23-06-23

CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE DE
PLANTAS MEDICINALES

INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES

La Investigación etnobotánica y
etnofarmacológica de las especies
vegetales para su posible utilizaciòn
fitoterapèutica, exige un delicado
protocolo de trabajo que incluye toda
la escala de pruebas y ensayos que
van desde la selección de una
determinada planta de acuerdo a
ciertos criterios hasta una exhaustiva
gama de ensayos farmacològicos,
químicos fitoquímicos, toxicológicos y
clínicos.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto
X.10 . CYTED

1
 23-06-23

¿Ensayos Clínicos en Plantas Medicinales?

ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS ESTUDIOS CLINICOS

A
U
ESTUDIOS T
TOXICOLÓGI O ESTUDIOS
COS R FASE I
I
D ESTUDIOS
ESTUDIOS A FASE II
FARMACÓLO D
GICOS
R ESTUDIOS
E FASE III
ESTUDIOS G
QUIMICO- U AUTORIDAD
FARMACÉUTICOS L REGULADORA
A
D ESTUDIOS
ESTUDIOS O
R FASE IV
ETNOBÓTANICOS,
AGRONÓMICOS
A

2
 23-06-23

FASES DE ESTUDIO DE UN NUEVO

MEDICAMENTO

Selección y Estudos pre-clínicos Estudos pre-clínicos

estandarización
del material activo FASE I FASE II
• Eficacia • Farmacocinética
• Efectos colaterales • Toxicologia especial
• Toxicologia aguda
• Doses repetidas

Test clínicos Test clínicos Test clínicos Test clínicos

FASE I FASE II FASE III FASE IV

VOLUNTÁRIOS PACIENTES MULTICÉNTRICO USO GENERAL
• limites de dosis • eficacia • efectos colaterales • vigilancia médica
• farmacocinética • interacciones
• efectos inesperados • ventajas
• limitaciones

INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES

(EQUIPO MULTIDISCIPLINARIO)
CULTIVO SÍNTESIS PATENTES
(ING. FORESTAL, ING. QUÍMICA
AGRONOMO, ETC)
COMBINATORIA FARMACOLOGÍA
L
MOLECULAR
QUÍMICA
ORGÁNICA
(QUIMICOS; INGENIEROS
QUÎMICOS,
FARMACÉUTICOS, ETC)

FARMACOLOGIA TOXICOLOGIA ENSAYOS

PLANTA CLÍNICOS(FARMACOLOGOS;,QUIMICOS FARMACEUTICOS; MEDICOS; ETC)

PROCESO DE VALIDACIÓN
BOTÁNICA CONTROL DE CALIDAD
(BOTANICOS, TAXONOMOS FARMACEUTICOS; BIOLOGOS, ETC)
FITOMEDICAMENTOS

ETNOFARMACOLOGIA COMERCIALIZACION, EXPORTACION

(FARMACÓLOGOS; ANTROPÓLOGOS;FARMACÉUTICOS; (EMPRESARIOS, EXPORTADORES,
BIOLOGOS;MEDICOS, ETC).
COMUNIDADES ANDINAS, AMAZONICAS, ETC)

3
 23-06-23

VALIDACIÓN DE
PLANTAS MEDICINALES

PLANTA Test in vitro,

preclínicos
Perfil farmacológico
Análisis toxicológico Y clínicos

EFICACIA SEGURIDAD

PLANTA MEDICINAL

Síntesis química de
NUEVOS derivados activos
MEDICAMENTOS

Fracciones purificadas
Extracto total de la planta Principios activos aislados e
identificados
7

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS
Numerosos estudios en nutrición humana
demuestran una estrecha correlación entre el
consumo de frutas y verduras y la menor
incidencia de enfermedades crónico
degenerativas debido a su bajo contenido en
calorías, colesterol y a la presencia de
vitaminas, fibras, antioxidantes naturales y
minerales.
Así mismo el estrés oxidativo ha sido
asociado a la patogénesis de muchas
enfermedades humanas, como
arterioesclerosis, artritis, demencia, cáncer,
etc; es por ello que el uso de antioxidantes en
farmacología es estudiado de forma
intensiva, particularmente en el tratamiento
de accidentes cerebrovasculares y
enfermedades neurodegenerativas.

4
 23-06-23

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS

El oxígeno es esencial para la mayoría de

los organismos que viven bajo condiciones
aerobicas. Este es utilizado por la célula , la
cual posee diversos sistemas que producen
radicales libres de oxígeno(RLO).

