Práctica-2 Cromatografía

UNIVERSIDAD DE PANAMÁ
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

QUÍMICA ORGÁNICA (QM 110)
PRÁCTICA-2: CROMATOGRAFÍA
Cromatografía de papel
Prof. Liliana L. Escalante
1. INTRODUCCIÓN
Los métodos cromatográficos permiten fraccionar los componentes de una mezcla, ya
que dependen de una migración selectiva y diferencial de los solutos a través de un
sistema de dos fases. En este laboratorio utilizaremos la cromatografía de capa fina
(TLC) para separar los pigmentos en la espinaca.
2. OBJETIVOS
General: Aplicar la técnica cromatográfica a una mezcla de tintes comestibles.
Específicos:
Extraer pigmentos comestibles a partir de chocolates m&m y chicles agogó
Separa una mezcla de tintes utilizando cromatografía de papel y de capa
delgada
3. MATERIALES
Cámara cromatográfica de vidrio com tapa
Vaso químico
Papel de filtro
Placa de sílica gel
Solución salina
Pastillas de chocolate m&m de diferentes colores
Pastillas agogo de diferentes colores.
Regla
4. MARCO TEÓRICO
La cromatografía es muy empleada para obtener y purificar algunas sustancias tales
como: antibióticos, medicinas y productos industriales. Se puede dividir en
cromatografía en columna, en papel, en capa delgada y en fase gaseosa. La
cromatografía en papel y la de capa delgada son empleadas con fines analíticos en la
determinación de materiales que se encuentran en pequeñas cantidades. La
cromatografía en papel, lo mismo que la de capa delgada, son muy simples con
técnica fácil de dominar y que permite identificar componentes que se encuentran en
milésimas de miligramos. Además permiten determinar e identificar componentes en
productos comerciales, líquidos, biológicos minerales y tejidos. (Domínguez, 1980).
La cromatografía de capa fina se conoce normalmente por sus siglas en inglés (TLC,
thin layer chromatography). Es una técnica muy utilizada para la identificación y
determinación de pureza de compuestos. También puede utilizarse como técnica de
separación (cromatografía de capa fina TLC preparativa) a muy pequeña escala.
En esta técnica la fase estacionaria es una capa fina de gel de sílice u otro soporte con
propiedades adsorbentes (en nuestro caso de 25 mm de espesor) dispuesta sobre un
soporte de vidrio o aluminio que denominaremos placa. El eluyente o fase móvil será la
mezcla de disolventes adecuada.
a. Aplicación de la muestra
La introducción de la muestra se realiza utilizando un tubo capilar. Para ello se ha de
disolver una pequeña cantidad de la muestra a analizar en un disolvente volátil. A
continuación, el extremo del tubo capilar se introduce en la disolución. La disolución
ascenderá por el tubo por capilaridad. En uno de los lados de la placa,
aproximadamente a 3 mm del borde, se ha de trazar a lápiz una línea recta, línea base,
y sobre ella unos puntos de referencia. Sobre dichos puntos se pincha con el tubo
capilar, de modo que una pequeña cantidad de la disolución pase a la placa. De esta
manera, la muestra queda adsorbida por el soporte sólido en la placa.
b. Realización del cromatograma: Correr una placa.
El cromatograma se realiza en una cubeta que contiene el eluyente elegido. El nivel del
eluyente debe de ser menor que la separación entre el borde de la placa y la línea
base - el lugar donde se ha efectuado el pinchazo. La placa se introduce en la cubeta y
se tapa. El eluyente asciende por la placa por capilaridad, arrastrando a su paso a los
componentes de la mezcla. Naturalmente los componentes de la mezcla son
arrastrados con diferente velocidad, de acuerdo con su distinta polaridad. Cuando el
frente del eluyente llega casi al borde superior de la placa, esta se extrae de la cubeta.
Se debe de trazar una nueva línea a lápiz indicando el nivel hasta el que ha ascendido
el eluyente.
Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente:
hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído
aldehído < éster < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas
c. Revelado del cromatograma

Una vez que el eluyente sobre la placa se ha secado se ha de proceder a la
visualización del cromatograma. En determinados casos, si los compuestos son
coloreados esto puede realizarse de forma directa. Sin embargo, para compuestos
incoloros es necesario utilizar diferentes técnicas de revelado.
Las placas de cromatografía comerciales portan un agente fluorescente inorgánico en

la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la placa con
una lámpara de luz ultravioleta UV. Los diferentes compuestos aparecen en la placa
como manchas circulares. Las distintas manchas deben de marcarse a lápiz sobre la
placa para su estudio posterior.
Fig. 1. Metodología TLC

