Unidad Educativa Particular “La Salle”

Nombre: Valentina Valarezo Curso: 1° IB

Fecha: 09-11-2023 Paralelo: “E”

INFORME DE LABORATORIO

1. TEMA
Uso del Microscopio

2. OBJETIVOS

Objetivo General: Adquirir y desarrollar las habilidades necesarias para llevar a cabo
un uso y manejo adecuado de un microscopio monocular óptico y realizar un análisis
detallado de las muestras establecidas para la práctica; comprendiendo a la vez: las
diferencias entre ciertos tipos de microscopios, el funcionamiento de su estructura, el
proceso recomendado para calibrarlos y observar a través de ellos correctamente.

Objetivos Específicos:
• Recolectar apropiadamente las muestras asignadas: agua estancada, sangre y fruta
podrida. Asegurándose de evitar cualquier tipo de alteración que afecte
negativamente a las mismas.
• Elaborar tres diferentes placas frescas con las correspondientes muestras
recolectadas previamente, etiquetándolas para mantener un registro ordenado y
detallado.
• Mantener el orden y la disciplina durante el proceso de observación de las placas
en el microscopio, para evitar cualquier daño al mismo.
• Elaborar una documentación apropiada de todo lo observado, tomando apuntes
constantemente y participando activamente durante la práctica.
• Aplicar las normas de bioseguridad y bioética durante todo el proceso y desarrollo
de la práctica.

3. MARCO TEÓRICO

Fundamento Científico:
• Ventajas de la Microscopía Electrónica:
Consiste en una técnica que utiliza haces de electrones en lugar de luz para generar
imágenes, esto permite principalmente alcanzar ampliaciones más potentes y
obtener una imagen de mayor resolución y definición, lo que mejora la observación,
análisis y evaluación de estructuras a una escala extremadamente pequeña con la
mayor cantidad de detalles visibles, ejemplos de estas estructuras son:
- Estructuras internas de materiales biológicos y no biológicos.
- Estructuras a nivel atómico.
- Estructuras a nivel molecular.
- Materiales en escala nanométrica.

• Ventajas de la Criofractura:
La criofractura consiste en un procedimiento de preparación de las muestras o
materiales previamente a su observación en un microscopio electrónico, donde se
congela la muestra a temperaturas extremadamente bajas por un corto periodo de
tiempo mediante nitrógeno líquido, y luego se corta o cizalla la muestra, este
sistema es ventajoso debido a que:
 - Elimina por completo el daño en la estructura de las células biológicas, es decir
preserva la estructura celular, incluyendo las de aquellas que son sensibles a los
procesos de deshidratación o desnaturalización.
- Puede revelar detalles internos de la muestra, superficies frescas y estructuras
intracelulares.

• Ventajas de la Microscopía Electrónica Criogénica:

También conocida como criomicroscopía electrónica, esta de forma general
permite:
- La conservación de la estructura y composición original de la muestra.
- Reducción al mínimo de los factores que puedan surgir durante la preparación
de las muestras como la deshidratación, fijación química o desnaturalización.
- Observación de muestras biológicas en un estado hidratado y en tiempo real.

• Uso de la Tinción en la Microscopía Óptica y Fluorescente:

Consiste en un proceso fundamental, que involucra el uso de colorantes o
compuestos químicos para resaltar ciertas estructuras, al aumentar el contraste y la
visibilidad de estas:
- Microscopía óptica con tinción: En esta se tiñen con colorantes específicos que
tiñen diferentes componentes celulares con colores distintos, lo que permite una
mejor observación y análisis de las muestras.
- Microscopía fluorescente con tinción: Esta involucra el uso de sondas o
anticuerpos conjugados con moléculas fluorescentes determinadas, lo que
permite distinguir componentes celulares con mayor especificidad debido a que
resaltan por los diferentes fluoroforos usados; este tipo de microscopía es mas
sensible, es decir, permite la identificación de cantidades reducidas de
moléculas o estructuras dentro de una muestra.

