilla de la platina mecánica, monta la muestra correctamente sin tocar el objetivo
con ésta y deja que la grapilla se cierre suavemente. Usa los dos tornillos de la platina
mecánica para mover la preparación hasta que esté directamente debajo del
objetivo; verás que la iluminación pasa por el objeto cuando éste está en la posición
apropiada.

5. Enfoca el microscopio. Mirando por fuera el objetivo para que no toque la muestra,
usa el tornillo macrométrico para subir la platina a la posición más alta (no hagas
esto con el objetivo de 40x en la posición vertical). Mirando entonces por los oculares
(los estudiantes con anteojos pueden removerlos para facilitar el uso del
microscopio), usa el tornillo macrométrico para bajar la platina hasta que el objeto
esté en foco. Cerrando el ojo izquierdo, usa el tornillo micrométrico para lograr una
imagen en perfecto foco. Cerrando el ojo derecho, usa el ajuste en el ocular izquierdo
para corregir el foco. Este ajuste es necesario al principio de cada laboratorio.

6. Estudia la preparación o muestra. Si quieres obtener más detalles, cambia a un

objetivo de mayor magnificación (10x ó 40x), corrigiendo el foco con el tornillo
micrométrico solamente. Antes de cambiar el objetivo a uno de mayor magnificación,
el objeto debe aparecer en el centro del campo de visión. Después de cambiar el
objetivo debes ajustar la apertura del diafragma y la iluminación: un objetivo de
mayor magnificación requiere mayor apertura del diafragma y mayor intensidad de
iluminación. Antes de remover la muestra, debes devolver el objetivo de 4x ó 10x a
la posición vertical.

a. Muestras a observar. En este laboratorio se le proporcionarán algunas

preparaciones con la cuales usted practicará el uso del microscopio así como
la realización de esquemas utilizando la plantilla al final de esta guía.

7. EVALUACION.

Este laboratorio evaluará el trabajo desempeñado durante la sesión de trabajo y la

evaluación será individual.
• Se esperan de parte del estudiante dos tipos de productos que deberán ser
entregados al final del laboratorio:
o Un protocolo de observación en microscopio óptico, es decir, una guía paso
a paso, escrita por el estudiante, que sea lo suficientemente precisa tanto en
detalles como uso del lenguaje para que una tercera persona pueda utilizar el
microscopio óptico y obtenga resultados similares a los obtenidos por el
estudiante.

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o Dibujos detallados de a lo menos 2 preparaciones (el alumno podrá escoger

cuales) en el formato de la plantilla adjunta al final de esta guía, cada
preparación debe ser dibujada en dos diferentes aumentos del microscopio.

3. PREGUNTAS
Algunas de las preguntas que aparecen a continuación serán evaluadas como parte de la
prueba de este laboratorio, esta prueba se realizará online en el sitio web del curso y se
llevará a efecto después de la segunda sesión de laboratorio. Le sugerimos que las
responda previo a la realización del trabajo práctico, se requiere que usted averigue
aquellas preguntas que no pueda contestar con los contenidos de esta guía.

1. 10 milímetros es equivalente a _____ micrómetros.

2. Un objeto de 100 angstrom de ancho es equivalente a _______ micrometros.
3. El tamaño de un ribosoma es de alrededor de 25 nm. Esto es equivalente a ______
micrometros o _______ Angstrom.
4. ¿Cuál es el lente de microscopio más cercano al ojo del observador?
5. ¿A que concepto se refiere la siguiente afirmación? “Es la distancia entre el
espécimen y el lente objetivo”
6. ¿Qué tipo de instrumento es el mostrado en la figura de la derecha?
7. ¿Qué tipo de preparaciones deben ser observadas en el
microscopio con el uso de aceite de inmersión?
8. ¿Qué es el aceite de inmersión?
9. ¿Qué debería usarse para limpiar el objetivo con el cual se usó
aceite de inmersión?
10. En un microscopio de campo claro ¿con que se realiza el ajuste
fino del enfoque?
11. Mencione los otros tipos de microscopios que se utilizan en
investigación.
12. Cuando usted observe una muestra en un microscopio común
de campo claro, al moverla muestra en la platina hacia la derecha, la imagen en el
ocular se moverá a la izquierda. ¿Por qué?
13. ¿Qué es la refracción de la luz?
14. ¿Qué es la reflexión de la luz?
15. ¿Cuál es la típica magnificación de un ocular de microscopio?
16. Si el objetivo es 10x y el ocular es 10x ¿Cuál es la magnificación total?
17. ¿En que situación podemos obtener un aumento total de 1000 veces?
18. ¿Qué debe usted hacer antes de encender la luz del microscopio para asegurarse
de no quemar la ampolleta por un encendido brusco?
19. ¿Qué objetivo debe siempre ser utilizado primero al comenzar una nueva
observación?
20. ¿Qué objetivo permite ver un área mayor de la muestra que está observando?
21. Describa dos maneras de disminuir la intensidad de la luz que incide sobre la
muestra.
22. ¿Qué es un vidrio cubre objeto?
23. ¿Qué es un vidrio portaobjeto?
24. Cuando usted levante el microscopio para trasladarlo a otro lugar ¿Qué donde tiene
que sujetarlo?
25. En las preparaciones que observaste en el laboratorio. ¿Cómo sabes que observas
una célula procarionte?
26. En las preparaciones que observaste en el laboratorio. ¿Cómo sabes que observas
una célula eucarionte?
27. ¿Qué tipos de organismos poseen células eucariontes?
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28. ¿Qué estructuras celulares sólo se pueden ver con el microscopio electrónico?
29. ¿Cuáles son las estructuras únicas de células vegetales?
30. ¿Qué estructuras son comunes tanto a plantas como a células animales?
31. ¿Qué diferencia hay entre plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas?
32. ¿Qué es la tinción GRAM?
33. ¿Para qué tipo de preparación se utiliza la tinción GRAM?
34. ¿Qué es la tinción GIEMSA?
35. ¿para que se usa la tinción GIEMSA?
36. ¿Qué le pasara a la muestra de sangre que usted obtenga en el laboratorio si le
agrega suero fisiológico?
37. ¿Qué le pasara a la muestra de sangre que usted obtenga en el laboratorio si le
agrega agua?

4. SITIOS WEB RECOMENDADOS.

En las siguientes direcciones de Internet aparece contenido en el cual está basado la
confección de esta guía de laboratorio, le recomendamos que los revise y complemente su
conocimiento.

• General Microbiology laboratory

http://biology.fullerton.edu/biol302/302labf99/labsyll.html
• Introduction To The Culture and Methods of Biology.
http://science.kennesaw.edu/~pachar/Biol2101/Biol2101.htm
• General Biology laboratory
http://biology.clc.uc.edu/courses/bio114/carter.htm
• Lentes
http://es.wikipedia.org/wiki/Lente
• Standard Microscopy Terminology.
http://resolution.umn.edu/glossary/FrameGloss.html
• SCANNING ELECTRON MICROGRAPHS
http://www.ship.edu/~gspaul/sems.html

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