Diferentes reactivos orgánicos también permiten el revelado permanente de la placa,
obteniéndose manchas coloreadas en ella. De entre los métodos más comunes puede
destacarse la utilización del Iodo. Para ello la placa se introduce en una cubeta que
contiene cristales con Iodo y se deja estar en ella durante unos minutos. Los vapores
de iodo se disuelven en las manchas de los compuestos orgánicos tiñéndolas de color
marrón (Manual de pruebas).
Domínguez (1980) afirma que cuando los materiales que se tratan de identificar son
incoloros, se efectúa la cromatografía y una vez que el disolvente (fase móvil) ha
alcanzado una determinada altura, se detiene la operación, se seca el papel o la capa
delgada y finalmente se cubre son na dispersión muy fina de un reactivo que dé
reacciones coloridas con el material a identificar, los que aparecen como unas
manchas.
Revisar este enlace:

https://ar.pinterest.com/pin/307159637084051226/?nic_v2=1a6Vqyx9g
http://www.upv.es/visor/media/9961d6ef-c7f1-4e12-8727-ec693591d19a/v
5. TÉCNICA OPERATORIA:
PROCEDIMIENTO A (M&M y Chicles Agogo)
 Coloque los m&m y los chicles agogo de manera independiente en pequeñas
placas y rocíelas con 1-2 gotas de agua.
 Espere unos minutos hasta que se desprendan los tintes de diferentes colores.
 Utilizando una hoja de papel filtro, trace una línea horizontal del origen a más o
menos 1.5cm.
 Coloque círculos sobre la línea, que le permita diferenciar las muestras, aplique
sobre estos con el uso de un capilar una o dos manchas de los tintes
comestibles (rojo, verde, amarillo y azul).
 Para formar la MEZCLA, una los restos de los tintes y agite con un palillo antes
de aplicar en el papel filtro.
 Utilice el siguiente orden:
. rojo verde MEZCLA amarillo azul .

 Una vez implantadas las muestra coloque el papel filtro (placa) en un vaso
químico grande que contenga una solución saturada de NaCl de
aproximadamente 0.5cm de altura (no debe tocar el punto donde empieza la
mancha).
 Cubra el vaso con un vidrio reloj y deje ascender el frente de disolvente unos
8-9 cm, luego de este tiempo saque el papel filtro y con un lápiz marque la altura
máxima alcanzada.
 Una vez seco el papel, observe las manchas coloridas, marque su posición y
mida las distancias recorridas por cada una y divida entre las distancias
recorridas por el frente de disolvente y determine el Rf para cada tinte.
5. RESULTADOS
Medidas (desde la línea base)
Frente del solvente: 8.7 cm

Rojo 4.9 cm
Verde: (tendrá 2 Rf)
Amarillo 4.3 cm
Azul 5.4 cm
MEZCLA: (tendrá 3 Rf)
Amarillo 4.2 cm
Azul 5.2 cm
Rojo 4.8 cm
Amarillo 4.1 cm
Azul 5.3
Realice los cálculos de Rf correspondientes
6. INVESTIGACIÓN
 ¿Qué fases comprende la cromatografía? Explique.

 ¿A qué se le llama eluyente?
 ¿Qué características debe tener el eluyente?
 ¿Qué solvente se utilizó y cómo se preparó?
 ¿Aparte de la cromatografía de capa delgada defina otros tipos?
7. BIBLIOGRAFÍA
Domínguez, X.1980. Experimentos de Química Orgánica. Limusa. México. 203p.
Manual de pruebas. Área de Bioactividad. Universidad Particular de Loja. Ecuador.

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c. Revelado del cromatograma

Las placas de cromatografía comerciales portan un agente fluorescente inorgánico en

Fig. 1. Metodología TLC

Revisar este enlace:

. rojo verde MEZCLA amarillo azul .

Medidas (desde la línea base)

Frente del solvente: 8.7 cm

Realice los cálculos de Rf correspondientes

 ¿Qué fases comprende la cromatografía? Explique.

Domínguez, X.1980. Experimentos de Química Orgánica. Limusa. México. 203p.

Manual de pruebas. Área de Bioactividad. Universidad Particular de Loja. Ecuador.

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