Frente al poder agresivo de estos RLO, la

célula posee un arsenal defensivo de
mecanismos neutralizantes formado por
enzimas y compuestos que evitan la
formación incontrolada y excesiva de RLO
y producen la neutralización, eliminación y
bloqueo de su actividad en cadena

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS
La enzima superóxido dismutasa
remueve el anión superóxido (O2º)
convirtiéndolo en H2O2, el cual es
transformado por la enzimas catalasa y
Glutatión peroxidasa en agua (H2O)
.

Así mismo también posee moléculas

que remueven los radicales libres por
reacción directa (no catalítica) tales
como: el glutation reducido, los
tocoferoles (vitamina E) y el ácido
ascórbico (Vitamina C).

10

5
 23-06-23

● Así mientras que niveles moderados de RLO

constituyen y modulan vías fisiológicas de funciones
celulares, incluyendo señalización en cascadas y el
control de la expresión génica transcripcional y post-
transcripcional, el estrés oxidativo severo induce
daño celular que puede conducir a apoptosis o a la
necrosis.

● Por tanto el estrés oxidativo se deriva de la falta de

equilibrio entre los mecanismos de defensa
antioxidante y los fenómenos favorecederos de la
oxidación.

11

PROCESOS OXIDATIVOS

● Dos fenómenos muy importantes en nuestra vida son

procesos oxidativos: la combustión y la respiración.
Ambos se asemejan, ya que son procesos a través
de los cuales sustratos combustibles se transforman
en energía consumiéndose oxígeno y liberándose
agua y dióxido de carbono.

● Así, la combustión, es un proceso oxidativo en el

cual un combustible se transforma en energía en
forma de luz y calor, produciéndose además dióxido
de carbono (CO2) y agua. Pero si el proceso no es
perfecto, la oxidación no es total y produce
contaminantes, como el monóxido de carbono.

12

6
 23-06-23

● En la respiración ocurre lo mismo: La glucosa y

ácidos grasos - se transforman en energía. Esta
transformación se realiza al interior de la célula, en la
mitocondria y exactamente, se produce ATP, la
molécula clave para la síntesis de los componentes
celulares y para la mayoría de los procesos celulares,
y que se conoce también como la "moneda"
energética de la célula.

● En la respiración se consume oxígeno, se genera

ATP, y quedan como residuos dióxido de carbono y
agua. Pero, este proceso no es perfecto ya que se
producen también otras moléculas contaminantes, las
Especies Reactivas del Oxígeno (EROs). Entre el 1
y 3 % del oxígeno que respiran nuestras células al
oxidar sus sustratos se transforma en EROs, que, o
bien son radicales libres, o llevan a su formación.

13

ESPECIES OXIGENO REACTIVAS (ROS)

Por causas ambientales (radiación), así como por la ingesta

de algún contaminante o incluso como consecuencia de
nuestro propio metabolismo, surgen algunas moléculas
que nos pueden provocar daño.

A estas se les conoce como especies oxigeno reactivas

(ROS), que se asocian a enfermedades como cáncer,
problemas cardiacos o al natural envejecimiento humano.

Entre los problemas que originan figuran: destrucción de

paredes celulares, inactivación de enzimas, debilitamiento
de la capacidad defensiva, alteración del sistema
inmunológico e incluso daño del material genético .

14

7
 23-06-23

RADICALES LIBRES

Además la radiación cósmica y la radiación

electromagnética de baja longitud de onda (por
ejemplo los rayos gama) pueden dividir el agua en el
cuerpo para generar el radical hidroxilo, OH▪.

Este radical débilmente reactivo una vez producido

ataca a cualquier cosa que este cerca, siendo su vida
media extremadamente pequeña y reaccionando en
su punto de formación dejando tras de si una secuela
de reacciones en cadena de radicales libres en
propagación.

15

Antioxidantes
● Se define como cualquier sustancia que, a bajas concentraciones en
comparación con el sustrato oxidable, retrasa o inhibe
significativamente la oxidación de dicho sustrato. Para lograrlo los
antioxidantees entregan un electron a los radicales libres, con lo cual
los desactivan, apagando el proceso de oxidaciòn y transformandose
ellos en radicales libres inactivos o poco reactivos.

● La importancia de un antioxidante depende de su concentración, del

medio donde actúa y de su habilidad para interaccionar con sistemas
regeneradores.

● Ciertas enfermedades como la arterioesclerosis, degeneraciones

ligadas al envejecimiento y el cáncer, podrían estar unidas al
fenómeno de la oxidación celular mediada por radicales libres.

