Lab 3 TCD Tci

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
HUMANA O TEST DE COOMBS
TM. Andrea Navarrete Tapia

Universidad Católica de Temuco
2021
INTRODUCCIÓN.
 En 1945 Coombs, Mourant y Race, describieron

procedimientos para detectar la fijación de los anticuerpos
que no provocan aglutinación.
 Principio de la prueba de antiglobulina:

Detectar inmunoglobulinas de la clase IgG y /o
fracciones del complemento (C3d), unidos a los glóbulos
rojos.
INTRODUCCIÓN.
La sensibilización de los GR se puede producir de 2 formas:

In vivo, cuando la reacción Ag-Ac se efectúa en el organismo,
mientras ambos están circulando.
Ejm: Anemia hemolítica autoinmune.
Enfermedad Hemolítica del RN.
In vitro, la sensibilización de los GR por el Ac se realiza en un

tubo de ensayo en el laboratorio, donde se mezclan e incuban
eritrocitos adecuados con el suero en estudio.
Si en el suero existen Ac contra los Ag presentes en los GR, se
producirá la reacción Ag-Ac y los glóbulos rojos quedarán
sensibilizados.
PRUEBA DE ANTOGLOBULINA DIRECTA.
Es de gran valor en el diagnóstico de :

• Enfermedad hemolítica del RN.
• Anemia hemolítica autoinmune.
• Anemia hemolítica y sensibilización
inducida por drogas.
• Investigación de reacciones
Transfusionales.
Procedimiento:
• Realizar una suspensión al 5% de la muestra.
• Lavar 4 veces los eritrocitos con abundante solución salina.
• Eliminar todo la solución salina del ultimo lavado.
• Añadir una gota de suero de Coombs poliespecífico, mezclar y
centrifugar.
• Leer sobre una fuente de luz, para observar si existe
aglutinación.
• Las pruebas negativas deben confirmarse con Células Control
Coombs (células presensibilizadas con IgG).
PRUEBA DE ANTOGLOBULINA INDIRECTA.
La prueba de antiglobulina indirecta se utiliza en :

• Detección e identificación de Anticuerpos Irregulares.
• En la parte final de la prueba de Compatibilidad.
• Detección de antígenos no demostrables por otras técnicas:
Du , Kell, Duffy, Kidd, etc.
• Pruebas especiales: consumo de antiglobulina, estudio de
anticuerpos antileucocitarios, antiplaquetarios, etc.
Procedimiento:
• Colocar 2 gotas del suero en estudio en u tubo marcado.
• Agregar 1 gota de GR suspendidos al 5%.
• Mezclar e incubar 30-60 minutos a 37°C.
• Centrifugar y leer.
• Si la aglutinación es débil o negativa, lavar los eritrocitos en
solución salina, 4 veces.
• Eliminar toda la solución salina del ultimo lavado y agregar 1
gota de suero de Coombs.
• Mezclar, centrifugar y leer.
FACTORES DE AFECTAN LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA
Fase de sensibilización (in vitro):
a) Temperatura: Los Ac de clase IgG reaccionan a 37°C.

b) Medios de reacción: El medio de suspensión para los GR
puede ser, SSF, albúmina, suero inerte (suero AB libre de Ac),
o solución de baja fuerza iónica(LISS).
c) Proporción de células y suero: 2 gotas de suero + 1 gota de
suspensión de glóbulos rojos.
d) Tiempo de incubación: 15-30 minutos es suficiente para
detectar la mayoría de los Ac clínicamente significativos. LISS
permite disminuir a 10-15 min, el periodo de incubación.
FACTORES DE AFECTAN LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA
Fase de lavado:
a) Tiempo de lavado: Terminada la fase de incubación, iniciar de
inmediato el lavado de las células.
b) Volumen del salino: Llenado hasta 1 cm por debajo de la
boca del tubo.
c) Decantación del salino.
d) Contaminación.
e) Elución.
f) Centrifugación.
g) Lectura de la prueba.
CAUSAS DE ERROR
Falsos negativos: Falsos positivos:

1. Mal lavado. 1. Contaminación bacteriana de
2. Contaminación del reactivo. la muestra de sangre y de los
3. Elución de Ac durante el reactivos.
proceso de lavado. 2. Tubos de ensayo mal lavados.
4. Células mal conservadas o 3. Reactivos de antiglobulina
hemolizadas. mal preparados.
5. Perdida de células durante el 4. Muestras de sangre
lavado. coaguladas.
6. Movimientos violentos para
desprender el botón de
células.
PAPEL DEL COMPLEMENTO EN LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA.
Los glóbulos rojos pueden sensibilizarse con componentes del

complemento sea in vivo o in vitro, a través de dos mecanismos:
1. Por efecto de anticuerpos que fijan complemento.

