UAM IZTAPALAPA

LABORATORIO DE QUIMICA ANALITICA AVANZADA

PRACTICA 1
CROMATOGRAFIA CAPA FINA (TLC)

INTRODUCCIÓN.
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por
distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Varios
tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases
involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-líquido y gases-liquido (fase
vapor).

La cromatografía en capa fina (TLC) es un método de afinidad que se utiliza para separar los
compuestos de una mezcla. La TLC es un método de separación muy versátil que se utiliza
ampliamente para el análisis cualitativo y cuantitativo de las muestras. La TLC puede utilizarse
para analizar prácticamente cualquier clase de sustancia: plaguicidas, esteroides, alcaloides,
lípidos, nucleótidos, glucósidos, carbohidratos y ácidos grasos.

En la TLC, la fase estacionaria es una fina capa de material adsorbente, normalmente gel de
sílice u óxido de aluminio, que recubre una superficie de placa inerte, normalmente vidrio,
plástico o aluminio. Se deposita una pequeña cantidad de la muestra en un extremo de la
placa de TLC, que se coloca verticalmente en una cámara cerrada con un disolvente
orgánico (fase móvil). La fase móvil se desplaza hacia arriba por la placa por capilaridad y los
componentes de la muestra migran distancias variables en función de sus afinidades
diferenciales por las fases estacionaria y móvil. Cuando el disolvente llega a la parte superior
de la placa, ésta se retira de la cámara de desarrollo y se seca. Los componentes separados
aparecen como puntos en la placa, y se evalúa el factor de retención (RF) de cada
componente.

La TLC se basa en el principio clásico de la cromatografía según el cual, los componentes de

una mezcla se separan entre una fase fija estacionaria y una fase móvil líquida por afinidades
diferenciales entre las dos fases.

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño
espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa
y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes.

FACTOR DE RETENCIÓN DE LA TLC (RF)

El factor de retención (Rf) se utiliza para medir el movimiento de los compuestos a lo largo de
la placa de TLC. Rf se define como la distancia recorrida por un componente dividida por la
distancia total recorrida por el disolvente. Su valor se encuentra siempre entre cero y uno.

distancia recorrida por el componente

Rf =
distancia recorrida por el disolvente

En general, cuanto más fuerte se une un compuesto a la fase estacionaria adsorbente, más
despacio migra hacia arriba en la placa de la TLC. Como los adsorbentes de la TLC son
normalmente polares, los compuestos no polares tienden a subir más deprisa por la placa, lo
que produce mayores valores de Rf, mientras que los compuestos polares tienden a moverse
más despacio e y tienen menores valores de Rf.
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APLICACIONES DE LA TLC
La TLC se utiliza ampliamente en muchas industrias y campos de investigación, como los
farmacéuticos, los ensayos clínicos, la toxicología medioambiental, los alimentos, los análisis del
agua y los plaguicidas pesticidas, y los cosméticos. Las aplicaciones habituales de la TLC son:

• Análisis de residuos farmacológicos y de antibióticos en muestras alimentarias y

medioambientales
• Identificación y cuantificación de colores, ingredientes, conservantes y edulcorantes en
alimentos y cosméticos
• Control de calidad y ensayos de pureza de formulaciones farmacéuticas
• Cribado rápido, de gran rendimiento antes de la HPLC
• Examen de finalización de reacciones químicas

OBJETIVO.
Que el alumno aprenda el fundamento, la metodología y los efectos de la técnica de
cromatografía en capa fina a través de la separación de una muestra de aminoácidos.