• Uso y Ventajas de la Inmunofluorescencia en Microscopía Óptica:

La inmunofluorescencia es una técnica que consiste en la fijación y
permeabilización de muestras permitiendo el acceso de anticuerpos a las estructuras
intracelulares, incubación con anticuerpos primarios determinados para el antígeno
establecido, incubación con anticuerpos secundarios marcados con fluoróforos que
se unen a los anticuerpos primarios y de esta forma permitir la visibilización de
estructuras; se usa para localizar y observar proteínas o antígenos específicos, lo
que permite el estudio de la estructura y función de células y tejidos; Entre las
ventajas principales de esta técnica se encuentran:
- La especificidad de los anticuerpos utilizados para los antígenos deseados,
facilitando la identificación de estructuras.
- La alta sensibilidad que le caracteriza permite la detección de cantidades
reducidas de proteínas o antígenos.
- Permite el estudio detallado y simultaneo de múltiples marcadores, y la
localización de moléculas en una sola muestra.
- Permite la visualización directa de estructuras con mejor resolución y contraste
debido a la diferencia de colores en la luz que emiten los fluoróforos.

Introducción:
El microscopio tiene sus orígenes en el siglo XVII, atribuido comúnmente a la
invención del microscopio compuesto por Zacharias Janssen y su padre Hans Janssen
 en 1590, seguido por el perfeccionamiento de Anton van Leeuwenhoek en la década de
1670. A lo largo de los siglos, el microscopio ha experimentado mejoras tecnológicas
continuas, desde el microscopio óptico hasta el desarrollo de la microscopía electrónica
por Ernst Ruska en 1931. La utilización de microscopios ha sido esencial para el avance
en áreas como la biología, medicina, química, nanotecnología y ciencias de los
materiales, pues ha revolucionado la comprensión de la biología celular, permitiendo
la observación detallada de la estructura, función de las células y sus componentes.

Particularmente la microscopía óptica es una técnica que emplea luz visible y lentes
para ampliar y observar objetos o estructuras a nivel microscópico. Se basa en el uso
de la luz para iluminar la muestra y permite la visualización de detalles a una escala
mayor que la observación a simple vista.

4. METODOLOGÍA
Bioseguridad:
1. Primero se elabora la caja de disección, la cual debe contener: un bisturí, un par de
agujas de disección, un gotero, unas tijeras pequeñas, un frasco pequeño con
alcohol, unas pinzas y paños o toallas desechables.
2. Antes de ingresar al laboratorio y comenzar la práctica, colocarse el mandil y cerrar
la totalidad de sus botones.
3. En caso de tener cabello largo, recogérselo para evitar cualquier tipo de accidente o
que este obstaculice la vista.
4. De preferencia lavarse las manos antes de manipular los elementos del laboratorio.

Toma de Muestras:
• Muestra de Agua estancada:
1. Comprar un frasco estéril.
2. Dirigirse con el frasco estéril a la ubicación en donde haya una posibilidad de
encontrar agua estancada.
3. Una vez encontrada una fuente de agua estancada, se debe tomar en cuenta que
no esté turbia o contaminada, más bien el agua debe ser clara y debe tener una
tela vegetal visible y verde en las paredes o base de la fuente.
4. Abrir el frasco estéril y tomar la muestra.
5. Cerrar adecuadamente el frasco estéril con la muestra dentro para transportarla
con seguridad hacia el laboratorio.

• Muestra de Sangre:
1. Tomar un trozo de algodón y elaborar una torunda.
2. Humedecer la torunda con alcohol.
3. Desinfectar la zona del dedo que se pinchará con la torunda y el antiséptico.
4. Tomar una lanceta y abrirla.
5. Doblar ligeramente el dedo para que realce la zona que se pinchará.
6. Pinchar delicadamente y retirar inmediatamente la lanceta.
7. Presionar alrededor de la zona pinchada para que salga la sangre.