16

8
 23-06-23

EL ENVEJECIMIENTO ENFERMEDADES
CRONICODEGENERATIVAS

17

Envejecimiento celular Peroxidación de los ácidos grasos de

la membrana celular y daño del ADN.
Ateroesclerosis Peroxidación de lípidos en las
partículas de LDL con daño de otros de
sus componentes.
Cáncer Daño del ADN.
Cataratas Modificaciones irreversibles en las
proteínas.
Cuadros Inflamatorios Crónicos Activación de genes relacionados con
la respuesta inflamatoria.

18

9
 23-06-23

OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS

La oxidación de las moléculas biológicas,

membranas y tejidos es inducida por el oxigeno
activo y mediada por radicales libres, lo cual esta
relacionado con un aumento en la incidencia de
enfermedades digestivas en los seres humanos.
El metabolismo oxidativo, proceso biológico
normal, es capaz de generar radicales libres
oxigenados, altamente reactivos. Estas especies con
oxígenos activos incluyen el radical superóxido
(O2º), el peróxido de hidrógeno (H2O2), el radical
óxido nítrico (NO▪) y el oxígeno singulete ( O2).
1

19

Sustancias propias del organismo,

enzimas antioxidantes
● Tambièn cierta parte de los superóxidos son producidos
por accidentes químicos en los que muchas moléculas del
cuerpo reaccionan directamente con el Oxigeno para
producir súperóxido. Ejemplos de ello incluyen las
catecolaminas, tetrahidrofolatos y algunos componentes
de la cadena mitocondrial y otras cadenas de transporte de
electrones.

● Esta producción de superóxido es inevitable. Además

cierta cantidad de súper óxido se produce
deliberadamente por ejemplo los fagocitos activados
(neutrófilos, monocitos, macrófagos, eosinófilos) dan lugar
a grandes cantidades superóxido como parte del
mecanismo a través del cual exterminan a los organismos
extraños durante las inflamaciones crónicas este
mecanismo protector normal puede afectarse.

20

10
 23-06-23

Sistemas antioxidantes del organismo

● . ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS.
INTRACELULAR. ENDOGENOS
Catalasa
Glutation peroxidasa
Gutation reductasa
Superoxido dismutasa
Complejo reparador de ADN
ANTIOXIDANTES NO ENZIMATICOS.
EXTRACELULAR. ENDOGENOS DIETARIOS EXOGEBNOS
Glutation B Caroteno
Urato Vit C y E
Ubiquinol Polifenoles
Poteínas plasmáticas Flavonoides
Químicos sintéticos
21

Sustancias propias del organismo,

enzimas antioxidantes

Además de las enzimas glutatión peroxidasa, catalasa y

superóxido dismutasa, hay otras sustancias
antioxidantes como la coenzima Q-10, que ayuda a las
enzimas a realizar su función, y participa en
numerosos procesos corporales.

Se ha comprobado una gran similitud entre las

propiedades antioxidantes de la vitamina E y las de la
coenzima Q-10, que juega un muy importante papel en
la generación de energía celular, y a su vez es un
estimulante inmune, mejora la circulación y ayuda a
proteger el sistema cardiovascular.

22

11
 23-06-23

Sustancias propias del organismo,

enzimas antioxidantes

Entre los principales antioxidantes dietarios esta la vitamina E que

se ha demostrado posee actividad antioxidante in vivo.

La vitamina C in vitro regenera a la vitamina E, lo que

probablemente ocurra tambien in vivo.

Los carotenoides estàn presentes en zanahorias , berros, espinacas,

tomates , mangos y damascos.

Los polifenoles son un grupo de compuestos presentes en la

naturaleza, en su mayoría potentes antioxidantes necesarios para
el funcionamiento de las células vegetales, que se encuentran en
frutas y verduras, principalmente manzanas y cebollas y en
bebidas como el té y el vino.

23

Los principales polifenoles identificados en la

dieta son àcidos fenólicos, derivados de
tirosina, estilbenos, flavonoides y
compuestos poliméricos como los taninos.
En estudios in vitro, muchos polifenoles
naturales son mejores antioxidantes que la vit
C y E, siendo la quercetina la sustancia más
abundante.
Los citroflavonoides presentes en algunos
cítricos, como el hesperidósido y el rutósido,
son eficaces antioxidantes.