2. Por complejos inmunes presentes en el plasma, los cuales se
depositan sobre los glóbulos rojos y causan activación no
especifica del complemento, cuyos componentes se fijan en
la membrana eritrocitaria.
DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES
INTRODUCCIÓN.
Los Ac. irregulares Pueden aparecer en Transfusión,

corresponden a respuesta ala trasplante,
aquellos distintos a los exposición de un incompatibilidad feto-
Ac. Naturales del antígeno eritrocitario materna, sin estimulo
sistema ABO extraño. identificado.
En Chile:
Ac. Irregulares mas
Ac. Irregulares más frecuentes en
frecuentes en paciente son: anti-D,
donantes son: anti- anti-E y anti-K.
Leª, anti-K y anti-E
TODOS ESTOS ANTICUERPOS SON CAPACES DE PROVOCAR HEMOLISIS IN VIVO Y

ACORTAMIENTO EN LA SOBREVIDA NORMAL DE LOS GLÓBULOS ROJOS.
EXISTEN DOS TIPOS DE ANTICUERPOS IRREGULARES.
AUTOANTICUERPO: AC. PRODUCIDO EN UN INDICIDUO QUE ESTA

DIRIGIDO CONTRA ANTIGENOS QUE EXPRESAN SUS PROPIOS
ERITROCITOS. .
ALOANTICUERPO: AC. PRODUCIDO EN UN INDIOCIDUO QUE ESTA

DIRIGIDO CONTRAN ANTIGENOS ERITROCITARIOS QUE EL CARECE,
PRESENTES EN OTRO INDICIDUO DE SU MISMA ESPECIE.
• La heterogeneidad de los
anticuerpos, en cuanto a:
– Tipo
– Clase de inmunoglobulina La detección e identificación de
– Temperatura de reacción Anticuerpos irregulares se
realiza mediante técnicas de
– Tipo de hemolisis aglutinación en tubo, en
asociada. columna o en microplacas, con
– Capacidad de activar etapas de temperatura
complemento. ambiente, incubación a 37ºc y
antiglobulina humana.
Hacen que la pesquisa e
identificación de ellos, deba
hacerse de una manera
estandarizada y controlada.
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Muestras:
• Suero o plasma obtenido a partir de sangre total.
• Almacenamiento de muestras a 4ºc, frescas.
Reactivos.
• Células panel, sets comerciales de 2 o 3 frascos en
concentración adecuada para tipo de técnica.
• Tubo: 2-4 %, columna: 0,8-1%
Reactivos.
• Capacidad de detectar anticuerpos clínicamente
significativos.
• Expresar a lo menos: D,C,E,c,e,M,N,S,s, P1, Leª, Leb, K,k,
Fyª, Fyb, Jkª, Jkb.
TUBO AGLUTINACION EN COLUMNA

• Se recomienda realizar en • La lectura se realiza en una
medio de Liss-coombs. etapa.
• La lectura se puede realizar • Permite detectar
en 3 etapas, permite principalmente los Ac
diferenciar Ac que acutian clínicamente significativos.
en salino a T° ambiente, en • Es posible detectar Ac de
salino a 37°C y con SAGH. clase IgM que presentan
• Permite inferir clase de Ig amplio rango térmico.
(IgM y/o IgG)
IDENTIFICACIÓN BASICA DE ANTICUERPOS
IRREGULARES.
PANEL DEBE PERMITIR PRESENTAR

PANEL BASICO DE
IDENTIFICAR ESPECIFICIDADES PARA
IDENTIFICACION ENTRE 8
CLARAMENTE LAS LOS SIGUIENTES
A 11 FRASCOS DE
ESPECIFICIDADES DE ANTIGENOS:
CELULAS CON
ALOANTICUERPOS MAS D,C,E,c,e,M,N,S,s, P1, Leª,
DIFERENTES
PREVALENTES Y DE Leb, K,k, Fyª, Fyb, Jkª, Jkb.
ESPECIFICACIONES
MAYOR IMPORTANCIA
ANTIGENICAS.
CLINICA.
VERIFICAR QUE EL
DISPONER DE CÉLULAS
INSERTO DEL REACTIVO Y
CON DOBLE
LA TABLA DE TRABAJO
DISIS(HOMOCIGOTAS)
QUE VIENEN CON EL
ESPECIALMENTE DE LOS
PANEL, COINCIDAN CON
ANTIGENOS: S,s, Fyª, Fyb,
NÚMERO DE LOTE DE
Jkª, Jkb.
REACTIVO.
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
TUBO AGLUTINACION EN COLUMNA

• Se recomienda realizar en • La lectura se realiza en una
medio de Liss-coombs. etapa.
• La lectura se puede realizar • Permite detectar
en 3 etapas, permite principalmente los Ac
diferenciar Ac que acutian clínicamente significativos.
en salino a T° ambiente, en • Es posible detectar Ac de
salino a 37°C y con SAGH. clase IgM que presentan
• Permite inferir clase de Ig amplio rango térmico.
(IgM y/o IgG)
ANTES DE COMENZAR CON LAS PRUEBAS DE
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS, ES UTIL
CONISDERAR LA HISTORIA MÉDICA DEL PACIENTE.
ES POCO COMUN LA PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