• Muestra de la Fruta Podrida:

1. Seleccionar una fruta, de preferencia un plátano o un cítrico.
2. Introducir la fruta dentro de una funda.
3. Colocar la funda con la fruta en un espacio algo alejado y considerablemente
cálido.
 4. Esperar durante una semana aproximadamente para que la fruta se pudra.
5. Mantener la fruta dentro de la funda para transportarla al laboratorio.

Preparación de las placas:

• Muestra de Agua estancada:
1. Tomar un portaobjetos con su respectivo cubreobjetos.
2. Tomar el gotero de la caja de disección.
3. Abrir el frasco estéril con la muestra de agua estancada.
4. Tomar parte del contenido con ayuda del gotero.
5. Colocar una gota en medio del portaobjetos.
6. Cubrir cuidadosamente con el cubreobjetos.
7. Enumeramos la placa con un marcador (número 1).

• Muestra de Sangre:
1. Tomar un portaobjetos con su respectivo cubreobjetos.
2. Tomar el dedo de la persona de quien se obtuvo la muestra de sangre.
3. Presionar su dedo hasta que salga una gota considerable de sangre.
4. Colocar la gota directamente en el portaobjetos, evitando que este tenga
contacto con la piel.
5. Cubrir cuidadosamente con el cubreobjetos.
6. Enumeramos la placa con un marcador (número 2).

• Muestra de la Fruta Podrida:

1. Tomar un portaobjetos con su respectivo cubreobjetos.
2. Sacar cuidadosamente la fruta de la funda
3. Tomar un trozo de cinta adhesiva transparente.
4. Pegar el trozo de cinta entre el dedo pulgar e índice formando un arco en
donde la superficie adhesiva se muestre hacia afuera.
5. Buscar una zona de la fruta donde se observe moho.
6. Presionar la cinta contra la superficie de la fruta y retirar cuidadosamente.
7. Pegar la cinta en el portaobjetos.
8. Enumeramos la placa con un marcador (número 3).

Proceso de la Práctica:
1. En primer lugar, se debe organizar el material que se utilizará: las placas con las
muestras, el microscopio asignado, dispositivos móviles para tomar fotografías, un
marcador permanente y libretas de apuntes.
2. Ubicar correctamente el microscopio en el mesón del laboratorio, una vez hecho
esto conectarlo al enchufe y prenderlo.
3. Examinar el microscopio para asegurarse de que no haya ningún problema antes de
colocar las placas con las muestras.
4. Colocar la primera placa con la muestra del agua estancada.
5. Enfocar y calibrar el microscopio de acuerdo con el lente con el que se observe,
comenzando con 4X, luego con 10X y concluyendo con 40X.
6. Tomar fotografías de lo que se observa con cada lente.
7. Retirar la primera placa y colocar la segunda con la muestra de sangre.
8. Enfocar y calibrar el microscopio de acuerdo con el lente con el que se observe,
comenzando con 4X, luego con 10X y concluyendo con 40X.
9. Tomar fotografías de lo que se observa con cada lente.
10. Retirar la segunda placa y colocar la tercera con la muestra de la fruta podrida.
 11. Enfocar y calibrar el microscopio de acuerdo con el lente con el que se observe,
comenzando con 4X, luego con 10X y concluyendo con 40X.
12. Tomar fotografías de lo que se observa con cada lente.
13. Retirar la ultima placa.
14. Apagar y desconectar el microscopio.
15. Retirar los cubreobjetos de los portaobjetos, así mismo, retirar las muestras y tirarlas
en el tacho de desechos correspondiente.
16. Lavar los cubreobjetos y los portaobjetos, posteriormente, dejarlos secar en una de
las toallas desechables de la caja de disección.
17. Entregar el microscopio, portaobjetos y cubreobjetos en buen estado.
18. Una vez estando fuera del laboratorio, retirarse el mandil.