24

12
 23-06-23

Moléculas con actividad antioxidante

Flavonoides

25

Investigación de plantas
con actividad antioxidante

26

13
 23-06-23

OBTENCION DEL
MATERIAL VEGETAL(MV)

El MV que serà utilizado para la investigación se debe

recolectar de acuerdo con cada especie, la época de
recolección, la parte que es utilizada, la naturaleza,
cantidad y tipo de principio activo, los mismos que
varían considerablemente de acuerdo a la familia,
género y especie de cada planta medicinal y se debe
proceder de forma rigurosa a su correcta
identificación, posterior preservación, conservación y
preparación.

27

Plantas peruanas nativas e introducidas

evaluadas

28

14
 23-06-23

EXTRACCION DEL MATERIAL

VEGETAL
● Una vez seleccionada y
recolectada la especie que
se quiere estudiar se
dispondra de una cantidad
apropiada de material
vegetal seco que puede
triturarse en mayor o menor
grado,según el caso y
posteriormente someterse a
la acción del disolvente
oportuno en las condiciones
y con la duración adecuadas
para conseguir la extracción
más completa posible de las
sustancias activas en el MV.

29

SCREENING FITOQUIMICO

● El objetivo de la primera extracción se centra

en la obtención de una pequeña porción de
extracto, en cantidad suficiente que permita
por un lado, la realización de los bioensayos
preliminares programados , encaminados a
demostrar la presencia de sustancias
bioactivas en él y por otro disponer de
materia para obtener cromatogramas (CF) en
diversas condiciones de elución, espectros de
infrarojo(IR) y de Resonancia Magnetica
Nuclear de protón (RMN), que sirvan para
caracterizar suficientemente el extracto y
proporcionar información sobre su probable
composición.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED

30

15
 23-06-23

CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS

Para conseguir el aislamiento y purificaciòn de los

principios activos , se recomienda utilizar algunas
técnicas fisicoquímicas e instrumentales que puedan
informar sobre la naturaleza y composición de los
extractos y fracciones que se estén analizando y
puedan permitir detectar la presencia de algunos
tipos de metabolitos, alcaloides, flavonoide,
esteroides, saponinas.

Como herramienta fitoquímica se utiliza un conjunto

de técnicas muy bien establecidas, que están
basadas en reacciones coloreadas, selectivas o
específicas y que mediante reactivos de diverso tipo,
aplicados generalmente de forma directa sobre el
extracto o sus fracciones o sobre placas
cromatográficas desarrolladas, proporcionan
información sobre la presencia de distintos grupos
de metabolitos.
Manual de Técnicas Experimentales .

31

OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS

Otro grupo de herramientas muy útiles se

basan en la aplicación de técnicas
espectróscopicas generalmente disponible.

Es conveniente obtener espectros IR (neto) y

RMN1H (Preferentemente en CDCl3 o
DMSO-d6) del extracto o la fracción, para
tratar de detectar y estimar particularmente
la presencia y la proporción de componentes
lineales y otros tipos de metabolitos
secundarios definidos.

32

16
 23-06-23

CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS

La estimación de la presencia de componentes lineales se

consigue directamente mediante observación simple de la
intensidad y proporción de las absorciones hacia 720 cm-1(IR) y
1,25 ppm (RMN 1H).

La estimación de componentes funcionalizados se puede llevar a

cabo tambien mediante la observación del espectro de IR, a
través de las absorvaciones que aparezcan en las regiones de
3,500-3000 cm-1(funciones NH y OH, olefinas y sistemas
aromáticos), 1800-1500 cm-1 (carbonilos, carboxilos e
insaturaciones ) y 1100-800 cm-1 (éteres e insaturaciones);
complementandola con la observación del espectro de RMN1H ,
en las zonas 13-8 ppm (H puente, aldehidos, amidas), 8-6 ppm
(aromáticos y olefínicos conjugados)), 6-3 ppm (olefínicos,
alcoholes, ésteres, grupos metoxilo, azúcares) y 3-0,5 (metilos)
ppm.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED (pag 37)

33

VALIDACION
VALIDACION EXPERIMENTAL
EXPERIMENTAL

Tamizaje In vitro (céluas , órganos aislados)

/ In vivo: preclínica (animales) y clínica (humanos)
antiinflamatoria, antitumoral, antiviral espasmolítica,
analgésica, diurética, hipoglicémica, sedante, antioxidante,
antiinfecciosa, cicatrizante, etc.
Extracción fraccionada ( > ó < polaridad)
Fraccionamiento dirigido.
Elucidación estructural: a) Universidad de Salamanca.
(Departamento de Química Farmacéutica
Dr. Arturo San Feliciano)
b) Universidad Autónoma de Mexico
(Instituto de Química. Dr. Ricardo Reyes Chilpa).

34

17