CLINICAMNETE SIGNIFICATIVOS EN MUJERES QUE NO
HAN CURSADO CON EMBARAZO O PACIENTES QUE
NUNCA HAN SIDO TRANSFUNDIDOS.
SI EL PACIENTE HA SIDO TRANSUNDIDO ES MUY

IMPORTANTE CONOCER CUANDO SE REALIZO LA
ULTIMA TRANSFUSIÓN.
LUEGO DE DETECTAR EL ANTICUERPO, SE DEBE EVALUAR SU
ESPECIFICIDAD Y EVALUAR SU IMPORTANCIA CLÍNICA.
CLINICAMENTE SIGNIFICATIVO ES AQUEL ANTICUERPO ANTI-

ERITROCITARIO QUE SE ASOCIA A EHFN, REACCIÓN
HEMOLITICA POSTRANSFUSIONAL O DIMINUCION NOTABLE
DE LA SOBREVIDA DE LOS GR TRANSFUNDIDOS.
ALGUNOS ANTICUERPOS PUEDEN CAUSAR EHFN, MIENTRAS

QUE OTROS PUEDEN SOLO OCASIONAR UN PAD POSITIVO SIN
EVIDENCIA CLÍNICA DE LA ENFERMEDAD.
INFORME DE RESULTADOS:
DETECCION DE ANTICUERPOS
IRREGULARES: POSITIVO O NEGATIVO.
EN CASO DE SER POSITVO SE

RECOMIENDA REGISTRAR LAS
ALTERNATIVAS POSIBLES DE
ESPECIFICIDAD DE ACUERDO AL PANEL
UTILIZADO.
LOS PANELES COMERCIALES CONTIENEN

UNA PLANILLA QUE ENUMERA LOS
FENOTIPOS DE LOS REACTIVOS. LA
COMBINACION DE LAS MUESTRAS VARIA DE
LOTE A LOTE , POR LO QUE ES ESCENCIAL
UTILIZAR LA PLANILLA CORRECTA.
CONTROL AUTOLOGO(AUTOCONTROL)
• SE EVALUA EL SUERO Y LOS GLÓBULO ROJOS AUTOLOGOS

BAJO LAS MISMAS CONDICIONES QUE SE TRATA LA
MUESTRA Y A LOS GR COMERCIALES.
• EL AUTOCONTROL NO ES LO MISMO QUE LA PAD.

• LA INCUBACION Y PRESENCIA DE MEDIO POTENCIADORES
PUEDEN CAUSAR REACTIVIDAD EN EL CONTROL AUTOLOGO.
• SI EL AUTOCONTROL RESULTA POSITIVO EN LA FASE DE

ANTOGLOBULINA, DEBE EFECTUARSE UN PAD.

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HUMANA O TEST DE COOMBS

TM. Andrea Navarrete Tapia

 En 1945 Coombs, Mourant y Race, describieron

 Principio de la prueba de antiglobulina:

La sensibilización de los GR se puede producir de 2 formas:

In vitro, la sensibilización de los GR por el Ac se realiza en un

Es de gran valor en el diagnóstico de :

La prueba de antiglobulina indirecta se utiliza en :

Fase de sensibilización (in vitro):

a) Temperatura: Los Ac de clase IgG reaccionan a 37°C.

Falsos negativos: Falsos positivos:

Los glóbulos rojos pueden sensibilizarse con componentes del

1. Por efecto de anticuerpos que fijan complemento.

Los Ac. irregulares Pueden aparecer en Transfusión,

TODOS ESTOS ANTICUERPOS SON CAPACES DE PROVOCAR HEMOLISIS IN VIVO Y

AUTOANTICUERPO: AC. PRODUCIDO EN UN INDICIDUO QUE ESTA

ALOANTICUERPO: AC. PRODUCIDO EN UN INDIOCIDUO QUE ESTA

TUBO AGLUTINACION EN COLUMNA

PANEL DEBE PERMITIR PRESENTAR

TUBO AGLUTINACION EN COLUMNA

ES POCO COMUN LA PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

SI EL PACIENTE HA SIDO TRANSUNDIDO ES MUY

CLINICAMENTE SIGNIFICATIVO ES AQUEL ANTICUERPO ANTI-

ALGUNOS ANTICUERPOS PUEDEN CAUSAR EHFN, MIENTRAS

EN CASO DE SER POSITVO SE

LOS PANELES COMERCIALES CONTIENEN

• SE EVALUA EL SUERO Y LOS GLÓBULO ROJOS AUTOLOGOS

• EL AUTOCONTROL NO ES LO MISMO QUE LA PAD.

• SI EL AUTOCONTROL RESULTA POSITIVO EN LA FASE DE

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