5. RESULTADOS
Primera Muestra- Agua Estancada:
Lente Descripción
4X El agua al ser incolora la muestra toma el color de la luz del microscopio,
la cual es de un tono amarillo o anaranjado; con este lente no se observan
figuras muy definidas, apenas unos pequeños puntos en el fondo
10X El agua al ser incolora la muestra toma el color de la luz del microscopio,
la cual es de un tono amarillo o anaranjado; con este lente se observan más
figuras y más claras, en la parte superior derecha se observa algo que
probablemente podría ser un microorganismo, por otro lado, se logran
observar puntos mas oscuros y en el fondo una especie de líneas bastante
difuminadas.
40X El agua al ser incolora la muestra toma el color de la luz del microscopio,
la cual es de un tono amarillo o anaranjado; con este lente únicamente se
visualiza una gran figura alargada que igualmente podría ser un
microorganismo.

Segunda Muestra- Sangre:

Lente Descripción
4X Esta muestra tiene un característico color rojo debido a la hemoglobina, sin
embargo, es un rojo bastante claro; en este lente se pueden observar
glóbulos rojos muy indefinidos, con una imagen algo distorsionada y todos
ellos ocupan una gran cantidad de espacio.
10X Esta muestra tiene un característico color rojo debido a la hemoglobina,
por otro lado, en este lente se aprecia un color más saturado, se torna en un
color algo anaranjado debido a la luz amarilla del microscopio; con este
lente se aprecian mejor los glóbulos rojos y las agrupaciones que estos
forman.
40X Esta muestra tiene un característico color rojo debido a la hemoglobina que
se aprecia mejor en este lente, la forma o figura específica de los glóbulos
rojos no se puede apreciar adecuadamente con este tipo de microscopio,
pues parecen tener una forma alargada.

Tercera Muestra- Fruta Putrefacta:

Lente Descripción
4X Debido al tinte la muestra adopto un color azul intenso; con este lente se
observan varias figuras, la que mas resalta es una mancha oscura y verdosa
en la parte superior y derecha, así mismo resalta una pequeña figura de un
 particular color amarillo podría tratarse de algún microorganismo, en el
fondo hay otro tipo de figuras irregulares y curvas que podrían tratarse de
una especie de distorsión debido a la cinta adhesiva.
10X Debido al tinte la muestra adopto un color azul intenso; con este lente se
observa con mayor claridad a la figura de color amarillo, y se nota que
junto a ella hay otra figura de un color entre verde, café y amarillo, en el
fondo se observan figuras redondas y otras alargadas además de pequeñas
manchas oscuras.
40X Debido al tinte la muestra adopto un color azul intenso; en este lente no se
logran apreciar muchas cosas, se observan algunas machas de color azul
oscuro y al fondo unas líneas bastante difuminadas.

6. GRÁFICOS
Primera Muestra- Agua Estancada:
Lente Fotografía Dibujo
4X

10X
 40X

Segunda Muestra- Sangre:

Lente Fotografía Dibujo
4X
 10X

40X

Tercera Muestra- Fruta Putrefacta:

Lente Fotografía Dibujo
4X
 10X

40X

7. CONCLUSIONES:
• En conclusión, el acto de recolectar apropiadamente las muestras asignadas,
son un factor fundamental que define que tipo de estructuras se podrán
observar en el microscopio.
• El desarrollo de técnicas para la elaboración de placas define la calidad de la
información que obtendremos tras la observación de las mismas con el
microscopio, y estas técnicas representan un desafío en el avance de la
microscopía.
• Mantener el orden y la disciplina en las diferentes prácticas académicas
permite un mejor rendimiento y eficacia en el proceso de aprendizaje y
desarrollo de habilidades, además de que permiten dar un buen uso a las
herramientas y recursos otorgados para facilitar estas actividades.
• La participación activa de una actividad es clave para obtener información y
conocimiento de calidad.
• Las normas de bioseguridad y bioética son una herramienta para el desarrollo
seguro de las actividades relacionadas a la ciencia, para asegurar el bienestar
de las personas y un sano desarrollo y progreso de la humanidad
8. BIBLIOGRAFÍA:

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