MATERIALES.
1 cromatoplaca de cromatografía de capa fina de 20x20 cm DC Kieselgel 60 F254.
Burbuja Niveladora (profesor)
Cámaras de Corrimiento para Cromatoplacas 1 Lámpara UV-Visible
1 gradilla
1 mechero Bunsen
5 capilares de Vidrio 1 Piceta con Agua
1 vaso de Precipitados de 250 mL 4 Vaso de precipitado de 100 mL 1 Pliego de Papel Filtro
1 Pliego de papel amarillo

REACTIVOS.
Agua Destilada Ácido Acético butano
Ninhidrina en Etanol-Agua al 50%
Alumnos:
Muestras Obtenidas en la Practica 1 1 Par de guantes por alumno
1 Regla
1 Lápiz
1 Secadora para el Cabello
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METODOLOGÍA
PREPARACION DE LA CROMATOPLACA
Colocar la cromatoplaca previamente en una estufa a 40ºC durante 30 min.
Después lavar y secar la cámara cromatográfica y ubicarla nivelada en un lugar donde se
realizará el corrimiento.

Cubrir con un pliego de papel filtro una de las paredes interiores de la cámara cromatográfica
y adicionar dentro de la cámara una mezcla butano: agua: ácido acético (4:1:1
respectivamente), hasta un nivel menor a 0.5cm de altura y tapar para que el ambiente
interior se sature.

La placa se tomará siempre con los guantes y se marcaran en forma tenue con un lápiz y
regla, carriles paralelos de 1cm de ancho. De la misma forma se marca suavemente el origen
a 1cm del borde inferior, que servirá para colocar las muestras.

APLICACIÓN DE LAS MUESTRAS

Previamente las muestras estándares de los aminoácidos y la muestra problema se disolverán
en etanol.
Después para cada muestra se absorbe con un capilar y se aplica puntualmente en la
cromatoplaca en el carril correspondiente, dejando secar entre cada aplicación.
Efectuar este proceso 6 veces, evitando que la mancha crezca en tamaño.

OBTENCION DEL CROMATOGRAMA

Posteriormente colocar con cuidado la cromatoplaca en el interior de la cámara y cerrar.
Esperar que el solvente realice el corrimiento hasta que llegue a 1cm antes del borde de
superior, se debe evitar movimientos en la cámara. Marcar este nivel con el lápiz; dejar secar
la cromatoplaca.

Para el revelado, colocar la cromatoplaca en una cámara UV y observar si se presenta alguna

mancha cuando ésta se exponga ésta a la luz. Marcar tenuemente con un lápiz cada una de
las manchas, medir la distancia recorrida total y de cada mancha para calcular el Rf.

El registro de resultados se efectuará en un cuadro, que indique la distancia del origen y su Rf,
indique la polaridad de cada uno de los componentes separados respecto a los demás.

Figura 1. Pasos básicos de una cromatografía en capa fina.

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CUESTIONARIO
1. ¿Qué significa el Rf de una sustancia?
2. ¿De qué depende el valor de Rf en un cromatograma?
3. ¿Cómo son la precisión y exactitud del método de cromatografía en capa fina?
4. ¿Qué criterios se deben tomar para la selección de un adsorbente colocado en
la cromatografía en capa fina?
5. ¿Qué factores fisicoquímicos influyen en la separación por cromatografía en
capa fina?
6. ¿Por qué la cromatografía en capa fina es un criterio parcial y no total de
identificación?
7. ¿Qué ventajas y desventajas tiene el método de cromatografía en capa fina?
8. Una serie de colorantes es separada por cromatografía en capa fina. Calcular
los valores de Rf de cada colorante de acuerdo con la siguiente tabla:
Colorantes Distancia Recorrida (mm)
Eluyente 66.0
Rojo de metilo 56.0
Rodamina B 38.0
Rojo Congo 0.5

BIBLIOGRAFIA
▪ Harris, D. C. 2001. Análisis Químico Cuantitativo. Ed. Reverté S. A., España. Ed.
Mac Graw Hill Interamericana.
▪ Luna-Rangel, R. 1981. Fundamentos de Química Analítica. Vol. I. Ed. Limusa
México
▪ Zweig, G. and Sherma, J. (eds). 1978. Handbook series in chromatography. CRC
Handbook Series in Chromatography. Section A: General data and principles.
Vol II. CRC Press, USA.
▪ Abbot D. y Andrews R. S. Introducción a la Cromatografía. 3a. Ed. Alhambra,
Madrid, 1970.